家蝇幼虫抗菌肽对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响?

为了更全面的探究家蝇抗菌肽的抗肿瘤作用,本文从肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移的角度研究家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞的抑制作用。通过针刺诱导家蝇三龄幼虫、低温离心、固相萃取后冻干获取抗菌肽粗提物,将所获抗菌肽调整至不同浓度进行CCK8细胞增殖实验。并通过细胞划痕实验和细胞侵袭实验判断家蝇抗菌肽对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响。实验结果显示家蝇抗菌肽能够明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖,且作用效果与浓度呈剂量依赖特点。低浓度的抗菌肽（60μg／mL）能有效抑制肝癌HepG2细胞迁移及侵袭。     

家蝇幼虫抗茵肽粗提物对人肝癌HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响

本文从肿瘤细胞凋亡及作用机制的角度出发初步探讨了家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞的影响.采用Hoechst 33258荧光染色法在荧光显微镜下观察家蝇抗菌肽对HepG2细胞形态学的影响.并通过流式细胞术分别观察家蝇抗菌肽粗提物对HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响.Hoechst 33258荧光染色法结果显示家蝇抗菌肽粗提物作用于HepG2细胞48h后能够引起细胞核发生核凝聚、染色质趋边化、核碎裂等凋亡形态学的改变;流式细胞仪检测结果显示家蝇抗菌肽粗提物能够诱导HepG2细胞发生凋亡、线粒体膜电位下降、细胞内钙离子浓度增加的现象.因此,我们推测家蝇抗菌肽可能通过增加HepG2细胞内钙离子,降低线粒体膜电位,进而诱导细胞凋亡的发生.     

Runx3对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨siRNA干扰Runx3对人肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法以人肝癌Hep G2细胞为研究对象,构建Runx3-siRNA,转染入细胞。将细胞分为对照组、脂质体组、NC-siRNA组和Runx3-siRNA组。用RT-PCR法检测Runx3 mRNA表达,用Western blot检测Runx3蛋白表达。用MTT法、流式细胞法和Transwell小室法观察Runx3对Hep G2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。结果 Runx3-siRNA可抑制Hep G2细胞的增殖(P0.05);Runx3-siRNA可促进Hep G2细胞凋亡(P0.05);Runx3-siRNA可抑制Hep G2细胞的侵袭(P0.05)。结论Runx3基因在肝癌的发生发展中发挥一定的促进作用,有可能成为肝癌治疗的新靶点。     

硫酸肝素对人肝癌HepG2细胞系增殖和凋亡的影响

目的:探讨硫酸肝素对人肝癌HepG2细胞系增殖和凋亡的影响。方法:体外观察硫酸肝素作用于人肝癌细胞系(HepG2)的细胞增殖、凋亡效应和细胞ras基因表达的变化关系。结果:硫酸肝素能下调细胞HepG2的增殖能力及其细胞ras基因蛋白的表达并上调其细胞的凋亡率。结论:硫酸肝素对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响与ras基因蛋白介导的信号转导有关。     

PARP-1抑制剂对人肝癌细胞HepG2增殖和迁移的抑制作用

目的 研究证实聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(poly ADP ribose polymerase,PARP-1)抑制剂对肿瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭有影响,但对肝癌细胞生物学特性的影响尚不清楚,此研究的目的是观察3种不同的PARP-1抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡及迁移的影响及可能机制.方法 MTT检测体外不同浓度的PARP-1抑制剂AG014699,BSI-201,AZD-2281处理后HepG2细胞的增殖;随后选择抑制效果明显的抑制剂AG014699和BSI-201处理HepG2;Western印迹法检测HepG2细胞Casepase3、Casepase8、Bax、Bcl-2、PTEN、Timp3、MMP3蛋白的表达水平.Transwell实验检测AG014699和BSI-201对HepG2细胞迁移的影响.结果 AG014699,BSI-201,AZD-2281均具有抑制HepG2细胞增殖的作用,具有时间和浓度依赖性,作用HepG2细胞48 h后的Caspase3、Caspase8、Bax、PTEN、Timp3蛋白的表达水平随药物浓度的增加而增高,而Bcl-2和MMP3蛋白水平随药物浓度的增加而降低且与对照组相比有显著性差异(P<0.01).结论 在体外PARP-1抑制剂AG014699、BSI-201、AZD-2281明显抑制HepG2细胞的增殖,但AG014699和BSI-201展示较好的敏感性,同时二者诱导肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞的迁移,这其中的机制可能与影响凋亡信号的通路以及迁移相关蛋白的表达有关.     

