重组E.coli LLO/WT1诱导树突状细胞成熟并促进特异性抗肿瘤免疫

目的:观察重组疫苗E.coli LLO/WT1诱导人外周血树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟及其致敏的T细胞对WT1+肿瘤细胞的杀伤作用.方法:以E.coli为对照,采用E.coliLLO/WT1刺激健康人外周血树突状细胞后,流式细胞术分析DC的CD83,CD86和HLA-DR的表达,MTT法观察活化DC促进T细胞增殖和杀伤WT1+人胃癌细胞SGC-7901的效果,ELISA检测DC及DC和T细胞混合培养上清液内IL-12和IFN-γ的含量.结果:E.coliLLO/WT1较E.coli刺激的DC表达更高水平的CD83,CD86和HLA-DR,其阳性率分别为78.1%,83.4%,93.2%和65.8%,61.2%,75.8%;两组DC培养上清内IL-12的含量分别为(270.42±3.85)ng/L和(204.17±4.23)ng/L(P<0.05);E.coli LLO/WT1活化的DC较E.coli活化的DC更明显地促进了同源T细胞增殖,混合培养细胞上清液内IFN-γ的含量也更高,分别为(86.32±2.00)ng/L和(44.71±1.45)ng/L(P<0.05);活化的T细胞发挥...     

口腔癌患者外周血树突状细胞的生物学特性

目的:研究口腔癌患者外周血树突状细胞(DC)的形态、表型和功能性变化及其临床意义. 方法: 口腔癌患者(实验组)及正常人(对照组)15例外周血单个核细胞经GM-CSF,IL-4及TNF-α诱导培养, 获取成熟DC, 光镜和电镜观察细胞的形态,流式细胞仪检测细胞表型如CD1a,CD83,CD80,CD86和HLA-DR等分子的表达变化,用噻唑蓝(MTT)法检测DC与自体和同种异体的混合淋巴细胞反应(MLR)中对淋巴细胞增殖的刺激能力. 结果: 正常人及口腔癌患者的外周血单个核细胞经体外7 d诱导培养,均诱导出具有典型形态和表型的DC,其中实验组细胞的CD83,CD1a表达率分别为49.3±9.5和48.1±7.3,与对照组两者表达率62.1±7.9和60.2±6.8相比,差异有统计学意义(P＜0.05),CD86,CD80和HLA-DR的表达率分别为85.5±8.7,83.2±8.1和78.3±5.4,与对照组三者表达率89.2±6.7,87.7±7.2和82.3±4.1相比无明显统计学差异(P＞0.05);实验组DC细胞CD83,CD1a,CD86,CD80和HLA-DR表达的平均荧光指数(MFI)分别为4.80±2.13,3.96±1.15,12.33±6.75,19.63±8.12和39.44±7.9, 均低于对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05);口腔癌患者来源的DC在体外具有诱导同种异体和自体外周血T细胞增殖的能力. 结论: 口腔癌患者外周血单核细胞来源可诱导成为具有功能性的成熟DC,该细胞可应用于口腔癌的免疫治疗.     

35例多发性硬化患者Th17细胞及相关细胞因子的检测

目的 探讨多发性硬化(MS)患者外周血Th17细胞水平及相关细胞因子的意义.方法 采用流式细胞分析法检测35例MS患者(MS组)和20例健康者(对照组)外周血Th17细胞占CD4+T细胞比例,ELISA法检测外周血IL-17、IL-23水平.结果 MS组患者外周血Th17/CD4+T细胞比例[(1.94±0.32)%]显著高于对照组[(0.60±0.25)%],差异有统计学意义(P<0.01);MS组患者外周血IL-17、IL-23水平亦明显高于对照组[IL-17:MS组(69.01±19.29)ng/L、对照组(25.94±15.61)ng/L;IL-23:MS组(550.80±112.06)ng/L、对照组(158.78±33.19)ng/L,(P<0.01)].患者外周血IL-17水平与IL-23水平呈正相关(r=0.731,P<0.01).结论 MS患者外周血Th17/CD4+T细胞比例增加,相关细胞因子IL-17、IL-23水平升高,Th17细胞可能参与了MS的发生与发展.     

