反义细胞周期素D1基因转导肾小球系膜细胞

目的：建立外源基因转导肾小球系膜细胞的基因转移系统，为系膜增殖性肾小球疾病的机制和治疗研究提供条件。方法：利用基因重组技术构建反义Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１逆转录病毒表达载体，重组体经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染第３代包装细胞，建立了能持续分泌假病毒颗粒的无性细胞系，重组病毒经ＤＥＡＥ－葡聚糖转导肾小球系膜细胞，并对系膜细胞转录表达Ｃｙｌｉｎ Ｄ１反义ＲＮＡ水平进行原位杂交分析。结果：建立的无性细胞系上清中病     

炎症因子内皮素—1对肾小球系膜细胞周期G1期调控蛋白表达…

目的：研究内皮素－１对肾小球系膜细胞周期Ｇ１期进展的调控机制。方法：应用免疫组织化学、免疫印迹等技术检测系膜细胞在内皮素－１刺激增殖时，细胞内Ｇ１期调控蛋白ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１和ｃｄｋ４表达的变化。结果：正常指数式生长的系膜细胞核内表达二种蛋白、在内皮素１刺激下Ｇ１期进展中ｃｙｃｌｉｎＤ１表达增加，ｃｄｋ４表达变化不明显，结论：ｃｙｃｌｉｎＤ１是体外培养肾小球系膜细胞针对炎症因子内皮素１刺激时Ｇ１期     

肺癌组织中细胞周期蛋白D1的表达

目的　观察细胞周期蛋白Ｄ１（Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１）在肺癌发生中的作用及其与生物学行为的关系。方法　收集肺癌及癌前病变和正常肺组织,采用免疫组化ＳＰ法检测Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的表达。结果　正常肺组织和鳞状化生的支气管上皮未见Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达;在轻→中→重度不典型增生、原位癌、浸润癌,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达的阳性率逐渐升高,阳性细胞数也增多,低分化癌的阳性率高于中高分化癌（Ｐ＜ ０．０５）。Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１阳性组的增殖活性高于阴性组（Ｐ＜ ０．０５） ;肺鳞癌有淋巴结转移组Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的阳性率高于无转移组（Ｐ＜ ０．０５） 。结论　Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达与肺癌的发生和增殖有关,而且Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达是支气管粘膜上皮癌变的早期表现。Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达与肺鳞癌分化不良及淋巴结转移有关,可能是预后不良的标志。     

CyclinD1在子宫内膜癌中的表达及其意义

应用免疫组织化学技术（ＳＰ法），检测ＣｙｃｌｉｎＤ１基因在３６例子宫内膜癌中的表达。ＣｙｃｌｉｎＤ１在子宫内膜癌过表达阳性率为４１６７％（１５／３６），其表达与子宫内膜癌的临床分期，细胞分级、转移及患者预后有关（Ｐ＜００５）。结果提示，测定子宫内膜癌ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白有助于确定患者的临床分期，组织分化程度，判断肿瘤转移及估计患者的预后     

细胞周期素D1表达对肾母细胞瘤生长的影响

目的：研究细胞周期素 Ｄ１ （ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１）表达对肾母细胞瘤的影响。方法：应用原位杂交技术检测 ２３例肾母细胞瘤 ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 表达情况。结果：１５ 例检测到ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 表达阳性细胞,表达指数 ５６％ ～４３９％ 。ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 表达阳性组瘤体重量显著大于阴性组（ Ｐ＜ ００５）;ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 高表达者瘤体重量明显大于低表达者（ Ｐ＜ ００５）。临床晚期标本ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 表达指数明显高于早期标本（ Ｐ＜ ００５）;不同组织类型标本 ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 表达指数无显著性差异（ Ｐ＞ ００５）。ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 表达指数与瘤体重量呈正相关（ｒ＝ ０５３, Ｐ＜ ００５）。结论：ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达与肾母细胞瘤发生发展关系密切;过度表达时,肾母细胞瘤细胞增殖周期演进快,肿瘤生长迅速,预后不良。     

CyclinD_1、CDK_4蛋白在食管癌中的表达及意义

目的为探讨ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４基因及蛋白在食管癌发生中的意义及其相互间的作用。方法采用ＬＳＡＢ免疫组化染色法,对４３例食管癌手术标本的ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４蛋白进行标记。结果在鳞癌组织中,两种抗体的阳性物质存在于细胞核中和／或胞浆中,在正常鳞状上皮主要存在于核中,且从正常鳞状上皮→癌旁不典型增生→鳞癌组织,ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４的阳性率逐渐上升,统计学处理：正常上皮与癌组织之间的阳性率有差异显著性（ＰＣｙｃｌｉｎＤ１＜０．０５,ＰＣＤＫ４＜０．０５）;但未检出ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４与癌分化的关系。另外,在正常鳞状上皮中,ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４则多集中在基底层的增殖带。结论ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４蛋白表达的变化是食管癌发生中的早期事件,并且在正常细胞周期中起正调控作用。     

