蛋白激酶C对SDF-1诱导巨噬细胞趋化及血管内皮生长因子转录的调节作用

目的 探讨基质细胞衍生因子(SDF-1)对体外培养的大鼠巨噬细胞的趋化作用和对培养的巨噬细胞株U937细胞血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达的作用,以及蛋白激酶C(PKC)对其的影响.方法 用Boyden小室法观察人SDF-1对培养的大鼠脾巨噬细胞的趋化效应,以及蛋白激酶C抑制剂氯化白屈菜季铵碱对其趋化反应的影响;用RT-PCR方法观察浓度为100 ng/ml的SDF-1作用12 h后人U937细胞VEGF的表达以及氯化白屈菜季铵碱对其作用的影响.结果 SDF-1对体外培养的大鼠巨噬细胞表现出剂量依赖的趋化作用,100 ng/ml时作用最强,趋化细胞数为(398±159)个/视野;不同浓度的氯化白屈菜季铵碱预处理后均能抑制巨噬细胞的趋化反应,10ng/Lmol/L时抑制作用最强.SDF-1的趋化细胞数下降至(68±31)个/视野.SDF-1能使U937细胞VEGF的mRNA转录水平提高20%;当氯化白屈菜季铵碱预处理后,此促进效应受到明显抑制,氯化白屈菜季铵碱浓度为10靘ol/L时作用最强.仅可检测到微量VEGF.结论 SDF-1通过其受体CXCR4实现对巨噬细胞的趋化作用和促VEGF表达的作用,PKC参与调控该过程.     

脂多糖对人单核细胞株THP-1细胞HIF-1α及其靶基因GLUT-1表达的影响

目的 研究脂多糖(LPS)对人单核细胞株THP-1细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其靶基因葡萄糖转运载体-1(GLUT-1)表达的影响.方法 以1 μg/mL LPS分别处理体外常规培养的THP-1细胞0、2、4、6、8 h.采用Western blotting检测THP-1细胞HIF-1α蛋白表达,RT-PCR技术检测HIF-1α mRNA与GLUT-1 mRNA表达.以不同浓度的LPS(0、0.01、0.1、1 μg/mL)分别刺激THP-1细胞6 h,Western blotting检测HIF-1α蛋白表达.结果 1 μg/mL LPS作用2 h时,THP-1细胞的HIF-1α蛋白表达开始增加,4 h时显著增加(P＜0.05),6～8 h时达高峰(P＜0.01).0.01 μg/mL LPS刺激6 h,THP-1细胞的HIF-1α蛋白表达较对照组明显升高(P＜0.05);当0.1 μg/mL LPS和1 μg/mL LPS刺激6 h时,HIF-1α蛋白表达更高,与对照组相比差异有高度统计学意义(P＜0.01).提示LPS能够诱导THP-1细胞内HIF-1α蛋白表达,并且呈时间和浓度依赖性.1 μg/mL LPS作用2、4、6、8 h均能上调THP-1细胞HIF-1α与GLUT-1 mRNA水平(P＜0.01),且随时间的延长表达逐渐增加.结论 LPS能够促进人单核细胞株THP-1细胞HIF-1α及其靶基因GLUT-1的表达.     

脂多糖对人单核细胞株THP-1细胞HIF-1α及其靶基因GLUT-1表达的影响

目的研究脂多糖(LPS)对人单核细胞株THP-1细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其靶基因葡萄糖转运载体-1(GLUT-1)表达的影响。方法以1μg/mL LPS分别处理体外常规培养的THP-1细胞0、2、4、6、8 h。采用Western blotting检测THP-1细胞HIF-1α蛋白表达,RT-PCR技术检测HIF-1αmRNA与GLUT-1 mRNA表达。以不同浓度的LPS(0、0.01、0.1、1μg/mL)分别刺激THP-1细胞6 h,Western blotting检测HIF-1α蛋白表达。结果1μg/mL LPS作用2 h时,THP-1细胞的HIF-1α蛋白表达开始增加,4 h时显著增加(P<0.05),6~8 h时达高峰(P<0.01)。0.01μg/mL LPS刺激6 h,THP-1细胞的HIF-1α蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05);当0.1μg/mL LPS和1μg/mL LPS刺激6 h时,HIF-1α蛋白表达更高,与对照组相比差异有高度统计学意义(P<0.01)。提示LPS能够诱导THP-1细胞内HIF-1α蛋白表达,并且呈时间和浓度依赖性。1μg/mL LPS作用2、4、6、8 h均能上调THP-1细胞HIF-1α与GLUT-1 mRNA水平(P<0.01),且随时间的延长表达逐渐增加。结论LPS能够促进人单核细胞株THP-1细胞HIF-1α及其靶基因GLUT-1的表达。     

