益肺箍消方对肺癌细胞株A549细胞体外生长的抑制作用

目的 观察中药益肺箍消方对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及survivin基因表达的影响.方法 用不同浓度(50、100、150、200mL/L)益肺箍消方处理A549细胞,以未经药物处理细胞作对照(对照组),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察细胞增殖活性的差异,流式细胞仪观察细胞凋亡水平的差异,逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察凋亡相关蛋白Survivin mRNA表达水平的变化,Western-blot技术检测survivin分子蛋白表达水平.结果 益肺箍消方对人肺腺癌细胞株A549增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间和剂量依赖性.随着益肺箍消方浓度的增加,细胞的凋亡水平增大,survivin mRNA和蛋白表达降低(P＜0.05).结论 益肺箍消方可抑制人肺腺癌A549细胞株的增殖,诱导细胞凋亡,抑制survivin mRNA和蛋白的表达,可能是其临床治疗肺癌的重要药效机制之一.     

B7-H3上调IL-22表达在肺腺癌中的临床意义

目的 探讨协同信号分子B7-H3对白介素22(IL-22)的表达调控及其在肺腺癌中的临床意义.方法 采用CRISPR/Cas9技术敲除肺腺癌A549细胞B7-H3基因(A549/KO),同时收集56例肺腺癌患者血清,酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测A549/KO培养上清液和患者血清中的IL-22水平,并检测患者血清中可溶性B7-H3(sB7-H3)含量.分析sB7-H3与IL-22的相关性,建立Logistic回归模型对肺腺癌的危险因素进行预测,并采用受试者工作特征曲线(ROC)探讨sB7-H3、IL-22在肺腺癌诊断中的价值.结果 A549/KO细胞上清液IL-22表达水平较野生型A549降低(P＜0.05).肺腺癌患者血清sB7-H3和IL-22的表达水平高于健康对照组(P＜0.05).肺腺癌患者血清sB7-H3和IL-22的表达水平与pT分期、淋巴结是否转移及pTNM分期有关(P＜0.05),且sB7-H3和IL-22的表达水平呈正相关(rs=0.316,P＜0.05).通过多因素Logistic回归分析鉴定sB7-H3(OR=1.423,95％ CI:1.139～1.778)、IL-22(OR=1.108,95％ CI:1.001～1.228)为肺腺癌的危险因素,两者可作为肺腺癌诊断指标.ROC曲线分析表明,IL-22和sB7-H3联合检测(AUC =0.827,95％CI:0.727～0.903)对肺腺癌的诊断性能高于sB7-H3 (AUC=0.795,95％ CI:0.690～0.877)和IL-22 (AUC=0.766,95％CI:0.658～0.853)单项检测.结论 B7-H3可通过上调IL-22表达在肺腺癌的发生与发展中发挥作用,联合检测血清sB7-H3和IL-22有助于肺腺癌的诊断与监测.     

α-干扰素对人肺腺癌A549细胞生物学行为的影响

目的:研究IFN-α对人肺腺癌A549细胞株克隆形成、迁移和侵袭能力以及细胞凋亡的影响。方法:用不同浓度(100、500、1 000、2 000 U.ml-1)IFN-α处理人肺腺癌A549细胞(实验组),以未经药物处理细胞作对照(对照组),平板克隆形成实验观察两组细胞克隆形成能力的差异,Transwell小室实验观察两组细胞迁移和侵袭能力的差异,流式细胞仪观察两组细胞凋亡水平的差异。结果:IFN-α能够明显降低人肺腺癌A549细胞克隆形成、迁移和侵袭能力,诱导细胞的凋亡,而且在一定范围内与药物浓度成正相关(P<0.05)。结论:IFN-α在非小细胞肺癌临床治疗中可能有潜在价值。     

