胶质母细胞瘤基因表达谱及相关基因的聚类研究

目的探讨人脑胶质母细胞瘤发生、发展中相关基因的表达及功能.方法用含13 939种人类基因的BioStarH140S型表达谱芯片,以正常成人脑及不同级别胶质瘤组织总RNA制备的探针杂交芯片;ScanArray 4000扫描芯片荧光信号,提取脑及胶质瘤组织差异基因并进行生物信息分析;用Hierarchical聚类对胶质瘤差异基因进行特征提取;用Northern杂交验证及进行初步功能研究.结果正常脑与18例不同级别胶质瘤组织间筛选出多类差异表达基因,通过生物信息学和Hierarchical聚类,发现α-连环素、微型染色体维护蛋白7、细胞周期素B2、FBX05、着丝粒蛋白F基因与胶质母细胞瘤密切相关,该类基因在低级别胶质瘤中表达差异不明显,但胶质母细胞瘤中表达明显上调.Northern杂交显示该类基因与胶质母细胞瘤密切相关,与芯片结果一致.结论基因表达谱芯片可快速、高效地筛选胶质瘤相关基因,发现的5条基因与胶质母细胞瘤侵袭性强密切相关,可成为判断胶质瘤预后的分子生物学指标.     

Ki-67及TopoisomeraseⅡ在脑胶质母细胞瘤组织中的表达及其生物学意义

目的 探讨人胶质母细胞瘤中Ki-67及TopoisomeraseⅡ(TopoⅡ)之间的相关性及其与胶质母细胞瘤病人预后的关系.方法 收集O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)低表达的胶质母细胞瘤标本60例,应用免疫组化法检测Ki-67和TopoⅡ的表达,研究其相关性.结果 在MGMT低表达的胶质母细胞瘤中,Ki-67与TopoⅡ表达呈正相关(γ=0.83,P＜0.05).对本组标本来源的60例胶质母细胞瘤病人随访12-23个月,其中死亡38例,肿瘤复发46例.结论 Ki-67和TopoⅡ在胶质母细胞瘤中的表达强度相对一致;其表达能客观反映肿瘤细胞的增殖活性和恶性程度,且可能影响胶质母细胞瘤病人的预后.     

腺病毒早期区域1A蛋白结合p300蛋白在胶质母细胞瘤中的相关研究进展

胶质母细胞瘤(GBM)是中枢神经系统肿瘤中最具侵袭性和致死性的类型, 以进展快、易复发和治疗抵抗为特征。腺病毒早期区域1A蛋白结合p300蛋白(简称p300)是一种功能丰富的蛋白, 可作为转录辅激活物和赖氨酸乙酰转移酶发挥作用。目前研究表明p300在GBM的发生、增殖、侵袭和放化疗抵抗中具有着重要价值。本文现围绕p300的结构、功能及其参与GBM发生发展的多种途径、转化应用前景等方面的相关研究进展进行综述, 以期为GBM研究提供更多的参考借鉴。     

利用基因芯片研究与胶质母细胞瘤侵袭性相关的基因

目的探讨利用基因表达谱芯片筛选人脑胶质母细胞瘤与侵袭性相关基因的表达及功能。方法用含13 939种人类基因的BioStarH140S型芯片,以成人脑及6例胶质母细胞瘤组织总RNA制备的探针杂交芯片;ScanArray4 000扫描芯片荧光信号,提取脑及胶质母细胞瘤组织差异基因,并进行生物信息分析及功能研究。结果表达谱芯片筛选出胶质母细胞瘤差异基因198条(1.42％),与细胞信号和传递蛋白、细胞骨架、代谢、蛋白翻译合成、细胞周期蛋白类、癌基因和抑癌基因等多类基因密切相关;与侵袭性相关的8条细胞骨架和细胞外基质基因表达谱相似,均在胶质母细胞瘤中显著上调,生物信息分析为α-连环素基因、钙粘附素1基因、层粘连蛋白、纤连蛋白1基因、基质金属蛋白酶2、Ⅲ型胶原基因、组织金属蛋白酶抑制1基因和血小板衍生生长因子受体A基因。结论表达谱芯片是高通量筛选胶质瘤相关基因的生物高新技术,侵袭性相关基因为判断胶质母细胞瘤患者的预后提供了分子生物学指标,有助于临床诊治。     