SDF-1/RUNX1融合蛋白腺病毒载体的构建及滴度测定

目的构建SDF-1/RUNX1融合蛋白腺病毒表达载体,并测定其滴度,为研究SDF-1/RUNX1融合蛋白介导的间充质干细胞对造血干细胞定向募集的作用打下基础。方法全基因合成SDF-1-(GlySer)3-RUNX1片段,并在其两端添加限制性酶切位点XhoI及EcoRI,经测序验证基因序列是否正确。采用分子克隆技术构建pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP腺病毒载体,转染入293A细胞中进行包装,采用免疫法测定腺病毒滴度。结果全基因合成SDF-1-(GlySer)3-RUNX1片段经测序验证基因序列正确,长约3 000bp。将其连接至目的载体pIRES2-EGFP,构建出含有SDF-1-(GlySer)3-RUNX1基因序列的GFP共表达质粒编号为B。以B质粒为模板,扩增出带attB1和attB2位点的SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-EGFP片段,长约4 300bp。采用BP重组系统将上述目的片段重组到载体pDONR221,构建出BP重组质粒C。再采用LR重组系统将目的序列重组到腺病毒载体pAD/CMV/v5-DEST上,构建出pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP腺病毒载体。经293细胞包装后,采用免疫法测定腺病毒滴度为1.03×1011 ifu/mL。结论成功构建出SDF-11/RUNX1融合蛋白腺病毒表达载体,且腺病毒滴度较高,有利于后续试验。     

人血管内皮生长因子165基因腺病毒载体的构建及其在C17.2神经干细胞的表达

[目的]构建含有人血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的重组腺病毒载体并观察其在C17.2神经干细胞的表达,为下一步脑缺血的转基因细胞移植治疗提供基础.[方法]将VEGF165基因克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV,获得重组质粒pAdTrack VEGF165,经酶切线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转染大肠杆菌BJ5183同源重组获得重组腺病毒质粒,将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒pAdCMV VEGF165,转化体外培养的C17.2神经干细胞.通过RT-PCR、原位杂交、免疫组化、Western blot法检测其在C17.2神经干细胞中的表达.[结果]重组腺病毒AdCMV VEGF165在293细胞中包装成功,病毒滴度达2×1011efu/mL.病毒上清液经ELISA检测VEGF165表达的量为(1135±138)ng/L.重组腺病毒转染神经干细胞后有稳定表达.[结论]成功构建pAd VEGF165重组腺病毒,获得了稳定表达VEGF165的神经干细胞克隆,为下一步脑缺血的转基因细胞移植治疗提供了基础.     

小鼠MIP1-α重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞中的表达

目的:构建小鼠趋化因子MIP1-α(mMIP1-α)的重组腺病毒载体并在小鼠肝癌细胞中表达,为肝癌基因治疗提供实验基础.方法:PCR扩增含有mMIP1-α的质粒,将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1以及线性化的重组穿梭质粒pTrack-CMV- mMIP1-α共转化BJ5183受体菌并在其中发生同源重组,利用重组前后抗性的改变筛选出重组子,重组腺病毒质粒经过293细胞的包装、扩增和纯化后,感染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,一步法提取细胞总RNA,RT-PCR检测mMIP1-α的mRNA.琼脂糖凝胶打孔法体外观察感染上清中mMIP1-α对小鼠脾细胞的趋化活性.结果:得到了携带mMIP1-α的重组腺病毒,纯化后滴度为4×1011 efu/ml,在感染后的Hepa1-6细胞中检测到mMIP1-α的表达,上清中mMIP1-α的趋化指数为6.3.结论:成功地构建了携带mMIP1-α的重组腺病毒载体,为下一步应用于肝癌的基因治疗提供了基础.     

