山奈素对melan-a黑素细胞株黑素生成的影响

目的:观察山奈素对melan-a黑素细胞株黑素生成的影响。方法:山奈素干预melan-a后,观察对黑素细胞增殖率的影响并测定各组酪氨酸酶活性大小及黑素量。结果:山奈素表现出轻度的促melan-a增殖作用(P<0.01),当山奈素浓度在0.001mmol/L至0.1mmol/L之间时,细胞增殖率和浓度呈指数关系,而浓度高于0.1mmol/L后进入平台期。山奈素在1mmol/L浓度时,促黑素合成的作用与同浓度8-MOP类似(P>0.05)。Fontana-Masson染色后与空白对照比较,经山奈素干预的细胞内,黑素颗粒染成黑色,融合成片,明显多于空白对照。结论:山奈素能够激活melan-a黑素细胞酪氨酸酶的活性,并具有促进黑素细胞增殖、使黑素合成量增加的作用。     

芦荟素抑制人表皮黑素细胞酪氨酸酶的最佳浓度选择

目的:研究抑制人表皮黑素细胞酪氨酸酶的芦荟素最佳浓度。方法:选择不同浓度的中药单体芦荟素(分别为0.010、0.001、0.100、1.000和10.000mmol/L),作用于体外培养的人表皮黑素细胞,测定黑素细胞增殖率、酪氨酸酶活性和黑素含量。结果:10.000mmol/L芦荟素组导致黑素细胞死亡;与正常对照组相比,芦荟素浓度大于0.100mmol/L的黑素细胞增殖率明显下降(P<0.05);所有实验组黑素细胞的酪氨酸酶活性和黑素含量都显著降低(P<0.001)。结论:低浓度的芦荟素(0.001～0.010mmol/L)在不影响黑素细胞增殖的情况下可以显著抑制酪氨酸酶活性和黑素的合成。     

芦荟素对Melan-a鼠黑素细胞株黑素生成及其相关基因表达的影响

目的:研究芦荟素对Melan-a鼠黑素细胞株的黑素生成及其相关基因表达的影响。方法:分别测定不同浓度芦荟素作用后的Melan-a鼠黑素细胞株的细胞增殖率、酪氨酸酶(TRY)含量及黑素量变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定酪氨酸酶相关蛋白(TRP)-1和TRP-2的表达,并与相应浓度的氢醌进行比较。结果:0.01～10.00mmol/L的芦荟素对黑素细胞的增殖率无影响,芦荟素可显著抑制Melan-a鼠黑素细胞株的TRY活性和黑素量生成,抑制作用随芦荟素的浓度升高而增加,0.10mmol/L芦荟素处理的Melan-a鼠黑素细胞株的TRY抑制率及黑素量与0.10μmol/L的氢醌相当(P>0.05);芦荟素还能显著下调TRP-1和TRP-2 mRNA的表达水平(P<0.01),但是TRP-1和TRP-2的变化与TRY及黑素量的变化不平行。结论:芦荟素显著抑制Melan-a鼠黑素细胞株的TRY活性、黑素量和TRP-1/TRP-2 mRNA的表达水平,直接测定黑素细胞TRY浓度和黑素量比检测TRP-1/TRP-2mRNA更能确切地反映芦荟素对黑素细胞的影响。     

色素调节剂对体外培养的人表皮黑素细胞的影响

目的 观察几种色素调节剂对体外培养的人表皮黑素细胞形态及功能的影响.方法 体外培养正常表皮黑素细胞,分别加入合适浓度的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、氢醌(HQ)、烟酰胺(NAA)、α-黑素细胞刺激素(α-MSH)和维生素C磷酸酯镁(AP-Mg)干预细胞72h,测定酪氨酸酶活性和黑素生成量.用黑素体相关蛋白单克隆抗体(NKI-beteb)染色鉴定黑素细胞,观察并摄片.结果 3mmol/L EGCG,0.5mmol/L HQ,6mmol/L AP-Mg与黑素细胞共同孵育72h后,其细胞酪氨酸酶活性及黑素生成受到抑制,但只有EGCG组细胞形态发生变化;50nmol/L α-MSH干预后,细胞酪氨酸酶活性及黑素生成显著增加,形态改变较显著.1mg/mL NAA组细胞酪氨酸酶活性无改变,而黑素生成减少,细胞异形化.结论 EGCG,HQ,NAA,AP-Mg和α-MSH对黑素细胞都有显著的影响,虽然作用于黑素细胞的机制有所不同,但也有一些相似的地方,其具体机理有待于进一步研究.     