梅毒患者外周血单核细胞体外诱导树突状细胞的形态学与功能研究

目的探讨梅毒患者外周血单个核细胞(PBMC)向树突状细胞(DC)分化的形态学与功能特征。方法分别分离健康人(10例,对照组)和梅毒患者(10例,实验组)外周血中PBMC,与粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)共同培养。用倒置显微镜观察细胞形态,用流式细胞仪测定细胞表型,同时进行混合淋巴细胞反应(MLR),观察其刺激同种异体未致敏T淋巴细胞增殖的能力。结果梅毒患者PBMC经GM-CSF与IL-4诱导获得的细胞具有典型的DC形态特征。细胞表面的CD80、CD83、CD86及HLA-DR的表达率分别为77.92%、39.34%、75.78%和95.42%。与对照组相比,CD80表达明显增高(P<0.05)、CD86表达明显降低(P<0.05),CD83及HLA-DR的表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。MLR结果显示,梅毒患者PBMC诱导分化的DC可以刺激同种异体T细胞增殖。结论经GM-CSF、IL-4刺激后,梅毒患者的PBMC可以诱导分化为具有典型形态特征及抗原呈递功能的DC,DC表型的特征可能影响梅毒患者的细胞免疫状态。     

宫颈癌患者外周血来源的树突状细胞的生物学特性观察

【目的】探讨宫颈癌患者外周血来源的树突状细胞(DC)的生物学特性。【方法】14例Ib期及以上的宫颈癌患者为研究组,24例健康女性为对照组。外周血经密度梯度离心得到单个核细胞,其中附壁成分在含GM-CSF/IL-4的完全淋巴细胞培养液培养。光镜和电镜观察培养细胞的形态变化。培养7d后,计算树突状细胞的产量,流式细胞术分析HLA-ABC、HLA-DR、CD40、CD80、CD1a和CD14的表达,同种异体淋巴细胞的混合淋巴反应(MLR)检测树突状细胞刺激淋巴细胞增殖能力。【结果】经过7d培养,两组均诱导出典型形态和表型的DC。宫颈癌患者单位体积外周血的未成熟DC(ImDC)的产量为67.3×106±33.8×106,较对照组低(P<0.05)。研究组的CD40、CD80和CD1a的平均荧光强度(MFI)分别为18±9,15±6和71±11,均较对照组低(P<0.05);而两组ImDC的HLA-ABC、HLA-DR表达强度相似(P>0.05)。相同PBL/DC比值,研究组ImDC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力下降(P<0.05)。【结论】宫颈癌患者的外周血单个核细胞培养的树突状细胞(ImDC)和健康对照组的ImDC具有免疫学差异,提示在应用树突状细胞进行免疫治疗时应考虑这种差异。     

表面抗原调节慢性乙肝患者树突状细胞免疫功能的研究

目的研究表面抗原（HBsAg）对慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血树突状细胞（DC）免疫功能的调节作用。方法采用体外细胞培养的方法培养30例CHB患者外周血DC,分为HBsAg组和无HBsAg组,培养7d后用流式细胞术检测各组DC的CD83及CD86的表达,MTT法检测DC对混合淋巴细胞的刺激作用,ELISA方法检测培养上清中IL-12及IL-6的含量。结果 HBsAg组CD83、CD86的表达量分别为（19±4）%和（49±9）%,无HBsAg组则分别为（12±4）%和（18±6）%（P均〈0.01）。HBsAg组和无HBsAg组的DC对混合淋巴细胞的刺激指数分别为（20±10）%和（7±4）%（P〈0.01）。HBsAg组的DC培养上清中IL-12、IL-6的含量分别为（111±68）ng/ml和（646±426）ng/ml,无HBsAg组分别为（38±12）ng/ml和（1843±235）ng/ml,差异均有统计学意义（P均〈0.01）。结论 HBsAg可增强CHB患者外周血DC提呈抗原、激活T淋巴细胞的功能,对DC分泌细胞因子的功能有调节作用。     