视黄酸及芳维甲对HL-60细胞细胞周期素及相关激酶P34~(cdk2)蛋白表达的影响

目的：本研究从细胞周期调控这一角度来探讨视黄酸类物质阻遏白血病细胞增殖的分子机理。方法：采用两步过量胸苷阻断法将ＨＬ－６０细胞同步化于Ｇ１／Ｓ期边缘，５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ视黄酸或芳维甲处理１ｄ～４ｄ后收获细胞，以流式细胞仪（ＦＣＭ）分析细胞周期相分布，免疫印迹法检测ＣｙｃｌｉｎＥ、ＣｙｃｌｉｎＤ１和Ｐ３４ｃｄｋ２蛋白表达水平。结果：ＣｙｃｌｉｎＥ和Ｄ１蛋白表达量具有周期依赖性，Ｇ１期开始增加，Ｓ期达到高峰，Ｇ２期逐渐下降，而Ｐ３４ｃｄｋ２蛋白表达量在整个细胞周期中无明显变化；视黄酸或芳维甲处理后，大部分细胞被阻断在Ｇ０／Ｇ１期，Ｐ３４ｃｄｋ２蛋白表达量变化不明显，而ＣｙｃｌｉｎＥ和Ｄ１蛋白表达量明显下降。结论：视黄酸或芳维甲诱导的ＣｙｃｌｉｎＥ和ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白表达的降低，可能与视黄酸类物质干扰细胞Ｇ１→Ｓ期转换、阻遏ＨＬ－６０细胞增殖并诱导其分化有关。     

细胞周期素D1在结肠癌中的表达

目的 探讨细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）Ｄ１与ｐ５３基因在结肠癌中的表达意义及其关系。方法 应用原位杂交技术和免疫组织化学技术检测结肠癌中ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因ｍＲＮＡ和ｐ５３蛋白的表达。统计处理采用卡方检验。结果 发现结肠癌组织和癌旁组织中ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达阳性率分别为６３．４％（４０／６３）及４４．４４％（２８／６３）,两者之间差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达程度与癌组织分化程度及临床分期有关,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达与其他临床病理指标无关（Ｐ〉０．０５）。ｐ５３蛋白在结肠癌中阳性率为３８．０９％（２４／６３）,ｐ５３阳性的患者其ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的表达较之ｐ５３阴性者为高,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。结论 ｃｙｃｌｉｎＤ１的过表达及ｐ５３突变在结肠癌的癌变     

内皮素反义寡核苷酸在抑制大鼠肾小球系膜细胞和系膜基质增生中的作用

目的研究内皮素１（ＥＴ１）在体内系膜细胞和系膜基质增生中的作用。方法应用反义寡核苷酸技术,将前内皮素原的反义寡核苷酸作为ＥＴ１基因表达的特异抑制剂,同时设立正义寡核苷酸和错配寡核苷酸作为对照序列（每组３只大鼠）。（１）在大鼠抗Ｔｈｙ１１系膜增生性肾小球肾炎模型中,以阳离子脂质体介导的基因转移方法,将各种寡核苷酸链分别导入大鼠肾脏。通过生物素修饰的反义寡核苷酸显色反应,了解寡核苷酸链的体内转移效果。（２）用放射免疫分析方法分析反义、正义,错配寡核苷酸对肾小球ＥＴ１蛋白量的影响;用定量病理分析方法观察反义、正义,错配寡核苷酸对系膜细胞和系膜基质增生的作用。结果（１）寡核苷酸链能够进入肾小球系膜细胞。（２）反义寡核苷酸降低了肾小球的ＥＴ１蛋白水平［（３２±１９）ｎｇ／ｇ,对照组（１２６±２０）ｎｇ／ｇ］,抑制了系膜细胞增生［（０８２±００４）个／１００μｍ２］和系膜基质增生（１２８±１６）％,而正义和错配寡核苷酸不影响肾小球的ＥＴ１蛋白水平或系膜细胞和系膜基质的病变。结论抑制ＥＴ１基因表达能够抑制肾炎大鼠系膜细胞和系膜基质增生,ＥＴ１是刺激体内系膜细胞和系膜基质增生的重要炎症介质之一     

