α-MSH对脂多糖部分生物学活性的影响

目的旨在观察α-黑色素细胞刺激素(α-melanocytestimulatinghormone,α-MSH)对LPS部分生物学活性的影响,进一步探讨α-MSH的抗炎作用及免疫调节功能.方法应用比色法、倒置生物显微镜及流式细胞仪,测定在LPS作用下α-MSH对小鼠腹腔巨噬细胞释放H2O2量、中性粒细胞凋亡率及FITC-LPS与单核细胞的结合率及单核细胞表面平均荧光强度的影响.结果LPS可刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放H2O2,而α-MSH与LPS共同培养,则能明显抑制巨噬细胞释放H2O2(P＜0.01);α-MSH及LPS本身均不影响中性粒细胞凋亡(P＞0.05),但在LPS作用下,α-MSH可显著促进中性粒细胞凋亡(P＜0.01);并且,α-MSH可降低FITC-LPS与单核细胞的结合率及单核细胞表面的平均荧光强度(P＜0.05,P＜0.01).结论以上结果表明,α-MSH不仅能有效抑制LPS刺激巨噬细胞释放H2O2、促进LPS作用下的中性粒细胞发生凋亡;而且可干扰LPS与单核细胞的结合,发挥其有效的免疫调控作用,对控制局部和全身炎症反应具有重要意义.     

α-MSH对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞SOCS-3mRNA表达的影响

目的:观察α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞SOCS-3mRNA表达及NO释放的影响,以探讨α-MSH拮抗LPS的作用机制。方法:用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)的方法检测LPS诱导体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞SOCS-3mRNA表达水平和给予α-MSH后对SOCS-3mRNA表达的影响;用Griess试剂检测单独给予LPS与同时给予α-MSH和LPS作用巨噬细胞后对NO生成量的影响。结果:未受LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞表达低水平的SOCS-3。LPS组SOCS-3的表达和NO的生成显著高于对照组,而同时给予α-MSH和LPS培养,巨噬细胞的SOCS-3的表达明显低于LPS组,NO的生成则几乎完全阻断。结论:LPS在启动炎症的过程中可能也激活了SOCS介导的负调节机制;但SOCS可能不参与α-MSH的抗LPS作用。     

五味子乙素对氧化损伤的晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的:探讨五味子乙素(Sch B)对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(LEC)凋亡的影响。方法:采用无菌操作摘取SD大鼠双眼,并在手术显微镜下分离晶状体,随机分为空白对照组、过氧化氢组(H₂O₂)、吡诺克辛(PS)组和Sch B组。使晶状体孵育在300μmol·L^-1H₂O₂培养液中复制LEC凋亡模型,同时加入终浓度为0.5mmol·L^-1的SchB,置二氧化碳培养箱共同孵育24h。取晶状体前囊膜,采用TUNEL法检测LEC凋亡及凋亡率,透射电子显微镜观察LEC超微结构改变和凋亡小体形成。结果:H₂O₂组LEC凋亡率(92.0±2.6)显著高于空白对照组(3.5±1.8)(P<0.01);SchB组LEC凋亡率(13.8±3.0)显著低于H₂O₂组,且与PS组(56.0±9.9)有显著的差异(P<0.05)。超微结构研究显示,H₂O₂组绝大多数LEC发生凋亡,并呈凋亡各期严重改变的全过程;Sch B组仅少数LEC发生凋亡,并多为早期或中期的轻微改变。结论:Sch B可明显抑制实验性氧化损伤大鼠LEC凋亡,且明显优于PS滴眼液。     

血管内皮生长因子拮抗H2O2诱导的血管内皮细胞凋亡

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）预防血管成形术后再狭窄的机制。方法：构件含人VEGF₁₆₅基因的重组腺病毒载体并感染体外培养的血管平滑肌细胞，72 h后收集含VEGF的条件培养液，将对数生长期的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分成对照组、H₂O₂处理组和H₂O₂+VEGF处理组，12 h后采用原位末端标记法和流式细胞术检测各组细胞的凋亡发生情况。结果：H₂O₂处理组细胞凋亡明显多于对照组和H₂O₂+VEGF处理组（P<0.01）。结论：H₂O₂能诱导HUVEC凋亡，而VEGF能部分拮抗上述作用。     