轴突导向因子Netrin-1对视网膜脉络膜内皮细胞RF/6A的作用研究

目的 研究轴突导向因子Netrin-1对视网膜脉络膜内皮细胞RF/6A的作用.方法 用免疫组化,CCK-8,Transwell及Martrigel方法检测不同浓度Netrin-1对RF/6A细胞增殖,迁移和管腔形成的作用及与血管内皮生长因子(VEGF)的相互作用.结果 体外实验发现Netrin-1对新生血管形成具有双重作用,浓度0～500ng/ml,对细胞迁移,增殖及管腔形成表现为促进作用,而在Netrin-1浓度＞500ng/ml时表现为抑制作用.Netrin-1浓度为50ng/ml时增殖和迁移能力最强.VEGF同时作用时,增殖及迁移作用增强.结论 Netrin-1对RF/6A细胞系的作用依浓度改变表现为对细胞增殖、迁移及管腔形成的促进及抑制作用.VEGF存在的条件下,促进作用表现为进一步增强,抑制作用无明显差异.由此可以推测Netrin-1在新生血管形成中具有双重调控作用,调控作用取决于Netrin-1的浓度及与VEGF的相互作用.在以新生血管发生为主要特点的增殖性糖尿病性视网膜病变中可能起到一定作用.     

构建携带人PAPS合成酶1(hpapss1)全长cDNA的重组腺病毒

目的 构建携带人PAPS合成酶1(hpapss1)全长cDNA的重组腺病毒,并感染巨噬细胞使PAPSS1过表达,为研究其在胆固醇代谢中的作用提供工具.方法 PCR扩增hpapss1全长cDNA,继而构建了真核表达载体pCDNA3.0-hpapss1,再将hpapss1片段亚克隆入腺病毒穿梭质粒pshuttle-CMV,得到转移质粒pshuttle-CMV-hpapss1,并将其转化含腺病毒基因组质粒pAdEasy-1的BJ5183感受态菌(AdEasier-1 cells).筛选并鉴定重组正确的腺病毒质粒pAdEasy-1-hpapss1,在阳离子脂质体介导下,转染腺病毒包装细胞(293细胞)进行包装和扩增.携带hpapss1全长cDNA的重组腺病毒感染THP-1来源的巨噬细胞48 h后,用Western blot方法测定蛋白水平来确定PAPSS1的过表达.结果 成功制备携带hpapss1全长cDNA的重组腺病毒,滴度为5.3×108 pfu/mL,实现了hpapss1基因在巨噬细胞中的过表达.结论 携带hpapss1全长cDNA的重组腺病毒的成功制备为进一步探讨PAPSS1及氧化固醇硫酸化在巨噬细胞胆固醇代谢平衡中的作用及机制建立了很好的模型和工具.     

含CYP2E1基因的重组腺病毒载体转染人骨髓间充质干细胞联合达卡巴嗪的抗肿瘤效应

目的 构建含人细胞色素P-450 CYP2E1(CYP2E1)基因的缺陷型重组腺病毒载体,检测其协同化疗药物的抗肿瘤效应,为基因介导酶前药治疗提供新的思路.方法 克隆人肝CYP2E1全长cDNA,制备高滴度的重组腺病毒颗粒(1.2×1012 pfu/ml).分离、培养、传代纯化及鉴定人骨髓间充质干细胞(BMSC).用Transwell小室检测BMSC向肿瘤细胞的趋化迁移.将重组腺病毒分别转染BMSC和人黑色素瘤细胞A375细胞.荧光显微镜和RT-PCR、Western印迹法分别检测转基因细胞中外源增强绿色荧光蛋白(EGFP)、CYP2E1的表达.倒置显微镜、四甲基偶氮唑盐(MTT)和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双染色法检测CYP2E1协同酶前药达卡巴嗪(DTIC)的抗肿瘤效应(实验分A375-CYP2E1组、BMSC-CYP2E1组和BMSC-CYP2E1+A375组,并以各自空载体组作为对照;细胞接种后分别加入不同浓度DTIC).结果 成功构建重组腺病毒载体pAd5CMV-NpA-CYP2E1和pAd5CMV-NpA-EGFP.成功分离BMSC,并证明BMSC可通过聚碳酸酯膜分别向下室内的K562和A375细胞迁移.荧光显微镜检测到转基因靶细胞EGFP表达,RT-PCR和Western印迹法均检测到目的基因在转基因细胞中高表达.倒置显微镜下见加入DTIC后BMSCCYP2E1+A375组的死亡细胞明显多于对照组.MTT法示DTIC呈浓度依赖性抑制转CYP2E1基因的细胞生长,其中BMSC-CYP2E1+A375组药物半数抑制量(IC50)值为(0.17±0.13)mmol/L,其对照组为(0.65±0.20)mmol/L,二者差异有统计学意义(P＜0.01),可选0.05 mmol/L DTIC浓度作人BMSC的相对安全浓度.Annexin V/PI法示0.05 mmol/L DTIC处理细胞48 h后BMSC-CYP2E1+A375组细胞凋亡率明显高于其对照组(26.8±2.0比8.7±1.3,P＜0.01).结论 BMSC体外具有向肿瘤细胞趋化迁移的特性.重组腺病毒载体介导的CYP2E1转染BMSC具有协同化疗前药的抗肿瘤效应.     

