雌激素对绝经后雌性大鼠缺血性脑损伤的保护作用及机制

目的观察雌激素对绝经后雌性大鼠缺血性脑损伤的保护作用及机制。方法随机将12月龄雌性大鼠分为假手术组（A组）、对照组（B组）、雌激素处理组（C组）、雌激素＋他莫西芬处理组（D组），采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，观察缺血后24h脑梗死体积、神经功能缺损程度、血清NO及NOS浓度。结果雌激素处理组及雌激素＋他莫西芬处理组均较对照组脑梗死体积小、神经功能缺损轻、血清N0及NOS浓度高；雌激素处理组较雌激素＋他莫西芬处理组脑梗死体积小、神经功能缺损轻、血清NO及NOS浓度高。结论雌激素对绝经后雌性大鼠缺血性脑损伤具有明显的保护作用，时间窗为6h；雌激素提高血清NO及NOS浓度是神经保护作用的可能机制；雌激素受体拮抗剂他莫西芬可部分阻断雌激素的神经保护作用。     

雌激素对雄性大鼠缺血性脑损伤的神经保护作用及其可能机制

目的 探讨雌激素对雄性大鼠局灶性脑缺血的神经保护作用及其可能机制。方法 随机将大鼠分为雌激素预处理组、雌激素＋他莫昔芬预处理组和对照组，采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，观察缺血后2h和24h脑梗死体积、大鼠死亡率、神经功能缺损程度、神经元凋亡以及Bcl-2、Bax、p53蛋白的表达。结果 缺血后2h和24h，雌激素预处理组较对照组脑梗死体积小、死亡率低、神经功能缺损程度轻、神经元凋亡少，并抑制Bax、p53表达，促进Bcl-2蛋白表达。雌激素受体拮抗剂他莫昔芬可抑制这一作用。结论 雌激素对雄性大鼠缺血性脑损伤具有明显的神经保护作用。对基因和非基因因素的影响是神经保护作用的可能机制。     

葛根素对脑缺血再灌注大鼠脑组织eNOS蛋白表达的影响

目的观察葛根素对脑缺血再灌注大鼠的脑保护作用及脑组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达的影响。方法采用神经功能缺损评分评价脑缺血再灌注模型大鼠神经功能变化,取脑测定脑含水量、脑梗死面积和脑组织eNOS蛋白的表达。结果治疗组神经功能缺损较对照组明显减轻,其脑含水量和脑梗死面积减少,脑组织eNOS蛋白表达也减少,但较假手术组高。结论葛根素可通过减少脑缺血再灌注亚急性期脑组织eNOS蛋白的表达而发挥脑保护作用。     

脑缺血再灌注损伤后一氧化氮合酶表达变化及知母总皂苷对其影响

目的观察脑缺血再灌注损伤后3型—氧化氮合酶(NOS)在脑内表达的变化,了解知母总皂苷(SAaB)对它们表达的影响。方法大鼠灌胃给药7d,采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察大鼠神经功能损害,利用免疫组织化学法观察脑组织中3型NOS表达。结果缺血再灌注组大鼠表现出明显神经功能障碍,神经元型NOS(nNOS)含量明显升高,内皮型NOS (eNOS)仅轻度升高。SAaB低、高剂量治疗组大鼠神经功能障碍较轻,同时脑组织中nNOS表达明显降低,而eNOS的表达增强,经图像分析比较后显示各组表达强度差异具有统计学意义(P＜0．05)。结论各型NOS的表达变化在脑缺血再灌注损伤的机制中起着重要作用,推测SAaB因其减低nNOS表达同时增加eNOS表达的作用,而表现出一定的神经保护作用。     

一氧化氮合酶及其抑制剂与脑缺血

一氧化氮合酶(NOS)在脑缺血中具有双重作用,nNOS介导缺血早期神经元损伤,iNOS介导缺血晚期神经元损伤,eNOS则介导神经保护作用。对NOS抑制剂,尤其是选择性nNOS和iNOS抑制剂的研究,无疑将为缺血性脑损伤的治疗提供新途径。     

