核素示踪反义寡核苷酸在荷人淋巴瘤裸鼠中的分布及显像研究

目的研究^125I标记反义寡核苷酸在正常小鼠内的生物分布,比较脂质体介导^131I标记正义及反义寡核苷酸在荷人淋巴瘤裸鼠体内的显像,以探讨核素标记的AS0N作为反义显像剂及反义治疗药物的可能性。方法通过氯胺-T法进行^125I与^131I标记含酪胺的18聚体寡核苷酸,制作荷瘤裸鼠模型,将148kBq ^125I标记反义寡核苷酸（2μg～3μg）,尾静脉注入正常小鼠,于不同时间处死小鼠,测定不同组织及标准源的放射性计数。荷瘤裸鼠瘤内注入脂质体介导335MBq^131I标记反义寡核苷酸（7μg～9μg）,分别与注射后不同时间进行SPECT显像,以脂质体介导正义寡核苷酸作为对照,24h显像后处死全部裸鼠,取出血液、重要器官和肿瘤组织,测定各组织的放射性计数,并记算肿瘤与非肿瘤组织（T／NT）比值。结果^125I标记反义寡核苷酸注入正常小鼠体内后1h,各脏器达高峰,24h基本清除。肝、胃和肠放射性分布最高,骨、肌肉、脑中放射性分布较少。荷瘤裸鼠瘤内注入脂质体介导的^131I标记反义寡核苷酸后立即用SPEcT成像仅见肿瘤部位,1、2h成像可见示踪剂从肿瘤到腹腔,24h仍见肿瘤显像。比较24h正义组与反义组肿瘤的％1D／g、肿瘤／血液、肿瘤／肌肉,差异有统计学意义。结论^131标记AS0N对淋巴瘤肿瘤组织有很强的特异性,可用于淋巴瘤反义显像和反义治疗的研究,但仍需进行大量的临床应用前研究。     

VIP-~(125)I-ASON的制备及其在荷瘤裸鼠体内的分布

目的通过制备VIP-~(125)I-ASON(反义寡核苷酸)并观察其在荷瘤裸鼠体内的分布,探讨以血管活性肠肽(VIP)作为载体进行肿瘤放射性反义治疗的可行性。方法以三氯化铊作为氧化剂,将与C-mycmRNA互补的15个碱基的ASON进行125I标记。碘化的ASON与血管活性肠肽-多聚赖氨酸(VIP-PL)通过静电作用结合形成放射性反义复合物。荷瘤BALB/c裸鼠尾静脉注射VIP-~(125)I-ASON或~(125)I-ASON后,于不同时相观察各脏器及肿瘤组织的放射性分布情况。结果125I-ASON主要浓聚在肝、肾,另外肺、脾、胃、肠也有较少浓聚,而其它组织放射性分布极少。除肝、脾、骨外,其余组织的清除速度较快。VIP-~(125)I-ASON在体内的分布以肝为最高,其次为肺、脾、肾脏,其它组织放射性分布较少,各组织中放射性清除较125I-ASON为慢。VIP-~(125)I-ASON在肿瘤组织中摄取增高,2h达最大,为5.89%ID/g,明显高于未经VIP受体介导的125I-ASON肿瘤组织的摄取,其最大值仅为1.98%ID/g。肿瘤/血液及肿瘤/肌肉的放射性比值在4h达最大。结论VIP与125I-ASON偶联后,使其经肾脏排泄减少,血液及组织内清除速度有所减慢,在肿瘤组织摄取增高,可望用于肿瘤的显像诊断与治疗。     

VIP-125I-ASON的制备及其在荷瘤裸鼠体内的分布

目的 通过制备VIP-^125I-ASON（反义寡核苷酸）并观察其在荷瘤裸鼠体内的分布，探讨以血管活性肠肽（VIP）作为载体进行肿瘤放射性反义治疗的可行性。方法 以三氯化铊作为氧化剂，将与C-myc mRNA互补的15个碱基的ASON进行^125I标记。碘化的ASON与血管活性肠肽-多聚赖氨酸（VIP-PL）通过静电作用结合形成放射性反义复合物。荷瘤BALB／c棵鼠尾静脉注射VIP-^125I-ASON或^125I-ASON后，于不同时相观察各脏器及肿瘤组织的放射性分布情况。结果 ^125I-ASON主要浓聚在肝、肾，另外肺、脾、胃、肠也有较少浓聚，而其它组织放射性分布极少。除肝、脾、骨外，其余组织的清除速度较快。VIP-^125I-ASON在体内的分布以肝为最高，其次为肺、脾、肾脏，其它组织放射性分布较少，各组织中放射性清除较^125I-ASON为慢。VIP-^125I-ASON在肿瘤组织中摄取增高，2h达最大，为5．89％ID／g，明显高于未经VIP受体介导的^125I-ASON肿瘤组织的摄取，其最大值仅为1．98％ID／g。肿瘤／血液及肿瘤／肌肉的放射性比值在4h达最大。结论 VIP与^125I-ASON偶联后，使其经肾脏排泄减少，血液及组织内清除速度有所减慢，在肿瘤组织摄取增高，可望用于肿瘤的显像诊断与治疗。     