Probucol对碱性成纤维细胞生长因子和过氧化氢促大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究probucol对bFGF和H₂O₂促大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:采用MTT、细胞计数和[3H]-TdR掺入法观察probucol对bFGF和H₂O₂促VSMC增殖的影响。结果:①Probucol抑制bFGF和H₂O₂刺激VSMC增殖和DNA合成,且呈剂量依赖性。Probucol+bFGF和probucol+H₂O₂组与bFGF和H₂O₂组比较,细胞计数、A值和[3H]-TdR掺入量分别下降了40.0%、39.1%、45.5%和46.9%、45.0%、39.5%(P＜0.05,P＜0.01)。②bFGF和H₂O₂刺激前给予probucol预处理24h能显著抑制VSMC增殖和DNA合成(P＜0.05),而bFGF和H₂O₂刺激后24h给予probucol则无明显影响(P＞0.05)。结论:Probucol能显著抑制bFGF和H₂O₂刺激的VSMC增殖和DNA合成,但对bFGF和H₂O₂预刺激诱导的细胞增殖无抑制作用。     

丹参单体通过下调粘着斑激酶诱导H2O2刺激的肝星状细胞凋亡

目的: 研究丹参单体IH764-3对H₂O₂刺激的肝星状细胞(HSCs)凋亡的诱导作用以及此过程中粘着斑激酶(FAK)的变化。方法: 通过直接细胞计数法测定HSCs增殖;光学显微镜及透射电镜技术观察凋亡细胞的形态学改变,并应用膜联蛋白(Annexin-V)/碘化丙啶(PI)联合标记法检测HSCs的凋亡率;运用RT-PCR方法观察FAKmRNA表达。结果: H₂O₂具有刺激HSCs增殖的作用;丹参单体IH764-3能够诱导H₂O₂刺激的HSCs凋亡,并呈剂量依赖关系:10mg/L、20mg/L、30mg/L及40mg/LIH764-3干预48h后各组凋亡率分别为6.35%、9.28%、15.10%、19.69%,而H₂O₂组为2.30%;30mg/LIH764-3干预HSCs不同时间(12h、24h、48h)的凋亡率分别是6.73%、10.34%、15.10%,呈时间依赖关系;RT-PCR分析表明FAK基因表达强度在加入IH764-3后2h即明显下调,10mg/L,20mg/L,30mg/L及40mg/L组分别比H₂O₂组低了68.71%、71.00%、86.72%、95.16%。结论: 丹参单体IH764-3可以诱导H₂O₂刺激的HSCs凋亡,下调FAKmRNA表达是其诱导HSCs凋亡的机制之一。     

热休克蛋白参与PI3K/Akt 介导H2O2 预处理的抗凋亡作用

目的: 探讨热休克蛋白(HSP)是否参与PI3K/Akt信号通路介导的H₂O₂预处理的抗细胞凋亡作用。方法: 利用PC12细胞建立H₂O₂预处理对抗高浓度H₂O₂诱导细胞凋亡的实验模型,分组如下:(1)空白对照组;(2) 损伤组;(3)预处理＋损伤组; (4)LY294002＋预处理＋损伤组;(5) LY294002组;(6) quercetin＋预处理＋损伤组;(7) 17-AAG＋预处理＋损伤组;(8) 溶剂对照组。应用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定caspase-3的活性,免疫印迹法(Western blotting)测定HSP的表达水平。结果: 100 μmol/L H₂O₂预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300 μmol/L H₂O₂引起的细胞凋亡,使caspase-3的活性降低,同时上调HSP70和HSP90的表达。HSP70和HSP90的抑制剂quercetin和17-AAG拮抗H₂O₂预处理的抗细胞凋亡作用。 PI3K抑制剂LY294002不仅拮抗了H₂O₂预处理抗细胞凋亡的作用,并且抑制H₂O₂预处理对HSP70和HSP90的表达上调。结论: PI3K/Akt通路、HSP70和HSP90均参与H₂O₂预处理诱导的细胞保护作用。并且HSP70和HSP90参与PI3K/Akt信号通路介导H₂O₂预处理的抗细胞凋亡作用。     