柴胡皂苷D对人肝癌HepG2细胞系增殖和裸鼠肝癌形成的抑制作用

目的：探索柴胡皂苷D(Saikosaponin-d,SSd)对人肝癌HepG2细胞系增殖和裸鼠肝癌形成的影响。方法：CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡;蛋白印记检测细胞Ki67和cleaved caspase-3表达;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色分析肿瘤组织细胞凋亡;免疫组化检测肿瘤组织Ki67和cleaved caspase-3表达。结果：柴胡皂苷D组HepG2细胞增殖能力明显低于对照组,细胞凋亡明显高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,柴胡皂苷D组HepG2细胞Ki67表达明显减弱,cleaved caspase-3的表达明显增强(P<0.05)。而且,柴胡皂苷D组裸鼠肿瘤体积明显小于对照组(P<0.05)。柴胡皂苷D处理可提高小鼠存活率。另外,柴胡皂苷D组裸鼠肿瘤组织细胞凋亡远远高于对照组(P<0.001)。与对照组相比,柴胡皂苷D组裸鼠肿瘤组织Ki67表达显著降低,cleaved caspase-3表达显著增强(P<0.01)。结论：柴胡皂苷D可抑制人肝癌HepG2细胞系增殖及裸鼠肝癌形成。     

银杏叶总黄酮对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨银杏叶总黄酮体外对人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响。方法将银杏叶总黄酮作用于体外培养的人肝癌细胞HepG2,MTT法检测药物对HepG2细胞增殖的影响,缺口末端核苷标记(TUNEL)法检测药物对HepG2细胞凋亡的影响。结果银杏叶总黄酮对体外培养的人肝癌细胞HepG2的增殖效率下降,使凋亡细胞数增加(P0.01),呈剂量依赖效应。结论银杏叶总黄酮对体外培养的人HepG2细胞增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡。     

家蝇幼虫、蛹、成虫抗菌肽的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

目的分析家蝇幼虫、蛹、成虫的抗菌肽成分。方法通过针刺感染大肠杆菌诱导家蝇各虫态产生抗菌肽，再经研磨、离心等步骤提取这些抗菌肽，用改进的聚丙烯酰胺凝胶电泳使其分离。结果家蝇幼虫有7条带，成虫有5条，蛹只有4条。结论家蝇幼虫和成虫的抗菌肽种类较蛹的多，且有一些小分子肽段，可能与其较强的抗菌效果有关；家蝇蛹处于相对静止期，其电泳图中抗菌肽条带较少，无较小的条带，抗菌效果可能较幼虫和成虫的差。     

光敏化姜黄素对人肝癌细胞HepG2的增殖影响

目的：研究姜黄素的光敏化效应并探讨光敏化姜黄素对人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖和凋亡的影响。方法：采用人肝癌细胞株HepG2进行研究。细胞用不同浓度的姜黄素（2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L,80μmol/L,160μmol/L）孵育2 h后,用0.4 J/cm2剂量的紫光照射,光照的功率为10 mW。利用MTT法测定不同浓度的姜黄素对HepG2细胞的抑制作用,观察其紫光光敏化效应。在选择的姜黄素剂量下,分别用不同剂量的紫光照射,检测能量密度改变后光敏化姜黄素对细胞的杀伤作用。最终选定在20μmol/L浓度下,姜黄素用0.2 J/cm2紫光照射其对细胞的杀伤作用。利用Hoechst33342染色从形态学上在观察光敏化姜黄素对HepG2细胞的促凋亡效应,采用流式细胞仪定量检测光敏化姜黄素的凋亡率。结果 ：姜黄素在紫光下具有光敏化效应,IC50从单独作用的92.49μmol/L降到27.06μmol/L,且这种效应在低浓度姜黄素低剂量的能量密度下更加明显。形态学和流式细胞仪检测到光敏化姜黄素的促凋亡效应,且凋亡率是同剂量姜黄素作用的3倍。结论：紫光照射可明显增强低剂量姜黄素对HepG2的细胞毒性,并可显著诱导细胞凋亡。     