舒芬太尼对人脐血树突状细胞免疫功能的影响

目的探讨舒芬太尼对人脐血树突状细胞(DC)免疫功能的影响。方法无菌条件下采集脐带血70 ml,经密度梯度离心法获得脐血单个核细胞,然后分3组进行培养。阴性对照组(N组):只加rhGM-CSF 50 ng/ml和rhIL-4 10 ng/ml培养10 d;阳性对照组(P组):在加入rhGM-CSF、rhIL-4培养的同时加入rhTNF-α50 ng/ml培养10 d诱导成熟树突状细胞;药物组(S组):加入rhGM-CSF、rhIL-4的同时加入舒芬太尼其浓度分别为(0.2、0.5、1.0)ng/ml(S_(0.2)、S_(0.5)、S_(1.0)培养10 d。培养过程中在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态学变化;以流式细胞仪分析各组细胞免疫表型CD80、CD86、CD83、HLA-DR分子的表达;ELISA法测定其分泌IL-12的水平;MTT法检测DCs刺激混合淋巴细胞的增殖能力。结果与N组比较,S组和P组细胞具有典型的树突状细胞形态学特征,CD80、CD86、CD83和HLA-DR分子的表达增加(P<0.05),促进同种异体混合淋巴细胞增殖的能力较强(P<0.05),IL-12表达增加(P<0.05);与P组比较,S组细胞随舒芬太尼药物浓度增加树突状伪足逐渐不明显,CD80、CD86、CD83和HLA-DR分子表达以及促进混合淋巴细胞增殖能力呈不典型的剂量依赖性下降趋势(P<0.05),IL-12表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论脐血来源的单个核细胞可在舒芬太尼的刺激下诱导为成熟的树突状细胞,但舒芬太尼对树突状细胞成熟和免疫功能的影响具有剂量依赖性下降趋势。     

儿童B系急性淋巴细胞白血病树突状细胞的生物学特性

目的 体外诱导培养正常儿童与B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)儿童的树突状细胞(DC),比较二者的生物学特性.方法 分离10例B-ALL初诊患儿(ALL组)和10例正常儿童(对照组)的外周血单个核细胞,以rhGM-CSF(20 ng/mL)、rhIL-4(10 ng/mL)及TNF-α(10 ng/mL)联合培养8 d,显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞免疫表型(CD11c、CD80、CD83、CD86),ELISA检测培养上清中IL-12的浓度,混合淋巴细胞反应(MLR)检测抗原递呈功能,电化学法检测上清中葡萄糖浓度.结果 ALL组细胞未表现出DC的典型形态,CD11c、CD80、CD83、CD86表达均较对照组细胞低(P< 0.05),分泌IL-12的能力弱于对照组细胞(P<0.05),刺激T淋巴细胞增殖的能力弱于对照组细胞,ALL组细胞培养上清中的葡萄糖浓度高于对照组(P<0.05).结论 B-ALL来源的DC成熟度异常,功能减弱,葡萄糖代谢异常可能是其成熟异常的原因之一.     

脓毒血症对大鼠外周血树突状细胞免疫功能的影响

目的探讨脓毒血症大鼠外周血树突状细胞(DC)数量和免疫功能的变化及意义。方法将SD大鼠随机分为正常对照组和致伤组,正常对照组只麻醉不致伤,并取外周血1次;致伤组以盲肠结扎穿孔制作脓毒症动物模型,分别于伤后4、12、24 h活杀动物取标本。分离两组外周血DC,通过流式细胞仪检测各组的DC数量,DC表面HLA-DR、CD80、CD86表达水平以及DC诱导的T细胞反应性增殖,并检测各组外周血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平。结果致伤组DC数量较正常对照组明显下降;DC表面HLA-DR、CD80、CD86表达水平也较正常对照组明显降低。致伤组DC诱导的T细胞增殖能力明显低于正常对照组;伤后血清IL-1β、IL-6显著升高,与正常对照组比较差异有统计学意义。结论脓毒血症早期大鼠外周血DC数量下降,功能降低,与伤后免疫系统功能低下密切相关。     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞培养与功能检测方法

