非小细胞肺癌患者外周血调节性T细胞和辅助性T细胞17的平衡表达特征

目的 通过检测辅助性T(Th)细胞17、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)相关细胞因子及特异性转录因子维A酸相关孤核受体(RORγt)和叉头转录因子3(forkhead box P3,FoxP3) mRNA的表达变化,探讨非小细胞肺癌患者外周血Treg和Th17的平衡表达特征.方法 57例非小细胞肺癌患者作为研究对象,25名健康人作为对照.通过荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞(PBMC)中RORγt和FoxP3 mRNA的表达.应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测患者外周血转化生长因子β(transforming gowth factor-β,TGF-β)和Th17相关细胞因子白介素17 A(IL-17A)、IL-6的表达.结果 Ⅳ期非小细胞肺癌患者PBMC的RORγt mRNA水平[(11.30±4.07)×10-4]高于健康组[(7.50±2.75)×10-4]及Ⅰ～Ⅲ期非小细胞肺癌患者[(5.18±2.10)×10-4](q值分别为7.53、6.82,P值均＜0.01).Ⅳ期患者血浆TGF-β水平[(69.52±10.04) pg/ml]明显高于I～Ⅲ期非小细胞肺癌患者[(42.24±16.64)pg/ml]和健康对照组[(24.51±10.96)pg/ml](q值分别为3.91、3.87,P值均＜0.05).血浆IL-6、IL-17A各组间差异无统计学意义[非小细胞肺癌Ⅳ期组、Ⅰ～Ⅲ期组、健康对照组血浆IL-17A含量分别为(25.20±4.58)pg/ml、(18.58±5.92)pg/ml、(18.93±5.24)pg/ml];[非小细胞肺癌Ⅳ期组、Ⅰ～Ⅲ期组、健康对照组血浆IL-6含量(pg/ml)分别为(39.53±11.30) pg/ml]、(42.41±12.38)pg/ml、(38.15±12.09)pg/ml(血浆IL-17A组间两两比较q值分别为1.21、1.09、1.12;血浆IL-6组间两两比较q值分别为1.19、1.76、1.06,P值均＞0.05).结论 晚期非小细胞肺癌中RORγt mRNA表达增强、外周血TGF-β表达增高,Th17以及Treg细胞可能同时参与了非小细胞肺癌的肿瘤远处转移过程,从而影响肿瘤进程.     