Soluble endoglin和sFlt-1在子痫前期患者血清中的表达

目的探讨可溶性CD105淋巴细胞抗原及可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)在子痫前期患者血清中表达水平的变化及意义。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定子痫前期组、子痫前期各个亚组及正常晚期妊娠组血清sEng及sFlt-1的水平。结果①子痫前期组孕妇血清sEng、sFlt-1水平分别为(5.27±1.05)ng／mL、(391.14±70.25)pg／mL,正常晚期妊娠组分别为(1.26±0.40)ng／mL、(27.57±4.36)pg／mL,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01);②轻度子痫前期组sEng水平与重度子痫前期组比较差异有统计学意义(P＜0.01),两组sFlt-1水平比较差异无统计学意义(P＞0.05);③早发型重度子痫前期组sEng水平与晚发型重度子痫前期组比较差异有统计学意义(P＜0.01),两组sFlt-1水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论子痫前期患者血清中sEng、sFlt-1水平显著升高,sEng在早发型重度子痫前期血清中升高更显著,对早期诊断子痫前期有重要意义。     

Correlation between Endotoxin Tolerance in Human Monocyte Leukemia Cell Line THP-1 with Glucocorticoid Receptor-α

Lipopolysaccharide(LPS),a major cell wallcomponent of Gram-negative bacteria,induces ac-tivation of monocytes and macrophages.Activatedmacrophages produce several inflammatory cyto-kines including TNF-α,IL-6,and IL-12,which,when in excess,leads to serious systemic disor-ders—sepsis with a high mortality rate.Pre-expo-sure to LPSis shown toinduce a reduced sensitivi-ty to subsequent challenge of LPS.This phenome-non is termed LPS tolerance[1].The anti-inflam-mationis induced by glucoc…     

子痫前期患者血清VEGF、TNF-α和sFlt-1水平的变化及意义

目的探讨子痫前期患者血清中血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及其可溶性血管内皮生长因子受体（lsFlt-1）的水平及意义。方法采用酶联免疫吸附试验法测定30例重度子痫前期疾病患者血清VEGF、TNF-α及其sFlt-1水平,并与正常孕妇30例对照比较。结果重度子痫前期患者血清VEGF水平显著低于对照组,而血清TNF-α、sFlt-1水平明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。重度子痫前期患者血清VEGF水平与TNF-α及sFlt-1均呈负相关（均P〈0.05）。结论VEGF、TNF-α、sFlt-1参与子痫前期的发病,VEGF与TNF-α、sFlt-1的相互调节在子痫前期的发病机制中可能起一定作用。     

胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1抑制视网膜血管新生的机制研究

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1（IGFBP-rP1）抑制血管内皮细胞生长因子（VEGF）体外诱导视网膜新生血管形成的机制。方法 猕猴视网膜/脉络膜血管内皮细胞株（RF/6A）扩增培养、血清饥饿培养24 h后,分为对照组及50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1干预组进行干预,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;分为对照组,10 ng/mL VEGF干预组,50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1+10 ng/mL VEGF干预组进行干预,免疫细胞化学染色检测细胞中B-Raf蛋白表达,分光光度法检测细胞中Caspase 3活性的变化。结果 流式细胞仪检测显示,50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1干预组RF/6A细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。免疫细胞化学染色检测与Caspase 3活性检测显示,与对照组比较,10 ng/mL VEGF干预组RF/6A细胞细胞质平均吸光度显著升高、D405值显著降低（均P<0.05）;与10 ng/mL VEGF干预组比较,50、100、200 ng/mL IGFBP rP1+10 ng/mL VEGF干预组RF/6A细胞细胞质平均吸光度显著降低、D405值显著升高（均P<0.05）,且各组间比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 IGFBP-rP1通过干预B-Raf蛋白表达,上调细胞Caspase 3活性,对抗VEGF的促视网膜血管新生效应,发挥抑血管新生因子的负向调节作用。     