目的:建立从人外周血分离培养树突状细胞(dendritic cell,DC)及检测其表型与诱导淋巴细胞增殖能力的方法.方法:从未接受抗病毒治疗的CHB患者外周血中分离单个核细胞,在含GM-CSF、IL-4、TNF-α的完全培养基中诱导培养为DC,流式细胞仪检测细胞表型,混合淋巴细胞反应检测DC刺激淋巴细胞增殖的能力.结果:CHB患者外周血单核细胞,在体外可诱导出具有典型形态及生物学活性的DC.患者DC的HLA-DR、CD80、CD86的表达率分别为(44.77±8.127)%、(36.65±6.867)%、(32.16±6.340)%,CHB患者DC刺激淋巴细胞增殖的SI为1.39±0.375.与正常人DC相比明显降低(P<0.01).结论:CHB患者单个核细胞能被诱导培养为DC;通过检测DC表型和刺激淋巴细胞增殖能力可以了解CHB患者抗HBV免疫功能.     

In vitro induction of specific anti-tumoral immunity against laryngeal carcinoma by using human interleukin-12 gene-transfected dendritic cells

Background  Objective evaluation of the antitumor effect of interleukin-12 (IL-12) gene-transfected dendritic cell (DC) vaccine on laryngeal carcinoma requires in vivo and in vitro tests. The aim of this study was to investigate the function of IL-12 gene transfected DC at initiating specific immune response to laryngeal carcinoma in vitro．

Methods  Recombinant adenovirus with IL-12 gene was constructed. DCs were isolated from the peripheral blood of patients with laryngeal carcinoma, pulsed with tumor lysate of laryngeal carcinoma cells (DC⁺Ag), and transfected with IL-12 (DC-IL-12⁺Ag). The cells pheotypes including CD83, CD86 and HLA-DR on surface of DCs were assayed by flow cytometry (FCM). The concentration of IL-12 in culture supernatant of DCs and interferon γ (IFN-γ) in culture supernatant of T cells cocultured with DCs were quantified by ELISA. Methyl thiazolys tetrazolium (MTT) was used to evaluate proliferation of autologous T lymphocytes and activation of cytotoxic T lymphocytes (CTL) stimulated by IL-12-transfected DCs pulsed with tumor lysate against laryngeal carcinoma cells.

Results  The recombinant adenovirus expressing IL-12 gene was constructed successfully. Gene-transfected DC plused with tumor lysate with IL-12 (DC-IL-12⁺Ag) expressed higher level of CD83, CD86 and produced higher level of IL-12 than untransfected DCs (DC⁺Ag) (CD83: (60.2±1.8)% vs. (50.7±1.2)%, P <0.05; CD86: (88.9±2.1)% vs. (78.2±3.9)%, P <0.05; IL-12: (262.5±3.0) ng/L vs. (103.8±5.1) ng/L, P <0.05). The proliferation of autologous T lymphocytes and production of IFN-γ stimulated by DC transfected with IL-12 were more obviously than untransfected DCs. Cytotoxicity of CTL stimulated by IL-12-transfected DC pulsed with tumor lysate against laryngeal carcinoma cells were significantly stronger than stimulated by untransfected DC.

Conclusion  It is a promising approach for IL-12-transfected DC pulsed with tumor lysate to increase the antitumoral effect.

     

结核菌素纯蛋白衍生物刺激人γδT细胞效应分析

目的 探讨结核菌素纯蛋白衍生物(pure protein derivative,PPD)对人外周血γδT细胞的刺激效应.方法 采用Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)后,经尼龙毛柱法分离得T细胞.分别以卡介苗和PPD刺激γδT细...     