淫羊藿苷抑制正常黑素细胞黑素合成的研究

目的:观察中药单体淫羊藿苷对体外培养的正常黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响。方法:选择高、中、低3个浓度的中药单体作用于体外培养的黑素细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率。采用间接免疫荧光染色法对药物作用的黑素细胞和对照的酪氨酸酶(tyrosinase熏TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinaserelatedprotein-1熏TRP-1)、TRP-2进行标记,然后采用激光共聚焦显微镜半定量分析淫羊藿苷作用后细胞内3种成分表达量的变化。结果:淫羊藿苷明显抑制酪氨酸酶活性和黑素的生成(P<0.01),且呈浓度依赖性,但淫羊藿苷抑制黑素生成的作用较氢醌弱(P<0.01);淫羊藿苷以浓度依赖的方式促进细胞的增殖,氢醌则抑制了细胞的增殖;淫羊藿苷对黑素细胞内TYR和TRP-2的表达没有明显影响,但是对TRP-1的表达却明显增加了。结论:淫羊藿苷能够抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,这种抑制可能主要通过抑制酪氨酸酶活性起作用。     

姜黄素对正常人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的研究姜黄素对体外培养的正常人表皮黑素细胞黑素生成及酪氨酸酶活性的影响。方法采用MTT法测定姜黄素对人表皮黑素细胞的活力的影响,体外氧化DOPA反应方法测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素生成量。结果姜黄素在浓度小于或等于10μmol/L时无明显细胞毒性。姜黄素在浓度大于或等于2.5μmol/L时呈剂量依赖性抑制酪氨酸酶活性,减少黑素生成,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论姜黄素抑制培养的人表皮黑素细胞的黑素生成,可能具有开发成为美白产品的前景。     

芦荟素、肉桂酸、苦参碱对酪氨酸酶的抑制作用

目的 研究芦荟素、肉桂酸、苦参碱等15种单体化学物对酪氨酸酶活性的影响,判定其抑制类型,从而为色素增加性皮肤病和外用皮肤脱色剂提供药物。方法 酪氨酸酶多巴速率氧化法体外测定药物干预前后酪氨酸酶活性,求出酪氨酸酶抑制率,并分别作出相应Lineweaver-Burk曲线,推断其抑制类型。结果 15种中药单体化学物中,芦荟素、肉桂酸和苦参碱能显着抑制酪氨酸酶活性,其中芦荟素(2mmol/L)、苦参碱(2mmol/L、0.5mmol/L)酪氨酸酶抑制率高于氢醌(0.5mmol/L)(P<0.05)。结论 芦荟素、肉桂酸、苦参碱等均可下调酪氨酸酶活性。苦参碱属于酪氨酸酶非竞争性抑制剂,芦荟素、肉桂酸属混合型抑制剂。     

吡美莫司对人黑素细胞黑素合成的影响

目的:评价吡美莫司在体外对人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素生成的影响.方法:培养人原代表皮黑素细胞,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠法测定黑素含量.结果:随着剂量的增高,1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L及1μmol/L吡美莫司对黑素细胞的酪氨酸酶活性(分别为112.87%,117.29%,120.49%和123.97%)和黑素生成(分别为118.92%,122.55%,128.25%和134.48%)的促进作用逐渐增强,10 nmol/L、100 nmol/L及1μmol/L吡美莫司与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论:吡美莫司对人表皮黑素细胞的酪氨酸酶活性和黑素生成有较强的促进作用.     

橙皮苷对人黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响

目的:观察橙皮苷对人原代黑素细胞酪氨酸酶及黑素合成的影响,探讨其作用机制.方法:选择50、100、200、300、400、500 和600 mg/L 7 个浓度的橙皮苷作用于体外培养的人表皮黑素细胞72 h,分别测定细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素含量.结果:橙皮苷显著抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,且呈浓度依赖性.结论:橙皮苷可抑制黑素合成和酪氨酸酶活性.     