不同类型长循环脂质体在动物体内的分布和药代动力学研究

目的 研究不同类型长循环脂质体在动物体内的药代动力学和组织分布.方法 昆明大白兔和小鼠静脉内注射阴离子长循环脂质体(NA)、阳离子长循环脂质体(PA)和中性长循环脂质体(A-D),以及普通脂质体(CA)和游离125Ⅰ-反义寡核苷酸(ASON)(FA),不同时间点分别采集血样本和组织器官,测量其放射性,用3p87软件拟合...     

重组人纤溶酶原Kringle5的标记及其肿瘤显像

目的探讨放射性碘标记纤溶酶原Kringle5(K5)用于肿瘤显像的可行性.方法采用基因工程方法制备的重组人纤溶酶原Kringle5(rhK5),以Iodogen法制备125Ⅰ-rhK5和125Ⅰ-rhK5,进行荷瘤裸鼠体内分布和肿瘤显像研究.结果125Ⅰ-rhK5和131Ⅰ-rhK5的标记率为86%和84%,放化纯度为96%和95%.竞争结合实验表明,rhK5标记后其生物活性没有改变;荷瘤裸鼠体内分布显示,12 h肿瘤肌肉组织比可达4.94±0.89;131Ⅰ-rhK5肿瘤显像示肿瘤部位放射性浓聚随时间逐渐增加,3 h可见肿瘤清晰显影.结论Iodogen法制备125Ⅰ-rhK5和131Ⅰ-rhK5纯度高、稳定性好.131Ⅰ-rhK5可进行肿瘤的显像,为肿瘤的显像和治疗奠定了基础.     

锝-99m标记survivin反义寡核苷酸肝细胞癌显像的实验研究

目的研究放射性核素锝99m(99mTc)标记survivin反义寡核苷酸(ASON)显像诊断肝细胞癌的价值。方法用DNA合成仪合成18碱基单链survivinASON,在5′末端经氨基修饰后,以S乙酰基N羟基琥珀酰亚胺巯基乙酰基三甘氨酸(SacetylNHSMAG3)作为螯合剂对survivinASON进行99mTc标记,并对99mTcsurvivinASON在荷瘤(SMMC7721)裸鼠模型体内的生物学分布、肿瘤反义基因显像、肿瘤反义基因抑制显像进行了分析。结果肿瘤组织显像时间早,0.5h即已开始显影。99mTcsurvivinASON在肿瘤组织内的聚集程度随时间延长而逐渐增加,于4h时达到最大,肿瘤/对侧肢体肌肉比值分别为2.48±0.44(体外显像)和3.35±0.57(生物学分布)。正义寡核苷酸(SON)在肿瘤组织内的聚集各时间点均明显低于ASON,差异有统计学意义(P<0.01)。用未标记的survivinASON进行抑制后,99mTcsurvivinASON在肿瘤组织中的聚集明显减少,4h时的肿瘤/对侧肢体肌肉比值降为0.93±0.23,与抑制前的2.48±0.44相比有明显减低(P<0.01)。结论99mTcsurvivinASON可在荷瘤裸鼠模型的肿瘤组织中特异性聚集,为肝细胞癌的特异性诊断提供了一种可能的新方法。     

放射性碘标记的抗肺癌单克隆抗体在载瘤裸鼠体内的代谢

放射性碘标记的抗人肺癌单克隆抗体2E3和6DI注入载人肺癌移植瘤裸鼠体内,静脉血放射性-时间曲线符合二室开放模型;血放射性清除半减期为3.4d,表观分布容积636ml/kg;标记抗体在体内的脱碘率为18.6％,脱落的放射性碘绝大部分从尿排出。腹腔给药吸收快,半吸收期2.08h,生物利用度89％。~(125)I标记的单克隆抗体注射后1～3d,放射性主要分布在肿瘤、血、肝、脾中,其次为肺、肾、胃、小肠;此后,血和正常组织的放射性下降,肿瘤中的放射性较高。~(131)I标记的单克隆抗体能使移植瘤清晰显像。     