血管内皮生长因子及可溶性受体-1水平变化对子痫前期发病的预测探讨

目的:探讨孕妇血浆中血管内皮生长因子(VEGF)及可溶性受体-1(sFlt-1)水平变化对子痫前期发病的早期预测价值。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对200例初始血压正常的孕妇自孕16周开始检测血清VEGF及sFlt-1水平,共测定3次。结果:(1)200例孕妇中发展为子痫前期18例,其余182例孕妇妊娠结局正常;(2)在孕16~20、22~28、30~36周子痫前期组孕妇血清VEGF、sFlt-1水平分别为(29.30±4.25)ng/L、(6.68±1.65)μg/L;(26.98±3.81)ng/L、(15.18±3.99)μg/L;(26.77±4.32)ng/L、(20.23±5.67)μg/L。正常妊娠组VEGF、sFlt-1水平分别为(33.18±2.01)ng/L、(6.72±0.76)μg/L;(30.97±3.24)ng/L、(6.78±1.03)μg/L;(30.62±1.65)ng/L、(6.87±1.03)μg/L。两组比较孕16~20周差异无统计学意义(P>0.05),而孕22~28周、孕30~36周差异有统计学意义(P<0.01)。(3)sFlt-1水平作为预测子痫前期发生的指标,采用ROC曲线求得sFlt-1预测界限值为9.26μg/L。其预测敏感度81.82%,特异度99.13%,阳性预测值94.74%,阴性预测值96.61%。结论:血清sFlt-1水平可以作为子痫前期发病的早期预测指标。     

红细胞生成素对肾小管上皮-间充质细胞转化的抑制作用及其与VEGF表达变化的关系

目的探讨红细胞生成素（rHuEPO）对人肾小管上皮细胞（HKC）上皮-间充质细胞转化（EMT）的作用及其与该细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达变化的关系。方法体外培养HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/ml的转化生长因子-β1（TGF-β1）处理的HKC为阳性对照,以不同浓度（0.1、1.0、10、50、100IU/ml）的rHuEPO与8ng/ml的TGF-β1共同处理HKC,或在不同时间（-24、0、12、24、36h）用同一浓度rHuEPO（100IU/ml）对8ng/ml的TGF-β1处理的HKC进行干预。应用RT-PCR方法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和VEGFmRNA转录水平,应用免疫印迹方法检测α-SMA、E钙黏蛋白以及VEGF的蛋白表达水平。结果rHuEPO以剂量和时间依赖的方式抑制TGF-β1诱导的HKCα-SMAmRNA和蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）,保护性上调TGF-β1抑制的HKC细胞E钙黏蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）;同时上调TGF-β1抑制的HKC细胞VEGFmRNA和蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）。结论rHuEPO对TGF-β1诱导的EMT具有一定的抑制作用,并具剂量-时间依赖性;该作用可能与rHuEPO上调肾小管上皮细胞VEGF的表达有关。     

可溶性血管内皮生长因子受体-1与子痫前期相关因素分析

目的　研究可溶性血管内皮生长因子受体- 1 ( sFlt-1) 及临床生化指标在正常妊娠和子痫前期(轻度、重度)组母体外周血中表达差异。方法　选取子痫前期轻度16例、子痫前期重度孕妇24例,18例与之年龄孕周相匹配的血压正常单胎孕妇(对照组) ,用ELISA方法测定其外周血中sFlt-1的水平,检验科常规测量各项生化指标。结果　外周血中sFlt-1水平、血尿酸、血清肌酐、β2微球蛋白在子痫前期重度组明显高于对照组, 分别为(11039.43 ±1305.84) 、（3158.27±2658.13）ng/L ;(379.87 ±82.11) 、（266.41±57.69）μmol/ L;（61.65±12.24) 、（50.87±8.35）μmol/ L;（2.88±0.82）、（1.94±0.49）mg/L;血浆白蛋白水平（29.26±3.92）g/ L低于对照组（35.52±6.92 ）g/ L,以上两者差异均有显著性( P < 0.05) 。血清sFlt-1水平在对照组、子痫前期轻度、子痫前期重度中逐渐升高分别为（3158.27±2658.13）、（6060.75±2992.92 ）、(11039.9 ±1305.84)ng/L。结论　sFlt-1 在子痫前期组孕妇的外周血中表达升高, 可能与子痫前期的病因及病理生理有关,与疾病的严重程度相关,联合其他指标可以作为预测和判断子痫前期疾病严重性的指标。     