基因p21, p53在前列腺癌中的表达及相互关系

０　引言　ＣＤＫ抑制剂（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＣＤＫＩ）,是细胞周期负调节因子,被认为具有抑癌基因活性．ｐ２１基因是１９９３年发现的第一个ＣＤＫＩ基因［１］,其主要作用为：抑制ＣＤＫ２,４,６等活性,推测其在细胞周期的多个环节上普遍起作用;是含增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ）在内的ｃｙｃｌｉｎＤ－ＣＤＫ四聚体中的一员［２］,能够直接结合和抑制ＰＣＮＡ,而抑制ＤＮＡ的复制．ｐ５３基因通过结合ｐ２１基…     

炎症因子内皮素-1对肾小球系膜细胞周期G_1期调控蛋白表达的影响

目的：研究内皮素-1对肾小球系膜细胞周期G1期进展的调控机制。方法：应用免疫组织化学、免疫印迹分析等技术检测系膜细胞在内皮素-1刺激增殖时，细胞内G1期调控蛋白cyclinD1和cdk4表达的变化。结果：正常指数式生长的系股细胞核内表达二种蛋白，在内皮素1刺激下G1期进展中cyclinD1表达增加，cdk4表达变化不明显。结论：cyclinD1是体外培养肾小球系膜细胞针对炎症因子内皮素1刺激时G1期进展的重要调节蛋白。     

核因子—kB调控白细胞介素1β刺激人肾小球系膜细胞表达细胞间粘 …

目的 研究因子－ｋＢ（ＮＦ－ｋＢ）对白细胞介素１β（ＩＬ－１β）引起的体外培养的人肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ－１）的基因调控机理。方法 采用凝胶迁移率法观测ＮＦ－ｋＢ的活化。以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法检测细胞间粘附分子的基因表达,用细胞ＥＬＩＳＡ法检测ＩＣＡＭ－１蛋白水平的表达。结果 ｒｈＩＬ－１β１０ｎｇ／ｍｌ刺激肾小球系膜细胞１,２,４小时,均引起ＮＦ－ｋＢ活化,且１小时为最强     

高脂饮食对阿霉素肾病大鼠肾小球系膜基质的影响

目的 探讨高脂饮食对阿霉素肾病大鼠肾小球硬化的影响。方法 应用病理、免疫组化及分子生物学方法结合图像分析技术,观察高脂饮食对大鼠血胆固醇、尿蛋白、肾脏病理形态学改变以及肾小球系膜基质产生的影响。结果 在非肾病组及肾病组,高脂饮食大鼠的血胆固醇较标准饮食大鼠明显升高,分别为（ 2.2± 0.3） g/L vs(0.9± 0.1)g/L(P     

Cyclin D3正、反义表达质粒在淋巴瘤细胞系Raji中的转染与鉴定

目的 :构建人类cyclinD3正义和反义真核表达质粒 ,分别转染到淋巴瘤细胞系Raji细胞中 ,为探讨cyclinD3基因对淋巴瘤细胞生物学行为的影响提供研究基础。方法 :以Raji细胞总RNA为模板 ,通过RT -PCR获取cyclinD3全长cDNA ,克隆入 pGEM -T载体 ,再亚克隆到真核表达载体pcDNA3 .1中 ,构成含cyclinD3的表达质粒 pcD NA3 -cyclinD3。再运用DNA重组技术将cyclinD3基因反向克隆到pcDNA3 .1中 ,构建成cyclinD3反义表达质粒pcDNA3 -ascyclinD3。用脂质体介导的基因转染方法 ,将cyclinD3正、反义表达质粒和空质粒分别导入Raji细胞 ,经G418筛选建立稳定转染细胞株 ,用WesternBlot方法鉴定cyclinD3基因的表达。结果 :酶切鉴定和测序分析证实 ,实验成功构建了cyclinD3正、反义表达质粒。与转染cyclinD3正义表达质粒和空质粒的细胞相比 ,转染cyclinD3反义表达质粒的Raji细胞中cyclinD3表达水平下降。 结论 :正、反义cyclinD3在淋巴瘤细胞中的转染和表达 ,为进一步研究cyclinD3在淋巴瘤细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡中的作用奠定了基础     

EFFECT OF HIGH—LIPID DIET ON GLOMERULAR MESANGIAL MATRIX IN ADRIAMYCIN—INDUCED NEPHROTIC RATS

INTRODUCTIONSince１９８０＇s，increasingexperimentalandclinicalevidencehassuggestedthatlipidsareimportantmodula－torsinprogressivekidneydisease．Bothqualitativeandequantitativeabnormalitiesinlipidprofileshavebeennotedinpatientswithprimaryandsecondaryrenal     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱及对P53和Cyclin D1基因表达的影响