恶性胶质瘤中干细胞分离与细胞周期检测

目的从多形性胶质母细胞瘤组织标本中分离、培养、鉴定胶质瘤干细胞,并检测其所处的细胞周期。方法采用逐步递减培养基中血清含量的方式从多形性胶质母细胞瘤组织标本中获得悬浮生长的肿瘤球,应用免疫荧光染色检测胶质瘤干细胞及其分化细胞表面标志物的表达,免疫组化检测裸鼠颅内移植瘤表型。免疫磁珠分选多形性胶质母细胞瘤组织标本中的CD133阳性细胞后立即检测细胞周期。结果在多形性胶质母细胞瘤组织标本中成功分离出胶质瘤干细胞,在无血清培养液中呈悬浮生长,具有很强的自我更新与繁殖能力,免疫荧光染色显示该细胞表达CD133和巢蛋白,诱导分化后可分化成为神经元、星形胶质细胞与少突胶质细胞,裸鼠颅内移植后可重现亲本肿瘤表型。位于其中的胶质瘤干细胞大多处于G0～G1期。结论多形性胶质母细胞瘤组织中存在胶质瘤干细胞,相对处于静止状态。     

恶性胶质瘤组织中Bcl-xL mRNA和蛋白的表达及其与临床病理的关系

目的探讨恶性胶质瘤组织中bcl-xLmRNA和蛋白的表达及其与临床组织病理的关系。方法用免疫组化染色SP法和RT-PCR分别检测44例间变星形细胞瘤、45例胶质母细胞瘤和26例Ⅰ级星形细胞瘤组织中bcl-xLmRNA和蛋白的表达。结果bcl-xL蛋白表达的阳性率在间变星形细胞瘤中为86.40%,胶质母细胞瘤中为91.1%,与Ⅰ级星形细胞瘤的38.5%相比,差异显著(P<0.01)。bcl-xLmRNA相对含量在间变星形细胞瘤和胶质母细胞瘤中分别为0.89±0.26和0.93±0.21,与Ⅰ级星形细胞瘤的0.63±0.23相比,差异显著(P<0.01)。结论bcl-xLmRNA和蛋白表达与胶质瘤临床病理分级呈显著正相关,其高表达可能与胶质瘤的恶性进展密切相关。     

BTPCs在胶质母细胞瘤治疗中的研究进展

胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)是成人神经上皮性肿瘤中恶性程度最高、最具侵袭性、预后最差的肿瘤[1],中位生存期仅12~18.5个月[2]。脑胶质瘤的细胞来源仍众说纷纭,星形胶质细胞、神经干细胞和少突胶质前体细胞等均有可能是胶质瘤的起源细胞[3]。研究表明,高级别胶质瘤更有可能起源于神经干细胞(neural stem cell,NSCs)[4]。     

多形性胶质母细胞瘤放射前后ATM蛋白的表达及ATM/PI3-K区突变检测

目的探讨多形性胶质母细胞瘤(GBM)细胞辐射前后ATM蛋白表达量的变化及ATM/PI3-K区基因突变的情况。方法采用流式细胞仪技术检测U251细胞系及5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤细胞以2 Gy射线剂量照射前后ATM蛋白表达量的变化,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和PCR产物直接测序方法,对多形性胶质母细胞瘤细胞中ATM/PI3-K区关键区域进行突变检测。结果 U251细胞系中60Co照射前后ATM蛋白量均明显低于原代培养GBM的ATM蛋白量,U251和原代GBM细胞ATM蛋白表达量有显著差异(P<0.05);U251细胞系及原代培养GBM细胞60Co照射后的ATM表达虽有所升高,但经统计学分析无显著性差异(P>0.05)。所测U251细胞系及5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤细胞中ATM/PI3-K区序列中未检测到基因突变。结论 ATM蛋白表达水平不能完全反映ATM蛋白激酶的活性,多形性胶质母细胞瘤的放射抗拒可能与ATM/PI3-K区基因突变不相关。     