皮肤科学基础

20070567 构建及鉴定携带角聋白启动子和人乳头瘤病毒16E6／E7基因的重组腺病毒;20070568 氧化苦参碱对RBL-2H3肥大细胞活化脱颗粒的影响;20070569 苦参碱及肉桂酸对体外培养小鼠黑素细胞黑素生成的影响;20070570芦荟素抑制人表皮黑素细胞酪氨酸酶的最佳浓度选择;20070571威灵仙等4种中药抑制黑素生成作用的机制研究;[编按]     

全反式维甲酸和阿达帕林对中波紫外线诱导的melan-a黑素细胞黑素合成的影响

目的 探讨外用维甲酸脱色素作用的机制.方法 利用体外培养的melan-a黑素细胞,观察全反式维甲酸和阿达帕林对中波紫外线(UVB)诱导的melan-a黑素细胞黑素合成的影响.结果 二者可剂量依赖性抑制UVB诱导的细胞酪氨酸酶活性和黑素合成,使其回复到基础水平,但对基础黑素合成无明显影响,10-5M的全反式维甲酸可抑制黑素细胞增殖,阿达帕林对细胞增殖无明显影响.全反式维甲酸和阿达帕林对细胞黑素合成的影响无明显差异.结论提示维甲酸可直接作用于黑素细胞抑制其黑素合成,这可能是维甲酸脱色素作用的机制之一.     

Inhibitory effect of <Emphasis Type="Italic">N</Emphasis>-adamantyl-3,4-dihydroxybenzamide on melanogenesis in melan-a cells and brown guinea pigs

To find novel depigmenting agents, a new synthetic compound, N-adamantyl-3,4-dihydroxybenzamide (NADB) was produced and the effects on melanogenesis were investigated. Our results showed that NADB reduced melanin synthesis in a dose-dependent manner in melan-a cells. Tyrosinase activity was also reduced by NADB treatment in melan-a cells. However, NADB did not inhibit tyrosinase activity directly in a cell-free system. Treatment of melan-a cells with NADB caused a marked decrease in protein and mRNA levels of tyrosinase along with tyrosinase-related protein 1 and dopachrome tautomerase. To determine whether NADB reduces skin pigmentation, the dorsal skin of brown guinea pigs was shaved and irradiated with UV for 3 weeks using a solar simulator. Then NADB (2 or 1% in propylene glycol:ethanol:water = 5:3:2) was applied topically twice daily for 4 weeks. Visual inspection and Fontana-Masson staining both demonstrated that NADB resulted in lower skin pigmentation and total epidermal melanin in comparison to vehicle-treated areas. These findings suggest that NADB is useful in the treatment of hyperpigmentation.     

威灵仙等4种中药抑制黑素生成作用的机制研究

目的：研究威灵仙等4种中药对melan-a小鼠黑素细胞酪氨酸酶（Tyr）活性、Tyr及酪氨酸酶相关蛋白（TRP）基因转录与蛋白表达的影响,对4种中药抑制黑素生成的作用机制进行初步探讨.方法：用中药提取物处理melan-a小鼠黑素细胞后进行黑素含量测定,左旋多巴染色、实时荧光定量反转录（RT）-PCR和Western blot分别测Tyr及TRP-1、TRP-2的mRNA和蛋白表达水平.以熊果苷作为阳性对照.结果：4种中药在20 μg/mL浓度时具有明确的抑制黑素生成的作用,并且都不同程度地抑制Tyr的氧化活性.威灵仙、五倍子可以同时降低Tyr及TRP-1、TRP-2的基因转录和蛋白表达量.而麦冬、白苏叶可以降低Tyr及TRP-1、TRP-2的合成,但是对基因表达无影响.结论：威灵仙及五倍子提取物可以通过抑制Tyr、TRP-1、TRP-2的基因表达及蛋白合成和Tyr的多巴氧化活性这三方面实现其抑制黑素产生的作用;麦冬、白苏叶在基因转录后的酶蛋白水平发挥抑制黑素生成的作用.     