家蝇幼虫抗菌肽粗提物与8种纯化物对SUP－B15细胞增殖抑制和诱导的凋亡作用

将家蝇三龄幼虫抗菌肽粗提物利用反相高效液相色谱仪（ RP－HPLC）进行分离纯化,得到8种与对照组有差异的蛋白分别命名为I1、 I2、 I3、 I4、 G1、 G2、 G3、 G4组。通过CCK－8试剂盒检测发现,其中有4种蛋白及粗提物（ E0组）对sup－b15细胞有增殖抑制作用,生存率均值分别为I1：0．714、 I2：0．785、I4：0．641、 G2：0．686、E0：0．561。采用流式细胞仪检测其诱导凋亡的效果,其凋亡率均值分别为I1：16．73、 I2：9．79、 I4：18．60、 G2：11．85、E0：35．94。对比发现,粗提物（ E0）对sup－b15细胞的抑制率明显高于纯化物,证明粗提物较纯化物对肿瘤细胞抑杀作用更为明显,间接的说明各种纯化蛋白之间具有某些协同作用。     

家蝇源抗K562活性物质的分离与纯化

为从家蝇Ⅲ龄幼虫体内提取具有抗K562细胞活性的物质,并对其组分化学性质及对人正常细胞的作用进行分析。本文用大肠杆菌诱导家蝇Ⅲ龄幼虫大量表达活性物质,然后通过研磨、离心、固相萃取法（SPE）初步分离活性物质,通过反相高效液相色谱（RP—HPLC）进一步纯化提取活性组分,通过四甲基偶氮噻唑蓝（Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法和光镜观察法相结合,筛选出对K562有抑制作用的活性组分,并鉴定其对人正常细胞293T的作用。结果显示,从家蝇Ⅲ龄幼虫体内分离出4个具有抑制K562细胞活性的多肽组分（峰5～8）,具有分离度高、纯度高等特点。当质量浓度为100ug／mL和作用时间为24h时,4个多肽组分均具有抗K562细胞的活性,其中峰5多肽组分和峰8多肽组分活性较强,对K562细胞的相对抑制率分别为48．52％和65．80％。结果表明,家蝇Ⅲ龄幼虫体内存在一些具有抗K562细胞活性的多肽,而且对人正常细胞几乎无杀伤作用。但是,这些多肽是否属于抗肿瘤肽还有待被证实。     

川楝素对家蝇幼虫中肠细胞及淀粉酶活性的影响

本文通过透射电镜观察和生化分析研究了川楝素对家蝇 (Muscadomestia)幼虫中肠组织及中肠主要消化酶淀粉酶活性的影响。电镜观察表明 ,有效浓度的川楝素具有明显的胃毒作用 ,药物处理组家蝇幼虫中肠柱状细胞结构受到严重破坏 :顶膜微绒毛零乱、脱线 ;线粒体肿胀 ,双层膜模糊不清 ,外室水肿 ,内嵴紊乱 ;内质网小池扩张 ,核糖体脱落。淀粉酶测定表明 ,中毒试虫的淀粉酶活性与正常虫相比 ,无显著变化。因此认为 ,川楝素主要作用于中肠细胞的质膜及内膜系统。对其消化酶———淀粉酶的活性没有显著影响     