nTreg与基因1型CHC患者抗病毒疗效的关系

目的研究基因1型慢性丙型肝炎(CHC)患者治疗过程中外周血自然调节性T细胞(nTreg)的动态变化及其与抗病毒疗效的关系。方法 32例初治的CHC患者,均为基因1型,治疗方案为干扰素联合利巴韦林治疗48周。分别在治疗前、治疗过程中2、4、8、12、24、48周以及治疗结束后12或24周采集外周血标本。用流式的方法检测外周血单个核细胞(PBMC)中nTreg的比率。COBASAmpliprep/COBASTaqmanHCV试剂盒检测HCV-RNA定量。结果 24例患者治疗12周时HCV-RNA转阴,并且随访至治疗结束后24周仍阴性,达到持续病毒学应答(SVR);8例患者治疗12周时病毒量未转阴,无应答(NVR),24周时终止治疗。应答组和无应答组治疗前外周血中nTreg的比率差异无统计学意义(P>0.05)。应答组治疗过程中2、4、12、24、48周及治疗结束后各个时间点PBMC中nTreg水平分别为(0.91±0.22)%、(1.31±0.29)%、(1.78±0.43)%、(1.92±0.44)%、(1.90±0.37)%、(1.14±0.35)%;在治疗2周(P<0.001)及治疗结束后(P<0.001)下降明显。无应答组治疗过程中2、4、12、24周及治疗结束后各时间点PBMC中nTreg水平分别为(1.21±0.15)%、(1.24±0.18)%、(1.42±0.11)%、(1.45±0.11)%、(1.14±0.10)%;Treg水平在治疗4周时缓慢上升(P=0.005),在治疗结束后显著下降,与治疗24周比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论 CHC患者外周血nTreg水平与干扰素/利巴韦林抗病毒治疗的疗效密切相关,抗病毒治疗2周时nTreg水平的下降可以预测其疗效。提示nTreg可能在机体清除病毒的早期过程中起着重要作用。     

1,25-二羟维生素D3处理的树突细胞在变应性气道炎症中的免疫调节作用

目的 探讨1,25-二羟维生素D,[1,25(OH)2D3]处理的树突细胞(DC)在变应性气道炎症中的免疫调节作用及其机制.方法 小鼠骨髓来源DC分2组,分别用1,25(OH):D,和磷酸盐缓冲液(PBS)处理,RT-PCR和蛋白质印迹法检测2组Dc Notch配体Mrna和蛋白表达.将2组DC和Notch配体中和抗体封闭的1,25(OH)2D3处理DC分别与小鼠脾脏来源CIM+T细胞共培养,流式细胞仪检测CD4+T细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比.将卵清蛋白(OVA)致敏小鼠分2组,每组5只,分别过继转移1,25(OH)2D3组DC[1,25(OH)2D3-DC组]和PBS组DC(PBS-DC组),以OVA激发气道炎症后行肺脏病理、支气管肺泡灌洗液(BALF)中自细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13和干扰素γ(IFN-γ)水平以及脾脏CD4+T细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比检查.结果 1,25(OH)2D3组DC Notch配体Jaggedl和Jagged2 Mrna表达(0.376±0.029、0.564±0.018)和蛋白表达(0.786±0.034、0.632±0.026)均明显高于PBS组(分别为0.146±0.032、0.267±0.012和0.124±0.025、0.098±0.012,均P＜0.01).与CIM+T细胞共培养后,1,25(OH)2D3组CD4+T细胞中CD4+C1)25+Foxp3+T细胞百分比(22.49%±0.56%)明显高于PBS组(6.67%±0.60%,P＜0.01);经Jagged2中和抗体封闭组CIM4CD25+Foxp3+T细胞百分比(6.56%±1.89%)明显低于未封闭组(20.37%±1.64%,P＜0.01),1,25(OH)2D3-DC组小鼠气道炎症明显轻于PBS-DC组;BALF中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ水平(pg/ml)分别为33±5、134±23、91±11和未检测到(＜12.5),均明显低于PBS-DC组(分别为55±7、332±49、152±19、23±6,均P＜0.01);脾脏CD4+T细胞中CIM+CD25+Foxp3+T细胞百分比(14.69%±1.14%)明显高于PBS-DC组(2.38%±0.14%,P＜0.01).结论 1,25(OH)2D3处理DC对变应性气道炎症有抑制作用,这种作用可能与1,25(OH)2D3处理DC通过Jaggect2介导的Notch信号途径诱导CD4+CD25+Foxp3+T细胞生成有关.     