依达拉奉预处理对小鼠脑缺血再灌注损伤后皮质一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨依达拉奉预处理对小鼠脑缺血再灌注(IR)损伤后皮质一氧化氮合酶(NOS)表达的影响。方法 48只健康ICR小鼠被分为假手术组、对照组和依达拉奉组。依达拉奉组和对照组分别给予依达拉奉3 mg/(kg.d)和同等体积的生理盐水腹腔注射共7 d,然后建立小鼠IR模型;缺血1 h、再灌注24 h时应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测量各组脑梗死体积,应用免疫组化法检测各组小鼠皮质神经元型、、诱导型和内皮型NOS(nNOS、iNOS、eNOS)阳性细胞数。结果与假手术组比较,对照组小鼠皮质nNOS、iNOS和eNOS阳性细胞数明显增多(均P<0.05);与对照组比较,依达拉奉组脑梗死体积明显缩小,皮质nNOS和iNOS阳性细胞数明显减少,eNOS阳性细胞数明显增多(均P<0.05)。结论依达拉奉预处理可以影响IR小鼠皮质nNOS、iNOS和eNOS的表达,发挥神经保护作用。     

一氧化氮和一氧化氮合酶在大鼠局灶性脑缺血中的表达特点

目的建立脑缺血SD大鼠模型,探讨一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)在脑缺血模型中的表达特点。方法应用线栓法制作大脑中动脉阻塞(MCAO)局灶性脑缺血模型,根据缺血不同时间分为8组,设立假手术组和正常对照组,每组各有6只大鼠。应用硝酸还原酶法测定脑组织NO的含量,流式细胞术(FCM)定量检测硝基酪氨酸(NT)表达,化学比色法测定脑组织NOS的活性,免疫组织化学方法定位检测eNOS、nNOS和iNOS表达位置,逆转录反应系统(RT-PCR)半定量分析eNOS、nNOS和iNOS的 mRNA在脑缺血区域的表达。结果神经功能缺失评分发现缺血时间越长,神经功能缺失越明显;脑组织中NO含量与缺血时间正相关;缺血1h后NT阳性细胞百分比开始明显升高(9.50%);缺血0.5h时NOS的活性开始升高,缺血3d达到高峰[0.94nmol/(g.min)];免疫组织化学提示eNOS在神经细胞和血管内皮细胞胞浆均有表达,nNOS和iNOS抗体主要在神经细胞胞浆中表达;RT-PCR半定量分析在缺血早期(0.5h~6h),随着缺血时间延长,eNOS和nNOS表达增加,iNOS未见表达或低表达;缺血中晚期(6h~5d),iNOS高表达,并与缺血时间呈正相关,eNOS和nNOS表达明显减少。结论脑缺血时间延长,NOS的活性升高,NO在体内特异性代谢产物NT量增加,神经功能缺失越明显;NOS在缺血早期以eNOS和nNOS为主,在缺血晚期以iNOS为主。     

一氧化氮合酶与脑缺血早期神经损伤关系研究

目的:探讨大鼠脑缺血早期脑内3种亚型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的表达及作用。方法:采用免疫组织化学方法,用三型NOS的多克隆抗体检测大鼠局灶性脑缺血15、30min及1、2、3、6 h NOS在脑内的表达情况。结果:局灶性脑缺血1 h内缺血侧基底节区内神经元型NOS(nNOS)表达上调;脑缺血1 h内在缺血区小血管壁及3 h时在缺血边缘区小血管壁出现内皮型NOS(eNOS)两次上调。局灶性脑缺血6 h内神经组织中未见诱生型NOS(iNOS)表达。结论:在脑缺血的超早期出现结构型NOS(nNOS及eNOS)的上调表达,此时可能同时存在nNOS的神经损伤作用及eNOS的神经保护作用。     