香烟烟雾提取物对CD4^＋T细胞向Th17细胞和调节性T细胞分化的影响

目的观察香烟烟雾提取物（CSE）对CD4^＋T细胞向Th17细胞和调节性T细胞分化的影响,为探索香烟烟雾暴露导致气道慢性炎症的机制提供实验依据。方法采用免疫磁珠法分离纯化健康志愿者外周血CD4^＋T细胞,以1×10^6／ml细胞密度接种于96孔培养板,分为以下8个组①空白对照组;②T细胞刺激剂组：加入T细胞刺激剂抗人CD3／28抗体微磁珠;③T细胞刺激剂CSE干预组：CD3／28＋2%CSE;④细胞因子组：CD3／28＋细胞因子;⑤细胞因子CSE干预组：CD3／28＋细胞因子＋2％CSE;⑥芳香烃受体（AHR）激动剂6-甲酰基吲哚[3,2-b]咔唑（FICZ）组CD3／28＋细胞因子＋FICZ;⑦AHR拮抗剂白藜芦醇组：CD3／28＋细胞因子＋2％CSE＋白藜芦醇;⑧溶剂对照组：CD3／28＋细胞因子＋DMSO。细胞因子为含TGF-β/IL-1β／IL-6／IL～23的混合细胞因子,以诱导Th17细胞和调节性T细胞分化。培养5d后,收集细胞,采用流式细胞术检测细胞表面分子CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋细胞（Treg细胞）,以及胞内细胞因子IL-17＋的CD4^＋T细胞（Th17细胞）,计算各种刺激培养条件下,诱导生成的Th17及Treg细胞占CD4^＋T细胞的百分比。结果①CSE对Th17细胞分化的影响：空白对照组Th17细胞比例为（0．69±0．12）％,加入T细胞刺激剂后为（1．32±0．12）％,在此基础上加入CSE的干预组IL-17＋细胞比例升高为（2．17±0．24）％,（t=3．21,P〈0．01）;细胞因子组IL-17＋细胞比例为（1．35±0．08）％,而在此基础上加入CSE的干预组Th17细胞升高为（2．58±0．39）%（t=3．13,P〈0．01）。②CSE对Treg细胞分化的影响：在空白对照组中,Treg细胞占CD4^＋T细胞中的比例为（0．21±0．19）％,在加入T细胞刺激剂后,Treg细胞比例升高（3．59±0．37）％,加入细胞因子后,Treg细胞比例明显增加（5．85±0．76）％;在继续加入CSE干预后,Treg细胞比例明显减少（3．07±0．33）％（t=3．74,P〈0．01）;同样,T细胞刺激剂CSE干预组也出现Treg细胞比例减少（2．19±0．19）％,（t=2．71,P〈0．05）。③AHR活化对Treg细胞和Th17细胞分化的影响：AHR激动剂FICZ组的Treg细胞比例明显低于细胞因子组[（2．60±0．40）％,（5．85±0．76）％]（t=4．18,P〈0．01）,但Th17细胞比例升高[（2．86±0．43）％,（1．35±0．08）％]（t=3．65,P〈0．01）。AHR阻断剂白藜芦醇组中的Treg细胞比例和Th17细胞比例均低于细胞因子组,分别为[（0．33±0．14）％,（5．85±0．76）％],（t=7．71,P〈0．01）和[（0．42±0．07）％,（1．35±0．08）％],（t=8．87,P〈0．001）,并且和空白对照组接近,在细胞培养第5天通过7-AAD-AnnexinV对该组细胞检测并未发现细胞异常凋亡或死亡情况,结合该组细胞培养过程中的镜下形态推测该实验组CD4^＋T细胞的分化增殖受到白藜芦醇抑制。结论CSE可促进CD4^＋T细胞向Th17细胞分化,并抑制Treg细胞分化,这一过程可能通过AHR诱导。     

乳腺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋ Treg细胞及Th1/Th2类细胞因子水平测定及意义

目的探讨乳腺癌患者外周血CD4＋CD2＋5调节性T细胞（CD4＋CD2＋5Treg）水平变化在肿瘤发生、发展中的作用及机制。方法流式细胞术检测45例健康人（对照组）、44例乳腺良性增生患者（增生组）、61例乳腺癌患者（乳腺癌组）外周血CD4＋CD2＋5Treg水平,ELISA法检测三组Th1类细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α和Th2类细胞因子IL-6水平;分析CD4＋CD2＋5Treg与肿瘤临床病理特征及细胞因子的关系。结果乳腺癌组TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者外周血CD4＋CD2＋5Treg细胞水平显著高于0~Ⅱ期患者、对照组和增生组,且术后水平显著低于术前（P均〈0.05）;乳腺癌组TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者血清IL-2、IFN-γ、TNF-α水平明显低于0~Ⅱ期患者、对照组和增生组,IL-6水平则反之（P均〈0.05）;乳腺癌组外周血CD4＋CD2＋5Treg细胞水平与IL-2、IFN-γ、TNF-α水平呈负相关（r=-0.579、-0.607、-0.691）,与IL-6呈正相关（r=0.804）,P均〈0.05。结论外周血CD4＋CD2＋5Treg细胞水平与乳腺癌发生、发展有关,可能机制为通过调节Th1/Th2细胞因子平衡参与机体免疫应答。     

溃疡性结肠炎患者外周血Th17/Treg免疫平衡的研究

目的研究溃疡性结肠炎（UC）患者外周血Th17细胞（CD4＋IL-17＋T细胞）与Treg细胞（CD4^＋CD25^＋T细胞）数量以及相关细胞因子的表达水平,分析Th17／Treg细胞免疫平衡在UC发病机制中的作用。方法收集UC患者（UC组）和健康体检者（对照组）的外周肝素抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。分别以PE-CD4与FTTC—CD25单抗,PE-CD4与FITC—IL-17的单抗作双色流式细胞术,分析溃疡性结肠炎患者外周血Th17、Treg细胞的百分率,ELISA法检测血清中相关细胞因子IL-17和TGF—β1的水平。结果与对照组比较,溃疡性结肠炎患者外周血Th17细胞百分率升高,Treg细胞的百分率显著下降,Th17／Treg比值升高（P〈0．05）,血清中细胞因子IL-17升高、TGF-β1降低,并且IL-17／TGF-β1比值升高。结论溃疡性结肠炎患者外周血存在细胞免疫功能失调;Th17／Treg细胞数量与免疫平衡状态发生改变,T淋巴细胞耐受机制的破坏可能与溃疡性结肠炎的发病机制有关。     