阿魏酸对H2O2诱导脐静脉内皮细胞表达P-选择素的影响

目的:探讨阿魏酸对H₂O₂刺激脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达P-selectin的影响。方法:应用培养的HUVECs经H₂O₂刺激,用FTTC标记抗P-选择素单抗SZ-51-1gG和FCM测定HUVECs表面表达的P-se-lectin,同时观察了阿魏酸对其表达的影响。结果:实验显示正常HUVECs表面表达少量的P-selectin,H₂O₂能刺激培养的HUVECs表面P-selectin表达增高,其中最适的H₂O₂刺激浓度在250-300μmol/L,最适的刺激时间为1.5-2h;随着阿魏酸浓度增加,阿魏酸明显地抑制H₂O₂刺激HUVECs表面P-selectin的表达。结论:H₂O₂能刺激培养的HUVECs表面P-selectin表达增高,阿魏酸明显地抑制其表达。     

应用亲和磷酸蛋白质组学筛选氧化应激重塑型LPS通路的侯选信号分子

目的： 研究低剂量LPS刺激的Thp-1细胞在有或无H₂O₂预处理时磷酸化蛋白组的差异，以初步筛选氧化应激重塑型LPS通路中的新信号分子。方法： 使用PMA刺激Thp-1单核细胞36 h使之分化成为成熟的巨噬细胞，静息36 h后，先以等体积的培养基或100 μmol/L H₂O₂刺激1 h，再以培养基或10 μg/L LPS刺激 30 min。采用PMAC ( phosphoprotein metal affinity column)富集各组细胞的磷酸化蛋白质，经超滤除盐后进行二维凝胶电泳，比较LPS组和H₂O₂+LPS组的磷酸化蛋白图谱的差异，并挑选部分斑点进行质谱鉴定。结果： 相对于LPS组（仅用LPS刺激的细胞)，在H₂O₂+LPS组（LPS刺激前经H₂O₂提前处理的细胞)中，有29个磷酸化蛋白斑点在双向电泳图谱中表现出可重复的差异，其中，17个斑点发生了上调（包括新出现的斑点），12个发生了下调（包括消失的斑点）。我们已经鉴定出其中5个差异蛋白，这些蛋白参与多种多样的细胞过程例如蛋白质降解、信号转导和蛋白质折叠等。其中，在H₂O₂+LPS组中显著下调的proteasome beta-4亚基与LPS信号传递关系密切。结论： 亲和磷酸蛋白组学有效减少了高丰度的结构蛋白的干扰并增加了信号分子检出的可能性。上述５个蛋白尤其是proteasome beta-4亚基可能是氧化应激重塑型LPS通路的重要调节分子。     

热休克蛋白70对H2O2诱发大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的:探讨热休克蛋白70(HSP₇₀)对心肌细胞凋亡的保护作用。方法:体外培养大鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生HSP₇₀,用过氧化氢(H₂O₂)造成心肌细胞损伤。采用免疫组化、DNALadder、流式细胞仪、细胞色素C氧化酶及琥珀酸脱氢酶比活力的测定、电镜观察等作为检测指标的方法。结果:温度诱导后HSP₇₀在胞浆中大量表达,H₂O₂损伤组与HSP₇₀保护组凋亡率(12.18±1.94,6.42±0.86,P<0.01)、细胞色素C氧化酶比活力(5.824±1.949,10.375±2.513)及琥珀酸脱氢酶比活力(0.884±0.152,1.174±0.214,P<0.01)有显著差异。电镜观察损伤组细胞膜、细胞器损伤明显,并出现凋亡小体。结论:HSP₇₀可延迟细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用。     

过氧化氢诱导心肌细胞凋亡性和非凋亡性死亡的研究

目的:探讨活性氧过氧化氢(H₂O₂)对心肌细胞损伤作用。方法:用不同浓度的H₂O₂作用于新生鼠培养心肌细胞,通过琼脂糖凝胶电泳、Giemsa染色和流式细胞仪等方法观察H₂O₂对心肌细胞的凋亡性损伤作用,同时检测培养介质中乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)等生化指标的改变。结果:5 mmol/L H₂O₂作用于培养心肌细胞6 h,在琼脂糖凝胶电泳上出现梯状DNA带;Giemsa染色细胞涂片可见到染色体浓聚或边缘化,成新月型聚集在核膜周边,并有凋亡小体的存在;流式细胞仪可检测出亚二倍体峰的出现。结论: H₂O₂具有浓度和时间依赖关系诱导心肌细胞的凋亡,在低浓度H₂O₂(＜1 mmol/L)导致培养心肌细胞的早期生物化学改变,自由基含量升高,膜通透性增加,同时伴有少量心肌细胞凋亡;而在高浓度H₂O₂(＞10 mmol/L)时会造成培养心肌细胞的坏死性死亡,细胞膜崩塌,脂质过氧化物(MDA)大量产生,LDH大量泄漏,DNA琼脂糖凝胶电泳出现弥散(smear)泳带;5~10 mmol/L H₂O₂诱导大量心肌细胞凋亡性死亡,同时伴有LDH和MDA含量升高等生物化学的改变。     