多西环素对树突状细胞功能的影响

目的探讨多西环素对树突状细胞的免疫表型和功能的影响。方法采集健康人的外周血,密度梯度离心法获得外周血单个核细胞,用rhIL-4和rhGM—CSF诱导分化为树突状细胞,通过LPS诱导树突状细胞成熟。树突状细胞诱导成熟过程中向培养基中分别加入0μg／mL、100μg／mL和300μg／mL的多西环素,通过流式细胞术检测树突状细胞表面HLA—DR、CD83和CD80的表达,用ELISA检测树突状细胞分泌TNF—α、IL-6、IL-12和IL-10,与T细胞共培养检测刺激同种异型T细胞的增值能力。结果与对照组相比,100ng／mL和300ng／mL多西环素处理组诱导树突状细胞表达HLA—DR表达下调。多西环素可下调树突状细胞分泌IL-1B、IL-12、TNF-α和IL-6,也可抑制树突状细胞刺激同种异型T细胞增殖,并呈剂量依赖性。结论多西环素作用于树突状细胞成熟过程,导致树突状细胞下调HLA-DR的表达,抑制树突状细胞分泌IL-1B、IL-6、IL-12和TNF—α,下调其刺激同种异型T细胞的增值能力。     

CD40 siRNA对 MRL/Lpr狼疮小鼠炎症反应的影响

目的：观察CD40的小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）对系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus, SLE）动物模型MRL/Lpr小鼠细胞因子IFN γ、IL 17、IL-4和抗双链DNA(anti-double strand DNA,anti-ds-DNA)抗体表达水平的影响,探讨CD40 siRNA治疗MRL/Lpr小鼠的可能性。方法：16只MRL/Lpr小鼠随机分为对照组、空载体组、CD40-siRNA1组及CD40-siRNA2组,每组4只,将成功构建的CD40 siRNA表达载体尾静脉注射MRL/Lpr小鼠,对照组和空载体组小鼠分别注射等剂量、等比例的磷酸盐缓冲液（PBS）和pGFP-V-RS空载体,每隔1天1次,共6次,14 d处死小鼠,称其脾的质量,组织切片在荧光显微镜下观察小鼠脾是否有CD40 siRNA的表达,注射前及注射后第2、5、8、11和14 天小鼠尾部采血,ELISA法检测4组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-4和anti-dsDNA抗体的表达水平变化, RT-PCR法检测小鼠脾组织中CD40 mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测小鼠脾组织中CD40蛋白的表达水平。结果：注射后的siRNA表达载体可以在小鼠脾中表达;注射CD40 siRNA组的小鼠脾质量减轻,由对照组（141.88±7.81） mg和空载体组（153.10±7.60） mg降低至CD40-siRNA1组（78.85 ±5.61） mg和CD40-siRNA2组（80.25±4.07） mg,注射前4组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-4和anti-dsDNA抗体的（质量）浓度比较,差异无统计学意义;而注射后第2、5和8天 CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组MRL/Lpr小鼠血清中IFN-γ、IL-17和（质量）浓度明显下降,CD40-siRNA1组的IFN-γ的（质量）浓度依次为（118.74±10.32） ng/L（pg/mL）、 （115.24±8.26） ng/L、（113.71±5.02） ng/L ,CD40-siRNA2组依次为（117.83±6.83） ng/L 、（114.07±0.97） ng/L、（112.67±9.66） ng/L; CD40-siRNA1组的IL-17的(质量)浓度依次为（7.05±0.41） ng/L、（6.34±0.76） ng/L、（5.83±0.43） ng/L,CD40-siRNA2组依次为（7.07±0.22） ng/L、（6.35±0.49） ng/L、（6.12±0.80） ng/L;CD40-siRNA1组的anti-dsDNA的浓度依次为（7.51±0.29） ng/L、（6.74±0.45） ng/L、（6.32±0.39） ng/L;CD40-siRNA2组依次为（8.19±0.38） ng/L、（7.14±0.50） ng/L、（6.48±0.29） ng/L。IL-4的（质量）浓度明显升高,CD40-si-RNA1组IL-4的（质量）浓度依次为（26.51±1.81） ng/L、（27.80±1.72） ng/L、（28.08±2.21） ng/L,CD40-siRNA2组依次为（26.28±2.03） ng/L、（28.15±2.95） ng/L、（28.37±1.71） ng/L。 CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组与对照组和空载体组比较差异有统计学意义（P<0.05）, 注射后第11和14天 CD40 siRNA1组和CD40-siRNA2组中这4个指标的（质量）浓度逐渐恢复至对照组和空载体组的（质量）浓度水平,IFN-γ、 IL-17、IL-4的（质量）浓度4组小鼠比较,差异无统计学意义,注射后第11天 CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组anti-dsDNA抗体的水平尽管与对照组和空载体组比较有所提高,4组比较差异有统计学意义（P<0.05）,而注射后第14天 anti-dsDNA抗体的水平4组小鼠比较,差异无统计学意义。注射后第14天 CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组 MRL/Lpr小鼠脾组织中CD40 mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论： MRL/Lpr小鼠注射CD40 siRNA载体后,血清中IFN-γ、IL 17和anti-dsDNA抗体水平降低,IL-4的浓度升高,CD40 mRNA和蛋白的表达水平下降,说明CD40 siRNA抑制其mRNA和蛋白后,MRL/Lpr小鼠炎症反应减轻,疾病活动度下降,提示其对SLE动物模型MRL/Lpr小鼠有治疗作用。     