非小细胞肺癌组织中Th17及CD4~+CD25~+ Treg细胞的表达及意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中Th17细胞与CD4+CD25+ Treg细胞(标志物为CD4、FoxP3、IL-17A)的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测102例非小细胞肺癌根治术患者癌组织及癌旁组织中CD4、FoxP3以及IL-17A的表达,并分析其与NSCLC临床病理参数的关系。结果癌组织中CD4、FoxP3及IL-17A表达率或表达强度均显高于癌旁组织(P均<0.05);IL-17A表达与患者性别有关,CD4、FoxP3与NSCLC患者分化程度有关(P均<0.05)。结论 NSCLC癌组织中有更多的CD4+CD25+ Treg细胞以及Th17细胞浸润,表明CD4+CD25+ Treg细胞以及Th17细胞更容易被趋化到肿瘤组织并在肿瘤局部聚集,发挥其抑制效应。     

HBV感染者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达水平及临床意义

目的比较CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋和CD4^＋CD25^＋CD127^-/low两种设门方法对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）细胞的界定效果,并探讨HBV感染者外周血中Treg水平的表达及其临床意义。方法选择慢性乙型肝炎患者52例,HBV携带者24例,非活动性HBsAg携带者24例,正常对照者25例,采用CD4^＋CD25^＋CD127^-/low设门方法用流式细胞仪进行检测,其中正常对照组和21例慢性乙型肝炎患者同时采用CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋设门进行检测并分析。结果采用CD4^＋CD25^＋CD127^-/low设门方法检测外周血Treg与CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋设门方法在正常组和患者组均呈正相关（r=0.506,P〈0.05;r=0.556,P〈0.01）。以CD4^＋CD25^＋CD127^-/low设门检测慢性乙型肝炎患者组、HBV携带者组、非活动性HBsAg携带者组和正常对照组外周血Treg的水平分别为（10.65±2.86）%、（8.56±2.01）%、（8.75±3.04）%和（7.33±1.17）%。慢性乙型肝炎患者组明显高于其他三组（P〈0.01）,慢性HBV携带者组明显高于对照组（P〈0.05）,非活动性HBsAg携带者组与对照组之间差异无统计学意义。慢性乙型肝炎患者及慢性HBV携带者Treg表达水平与HBV病毒载量之间均无相关,慢性乙型肝炎患者Treg表达水平与ALT之间无相关,HBeAg阳性患者组和HBeAg阴性患者组的Treg表达水平差异无统计学意义。结论 CD4^＋CD25^＋CD127^-/low设门方法检测外周血Treg与CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋设门方法有较好的相关性,而前者更为简单、实用。Treg在慢性乙型肝炎患者、慢性HBV携带者中明显增高,提示Treg在乙型肝炎慢性化机制中发挥重要作用。     

白介素23受体在支气管哮喘小鼠脾源性CD4^＋T细胞中的表达及意义

-23R）的表达及在哮喘发病中的作用。方法建立急性哮喘小鼠模型,免疫磁珠分离小鼠脾源性CD4^＋T细胞,培养24h后,检测CD4^＋T细胞表面IL-23R的表达、Th17细胞的阳性率及细胞培养上清液中的IL-17水平。结果哮喘小鼠脾脏CD4^＋T细胞表面IL-23R的表达明显高于正常组（P〈0．01）;哮喘小鼠脾脏CD4^＋T细胞中Th17细胞的阳性率明显高于正常组（P〈0．01）;哮喘小鼠脾脏CD4^＋T细胞分泌IL-17浓度明显高于正常组（P〈O．01）;小鼠脾脏CD4^＋T细胞表面IL-23R的表达与Th17细胞的阳性率和IL-17的浓度呈正相关。结论IL-23R在急性哮喘的发病机制中可能起重要作用。     