小胶质细胞与胶质瘤免疫

目前,恶性胶质瘤治疗效果不佳,死亡率极高,特别是多形性胶质母细胞瘤,即使给予综合治疗,中位生存期也只有14个月^[1]研究^[2]发现,胶质瘤中浸润有大量的小胶质细胞,这些小胶质细胞既出现在未受损的肿瘤组织中,也出现在坏死区域,并且他们的浸润程度与胶质瘤的级别和侵袭性密切相关。     

原代培养多形性胶质母细胞瘤的增殖与放射敏感性

目的探讨多形性胶质母细胞瘤的增殖活性与放射敏感性,为临床治疗提供参考.方法观察了5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤的形态学变化并绘制生长曲线.采用免疫组化链酶亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法(SABC)检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,并用四唑盐比色法(MTT)检测原代培养多形性胶质母细胞瘤以60Co 2Gy放射剂量照射后的存活分数.结果 5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤细胞形态多样,生长曲线和增殖活性各不相同,放射敏感性也存在明显差异.结论多形性胶质母细胞瘤存在不同放射敏感性的细胞群,放射治疗应体现个体化原则.     

miR-125a-5p抑制胶质瘤细胞增殖和糖酵解的初步研究

目的研究微小核苷酸125a-5p(miR-125a-5p)在胶质母细胞瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖和糖酵解的影响。方法定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测miR-125a-5p在人源胶质母细胞瘤组织中的表达情况;利用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测miR-125a-5p对细胞活力的影响;分别利用三磷酸腺苷(ATP)和乳酸试剂盒检测miR-125a-5p对ATP和乳酸生成的影响。结果 miR-125a-5p在胶质母细胞瘤组织中的表达明显低于肿瘤周边组织;miR-125a-5p对胶质瘤细胞具有生长抑制作用;miR-125a-5p减少了胶质瘤细胞中ATP和乳酸的产生;miR-125a-5p和有氧糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-DG)具有协同抑制胶质瘤细胞增殖的作用。结论 miR-125a-5p抑制胶质瘤细胞的增殖和糖酵解,将来可能是潜在的胶质瘤治疗新靶点。     

siRNA沉默CCN5抑制人胶质母细胞瘤细胞的生长

目的研究小干扰RNA(siRNA)沉默高半胱氨酸蛋白61/结缔组织生长因子/肾母细胞瘤过度表达基因5(CCN5)对人胶质母细胞瘤细胞系生长的影响。方法 Western blot方法检测胶质母细胞瘤患者脑组织CNN5蛋白水平的表达;合成CCN5 siRNA小片段,并,筛选最佳干扰片段;siRNA沉默CCN5在胶质母细胞瘤细胞系中的表达,噻唑兰(MTT)方法检测细胞的生长;CCN5沉默表达后,检测半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)的酶活性。结果胶质母细胞瘤患者脑组织中CCN5蛋白表达水平较正常人脑组织中高;siRNA沉默CCN5表达抑制细胞的生长并促进凋亡效应基因caspase-3活性升高。结论 CCN5基因沉默抑制人胶质母细胞瘤细胞系的生长,为探讨CCN5在胶质母细胞瘤细胞中的作用奠定基础,并为胶质母细胞瘤的基因治疗提供潜在的靶标基因。     