ATRA对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其机制研究

目的探讨全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其可能的分子机制。方法ATRA处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况并运用MTT法检测其生长抑制情况,流式细胞仪进行细胞周期分析,Western blot检测CDK4、Rb、p-ERK1/2蛋白的表达,荧光定量PCR法检测CyclinD1mRNA水平。结果ATRA具有抑制A549细胞增殖、使细胞周期阻滞于G0/G1期,并下调p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平的作用。结论ATRA可能通过下调A549细胞p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平,使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而影响其DNA的合成,抑制其恶性增殖。     

非小细胞肺癌细胞株c-erbB-2基因的表达

目的:分析非小细胞肺癌细胞株中人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因的mRNA水平和蛋白水平.方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株c-erbB-2蛋白水平.结果:肺腺癌CALU-3细胞株c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P＜0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P＞0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P＜0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:c-erbB-2基因在肺腺癌CALU-3细胞株中的表达均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株.     

c-erbB-2基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的相关性

目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的关系。方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株的c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的c-erbB-2蛋白水平;绘制CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的存活曲线。结果:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,有显著性差异(P均<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P>0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,有显著性差异(P均<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P>0.05)。存活曲线显示,CALU-3、A549和NCL-H520细胞株间D0值无显著性差异(F=0.287,P>0.05),CALU-3和A549、A549和NCL-H520、CALU-3和NCL-H520细胞株间Dq值均有显著性差异(P值分别<0.05、<0.05、<0.01)。结论:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2基因在mRNA和蛋白水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株;3种细胞株中,CALU-3对γ射线最不敏感,NCL-H520最敏感;推测c-erbB-2基因高表达可能与肺腺癌CALU-3细胞株放疗抵抗有关。     

α-干扰素对人肺腺癌A549细胞周期和P53蛋白表达的影响

目的探讨α-干扰素(IFN-α)对人肺腺癌细胞株A549细胞周期和P53蛋白表达的影响。方法用2种不同质量浓度IFN-α(25μg/L，100μg／L)处理人肺腺癌A549细胞，并设空白为对照。用流式细胞仪测定IFN-α对A549细胞细胞周期的影响，用免疫荧光标记法测定P53蛋白的表达。结果IFN-α作用后的A549细胞，细胞周期明显改变，s期细胞数显著降低，且P53蛋白表达明显减少。结论IFN-α能阻止A549细胞细胞周期的进程，抑制P53蛋白的表达。     

MMP-7反义寡核苷酸抑制肺腺癌A549细胞体外增殖活性的实验研究

目的 观察基质溶解素(matrilysin,MMP-7)反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞体外增殖活性的影响. 方法采用硫代磷酸修饰的MMP-7反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide, ASODN),通过脂质体导入肺腺癌A549细胞后免疫组化法检测A549细胞MMP-7表达,MTT法检测A549细胞增殖,FCM检测A549细胞周期.结果 相差显微镜下观察A549细胞转染ASODN后细胞体积变小,数目减少.MTT法测细胞增殖活性见不同浓度ASODN均能抑制A549细胞的增殖,抑制作用在48 h最强.免疫组化SABC法检测提示转染ASODN后A549细胞MMP-7蛋白表达水平明显降低.FCM检测显示MMP-7 ASODN可以抑制A549由G0/G1期进入S期.结论 MMP-7 ASODN可以特异性地抑制肺腺癌A549细胞株MMP-7蛋白的表达,调控细胞周期,抑制细胞增殖.     

养阴清热祛湿方及其拆方抑制人肺腺癌细胞A 549 PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信号转导的研究