分化型甲状腺癌131I治疗中多种核素显像的联合应用

目的 探讨提高分化型甲状腺癌(DTC)复发灶或转移灶检出率的最优化核素显像方法 .方法 对89例DTC患者的临床资料进行回顾性分析.核素显像方法 包括血清甲状腺球蛋白(Tg)检查结合放射性碘(131Ⅰ)治疗剂量全身显像、99mTc-MIBI肿瘤显像和18F-FDG带符合线路的SPECT/CT全身显像,对三种核素显像的结果 进行对比分析.结果 131Ⅰ治疗剂量全身显像、99mTc-MIBI 肿瘤显像和18F-FDG带符合线路的SPECT/CT全身显像的灵敏度分别为83.05%、79.66%和16.95%.结论 99mTc-MIBI肿瘤显像和18F-FDG带符合线路的SPECT/CT全身显像作为补充检查手段,可弥补血清Tg检查结合131Ⅰ全身显像的局限性,对DTC患者复发灶或转移灶的检出、疗效评估及进一步治疗方案的制定具有重要意义.     

荷乳腺癌小鼠c-myc mRNA反义寡核苷酸显像研究

目的 建立99mTc标记寡核苷酸的方法并用于荷乳腺癌小鼠反义寡核苷酸显像研究.方法 利用双功能螯合剂N-羟基琥珀酰亚胺-巯乙苷肽(S-Acetyl-NHS-MAG3)对一段15碱基c-myc mRNA反义寡核苷酸片段进行99mTc标记;对荷乳腺癌昆明种小鼠进行标记反义寡核苷酸生物学分布与显像研究.结果 生物学分布结果表明,相对于正义核酸而言,反义核酸在肿瘤组织中的摄取明显增高(P<0.05).在反义寡核苷酸显像组,肿瘤组织显像剂摄取活跃,肿瘤/肌肉比值最高可达5.5.在正义寡核苷酸显像组及阻断组,肿瘤组织均未出现明显的显像剂浓聚.结论 99mTc标记反义寡核苷酸有望成为一种新的显像剂,在分子水平上用于恶性肿瘤的早期、特异和无创性诊断.     

~(131)I-OC125对荷人卵巢癌裸鼠肿瘤显像的实验研究

目的 探讨131碘-抗CA125单克隆抗体(131I-OC125)在荷人卵巢癌裸鼠中的分布,为131I-OC125临床应用提供依据.方法 用人卵巢癌上皮性腺癌细胞株NIH:OVCAR3分别于裸鼠腋窝、腹股沟及肩胛部皮下建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,肿瘤长至0.5～2cm时尾静脉注射131I-OC125,对照鼠注射131碘-正常小鼠免疫球蛋白(131I-NMIgG),分别于注射后24、48、60、72、96、120h用针孔准直器行裸鼠显像,观察不同时段显像结果;每次显像结束后处死裸鼠,取各组织称重,测各组织放射性计数,计算单位质量组织的摄取率(%ID/g)及肿瘤组织与非肿瘤组织比值(T/NT).结果 18只实验鼠50个肿瘤病灶显像41个,显像率为82.0%.不同部位病灶显像率差异无统计学意义,但直径0.5～1.5cm病灶显像效果最好,显像率为88.6%(31/35);大于1.5cm病灶显像率为81.8%(9/11),但T/NT值小于直径0.5～1.5cm病灶的T/NT值;直径小于0.5cm病灶显像率为25.0%(1/4).18只对照鼠47个瘤灶无1个显像.注射131I-OC125组不同时段T/NT值略有不同,以给药后72h T/NT值最高,但所有时间段标记抗体在肿瘤部位分布均明显高于其他部位,差异有统计学意义(P<0.01);注射131I-NMIgG组不同时段T/NT值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 131I-OC125能特异地浓聚于瘤组织中,可较好地用于卵巢癌放射免疫显像.     