大鼠脑出血早期脑组织神经元型一氧化氮合酶mRNA表达及中药抵当汤干预对其的影响

目的 探讨大鼠脑出血（ICH）早期脑组织神经元型一氧化氮合酶（nNOS）mRNA表达,以及中药抵当汤干预对其的影响。方法 将72只大鼠随机分为ICH组、抵当汤组、NOS抑制剂组和对照组,采用立体定向技术注入自体不凝血建立实验性ICH模型,对照组注入等量的生理盐水;术后6h、24h及72h用Bederson3级标准法对大鼠进行神经功能障碍评定;然后断头取脑,以原位杂交方法检测脑组织中nNOS mRNA阳性细胞的表达。结果 神经功能缺损程度评分术后72h时ICH组与抵当汤组均见明显改善（均P〈0.05）,但抵当汤组的改善明显优于ICH组（P〈0．05）;ICH后6h血肿侧大脑皮质nNOS mRNA阳性细胞的表达较对照组已有明显增高,24h达高峰,72h时下降,但仍明显高于对照组（均P〈0．05）;抵当汤组血肿侧大脑皮质nNOS mRNA阳性细胞表达在各时间点较ICH组明显减少（均P〈0．05）,且与NOS抑制剂组变化规律一致。结论 抵当汤具有与NOS抑制剂相似的作用,通过抑制ICH后脑组织中nNOS mRNA的表达而产生脑保护作用。     

尤瑞克林对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎性反应的影响

目的研究尤瑞克林对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎性反应的影响。方法将90只SD大鼠随机分为3组:假手术组,对照组,治疗组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,缺血2 h后,拔出线栓,恢复灌注24 h,观察大鼠神经功能缺损症状、脑梗死体积、脑组织中白细胞浸润、MPO活性、IL-1和ICAM-1的表达。结果 (1)假手术组大鼠在神经功能缺损评分、脑梗死体积均低于对照组,有显著的统计学差异(P<0.01);脑组织中白细胞浸润程度、髓过氧化物酶(MPO)活性、ICAM-1和IL-1的表达均较对照组低,统计学差异明显(P<0.01);(2)治疗组与对照组相比,大鼠的神经功能缺损评分低、脑梗死体积小,有显著统计学差异(P<0.01);白细胞浸润程度、MPO活性、ICAM-1和IL-1的表达均较对照组减少(P<0.01)。结论尤瑞克林可通过抑制大鼠脑缺血再灌注损伤后的炎性反应来实现其神经保护作用。     

脑血疏口服液对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响

目的 探讨脑血疏口服液对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响。方法 将120只SD大鼠随机分为3组:假手术组、对照组,脑血疏组; 采用线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞再灌注模型,缺血2 h后拔出线栓,恢复灌注24 h; 采用Longa FZ 5级评分法进行大鼠神经功能缺损评分; TTC染色计算脑梗死体积百分比; 运用干-湿重法测脑含水率; 通过伊文思蓝( EB)含量反映血脑屏障的损伤程度; 免疫组化检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。结果(1)假手术组大鼠在神经功能缺损评分、脑梗死体积、脑含水率均低于对照组(P<0.01); 脑组织中EB含量和MMP-9表达水平较对照组低(P<0.01);(2)脑血疏组大鼠的神经功能缺损评分较低、脑梗死体积较小,脑水肿程度较轻; EB含量和MMP-9表达水平均较对照组明显减少(P<0.01)。结论 脑血疏口服液对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障具有保护作用,其机制可能是通过抑制MMP-9的表达。     