JAZF1对胶质母细胞瘤侵袭和迁徙的影响及分子机制研究

目的探讨JAZF1对脑胶质母细胞瘤（GBM）细胞侵袭、迁徙的作用及相关作用机制。 方法通过挖掘TCGA数据库中不同级别胶质瘤患者JAZF1的转录水平差异以及患者生存曲线差异,然后通过科内收集的胶质瘤样本提取总蛋白进行Western blot实验研究JAZF1蛋白水平在胶质瘤不同级别中的差异,通过Trans-well实验、细胞划痕实验研究JAZF1对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响,通过Western blot实验研究JAZF1对胶质瘤细胞侵袭和迁徙能力的关键分子的影响。 结果（1）Ⅳ级胶质瘤中JAZF1的mRNA、蛋白水平的表达上相较于Ⅱ级和Ⅲ级胶质瘤明显更高,差异具有统计学意义（P<0.05）;（2）JAZF1高表达组患者的中位生存期为13.0个月,而低表达组中位生存期为30.2个月,差异具有统计学意义（P<0.05）;（3）JAZF1表达下降后,U87M细胞的侵袭和迁徙能力均显著下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;（4）干扰JAZF1的表达后,p-Akt、MMP9、MMP2的表达水平显著下调,差异均具有统计学意义（P<0.05）,而Akt的表达变化不明显,差异无统计学意义（P>0.05）。 结论JAZF1在GBM中高表达且显著缩短了患者的中位生存期,通过调控Akt的磷酸化水平进一步调控相应信号通路下游的MMP9、MMP2的表达影响GBM的侵袭和迁徙能力。     

P53、PTEN、Ki-67在原发性胶质母细胞瘤和继发性胶质母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨P53、PTEN、Ki-67蛋白在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的表达差异及其意义。方法采用免疫组化方法检测人原发性和继发性胶质母细胞瘤标本及正常人脑组织标本中P53、PTEN和Ki-67蛋白的表达情况,并分析上述蛋白的表达差异。结果在正常脑组织标本中,PTEN蛋白阳性率为100%;P53和Ki-67均表达阴性。原发性和继发性胶质瘤标本中,P53蛋白阳性率分别为28.6%、62.5%;PTEN蛋白阳性率分别为78.5%、37.5%;Ki-67蛋白阳性率分别为35.7%、68.8%。P53和Ki-67在原发性胶质母细胞瘤与正常脑组织之间表达均有显著差异(均P0.05)。P53、PTEN和Ki-67蛋白在继发性胶质母细胞瘤和正常脑组织之间以及原发性胶质母细胞瘤和继发性胶质母细胞瘤之间表达均有显著差异(均P0.05)。结论 P53、PTEN及Ki-67蛋白在胶质母细胞瘤的发生、发展中起重要作用,联合检测三者表达可为判断不同类型胶质母细胞瘤提供依据。     

IDH1-R132H突变体通过miR-191-5p/p53轴调控U87MG胶质母细胞瘤干细胞增殖及凋亡

目的 探索IDH1-R132H突变抑制U87 MG胶质母细胞瘤干细胞增殖及诱导其凋亡的可能机制。方法 (1)以U87 MG细胞为研究对象,采用慢病毒转染构建IDH 1-R132H突变型及野生型细胞株,并诱导为胶质母细胞瘤干细胞,观察细胞球形成情况;流式细胞术检测肿瘤干细胞标志物CD133表达水平;CCK-8法检测细胞增殖情况和PI/Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡情况;qRCP和Western blot法分别检测IDH1、miR-191-5p及p53表达水平。(2)以NOD/SCID荷瘤小鼠作为研究对象,在体内水平考察miR-191-5p、p53表达及肿瘤生长情况。结果IDH1-R132H突变能够在体内外抑制U87 MG胶质母细胞瘤干细胞增殖(P<0.01)及分化(P<0.05),诱导其凋亡(P<0.01),下调miR-191-5p表达(体内P<0.05,体外P<0.001),上调p53(P<0.001)及其编码基因TP53(体内P<0.01,体外P<0.000 1)表达。结论 IDH1-R132H突变引起的U87 MG胶质...     

EGF和AG1478对GL15细胞增殖、侵袭和GFAP表达的影响

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)信号通路对人胶质母细胞瘤GL15细胞系细胞生物学特性影响的分子机制。方法Gimsa染色分析GL15细胞核型,甲基四唑兰(MTT)和Transwell分别检测表皮生长因子(EGF),AG1478对GL15细胞增殖和侵袭力的影响,逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测EGF和AG1478作用后GL15细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA和蛋白表达。结果Gimsa染色表明EGFR所在的7号染色体过度扩增。外源性的EGF双向调节GL15细胞增生和生长,小剂量(50ng/ml,100ng/ml)EGF能促进细胞增生和提高细胞侵袭能力以及GFAPmRNA和蛋白表达,而大剂量(200ng/ml)则能降低其增殖和侵袭能力,AG1478则能明显拮抗EGF活性。结论GL15胶质母细胞瘤细胞系的生物学活性与EGFR所在的7号染色体过度扩增密切相关。EGF可双向调节GL15细胞系的生长,AG1478能不完全抑制EGFR的活性。EGFR是基因治疗胶质母细胞瘤的理想靶点。     