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤在H2O2引起的神经胶质瘤U251细胞损伤中的作用

目的: 探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)在H₂O₂诱导的神经胶质瘤U251细胞损伤过程中的作用。方法: 实验分为4组:正常对照组、10 mmol/L 3-MA组、1 mmol/L H₂O₂组、1 mmol/L H₂O₂ +10 mmol/L 3-MA组。MTT法检测各组的U251细胞增殖率;MDC染色检测细胞自噬空泡的变化;Hoechst 33342染色检测细胞核染色质凝聚变化;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果: 与对照组相比,单独应用3-MA对U251细胞无明显影响。H₂O₂作用组U251细胞增殖率明显降低,细胞内出现自噬空泡,细胞核染色质凝聚,细胞凋亡率增加。3-MA与H₂O₂联合作用于U251细胞时,与单独应用H₂O₂组相比,抑制了H₂O₂引起的胞内自噬空泡的积聚,但细胞凋亡率明显增加。结论: 自噬抑制剂3-MA能够一定程度地抑制H₂O₂诱导的U251细胞自噬,但促进了细胞凋亡,表明自噬在H₂O₂诱导的神经胶质瘤U251细胞损伤过程中很可能起到保护性作用。     

过氧化氢对血管平滑肌细胞增殖和明胶酶A及其抑制因子基因表达的影响

目的:探讨过氧化氢(H₂O₂)对体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和明胶酶A(MMP-2)、及其抑制因子(TIMP-2)基因表达的影响。方法:先用四甲基偶氮唑(MTT)法筛选出H₂O₂对VSMC的毒性作用浓度和增殖作用浓度,在此基础上用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定H₂O₂对MMP-2、TIMP-2mRNA表达的影响。结果:H₂O₂浓度大于300μmol/L后显示出对VSMC的致死毒性作用;H₂O₂浓度在0.01-5.0μmol/L内可以刺激VSMC的增殖,且呈时间依赖性;1μmol/LH₂O₂、10μmol/LH₂O₂对MMP-2基因转录有明显的促进作用;不同浓度的H₂O₂对TIMP-2基因转录无明显促进作用。结论:适当浓度的H₂O₂可以促进VSMC的增殖和MMP-2mRNA表达,但对TIMP-2mRNA表达无明显作用,提示H₂O₂参与了血管重塑的不同病理环节。     

α-MSH对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA 表达的影响

目的：观察α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对脂多糖（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达的影响，探讨α-MSH拮抗LPS的作用机制。方法：用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）的方法检测LPS诱导体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达水平和给予α-MSH后对CD14和TLR4 mRNA表达的影响。结果：正常静息小鼠腹腔巨噬细胞只表达少量的CD14和TLR4 mRNA,给予LPS刺激后6 h，两者表达明显强于正常对照（P<0.01），并且其表达量随着LPS刺激时间的增加维持在高水平，24 h达到峰值，在48 h CD14 mRNA的表达降到正常水平，而TLR4 mRNA的表达仍然维持在高水平。在LPS刺激的同时给予α-MSH，CD14和TLR4 mRNA的表达则明显低于LPS组（P<0.05），而且α-MSH这种效应与其使用浓度有关，0.1 nmol/L α-MSH不影响LPS诱导的CD14和TLR4 mRNA的表达，而当α-MSH的浓度达到1、10、100 nmol/L则能显著影响CD14和TLR4 mRNA的表达（P<0.05），但各个浓度组之间的作用没有明显差别（P>0.05）。结论：α-MSH抗LPS的效应可能与其下调LPS信号转导通路关键受体CD14和TLR4 mRNA的表达有关，从而干扰LPS跨膜信号转导，阻碍巨噬细胞活化。     