慢性乙型肝炎患者血清白介素18的临床意义

目的 探讨IL-18在慢性乙型肝炎(CHB)、肝衰竭中的意义.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测78例CHB患者不同临床类型组血清IL-18水平,与肝功能完全正常的20例健康体检者作对照,同时检测肝功能、乙肝两对半、HBV-DNA、部分病人进行了HbsAg定量测定和PT测定.结果 78例CHB患者血清IL-18水平为(555.46±582.72) ng/mL;健康对照组IL-18水平为(259.0±99.57) ng/mL,经完全随机设计两独立样本比较的秩和检验(P＜0.05),2组IL-18水平差异有统计学意义;抗病毒治疗应答组、HbeAg+CHB组、HBeAg-CHB组、肝衰竭组IL-18水平分别为(331.90±228.80) ng/mL、(428.02±244.08) ng/mL、(575.70±339.53) ng/mL、(1299.0±571.40) ng/mL,各组IL-18水平均高于对照组,差异均有统计学意义(z检验,P＜0.01),4个临床类型组IL-18水平两两比较,肝衰竭组IL-18水平最高,与其余各组相比,差异均具有统计学意义;HBeAg-CHB组IL-18水平＞HbeAg+CHB组>抗病毒治疗组,但差异无统计学意义(P＞0.05).高、低病毒载量组IL-18水平分别为(618.64±690.46) ng/mL、(475.60±508.26) ng/mL,差异无统计学意义(P＞0.05);HbsAg载量高、低组IL-18水平分别为:(846.40±1175.78) ng/mL)、(701.20±690.46) ng/mL,差异无统计学意义.炎症活动慢性HBV感染组63份病例IL-18与ALT、AST、Tbil相互关系经Spearman等级相关检验,相关系数有统计学意义(P＜0.05),呈正相关,其中IL-18与Tbil呈高度正相关.IL-18与HBV-DNA相互关系经Spearman等级相关检验,相关系数无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-18参与了HBV感染后的免疫反应、肝脏损伤和修复过程;IL-18水平的异常升高可能系肝衰竭发生机制之一;(3)IL-18与肝损伤程度有关,与HBV-DNA、HbsAg载量无明显相关性.     