阿司匹林促进大鼠缺血脑组织脑源性神经营养因子的表达

目的:探讨不同剂量阿司匹林(Asp)对脑缺血/再灌注(CI/RP)损伤大鼠的神经保护作用及其对脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法:采用线栓法建立大鼠大脑中动脉CI/RP模型,对CI/RP后大鼠进行肢体神经功能缺损评分:1~3分的48只大鼠入选。入选大鼠分为对照组、Asp小剂量组(20 mg.kg-1)、Asp中剂量组(80 mg.kg-1)和Asp大剂量组(320 mg.kg-1),于CI/RP术后每日腹腔注射Asp或溶媒,并进行神经功能缺损评分,72 h后处死,测定脑梗死体积和BDNF免疫组化检测。结果:CI/RP后24、48和72 h各Asp组大鼠与对照组相比,神经缺损评分明显降低(P<0.05或P<0.01),梗死灶体积显著减小(P<0.01),缺血区域BDNF表达显著增加(P<0.05或P<0.01)。对BDNF表达的作用Asp大剂量组的作用并不优于Asp小剂量组和中剂量组。结论:Asp可以减少CI/RP大鼠的脑梗死体积;促进内源性BDNF的表达可能是其神经保护的机制之一,Asp对BDNF表达的作用并非随Asp剂量的加大而增强。     

颈交感神经干离断对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马iNOS表达的影响

目的采用颈交感干离断（TCST）模拟星状神经节阻滞，观察其对局灶性脑缺血再灌注损伤（CIRI）大鼠脑梗死容积及海马诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达等的影响，并探讨其脑保护作用的机制。方法将大鼠随机分成实验组（A组）、对照组（B组）和假手术组（C组）；采用线栓法行大脑中动脉栓塞（MCAO）制作大鼠局灶性CIRI模型，A组于TCST后即行MCAO，2h后再恢复灌注；B组为单纯CIRI组；C组仅完成与A组相似的手术步骤但不造成MCAO、不行TCST；再灌注24h后观察各组大鼠神经行为学评分、脑梗死容积及海马iNOs的表达变化。结果A组大鼠脑梗死容积和神经行为学评分均低于B组（P〈0．05）；与A组、C组相比，B组大鼠海马iNOS的表达增加（P〈0．05），而A组与C组间无显著差异（P〉0．05）。结论TCST可通过下调大鼠海马iNOS的表达而对局灶性CIRI发挥脑保护作用。     

Expression of endothelial nitric oxide synthase in the ischemic penumbra: relationship to expression of neuronal nitric oxide synthase and vascular endothelial growth factor

Expressional patterns of the endothelial and neuronal forms of nitric oxide synthase (NOS) in cerebral ischemia were studied utilizing a permanent middle cerebral artery occlusion (PMCAO) model. Motor performance and infarct volumes were determined in the rats. Immunohistochemical staining for eNOS, nNOS and neurofilament were performed at 1, 2, 3, 5, 7 and 14 days after PMCAO. Vascular endothelial growth factor (VEGF) expression was determined by in-situ hybridization. PMCAO caused a reproducible cortical infarct with motor deficits in the rats. Double immunohistochemical stainings indicated that eNOS and nNOS were induced in ischemic neurons. Most stained neurons were positive for both NOS forms but some reacted with only one NOS antibody. nNOS expression peaked at 24-48 h after PMCAO, stained mainly the cytoplasm of core neurons, and disappeared after the 3rd day. eNOS expression increased until the 7th day, stained mainly the cytoplasm and membrane of penumbral cells and disappeared by the 14th day after PMCAO. VEGF expression was significantly induced in the penumbral zone in a similar distribution to eNOS. The anatomical and temporal pattern of VEGF and eNOS induction in the brain after permanent ischemia suggest that these mediators may play a role in protecting penumbral tissue from additional ischemic damage.     