原发性非小细胞肺癌患者外周血中Th17的检测及其临床意义

目的通过检测非小细胞癌(NSCLC)患者与健康对照组外周血中Th17细胞及相关因子的表达水平,探讨其在NSCLC中的临床意义。方法流式细胞术检测外周血中Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的比例;RT-PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)中IL-17及孤独核受体γt(RORγt)mRNA的表达水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测外周血浆中IL-17的水平。结果 NSCLC患者外周血Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的比例较对照组显著升高(P<0.01);PBMC中IL-17及RORγt mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.01);外周血浆中IL-17的水平显著高于对照组(P<0.01)。不同病理类型之间Th17细胞比例、IL-17 mRNA及IL-17的表达水平无统计学差异(P>0.05)。Ⅲ期患者Th17细胞比例、IL-17 mRNA及IL-17的表达水平较Ⅰ^Ⅱ期患者显著增高(P<0.01)。结论 Th17细胞可能通过RORγt和IL-17参与NSCLC的发生,Th17相关指标对NSCLC的治疗及预后有指导意义。     

慢性HBV感染者CD8^＋ T细胞免疫反应的研究

目的观察不同慢性HBV感染者外周血CD8^＋ T细胞的细胞内毒性颗粒和细胞因子的表达水平。方法用rHBcAg作为刺激剂,采用免疫荧光染色结合流式细胞术分析慢性乙型肝炎中度、重度患者以及无症状HBV携带者外周血CD8^＋ T细胞的IFN-γ/IL-4和穿孔素/颗粒酶B表达水平。结果慢性乙型肝炎重度患者CD8^＋T细胞的穿孔素及颗粒酶B百分率显著高于正常对照（P〈0.01）和HBV携带者（P〈0.05,P〈0.01）,中度患者显著高于正常对照（P〈0.05）。2组慢性乙型肝炎IFN-γ＋/CD8^＋ T细胞（Tc1）百分率均高于正常对照和HBV携带者（P〈0.05）。HBV携带者CD8^＋T细胞的穿孔素和颗粒酶B表达以及Tc1百分率与健康对照差异无统计学意义。IL-4^＋/CD8^＋ T细（Tc2）表达各组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 CD8^＋ T细胞中穿孔素/颗粒酶B表达率的增加以及Tc1细胞增加与慢性HBV感染的肝损伤有关。     

强直性脊柱炎患者外周血T细胞亚群的变化及意义

目的探讨强直性脊柱炎（AS）患者外周血中T细胞亚群的变化及其意义。方法采用流式细胞仪（FCM）检测外周血淋巴细胞表面CD3、CD4、CD8及其胞质内细胞因子IFN-γ和IL-4的表达。结果与正常对照组相比,As患者外周血Th细胞（CD;CD4＋）百分率无显著差异,Tc细胞（CD;CD;）明显升高（P〈0．05）;Th1细胞（CD3^＋CD4^＋IFN-γ^＋）百分率明显升高,Th2细胞（CD3^＋CD4^＋IL4^＋）无显著性差异;Te1细胞（CD3^＋CD8^＋IFN-γ^＋）百分率明显降低,T02细胞（CD3^＋CD8^＋IL4^＋）无显著性差异。结论AS患者外周血T细胞Th1／Th2、Tcl／Tc2亚群比例失衡,呈Th1、Tc2优势型。     

Increased CD4~+CD45RA~-FoxP3~(low) cells alter the balance between Treg and Th17 cells in colitis mice