远志皂苷元对氧化应激损伤的视网膜神经节细胞的保护作用

目的: 观察远志皂苷元(senegenin,Sen)对氧化应激损伤的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的影响并初步探讨其作用机制。方法: 采用上丘荧光金逆行标记RGCs后,体外原代RGCs混合细胞培养,随机分为control组、H₂O₂组、Sen+H₂O₂和Sen组。检测带荧光金荧光细胞的活力。同上述分组处理视网膜,用Hoechst 33258 染色后观察视网膜细胞核形态的变化,Western blotting检测视网膜细胞cleaved caspase-3、细胞色素C及Bcl-2蛋白的表达。结果: 与control组比较,Sen浓度在10、20和40 μmol/L时, RGCs活力无明显变化(P>0.05),但Sen浓度达到80和160 μmol/L时,RGCs活力明显下降,差异显著(P<0.01)。25、50、100和200 μmol/L H₂O₂明显降低RGCs活力(P<0.05)。Sen浓度在10、20和40 μmol/L时,对50 μmol/L H₂O₂损伤的RGCs有较好的保护作用(P<0.05),其中40 μmol/L Sen保护作用最为明显。Hoechst 33258染色表明Sen可以减少H₂O₂引起的视网膜细胞凋亡。Western blotting结果表明Sen促进Bcl-2蛋白的表达,降低线粒体细胞色素C的释放,下调cleaved caspase-3的表达。 结论: Sen保护RGCs对抗氧化应激引起的损伤,其机制可能与其增强Bcl-2蛋白表达和减少氧化应激引起的细胞凋亡有关。     

小鼠腹腔巨噬细胞基态游离钙离子浓度的不均一性及其和细胞反应性的关系

目的:在单细胞水平上研究小鼠腹腔巨噬细胞(PM)基态游离钙离子浓度([Ca²⁺]_i)的不均一性及其和细胞反应性的关系。方法:用荧光指示剂Fura-2/AM结合荧光显微镜成像系统检测单个PM基态的及用激动剂刺激细胞后的[Ca²⁺]_i;同时结合NBT染色法定量检测单个PM产超氧阴离子(O₂^-)水平。结果:对7只正常小鼠共392个PM基态[Ca²⁺]_i的研究表明小鼠PM的基态[Ca²⁺]_i呈正态分布[(54±24)nmol/L,n=392],但波动范围较大(从10nmol/L到高于100nmol/L),以[Ca²⁺]_i在40-60nmol/L的细胞数量最多(约占50%)。用PMA、fMLP刺激后PM[Ca²⁺]_i升高,且受刺激后[Ca²⁺]_i升高的峰值和基态[Ca²⁺]_i之间呈正相关(PMA刺激组:r=052,P<0.01,n=58;fMLP刺激组:r=0.59,P<0.01,n=44。此两组实验均以不同的小鼠重复3次,其它两只小鼠的结果与上同。下面的表述方法同此)。另外小鼠PM的基态[Ca²⁺]_i与其受PMA刺激后产生O₂^-的量也呈显著正相关(r=0.42,P<0.01,n=43,重复4次)。结论:小鼠PM的基态[Ca²⁺]_i是不均一的,且基态[Ca²⁺]_i的高低和该细胞对致炎因子的反应性密切相关。     

远志皂苷元对H2O2诱导的大鼠海马神经元损伤的影响及其机制

目的: 观察远志皂苷元(senegenin, Sen)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的SD大鼠海马神经元损伤的影响并探讨其作用机制。方法: SD大鼠海马神经元培养至第6 d,随机分为正常组、H₂O₂组、Sen+ H₂O₂ 组和Sen组,药物干预后检测细胞存活率、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并用 Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化,荧光定量PCR(real-time PCR)检测神经元凋亡相关基因 bcl-2和bax 的表达,进一步采用Western blotting观察Bcl-2和Bax蛋白表达,酶荧光活性检测试剂盒测定caspase-3的活性改变。结果: 与正常组相比,H₂O₂组细胞存活率降低。与H₂O₂组相比,20 μmol/L Sen+ H₂O₂ 组细胞存活率升高,SOD活性升高,MDA含量下降,并且远志皂苷元能够上调bcl-2 mRNA表达、下调bax mRNA表达,降低caspase-3活性,Western blotting结果进一步表明Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达下降,各指标均有显著差异(P<0.05)。结论: 远志皂苷元对H₂O₂处理的海马神经元有一定保护作用,其机制可能与远志皂苷元增强海马神经元抗氧化能力、调节细胞凋亡相关蛋白从而抑制凋亡有关。     