非甲基化CG的寡脱氧核苷酸链对慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的影响

目的:探讨非甲基化CG的寡脱核苷酸链(CPG ODN)对慢性乙型肝炎(CHB)患者树突状细胞(DCs)功能的影响.方法:对10例慢性乙型肝炎患者,10例HBV携带者及10例健康对照者外周血来源DCs进行体外培养.应用流式细胞技术检测DCs的表面分子HLA-DR,CD80和CD86的表达,ELISA检测DCs培养上清中IL-12水平,并在电镜下观察DCs的改变.结果:体外培养第6天的DCs,加入CpG ODN继续培养24 h后,透射电镜下观察,与完全培养基对照组DCs相比,其表面的空起丰富、增粗,粗面内质网增多,空泡减少甚至消失.流式细胞仪分析显示, CpG ODN刺激组CD80,CD86及HLA-DR在CHB患者、HBV携带者及正常人DCs上的表达阳性率均较完全培养基对照组明显升高(P＜0.05).CHB患者、HBV携带者及正常人DCs均用完全培养基培养时,CHB患者及HBV携带者DCs上的HLA-DR,CD86和CD80的表达阳性率较正常人明显下降(P＜0.05),但CHB患者和HBV携带者之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).CHB患者、HBV携带者及正常人DCs均用CpG ODN刺激时,CHB患者DCs上的HLA-DR和CD86表达阳性率较HBV携带者及正常人明显下降(P＜0.05),但HBV携带者和正常人之间比较却无统计学差异(P＞0.05);CHB患者和HBV携带者DCs的CD80表达阳性率较正常人明显下降(P＜0.05),但CHB患者和HBV携带者之间比较却无统计学差异(P＞0.05).ELISA检测发现CpG ODN刺激组DCs分泌IL-12的水平无论在CHB患者、HBV携带者及正常人均较完全培养基对照组明显升高(P＜0.05).无论是完全培养基培养还是CpG ODN刺激,CHB患者及HBV携带者DCs分泌IL-12较正常人明显下降(P＜0.05),但CHB患者和HBV携带者之间比较却无统计学差异(P＞0.05).结论:CpG ODN能够明显促进CHB患者外周血DCs成熟,为CpG ODN治疗CHB提供了实验基础.     

CRP、IL-6和TNF-α与糖尿病肾病关系的研究

目的 探讨不同程度的糖尿病肾病(DN)与高敏C-反应蛋白(HS-CRP)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的关系.方法 根据糖尿病(DM)患者是否伴有24h尿白蛋白(UAE)以及UAE的含量,将DM组分成无肾病DM组、轻度DN组和重度DN组.检测并分析141例2型糖尿病(T2DM)患者和54例...     

生长激素对脐血来源树突细胞成熟状态的影响

目的 检测生长激素(GH)对脐血来源树突细胞(DC)的免疫表型和功能状态的影响.方法 从新鲜脐带血中分离出单核细胞,应用白细胞介素4(IL-4)和重组人粒-巨细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)诱导刺激单核细胞,以不同浓度的GH作为修饰因子修饰DC诱导过程;观察DC形态、数目、生长状态,流式细胞仪检测DC的免疫表型,酶联免疫吸附试验测定DC上清液中白细胞介素12(IL-12),自体混合淋巴细胞反应测定其功能状态.结果 脐血贴壁的单核细胞在细胞因子和GH诱导下可以分化为成熟DE,不同浓度(5、25、100 ng/ml)GH可显著上调DC CD83(31%±4%、34%±4%、34%±5%)、CD80(26%±4%、29%±6%、30%±6%)和HLA-DR(45%±8%、49%±6%、50%±5%)分子表达的阳性宰(P<0.05),明显提高DC分泌IL-12的能力[分别由第5天的(91±12)、(159±20)、(166±19)pg/ml上升到第9天的(686±58)、(796±61)、(810±67)pg/ml](P<0.05),DC对自体淋巴细胞的激活功能明显增强(P<0.05).结论 GH可明显促进DC的诱导过程,修饰加速DC的成熟并提高细胞表面共刺激分子表达,增强DCIL-12分泌和激发自身淋巴细胞增殖能力;GH的修饰作用与浓度有一定的相关性.