AIM To investigate the role of regulatory T cell(Treg) subsets in the balance between Treg and T helper 17(Th17) cells in various tissues from mice with dextran sulfate sodium-induced colitis.METHODS T r e g c e l l s, T r e g c e l l s u b s e t s, T h 1 7 c e l l s, a n d CD4+CD25+FoxP 3+IL-17+ cells from the lamina propria of colon(LPC) and other ulcerative colitis(UC) mouse tissues were evaluated by flow cytometry. Forkhead box protein 3(FoxP 3), interleukin 17A(IL-17A), and RORC m RNA levels were assessed by real-time PCR, while interleukin-10(IL-10) and IL-17 A levels were detected with a Cytometric Beads Array.RESULTS In peripheral blood monocytes(PBMC), mesenteric lymphnode(MLN), lamina propria of jejunum(LPJ) and LPC from UC mice, Treg cell numbers were increased(P 0.05), and FoxP 3 and IL-10 mR NA levels were decreased. Th17 cell numbers were also increased in PBMC and LPC, as were IL-17 A levels in PBMC, LPJ, and serum. The number of FrI subset cells(CD4+CD45RA+FoxP 3low) was increased in the spleen, MLN, LPJ, and LPC. FrI I subset cells(CD4+CD45RA-Fox P3high) were decreased among PBMC, MLN, LPJ, and LPC, but the number of Fr III cells(CD4+CD45RA-FoxP 3low) and CD4+CD25+FoxP 3+IL-17A+ cells was increased. Fox P3 m RNA levels in CD4+CD45RA-Fox P3 low cells decreased in PBMC, MLN, LPJ, and LPC in UC mice, while IL-17 A and RORC mR NA increased. In UC mice the distribution of Treg, Th17 cells, CD4+CD45RA-FoxP 3high, and CD4+CD45RA-FoxP 3low cells was higher in LPC relative to other tissues.CONCLUSION Increased numbers of CD4+CD45RA-FoxP 3low cells may cause an imbalance between Treg and Th17 cells that is mainly localized to the LPC rather than secondary lymphoid tissues.     

Elevated Th17 cells are accompanied by FoxP3+ Treg cells decrease in patients with lupus nephritis

To investigate the variations of T-helper 17 (Th17) and regulatory T (Treg) cells in patients with lupus nephritis (LN), a total of 60 systemic lupus erythematosus patients and 28 healthy controls (HCs) were enrolled. The frequency of Th17 cells and Treg cells in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) was evaluated by flow cytometric analysis. The serum concentrations of interleukin-17 (IL-17) and transforming growth factor-beta 1 (TGF-β1) were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results demonstrated in LN patients a significant decrease in the frequency of CD4+CD25^high and CD4+CD25+FoxP3+ T cells and a significant increase in the frequency of Th17 cells in peripheral blood, and the ratio of Th17 to Treg cell frequency was significantly increased along with increased SLEDAI scores. LN patients had a lower percentage and expression of FoxP3 in CD4+CD25^high T cells than SLE patients without nephritis. The concentration of TGF-β1 was found decreased in SLE patients compared with that from healthy controls, though no significant difference was found between LN patients and SLE patients without nephritis. The expression of IL-17 levels in LN patients exhibited a significant increase compared with patients without nephritis and healthy controls. Based on our results, the significantly elevated Th17 cells are accompanied by FoxP3+ Treg cells decrease in lupus nephritis, suggesting that Th17/Treg functional imbalance may be involved in the pathogenesis of renal damage in SLE patients.     

先天性心脏病患者免疫因子Th17/Treg失衡与肺动脉高压的关系

目的:探讨患者外周血中Th17细胞、CD4+D25+FoxP3+调节性T细胞(Treg)的变化及意义。方法:75例先天性心脏病(CHD)合并肺动脉高压(PAH)患者,分为轻度肺动脉高压组(28例)、中度肺动脉高压组(32例)及重度肺动脉高压组(15例),20例健康体检者作为对照组。采用流式细胞分析法检测外周血中Th17细胞、Treg细胞占CD4+T细胞的比例,分析Th17细胞与Treg细胞的比例与肺动脉压的相关性。结果:Th17/CD4+T细胞比例、Treg/CD4+T细胞的比例和Th17/Treg细胞比值,两组间差异具有统计学意义(P<0.05),随着肺mPAP的增加,Th17/CD4+T细胞比例明显升高;Treg/CD4+T细胞的比例明显下降;Th17/Treg细胞比值显著升高。mPAP与Th17/Treg比值呈显著正相关(r=0.95,P<0.05)。结论:先天性心脏病合并肺动脉高压患者外周血中存在Th17/Treg失衡,且与肺动脉高压程度呈正相关,Th17/Treg失衡可能参与了肺动脉高压的发生发展。     