肿瘤坏死因子α反义寡核苷酸对鼠单疱病毒性视网膜炎的影响

目的观察不同部位注射肿瘤坏死因子α（TNF-α）反义寡核苷酸对实验性单疱病毒性视网膜炎的影响。方法BALB／c小鼠右眼前房注射单纯疱疹病毒-1（HSV-1）,同时左眼结膜下或玻璃体注射TNF-αASON治疗,观察其组织学变化并测定小鼠眼的TNF-α含量,比较2种治疗方式的效果。结果试验组小鼠眼TNF-α发生视网膜炎的几率及严重度明显减少;玻璃体注射组TNF-α含量更低。结论采用作用于TNF-α的反义寡核苷酸局部治疗小鼠单疱病毒性视网膜炎,能明显降低感染小鼠眼内细胞因子TNF-α的含量,减轻眼内视网膜炎症反应。结膜下注射给药也许是更好的方法。     

IL-6反义寡核苷酸对骨吸收的抑制作用

目的 :探讨IL -6反义寡核苷酸在体外对骨吸收的抑制作用及意义。方法 :分离培养新生小鼠颅盖骨 ,并分别用IL -6硫代反义寡核苷酸 (ASON )、无义寡核苷酸 (NSO )、IL -6或ASON与IL -6联合作用颅盖骨 ,未加药组为对照。培养一定时间后 ,测定培养上清液的钙含量 ,将实验组钙含量与对照组钙含量比值作骨吸收指数。结果 :ASON( 5.0m/L)分别作用 12、2 4、48h后 ,颅盖骨骨吸收指数呈时间依赖性降低。作用 48h后 ,ASON使颅盖骨骨吸收指数呈剂量依赖性降低 ;IL -6则使其呈剂量依赖性升高 ;ASON可轻度降低IL -6升高的骨吸收指数 ;ASON( 5μm /L)对有或无IL -6培养的颅盖骨骨吸收抑制率分别为 10 .8%、19.3 % ;NSO对骨吸收指数无影响。结论 :IL -6反义寡核苷酸对体外培养的颅盖骨骨吸收有一定的抑制作用     

Effect of antisense oligonucleotides of telomerase on the growth of RCZ cells derived from renal cell carcinoma in culture

目的 :研究端粒酶反义抑制剂对肿瘤细胞的影响。方法 :以端粒酶 RNA模板区为靶点 ,序列为 TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸 ( PS- ASON)及 1 3个寡核苷酸的随机引物与肾癌细胞株 RCZ细胞共同孵育 ,计数 1～ 43d细胞数 ,计算细胞倍增时间 ,通过 MTT法测定 ASON对细胞生长的抑制率。结果 :ASON实验组与随机引物对照组比较能明显减少细胞增殖数目 ( P<0 .0 1 )、增加抑制率 ( P<0 .0 1 )及延长倍增时间 ( P<0 .0 0 5) ;并且其抑制效果显示出剂量的依赖性 ( P<0 .0 5) ,具有序列选择特异性。结论 :以端粒酶 RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸抑制肾癌 RCZ细胞增殖 ,可能对肿瘤治疗有潜在的意义     

端粒酶反义寡核苷酸基因对裸鼠体内膀胱癌生长的抑制作用

目的：探讨端粒酶反义寡核苷酸(ASON)基因对裸鼠体内膀胱癌生长的抑制作用,阐明反义端粒酶基因对膀胱癌的治疗作用。方法：膀胱癌EJ细胞株分别采用换液培养和用硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸(PS-ASON)处理,将换液培养及PS-ASON处理的EJ细胞分别接种BALB/c裸鼠（对照组24只和PS-ASON处理组12只）,观察致瘤率;肿瘤形成至20 mm后将对照组裸鼠随机分为3组(n=8),隔日注射生理盐水（空白对照组）、PS-ASON（PS-ASON注射组）及化疗药物表阿霉素（表阿霉素组）。观察各组裸鼠致瘤时间、裸鼠体质量及肿瘤体积的变化,计算各组裸鼠生存率;光镜下观察肿瘤组织形态学变化。结果：PS-ASON处理组裸鼠致瘤率低于对照组（P<0.01）,致瘤时间长于对照组（P<0.01）,裸鼠平均体质量高于对照组（P<0.01）。按照不同分组,裸鼠注射不同药物治疗12 d后,PS-ASON注射组和表阿霉素组裸鼠肿瘤体积均小于空白对照组（P<0.01）;PS-ASON注射组与表阿霉素组裸鼠肿瘤体积比较差异无统计学意义（P>0.05）。空白对照组裸鼠体质量持续下降;接种16 d后,PS-ASON注射组裸鼠体质量明显高于空白对照组（P<0.01）;接种肿瘤8 d后,表阿霉素组裸鼠体质量低于PS-ASON注射组（P<0.01）;空白对照组裸鼠体质量与表阿霉素组比较差异无统计学意义（P>0.05）。光镜下观察,PS-ASON注射组和表阿霉素组肿瘤细胞出现大量凋亡和坏死。PS-ASON注射组裸鼠生存率明显高于空白对照组（P<0.001）和表阿霉素组（P<0.01）。结论：反义端粒酶基因对体内膀胱癌形成及生长有明显的抑制作用,抑制程度与化疗药表阿霉素相当,可以用于膀胱癌治疗的进一步研究。     