甲氧沙林对人毛囊黑素细胞增殖、活化和黑素合成作用的研究

目的 研究甲氧沙林对人毛囊黑素细胞活化、增殖和黑素合成的影响.方法 体外培养正常人毛囊黑素细胞,观察不同浓度甲氧沙林(10～500μmol/L)对毛囊黑素细胞形态、增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响.结果 50μmol/L甲氧沙林处理细胞7d后,毛囊黑素细胞树突明显增多延长,胞浆内出现较多棕褐色颗粒,酪氨酸酶活性和黑素含量增加显着高于对照组(P<0.01).结论 甲氧沙林能诱导毛囊黑素细胞树突增多延长,酪氨酸酶活性和黑素含量增加.     

α-硫辛酸对体外培养的黑素细胞影响的实验研究

目的　建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系 ,研究α 硫辛酸对体外培养的黑素细胞的影响。方法　采用MTT法测定α 硫辛酸对黑素细胞活力的影响 ,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性 ,NaOH裂解法测定黑素合成 ,并与茶多酚的结果进行比较。结果　α 硫辛酸对黑素细胞活力有抑制作用 ,能使细胞增殖力降低 ,酪氨酸酶活性减弱 ,黑素合成减少。结论　α 硫辛酸对体外培养的黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素生成都有抑制作用 ,这为临床应用α 硫辛酸治疗色素性疾病提供了实验依据。     

丹皮酚在体外对人黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素生成的影响

目的探讨丹皮酚对人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法培养人表皮黑素细胞及人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,475nm比色法测定黑素含量。结果50,100和200μmol/L丹皮酚对于黑素细胞及共培养细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性抑制作用,100及200μmol/L丹皮酚与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论丹皮酚对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性抑制作用。     

热处理对体外培养正常人黑素细胞活性的影响

目的 探讨热处理对体外培养的正常人黑素细胞的增殖活性、黑素合成及其酪氨酸酶活性的影响。方法 无菌操作获取正常人包皮环切术后的包皮,按照皮肤表皮细胞培养法获取黑素细胞,利用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）为主要有丝分裂原建立正常人表皮黑素细胞培养系,采用Masson-Fontana染色法对培养细胞进行鉴定,确定细胞种系,噻唑蓝（MTT）比色法测定不同温度条件（39、41、42、43、45 ℃）处理对黑素细胞活力的影响并选择最佳的温度条件,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,比色法测定黑素含量,并将实验组与对照组结果进行比较。结果 体外培养的正常人黑素细胞在5个不同的温度条件作用后,以42 ℃作用后的细胞增殖活性最佳。酪氨酸酶活性和黑素含量测定结果显示,42 ℃每天1 h连续干预3 d后,体外培养的正常人黑素细胞的酪氨酸酶活性增长率为36.4%,黑素合成增长率为78%,均明显高于对照组（P值均 < 0.01）。结论 热处理可以增强体外培养的人黑素细胞的增殖活性,促进其黑素合成,并且可提高其酪氨酸酶的活性。     

卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响

目的 探讨卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响及其作用的可能机制.方法 用噻唑蓝比色法(MTT法)、酶学方法及NaOH法,观察卡泊三醇对黑素细胞增殖及色素合成的作用;RT-PCR和蛋白印迹分别检测卡泊三醇对黑素细胞酪氨酸酶基因转录和蛋白表达水平的影响.结果 10~(-9)～10~(-5) mol/L浓度范围的卡泊三醇对体外培养的黑素细胞增殖的影响与空白对照组比较差异无统计意义(P＞0.05).同样浓度范围下,10~(-9)、10~(-8)mol/L浓度的卡泊三醇能明显增强黑素细胞的酪氨酸酶活性和促进黑素细胞的黑素含量,与空白对照组比较,酪氨酸酶活性可分别升高137%、123%(P＜0.05),黑素含量分别增加40.63%、18.75%(P＜0.05).其中10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇增强黑素细胞的酪氨酸酶活性及促进黑素细胞的黑素含量最明显.与高浓度组、空白对照组比较,10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇使酪氨酸酶蛋白表达增高也最明显.较空白对照组增高270.4%(P＜0.05).结论 卡泊三醇对黑素细胞增殖无影响,可增加黑素细胞酪氨酸酶蛋白表达水平,提高酪氨酸酶活性,从而促进黑素细胞的黑素合成.