结核性胸膜炎患者胸液中CD4~+ CD25~+ FoxP3~+调节T细胞抑制抗结核免疫

目的研究结核性胸膜炎患者胸液中CD4+CD25+FoxP3+调节T细胞是否增多,这些调节T细胞是否抑制结核的特异细胞免疫反应。方法使用细胞分离、流式细胞分析及体外细胞培养作细胞增殖及增殖抑制等实验方法,对15例结核性胸膜炎患者及17例健康正常人群胸液及外周血白细胞中CD4+CD25+FoxP3+调节T细胞的量及特征作研究。结果结核性胸膜炎患者胸液中CD4+CD25+FoxP3+调节T细胞明显高于患者及健康人群外周血。在体外,结核性胸膜炎患者胸液中单核细胞对BCG刺激产生γ-干扰素(IFN-γ)的能力明显强于患者及健康人群外周血中单核细胞;把这些调节T细胞从胸液单核细胞中清除,增强了结核患者胸液单核细胞对BCG刺激产生IFN-γ;从结核患者胸液分离的这些调节T细胞能抑制结核患者Th1细胞产生IFN-γ。结论结核性胸膜炎患者胸液CD4+CD25+FoxP3+调节T细胞增多,抑制结核性胸膜炎患者Th1细胞免疫反应,从而参与了结核性胸膜炎的发病。     

强直性脊柱炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的研究

目的 观察强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD4+CD25调节性T细胞(Treg)的数量、功能及肿瘤坏死因子(TNF)-a 抑制剂治疗的影响.方法 活动性AS患者25例,10例给予etanercept治疗12周,健康对照21名,分离外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测CD4+CD25high T细胞比例;实时定量聚合酶链反应检测FOXP3 mRNA表达;免疫磁珠法去除CD25+细胞,可溶性噻唑盐(WST-1)法检测T细胞增殖.结果 活动性AS组CD4+CD25high T细胞比例与对照组差异尤统计学意义,但FOXP3 mRNA表达明显低于对照组(P＜0.01),并与C反应蛋白(CRP)呈负相关(P＜0.01).两组的CD4+CD25+细胞体外均能抑制T细胞增殖(P均＜0.01). Etanercept治疗明显增加CD4+CD25highT细胞比例和FOXP3 mRNA表达(P均＜0.01),与CRP降低呈负相关(P＜0.05;P＜0.01).结论 AS患者外周血表达FOXP3的CD4+CD25+Treg细胞异常,可能参与AS发生和发展;Etanercept治疗上调Treg细胞,可能是抗TNF-α治疗的一个机制.     

慢性HBV感染者外周血CXCR5~+CD4~+Tfh细胞的测定及其与FoxP3~+Treg细胞的相关性

目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)感染不同阶段患者外周血CD4+T淋巴细胞中CD4+CXCR5+Tfh细胞及CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的百分比及其意义.方法:应用流式细胞术检测15例慢性无症状HBV携带者(chronic asymptomatic HBV carriers,AsC)、42例慢性乙型肝炎(chronic hepatitisB,CHB)患者(HBeAg阳性25例、HBeAg阴性17例)、11例非活动性HBsAg携带者(inactive HBsAg carriers,InC)外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞及CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比,并与15例健康对照(healthycontrol,HC)进行比较.结果:AsC、HBeAg(+)CHB、HBeAg(-)CHB组外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞占CD4+T淋巴细胞的比例分别为17.66(15.34%-20.56%),21.95(19.60%-26.32%),22.33(17.58%-24.85%),显著高于HC组的13.67(9.80%-15.32%),差异具有统计学意义(P<0.001).与AsC及InC组的16.11(12.33%-19.73%)相比,HBeAg(+)、HBeAg(-)CHB组外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞占CD4+T淋巴细胞的比例显著升高(P<0.05).此外,AsC组外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为7.70(6.35%-9.13%),显著高于HC组的6.53(5.54%-7.35%),P<0.05.HBeAg(+)CHB组外周血CD4+T淋巴细胞中CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的频率为7.52(6.09%-8.49%),与AsC组相比呈降低的趋势.外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞占CD4+T淋巴细胞的比例与HBVDNA载量呈负性相关(r=-0.275,P<0.05);而与血清ALT水平、HBsAg滴度无相关性.结论:CD4+CXCR5+Tfh细胞可能参与了慢性HBV感染所介导的免疫反应,外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞及CD4+CXCR5+Tfh细胞的消长可能与疾病的活动性相关.     