巨细胞性胶质母细胞瘤一例

目的探讨巨细胞胶质母细胞瘤(GCG)的临床病理特征、诊断及鉴别诊断。方法对1例巨细胞胶质母细胞瘤进行临床病理分析及免疫组化研究。结果巨细胞胶质母细胞瘤组织学特征为瘤细胞形态多样,以巨怪形多核巨细胞为主,核分裂像和坏死多见,网状纤维沿血管周围分布。瘤细胞弥漫表达Vim、S-100及GFAP灶性阳性,Ki-67约为20%。结论 GCG是一种罕见的具有特殊临床病理特征的及预后差的中枢神经系统肿瘤。病理组织学上需与多形性黄色瘤型星形细胞瘤、胶质肉瘤等鉴别。     

颅内多发多形性胶质母细胞瘤3例报告

目的探讨颅内多发多形性胶质母细胞瘤的临床特点.方法对3例多发多形性胶质母细胞瘤病人行手术治疗,术后给予放疗等辅助治疗,结合文献分析其影像学特点,总结临床经验.结果多发多形性胶质母细胞瘤临床特点为:病程短,病情进展迅速,容易误诊.CT上常表现为脑实质内多发病灶,形态不规则,边界不清,伴有程度不一的瘤周水肿和占位效应.MRI检查示病灶T1W像上呈低信号,T2W为高信号,边界不清,但在肿瘤增殖旺盛处,T1W为高信号,T2W为低信号.结论术前对该病作出正确诊断,有助予治疗方案的设计及治疗效果的评估.     

p14ARF基因改变及其蛋白表达与脑胶质瘤发生发展的相关性研究

一、材料与方法 　　脑胶质瘤石蜡包埋标本31例,包括Ⅰ、Ⅱ级星形细胞瘤8例,Ⅲ级间变性星形细胞瘤10例,Ⅳ级胶质母细胞瘤13例.另取5例脑挫裂伤组织作为正常对照.应用一种新型直接原位PCR方法检测p14^ARF基因外显子1β[引物（S）5＇-TCCCAGTCTGCAGTTAAGGG-3＇,（AS）5＇-ACCACGAAAACCCTCACTCC-3＇（扩增产物174bp）],并对该方法进行优化.采用SP免疫组化法检测p14^ARF蛋白.     

不同放射敏感性胶质瘤中ATM蛋白、NF-κB表达及相关性研究

目的探讨ATM蛋白、NF-κB在不同放射敏感性胶质瘤中的表达及相互关系。方法应用免疫组织化学SABC法检测ATM蛋白、NF-κB在儿例髓母细胞瘤,12例室管膜瘤,17例少枝胶质细胞瘤,低级别(Ⅰ～Ⅱ级)及高级别星形细胞瘤(Ⅲ～Ⅳ级)各21例和5例正常脑组织中的表达。结果正常脑组织中均未见阳性表达。ATM蛋白、NF-κB在82例不同组织类型胶质瘤中的阳性表达率分别为32.9%、48.8%,二者阳性和阴性同时表达者分别为25.6%、36.5%;ATM蛋白在多形性胶质母细胞瘤表达率最高,在髓母细胞瘤和低级别星形细胞瘤表达较低,髓母细胞瘤中平均光密度值与其他各组均有显著性差异(P<0.05)。NF-κB表达率在髓母细胞瘤、室管膜瘤、少枝胶质细胞瘤、低及高级别星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤中里依次上升趋势。结论ATM蛋白与NF-κB存在相关关系,它们的表达水平与胶质瘤的不同放射敏感性具有相关性。