高迁移率蛋白B1对血管平滑肌细胞迁移的影响及分子机制研究

目的：探讨高迁移率蛋白B1（HMGB1）对血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移的影响及 TLR4依赖的 TLR4／PI3K／Akt信号通路介导的分子机制。方法体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs ,采用不同浓度 HMGB1（0．1～1000．0 ng ／mL）处理,分为对照组（未经任何处理）、HMGB1组、HMGB1＋ TLR4 siRNA转染组、Control siRNA转染组和磷脂酰肌醇3‐激酶（PI3K）抑制剂（LY294002）干预组,观察各组细胞活性及 HMGB1对 VSMCs 迁移的影响;实时定量 RT‐PCR与 Western blot 分别检测TLR4、Akt、p‐Akt、PI3K mRNA和蛋白的表达;ELISA测定PI3K的活性。结果 HMGB1（0．1～1000．0 ng／mL）呈剂量依赖性促进VSMCs迁移（P＜ 0．05）;经细胞活性测定,HMGB1在使用的浓度范围内对 VSMCs未造成细胞毒性作用（P＜ 0．05）;HMGB1（100 ng／mL）处理的 VSMCs细胞组 PI3K 活性及 Akt磷酸化水平明显增加（P＜ 0．05）;经 TLR4 siRNA 转染发现, HMGB1引起的VSMCs迁移明显减弱（P＜0．05）,同样在PI3k抑制剂干预组,PI3K／Akt途径活化和HMGB1介导的VSMCs迁移也被明显抑制（P＜0．05）。结论 HMGB1呈剂量依赖性促进VSMCs迁移,TLR4依赖的 TLR4／PI3K／Akt信号通路参与了此过程,提示以TLR4依赖的PI3K／Akt途径为靶点,可为阻塞性血管疾病的治疗提供新思路。     

血管内皮生长因子及其可溶性Flt-1在子痫前期患者血清中的水平及意义

目的:探讨子痫前期患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)及其可溶性受体1(Flt-1)的水平及意义。方法:采用酶联免疫吸附试验法测定30例子痫前期患者孕晚期及临产前、产后血清VEGF及其sFlt-1水平,并与正常孕妇30例对照比较。结果:两组在孕晚期及临产前的VEGF、sFlt-1水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。轻度子痫前期与重度子痫前期患者在孕晚期及临产前的VEGF、sFlt-1水平比较,差异也均有统计学意义(P<0.01)。两组在产后的VEGF、sFlt-1水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:子痫前期患者血清中sFlt-1水平于孕晚期及临产前较正常孕妇明显增高,而VEGF水平降低,提示VEGF、sFlt-1可作为诊断子痫前期的指标。     

重组HMGB1 A-box蛋白对HMGB1抗炎作用的观察

目的：观察重组HMGB1 A-box蛋白对HMGB1的特异性拮抗作用。方法：复苏的RAW264.7细胞培养至对数生长期,用于以下实验：实验分为六组,r HMGB1组：加500 ng/mL r H-MGB1;LPS组：加100 ng/mL LPS;A-box干预1组：加500 ng/mL r HMGB1和100 ng/mL A-box;A-box干预2组：加500 ng/mL r HMGB1和200 ng/mL A-box;A-box干预3组：加500 ng/mL r HMGB1和500 ng/mL A-box;A-box干预4组：加100 ng/mL LPS和500 ng/mL A-box。培养6 h后,收集上清液,待测。各组上清液采用ELISA盒检测TNF-α的含量。结果：200 ng/mL、500 ng/mL重组A-box蛋白能明显抑制HMGB1诱导培养细胞释放TNF-α的水平（P〈0.05）,但对LPS的无明显作用。结论：r HMGB1 A-box蛋白可能有特异性拮抗HMGB1的致炎作用。