Dysfunctional CD4+,CD25+ regulatory T cells in untreated active systemic lupus erythematosus secondary to interferon-alpha-producing antigen-presenting cells

OBJECTIVE: To explore whether there are extrinsic factors that impair the suppressive function of CD4+,CD25+ regulatory T cells in patients with untreated active systemic lupus erythematosus (SLE). METHODS: We studied 15 patients with untreated active SLE, 10 patients with SLE in remission, and 15 healthy control subjects. Percentages of CD4+,CD25+,FoxP3+ Treg cells and levels of forkhead box P3 (FoxP3) protein were analyzed by flow cytometry. Expression of messenger RNA (mRNA) for FoxP3 in purified Treg cell populations was assessed by real-time polymerase chain reaction analysis. Experiments examining Treg cell function in SLE were designed to distinguish primary from secondary T cell dysfunction. Levels of interferon-alpha (IFNalpha) in supernatants from the function assays were determined with an IFN-stimulated response element-luciferase reporter assay. RESULTS: The percentage of CD4+,CD25+, FoxP3+ cells in peripheral blood was significantly increased in SLE patients as compared with controls (mean +/- SEM 9.11 +/- 0.73% versus 4.78 +/- 0.43%; P < 0.0001). We found no difference in FoxP3 expression at either the mRNA or protein level in any CD4+,CD25+ T cell subset from SLE patients as compared with controls. Antigen-presenting cells (APCs) from SLE patients were responsible for decreased Treg cell activity and could also render dysfunctional Treg cells from healthy control subjects. CD4+,CD25+ Treg cells from SLE patients exhibited normal suppressive activity when cultured with APCs from healthy controls. A partial Treg cell blockade effect was induced by the high levels of IFNalpha derived from SLE patient APCs. CONCLUSION: We suggest that blockade of Treg cell-mediated suppression by IFNalpha-producing APCs in SLE patients may contribute to a pathogenic loss of peripheral tolerance in this disease.     

从Th1/Th2、Treg/Th17之间的平衡研究轻、中度慢性乙型肝炎患者CD4~+T淋巴细胞的免疫失衡状态

目的从Th17及其相关细胞因子与Th1、Th2、Treg的相互关系,探讨轻、中度CHB患者CD4~+T淋巴细胞的整体免疫失衡状态。方法选择轻、中度CHB患者,与健康志愿者进行比较,观察其外周血各免疫细胞(Th17、Th1、Th2、Treg、Th1/Th2、Treg/Th17)、相关细胞因子(IL-17、IL-6、TGF-β、IFN-γ、IL-4)、主要效应分子(穿孔素、颗粒酶B)和核转录因子(孤独核受体RORγt、Foxp3等)的变化及其相互关系。结果与健康志愿者相比,CHB患者CD8~+T淋巴细胞比例更高,CD4~+/CD8~+比例显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者Th1细胞比例更高,Th1/Th2显著升高,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者Th17细胞比例更高,Treg/Th17比例显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者穿孔素和颗粒酶B的表达更高,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者FOXP3、IL17mRNA和RORγt的表达差异无统计学意义(P0.05);与健康志愿者相比,CHB患者TGF-B1、IL-6、IL-17显著增高,差异有统计学意义(P0.01);IFN-γ和IL-4的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论轻、中度CHB患者在免疫细胞及其相关细胞因子、效应分子等各环节,尤其是Treg/Th17比例,均处于严重的免疫失衡状态。     

Th17细胞/调节性T细胞偏倚在类风湿关节炎中的意义

目的 探讨白细胞介素(IL)-17+CD4+炎症性T细胞(Th17细胞)和Foxp3+CD4+调节性T细胞在类风湿关节炎(RA)的相互关系及可能机制.方法 采用前瞻性随机开放研究.测定RA患者外周血IL-17+CD4+T细胞及Foxp3+CD4+T细胞的比例变化及其相关细胞因子转化生长因子(TGF)-β、IL-6、IL-23和IL-17水平.结果 RA患者外周血IL-17+CD4+T细胞明显升高(P<0.01),而Foxp3+CD4+T细胞明显降低(P<0.01).同时,血清中IL-6、IL-23和IL-17水平明显升高(均P<0.01),而TGF-β水平无明显变化(P>0.05).结论 RA患者Th17细胞数量增高,而调节性T细胞数量减少,体内相关细胞因子的变化是引起上述改变的重要原因.