目的:通过观察养阴清热祛湿方(H)及其拆方(Y,R,Q,YR,YQ,RQ)对肺腺癌细胞A 549增殖抑制和PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信号转导通路的影响,研究肺腺癌发病和PDGFRα-PLC-γ1-PKCα转导通路的关系.方法:采用人肺腺癌A 549细胞为实验对象,筛选出有效的药物,用正交试验优选出疗效最好的方剂,设对照组和养阴清热祛湿全方及其六个拆方处理细胞,用Western blot检测A 549细胞PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信号转导通路各蛋白表达的影响.结果:①养阴清热祛湿全方及其拆方均能抑制A 549细胞的生长,全方作用最强,随药物浓度的增加,对细胞生长抑制呈现剂量-效应依赖关系.②人肺腺癌A 549细胞可检测到PDGFRα、PLC-γ1、PKCα蛋白分子的过度表达.③当用IC50药物剂量处理细胞时,养阴清热祛湿全方及其拆方均能抑制PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信号通路各蛋白表达水平,其作用强弱依次为:H＞RQ＞YR＞YQ＞R＞Q＞Y.结论:①养阴清热祛湿全方及其拆方均能明显抑制人肺腺癌细胞A 549的生长,全方组效果最好,表明养阴、清热、祛湿三法联用具有协同作用.②肺腺癌发病和PDGFRα-PLC-γ1-PKCα转导通路信号增强密切相关.③养阴清热祛湿全方及其拆方均能下调A 549细胞PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信号通路各蛋白表达水平,表明养阴、清热、祛湿及三法联用正是通过抑制PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信号转导途径而抑制肺腺癌细胞增殖.④肺腺癌治疗中应以养阴清热祛湿为治疗大法,扶正祛邪,虚实同治.     

肺癌细胞株c-erbB-2基因与放疗抵抗的相关关系

目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的关系.方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株的c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的c-erbB-2蛋白水平;绘制CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的存活曲线.结果:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(均P<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(均P<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P0.05).存活曲线显示,CALU-3、A549和NCL-H520细胞株D0值依次为1.18 Gy±0.05 Gy、1.67 Gy±0.13Gy和1.50 Gy±0.26Gy,细胞株间差异无统计学意义(F=0.287,P0.05),Dq值分别为3.98 Gy±0.03Gy、2.43 Gy±0.47Gy和1.32 Gy±0.08 Gy(F=61.670,P<0.05),其中CALU-3和A549、A549和NCL-H520、CALU-3和NCL-H520细胞株之间差异有统计学意义(P分别为<0.05、<0.05、<0.01).结论:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2基因在mRNA和蛋白水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株;三种细胞株中,CALU-3对?射线最不敏感,NCL-H520最敏感;推测c-erbB-2基因高表达可能与肺腺癌CALU-3细胞株放疗抵抗有关.     

二氯化钴所致缺氧对A549细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的:探讨CoCl2作用不同时间所致缺氧对体外培养的人肺腺癌A549细胞株增殖、凋亡和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:对肺腺癌细胞A549分别进行常氧和氯化钴模拟缺氧培养,采用MTT法检测CoCl2作用不同时间所致缺氧对A549细胞增殖的影响;半定量RT-PCR法测定缺氧不同时间HIF-1αmRNA表达水平的变化。AnnexinV-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测CoCl2作用不同时间缺氧肿瘤细胞凋亡情况。结果:CoCl2对A549细胞增殖抑制作用表现出时间依赖性抑制作用。常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1αmRNA的表达,随着CoCl2作用时间的延长,HIF-1αmRNA水平呈升高趋势,与正常对照组比较,各缺氧组差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,正常对照组、CoCl2作用4、12、24、48 h组细胞凋亡率分别为(0.60±0.10)%、(1.10±0.10)%、(8.63±0.75)%、(12.80±0.85)%和(19.33±0.80)%。结论:CoCl2对A549细胞具有上调HIF-1αmRNA表达作用,可抑制细胞的增殖和一定的凋亡诱导作用,这些说明HIF-1α可能在肺癌的发展中扮演着重要的作用。     