家蝇二氯苯醚菊酯抗性株分化的研究

本研究采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术,探索了家蝇二氯苯醚菊酯抗性株(2000倍)在DNA分子水平上的分化。实验数据采用两种分析方法:1)用RAPDPLOT计算出个体间的遗传距离,进一步用PHYLIP软件包的NEIGHBOR程序进行UPGMA(非加权对组算术平均值聚类)聚类分析;2)经bootstrip方法随机取样100次,然后再进行UPGMA分析,在PHYLIP软件包的CONSENSE中形成合意树。两种分析方法结果极为类似,在聚类树中首先是抗性与非抗性个体分成两群,然后雌、雄个体分成两群,说明抗性株在DNA分子水平上已有明显的分化。OPD-02引物在全部抗性株个体中扩增出了非抗性株所没有的特异性同一片段(100bp左右),提示此片段有可能作为家蝇二氯苯醚菊酯抗性株的分子标记,但需进一步研究确定。     

家蝇敌敌畏抗性品系的选育以及乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶的变化

本研究采用敌敌畏对家蝇的自然种群选育了20代,抗性指数由最初的4倍上升至20倍。选育过程中,F2～F14抗性变化不大,抗性指数在8倍左右变动;F15～F20,抗性呈直线增长。通过检测抗性选育过程中家蝇体内乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶的活性表明,这两个酶活性的变化与家蝇对敌敌畏的抗性没有明显的相关关系。但是抗性的发展趋势与家蝇体内乙酰胆碱酯酶或羧酸酯酶对敌敌畏的敏感度降低是一致的。     

家蝇抗菌肽对 FBL－3红白血病原代细胞增殖影响浓度的探索

本文初步探究不同浓度家蝇幼虫抗菌肽对FBL－3红白血病原代细胞增殖的影响。采用诱导、研磨、离心、 C18固相萃取等方法制备家蝇幼虫抗菌肽混合物,然后处理传代期的FBL－3细胞,调整浓度为2．25×106／mL并通过尾静脉注射C57BL／6小鼠,建立红白血病动物模型。待肿瘤生长较大时,处死并剥离肿瘤,再通过研磨、裂红液裂解、获取原代肿瘤细胞并培养。将抗菌肽混合物调整为不同浓度作用于传代期的FBL－3原代细胞,之后经倒置显微镜观察照相,台盼蓝染色试验计算死亡率、 CCK－8试剂盒做细胞毒性检测。结果显示抗菌肽混合物浓度为250～350μg／mL作用FBL－3原代细胞时,细胞碎片大量增多,死亡率增高,细胞毒性变大。初步证明了抗菌肽混合物在250～350μg／mL抑制细胞增殖效果明显,在300μg／mL浓度下抑制作用最强,本研究结果可作为动物模型体内实验的参考。     

北京不同城区家蝇种群乙酰胆碱酯酶不敏感个体频率季节变化

本文在不同季节对采自北京 4个城区的家蝇Muscadomestica(L .)种群的乙酰胆碱酯酶 (AChE)对杀虫药剂的敏感度进行检测。结果发现 ,在 4个种群中 ,海淀区种群对敌敌畏、灭多威和残杀威 3种杀虫药剂不敏感的AChE的个体频率均为最低 ,且随季节变化不大 ;而西城、朝阳和丰台种群 ,对 3种杀虫剂不敏感的个体频率均有随季节呈上升趋势。但是这 3个种群上升的高峰期和上升的速度各不相同 ,其中丰台种群不敏感个体频率最高 ,其上升的速度也最快     

家蝇抗药性的分子遗传机制

综述了近年来家蝇抗药性分子机制的研究进展。脂族酯酶基因(MdaE7)在位置137(Gly)和251(Trp)的氨基酸突变可能与家蝇对有机磷抗性有关;谷胱苷肽S转移酶(GSTs)超量表达在家蝇对有机磷农药的抗性中起重要作用;有机磷抗性家蝇的AChE基因普遍存在Gly262Ala和Phe327Tyr突变。击倒抗性(kdr)和P450介导的代谢抗性是家蝇对DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂抗性的重要机制,电压门控钠离子通道的L1041F突变产生Kdr,而M918T和L1041F双突变导致超击倒抗性(superkdr);P450介导的代谢抗性表现出进化可塑性的特点。有关家蝇抗性机制的阐明,可为抗性的检测和监测提供准确和方便的手段。