超负荷血糖对鼠局灶性脑缺血侧皮质内皮抑素表达的影响

目的观察超负荷血糖对鼠局灶性脑缺血侧皮质区内皮抑素(endostatin)表达的影响,进一步探讨超负荷血糖加重脑缺血损伤的分子机制。方法用SD大鼠腹腔内注射链脲佐菌素首先建立糖尿病高血糖大鼠模型,继而应用栓线法建立永久性局灶性脑缺血模型。随机分为3大组:假手术组、脑缺血组和糖尿病脑缺血组。于缺血24h时间点行神经功能评分、TTC染色测梗死面积、TUNEL法检测细胞凋亡数目、免疫组化及Western blot检测ES表达,并进行图像分析。结果糖尿病脑缺血组的神经功能评分为(4.73±0.35)、梗死面积为(50.12±3.54)、细胞凋亡数为(26.22±2.35)、免疫组化检测ES为(99.35±3.25)及Western blot检测ES为(1.193±0.045)。脑缺血组的神经功能评分为(3.18±0.65)、梗死面积为(39.98±2.02)、细胞凋亡数为(17.28±1.01)、免疫组化检测ES为(113.17±1.35)及Western blot检测ES为(1.033±0.032)。与脑缺血组相比,糖尿病脑缺血组的神经功能评分、梗死面积、细胞凋亡数、ES蛋白表达均明显增加(P<0.05)。结论血管再生可能参与了超负荷血糖加重脑缺血损伤的过程,上调ES表达可能是超负荷血糖加重脑缺血损伤的机制之一。     

肢体缺血预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响

目的探讨肢体缺血预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血预处理组(LIPC组)、3-甲基嘌呤组(3-MA组),每组15只。制作脑缺血再灌注、肢体缺血预处理及3-MA干预大鼠模型,在脑缺血2 h再灌注24 h后进行神经功能缺陷评分和脑梗死体积测定,HE染色观察细胞形态学改变,Western Bloting法检测自噬相关蛋白Beclin-1、Cathepsin B的表达。结果与I/R组比较,LIPC组神经功能缺陷评分降低(P<0.05),脑梗体积明显减小(P<0.05),细胞损伤、坏死减轻(P<0.05),Beclin-1、Cathepsin B的蛋白表达明显减弱(P<0.05)。结论 LIPC对缺血再灌注损伤大脑具有保护作用,其机制可能与减弱自噬水平有关。     

一种氯化铁诱导血栓生成的小鼠大脑中动脉远端缺血模型

目的 建立稳定的小鼠大脑中动脉远端氯化铁血栓模型,评价其造成的脑损伤及神经功能损伤程 度。 方法 C57BL6/J雄性小鼠随机分为脑缺血组和假手术组。脑缺血组用10%氯化铁（ferric chloride, FeCl3）溶液诱导右侧大脑中动脉远端形成血栓。在术前、术后10 mi n、术后1 d和7 d观测术侧脑血流 和手术动脉血流量的变化。术后1 d观察脑组织梗死率。术后1 d、3 d、5 d、7 d用3种神经学评分[改良 加西亚评分（modified Garcia score,mGS）、改良神经损伤严重程度评分（modified neurological severity scores,mNSS）和15分神经学评估表（15-point neurological evaluation scale,NES）]和胶黏纸测试评价小 鼠神经功能。术后7 d免疫荧光染色标记神经细胞核观察脑组织损伤,标记CD16/32、CD206和Iba1观 察胶质细胞表达。 结果 与假手术组相比,脑缺血组术后10 mi n、1 d、7 d脑表面血流和手术动脉血流下降,术后1 d脑 皮层梗死明显,术后7 d仍有明显脑组织损伤;脑缺血组术后1 d、3 d、5 d和7 d时3种神经学评分及胶 黏纸测试均提示小鼠神经功能不同程度损伤。术后7 d脑缺血组梗死周围皮层M1和M2型胶质细胞表 达增加。 结论 FeCl3溶液可诱导形成稳定的小鼠脑缺血模型,该模型可造成手术侧大脑中动脉远端及脑表 面血流量降低,皮层脑梗死,小鼠神经功能受损,梗死周围胶质细胞表达上调。本研究建立了稳定 氯化铁诱导血栓形成的小鼠脑缺血模型,为脑血栓形成和抗栓药物治疗提供了一种可靠的研究工 具。