α-干扰素对人肺腺癌A549细胞周期和P53蛋白表达的影响

目的：探讨α－干扰素（ＩＦＮ－α）对人肺腺癌细胞株Ａ５４９细胞周期和Ｐ５３蛋白表达的影响。方法：用２种不 同质量浓度ＩＦＮ－α（２５μｇ／Ｌ,１００ μｇ／Ｌ）处理人肺腺癌Ａ５４９细胞,并设空白为对照。用流式细胞仪测定ＩＦＮ－α对Ａ５４９细 胞细胞周期的影响,用免疫荧光标记法测定Ｐ５３蛋白的表达。结果：ＩＦＮ－α作用后的Ａ５４９细胞,细胞周期明显改变,Ｓ期细 胞数显著降低,且Ｐ５３蛋白表达明显减少。结论： ＩＦＮ－α能阻止Ａ５４９细胞细胞周期的进程,抑制Ｐ５３蛋白的表达。     

曲古抑菌素A下调人肺腺癌细胞A549内IDO表达的分子机制

【目的】研究曲古抑菌素A (-TSA)抑制γ干扰素（IFN-γ）诱导的人A549细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）表达的分子机制。【方法】 采用蛋白质免疫印迹技术检测TSA在IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达、信号转导及转录激活子1（STAT1）的磷酸化和干扰素调节因子1（IRF-1）的激活等过程中的作用,在激光共聚焦显微镜下观察TSA对STAT1核转位的影响,利用双荧光素酶报告基因系统检测TSA对γ-干扰素激活位点（GAS）、干扰素刺激应答元件（ISRE）和核因子-κB （NF-κB）的激活的影响。【结果】 TSA以浓度依赖方式下调A549细胞中IFN-γ诱导的IDO表达,并能明显抑制STAT1第701位酪氨酸的磷酸化和STAT1的核转位。双荧光素酶报告基因分析和Western blot结果表明：TSA能显著抑制GAS、ISRE和IRF-1 的激活却不能抑制NF-κB的激活。【结论】TSA能下调IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达,其机制可能是与其抑制STAT1的磷酸化和核转位,以及抑制STAT1与GAS的结合有关。     

microRNA-21对肺癌A549细胞增殖和Smad7表达的影响

目的 探讨微小RNA-21 ( miR-21 )对肺癌A549细胞中Smad7表达的调控和对肺癌A549 细胞增殖的影响. 方法 常规培养肺癌细胞系A549,经脂质体转染miR-21模拟物和抑制物及阴性对照片段48 h后,采用Western blot、qRT-PCR法检测 Smad7 基因及蛋白的表达水平, MTT 法检测A549细胞增殖情况. 结果 转染miR-21 模拟物后Smad7的mRNA和蛋白表达量降低( P<0. 05 ) ,而转染miR-21 抑制物后Smad7的mRNA和蛋白表达量升高( P<0. 05 );MTT结果显示转染 miR-21 模拟物后细胞的增殖能力明显增强(P<0. 05),而转染miR-21 抑制物后细胞增殖能力明显减弱( P<0. 05 ). 结论 通过下调 miR-21 可提高 Smad7 的mRNA和蛋白表达,进而抑制A549细胞的增殖.     

NF-κB抑制介导的黄芪多糖抗人肺癌细胞效应

目的:探讨黄芪多糖(APS)的抗肿瘤效应,并研究核转录因子(NF-κB)在APS抗肿瘤效应中的作用。方法:用不同浓度的APS干预A549细胞,用MTS法检测APS对A549细胞的增殖抑制效应(量效和时效关系)。用Real-time PCR法检测APS对A549细胞p65mRNA的抑制效应,用Western blot法检测APS对A549细胞P65蛋白的抑制效应。用NF-κB荧光素酶报告基因检测APS对A549细胞NF-κB活性的的抑制效应。结果:20g/L和40g/L的APS对A549细胞具有明显的增殖抑制效应,处理48h后抑制效应最强。20g/L的APS处理A549细胞后24h对p65mRNA具有显著抑制效应,同浓度APS处理后48h对P65蛋白有显著抑制效应。荧光素酶报告基因检测显示:20g/L的APS处理A549细胞后6h可显著抑制NF-κB的转录活性。结论:APS可显著抑制人肺癌细胞A549的增殖,通过对NF-κB的抑制介导其抗肿瘤活性。     