目的:探讨Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化及对P53和Cyclin D1基因表达的影响。方法:PC12细胞同步于G0期,采用终浓度为0-45μmol/L或浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,用MTT比色法分析细胞存活率;流式细胞仪检测分析细胞周期的改变;RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测P53和Cyclin D1基因的变化。结果:随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);流式细胞仪分析表明去血清培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8,16,24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P<0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);P53 mR-NA表达和P53蛋白表达降低、Cyclin D1 mRNA表达和Cyclin D1蛋白表达增高。结论:Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与下调P53的表达,上调Cyclin D1的表达有关。     

Enhanced sensitivity to mitomycin C by abating heat shock protein 70 expression in human bladder cancer cell line of BIU-87

Background Bladder cancer is a relatively common tumor in the urinary system, in which mitomycin C (MMC)-based chemotherapy or combination chemotherapy has been mainly used to treat patients with advanced bladder cancer. The prognosis of patients with advanced bladder cancer is still extremely poor in spite of recent therapeutic advances. To improve the prognosis, the sensitivity of tumor cells to mitomycin C by the induction of apoptosis with the abating heat shock protein 70 (HSP70) expression in human bladder cancer cell lines of BIU-87 was investigated. Methods HSP70 expression was abated in BIU-87 cells by HSP mRNA antisense oligomers. MTT assay and the clone-forming test were used for evaluating the sensitivity of cells to MMC. Apoptosis was assessed using both fluorescent microscopy after staining the cells with Hoechst 33258 and DNA fragment ladder agarose electrophoresis. Thirty-two male six-week-old BALB/c nude mice, at the beginning of the experiment, were used to evaluate the effect of antisense oligomers (ASO) on the tumor formation in vivo. Results HSP70 expression in BIU-87 was effectively abated by HSP70 mRNA antisense oligomers. The percentage of apoptotic cells in ASO group was greater than in sense oligomers (SO) ［P&lt;0.05, （18.31±2.89）% vs （1.89±0.74）%］, nonsense oligomers (NO) ［P&lt;0.05, （18.31±2.89）% vs （1.78±0.92）%］ and blank groups ［P&lt;0.05, （18.31±2.89）% vs （1.87±0.84）%］, while the sensitivity of tumor cells to mitomycin C was enhanced. The in vivo tumor inhibition rate of ASO plus MMC (&gt;50%) was more than that of ASO or MMC group alone (all P&lt;0.05). Conclusions The abating level of HSP70 expression can strengthen the sensitivity of BIU-87 to MMC. One of this effect might be related to the induction of apoptosis by abating HSP70 expression. Chin Med J 2005; 118(23):1965-1972     

FBXL20对人非小细胞肺癌A549细胞生长的影响

目的 观察FBXL20(F-box and leucine rich repeat protein 20) 对人非小细胞肺癌A549细胞生长的影响并初步探究其机制.方法 采用慢病毒感染A549细胞,构建对照组(FBXL20-vector组)及干扰组(FBXL20-RNAi组),通过Western blot验证慢病毒敲减效率.利用CCK-8及集落形成实验观察FBXL20的下调对A549细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot分析周期蛋白的改变,基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA) 探究FBXL20可能参与的生物学过程.结果 干扰组FBXL20的蛋白表达(0. 36 ± 0. 02) 显著低于对照组(0. 58 ± 0. 01)(P＜0. 01) .与对照组相比,干扰组的增殖能力增强(P＜0. 05),形成的集落数目也显著增加(100 ± 20 vs 53 ± 6)(P＜0. 05),且停留在G2 /M期的细胞比例明显降低(5. 65 ± 1. 35 vs 9. 94 ± 1. 44)(P＜0. 05) .Western blot结果显示Cyclin D1、ERK1 /2蛋白表达无明显变化(P＞ 0. 05),CDK2、Cyclin E、CDK1、Cyclin A、Cyclin B1蛋白表达显著增加,而p-ERK1 /2则显著降低(P＜0. 05) .GSEA结果显示FBXL20的低表达与G2 /M检查点呈正相关(P＜0. 01) .结论 下调FBXL20可以加快A549细胞G2 /M期的进程,提高其生长能力.其机制可能是通过抑制p-ERK的激活,使得其下游周期蛋白CDK1、Cyclin A、Cyclin B1表达增加而实现的.