单个巨噬细胞超氧阴离子水平的定量检测方法

目的：建立单个巨噬细胞超氧阴离子（O₂^-.）水平的定量检测方法,从而达到在单细胞内同时检测O₂^-.和细胞内游离钙离子浓度（[Ca²⁺]_i）的目的。方法：分离小鼠腹腔巨噬细胞，用NBT还原法显示细胞产生O₂^-.的水平，以细胞加入NBT前与染色后的透光强度之比来定量表示该细胞产生O₂^-.的量；以荧光探针Fura-2/AM负载细胞检测单细胞内[Ca²⁺]_i。结果：①分别用PMA、OZ刺激细胞并用NBT还原法染色后细胞内均有黑色沉淀，但前者分布均匀而后者所产生沉淀多偏于一侧，呈明显的局域性分布；②用NBT孵育10 min后，细胞透光强度没有明显变化（n=43, P>0.05），用NBT刺激细胞产生黑色沉淀后细胞透光强度明显降低（P<0.01, n=43）。③在不同的聚焦状态下，无细胞背景区的透光强度没有明显变化，而细胞区透光强度变化明显，但各个细胞透光强度的变化趋势是一致的；④PMA处理3批巨噬细胞并用NBT法染色得到3组R_OI值的分布情况提示用R_OI值定量是合理的但批间差异过大；⑤静息状态下的小鼠腹腔巨噬细胞[Ca²⁺]_i与细胞受PMA刺激后的R_OI呈显著正相关（n=43, r=0.42, P<0.01）。结论：用NBT还原法染色前后细胞透光强度比值可以代表该细胞产生O₂^-.的量，进而我们可以在单细胞内同时检测O₂^-.和[Ca²⁺]_i。     

过氧化氢对乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响及牛磺酸的拮抗作用

目的:研究过氧化氢(H₂O₂)对心肌细胞i的影响,以及牛磺酸对H₂O₂诱导钙超载的拮抗作用。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,实验分4组:①正常对照组;②H₂O₂组:加入终浓度为100μmol/L的H₂O₂;③H₂O₂＋牛磺酸(同时)组:牛磺酸30mmol/L与H₂O₂100μmol/L同时加入;④H₂O₂＋牛磺酸(先后)组:先加入终浓度为100μmol/L的H₂O₂,2min后再加20mmol/L的牛磺酸。以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入H₂O₂后即刻与15min,检测i变化。结果:对照组心肌细胞内荧光强度和荧光光密度值较低。H₂O₂加入后即刻,细胞内荧光光密度值开始增加,15min后细胞内荧光强度和荧光光密度值显著高于对照组(P＜0.05)。而H₂O₂＋牛磺酸(同时)组细胞内荧光光密度值显著低于H₂O₂组(P＜0.05vsH₂O₂组);H₂O₂＋牛磺酸(先后)组细胞内荧光光密度值显著低于H₂O₂组(P＜0.05vsH₂O₂组)。结论:H₂O₂可引起心肌细胞内钙超载;牛磺酸能显著减轻H₂O2诱导的心肌细胞内Ca²⁺超载。     

阿魏酸钠对大鼠晶状体上皮细胞凋亡相关基因BCl-2和bax的调控

目的:本研究旨在探讨阿魏酸钠 (SF)对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞 (LEC)凋亡相关基因BCl-2和bax的调控。方法:将SD大鼠双眼随机分成空白对照组、过氧化氢 (H₂O₂)组、吡诺克辛 (PS)组和SF组。无菌操作摘除眼球并在手术显微镜下分离晶状体,使晶状体孵育在 300μmol·L^-1H₂O₂ 培养液中复制LEC凋亡模型,同时加入终浓度为 5mmol·L^-1的SF,置二氧化碳培养箱共同孵育 2 4h。取晶状体前囊膜采用免疫组化法检测凋亡相关基因BCl-2和bax的蛋白表达并进行比较。结果:(1)正常SD大鼠LEC中BCl-2和Bax均有表达,BCl-2表达较Bax表达强。 (2)H₂O₂ 组BCl-2表达显著下调,Bax表达显著上调 (Ridit检验,P <0.01);BCl-2 /Bax比率下降。(3)与H₂O₂ 组比较,SF可明显上调BCl-2表达,下调Bax表达 (P <0.01),BCl-2 /Bax比率上升。 (4)PS与SF的调节作用相似,但SF的作用强于PS(P <0.05)。结论:本研究结果表明,SF调控凋亡相关基因BCl-2和bax的表达可能是SF抑制LEC凋亡的分子机制.