Inhibition of the activation and collagen production of cultured rat hepatic stellate cells by antisense oligonucleotides against transforming growth factor-beta 1 is enhanced by cationic liposome delivery]

In order to investigate the inhibition of the activation and collagen production of cultured rat hepatic stellate cells (HSC) by antisense oligonucleotides (ASON) against TGF beta 1 after cationic liposome (lipofectin) delivery, the authors synthesized a 20-mer phosphorothioate antisense oligonucleotide of TGF beta 1 mRNA, and its sense of missense oligonucleotides, and then treated the HSC with cationic liposome/oligonucleotide complexes respectively. The cellular uptake of 32P-labelled oligonucleotides was determined by liquid scintillation counting, and HSC activation was assessed by the expression of alpha-smooth muscle actin(alpha-SMA). The cellular uptake of lipofectin/32P-ASON complex was approximately five-fold higher than that of 32P-ASON alone. Cationic liposome (lipofectin) delivery significantly increased the inhibition of HSCs activation by ASON, while compared with the use of naked TGF beta 1 ASON at the same concentration (at a final concentration of 1 mumol/L, P < 0.05). However, these effects were not observed in lipofectin alone, liposome/sense or missense oligos complexes at the same concentration. The oligonucleotide or lipofectin/oligos complexes had no cytotoxicity to rat HSCs in culture. These findings suggest that cationic liposome is an effective vehicle to improve the delivery of ASON to rat HSCs in culture, and the cationic liposome/TGF beta 1 ASON complex may be useful for the treatment of hepatic fibrosis.     

^131I标记抗CEA、TPS及混合单抗在荷人乳腺癌裸鼠体内放射免疫显像及生物学分布

目的 研究^131I标记抗CEA、TPS单抗及混合单抗（CEA＋TPS）在荷人乳腺癌裸鼠体内的分布，为放免显像（RII）及临床应用提供依据。方法 荷瘤鼠分为3组，每组尾静脉分别注入^131I标记的抗CEA，TPS及混合单抗3．7MSq／0．1ml，于注射后2，4、48、96、120h行SPELT，于48、96、120h分批处死，测定肿瘤和血、肝、肺等重要脏器的单位放射性比值（T／NT）。结果 标记单抗注射后24～120h内，肿瘤部位出现放射性浓聚，T／NT比值120h最高达21．31。SPECT阳性率分别为50％、58％、91％。结论 混合单抗组在T/NT比值、SPECT阳性率方面明显优于对照组。单抗的混合使用有望成为RⅡ的首选方法。     

端粒酶反义寡核苷酸对膀胱癌端粒酶活性及细胞增殖的影响

目的 :探讨端粒酶反义核苷酸对膀胱癌的治疗作用。方法 :以端粒酶 RNA模板区为靶点 ,不同剂量的序列为 TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸 ( PS- ASON)作为实验组 ( A、B、C) ,以硫代磷酸修饰 1 3个核苷酸的随机引物作为对照组 ( D) ,仅加入培养基作为空白对照组 ( E) ,与人膀胱癌细胞株 BIU87细胞共同孵育 ,TRAP- ELISA方法检测端粒酶活性变化 ,计数1～ 30 d细胞数 ,计算细胞倍增时间 ,MTT法测定 ASON对细胞的抑制率。结果 :2 5例膀胱癌组织中 ,2 4例 ( 96% )表达端粒酶活性 ,4例癌旁组织无端粒酶活性表达。与随机引物及空白对照组比较 ,实验组的 ASON能明显降低端粒酶活性 ,减少细胞增殖数目 ,增加抑制率及延长倍增时间 ,并显示剂量的依赖性 ( P<0 .0 1 )。结论 :以端粒酶 RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸引起膀胱癌 BIU87细胞端粒酶活性下降 ,增殖抑制 ,引起细胞退化 ,对膀胱癌的治疗有潜在的意义。