4-HPR体外诱导A549细胞凋亡与Bcl-2家族蛋白相关性研究

目的研究4-HPR对肺腺癌细胞A549体外生长的影响及机制的初步探讨。方法MTT法观察4-HPR对肺腺癌细胞株A549的生长抑制作用,流式细胞术观察4-HPR诱导A549细胞凋亡作用和对细胞周期的影响,Western blot分析凋亡相关蛋白表达。结果4-HPR抑制A549的增殖呈剂量依赖性;4-HPR诱导A549细胞凋亡,凋亡过程伴随Bcl-2、Bcl-xS/L表达下降,而Caspase-3、Caspase-9的表达无明显变化。结论4-HPR可明显抑制肺腺癌细胞的增殖,通过降低Bcl-2和Bcl-xS/L促进A549细胞凋亡,为进一步探讨4-HPR治疗肺腺癌的机制提供实验依据。     

厄洛替尼联合survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的:探讨厄洛替尼联合survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549的作用.方法:survivin siRNA转染、厄洛替尼单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察对A549细胞的增殖抑制作用,免疫组化染色法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况.结果:survivin ...     

NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡机制的研究

目的:研究NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制。方法:通过实验细胞培养、MTT试验、细胞形态变化、A549细胞survivin的mRNA表达、A549细胞p-AKT与survivin的蛋白表达来对NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制进行分析研究。结果:NS398对A549细胞增殖的影响受到浓度的影响,NS398浓度越大,A549细胞增殖抑制率越大;A549细胞在不同浓度的NS398试剂中表现出不同的细胞形态;survivin的mRNA表达随着NS398浓度的增加而减弱,A549细胞p-AKT与survivin的蛋白表达随着NS398浓度的增加而增强。结论:NS398对A549细胞的凋亡具有诱导作用,使肿瘤生长受到抑制,其抗肿瘤机制与AKT磷酸化的抑制、survivin蛋白表达的下调有关。     

人B7-H4基因转染细胞株的构建及其对T细胞的作用

目的克隆人B7-H4基因,构建人B7-H4基因转染细胞株并初步研究其对T细胞的作用。方法通过RT-PCR的方法获得人B7-H4分子的基因,将目的片段双酶切(EcoRⅠ和BamHⅠ)后与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4并进行鉴定;脂质体转染法将重组载体导入L929细胞,经G418加压筛选并通过流式细胞术和RT-PCR检测表达载体是否转入L929细胞中,通过检测活化T细胞上CD25,CD69的表达及T细胞增殖实验对B7-H4转基因细胞的生物学功能进行初步研究。结果从外周血活化单核细胞中扩增出目的基因,构建重组表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4并将其转染至L929细胞,构建了一株稳定表达人B7-H4分子的基因转染细胞株,对其生物学功能的研究显示B7-H4分子可以下调活化T细胞上CD25,CD69的表达,并且对T细胞的活化增殖起到抑制作用(P<0.05)。结论成功构建了稳定表达B7-H4分子的基因转染细胞株,为进一步研制B7-H4分子的单克隆抗体提供了有效的免疫原。     

三氧化二砷对人肺腺癌A-549细胞株增殖及c-Myc基因表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌A549细胞株的生长增殖、细胞周期、凋亡等方面的影响,并初步探讨其机制。方法选用不同浓度As2O3处理人肺腺癌A549细胞株,以MTT比色法检测细胞生长增殖的抑制情况;用流式细胞术测定细胞周期、凋亡率;以免疫组织化学法分析不同浓度As2O3对c-Myc基因表达的影响。结果 As2O3以时间和浓度依赖的方式抑制人肺腺癌A-549细胞的增殖,并能诱导细胞凋亡。不同浓度As2O3处理组可调控细胞周期分别发生G2/M期阻滞和S期阻滞,并下调c-Myc基因表达。结论三氧化二砷对人肺腺癌细胞株A-549的生长、增殖有明显抑制作用,其机制可能与细胞周期阻滞和抑制c-Myc基因的表达和诱导细胞凋亡有关。