淡色库蚊(Culex pipiens Pallens)与击倒抗性(kdr)相关的钠通道基因突变

本研究采用RT-PCR技术,使用简并引物分别从淡色库蚊(Culex pipiens pallens)敏感品系和抗溴氰菊酯品系中扩增出钠通道ⅡS4～ⅡS6区域的基因片段,长度为359bp.该基因片段所编码的氨基酸与黑尾果蝇(Drosophila melanogaster)、家蝇(Musca domestica)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)、冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)及德国小蠊(Blattella germanica)等昆虫相应区域的氨基酸序列具有较高的同源性,其同源性分别为95.8%,95.0%,100.0%,98.3%和95.0%.经序列比对,确认抗溴氰菊酯品系淡色库蚊钠通道基因在1014位点发生了突变该位点的碱基"A"突变为"T",其对应氨基酸由亮氨酸(L)变为苯丙氨酸(F),该突变(L1014F型)在多种昆虫中较为常见.     

淡色库蚊乙酰胆碱酯酶基因上的可变剪接及对酶活性的影响

在淡色库蚊的乙酰胆碱酯酶ace1基因上发现了1个可变剪接,与实验室敏感株1个个体的ace1基因的编码区相差了24个碱基,导致所编码的成熟蛋白在44~51氨基酸残基处缺失了8个氨基酸。经过在昆虫杆状病毒表达系统中的表达,推测这段基因的可变剪接可影响乙酰胆碱酯酶的活性。     

抗性家蝇para基因的选择性剪接和位点突变

为了在分子水平上研究拟除虫菊酯抗性家蝇靶标抗性机制 ,根据昆虫para型钠通道Ⅱ区S4至S6及Ⅱ与Ⅲ连接区的保守区域 ,设计简并引物 ,利用降落RT PCR ,克隆拟除虫菊酯kdr (R品系 )家蝇para型钠通道 70 4bp的cDNA ,根据此序列用PrimerPremier5 0设计特异引物 ,分别扩增敏感 (SS品系 )、super kdr(RR品系 )家蝇各 6 5 1bp的cDNA。结果SS无有义突变 ,R和RR在ⅡS6CTT到TTT的替换导致Leu 10 14到Phe的保守性突变 ,RR在ⅡS 4～ 5细胞内片段接头处没有与超 -kdr抗性相关的Met到Thr突变 ;另外首次发现kdr (R品系 )家蝇在Ⅱ与Ⅲ连接区出现 39bp的选择性剪接 ,构成家蝇para钠通道亚型 (命名为xych ,GenBank登陆号为AF4 114 5 2 )。     

人CD44新剪接变异体克隆及分析

目的：应用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）分析CD44在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞株中表达，来寻找新的人CD44剪接变异体。方法：在CD44基因起始和终止密码子两端及变异剪接外显子v10中和剪接位点处设计特异性引物，以鼻咽癌组织、细胞株5-8F和HNE1 cDNA为模板进行RT-PCR扩增，产物测序。然后，应用生物信息学对克隆序列进行分析。结果：新克隆的CD44剪接变异体有1634bp，包含一个完整的阅读框，起始密码子在序列的12位，终止密码子在序列的1301位，可变剪接区只有变异型剪接外显子10，预测编码429氨基酸。GenBank登陆号：EF581837。结论：一个新的、预测编码429个氨基酸的CD44剪接变异体存在于研究的人鼻咽癌组织和细胞株中，它的功能有待于进一步研究。     

荧光定量PCR快速检测淡色库蚊击倒抗性相关钠通道基因突变(L1014F)

本研究的目的是采用荧光定量PCR扩增技术,建立快速检测淡色库蚊Culex pipiens pallens钠离子通道L1014位点击倒抗性(Knockdown resistance,kdr)相关点突变方法,该方法的原理是以突变位点为3′端设计两条特异性上游引物,和一条非特异下游引物组成两对引物平行双管法,用荧光定量PCR...     

淡色库蚊性别差异表达cDNA文库的构建和分析

目的为探讨媒介与病原、媒介与宿主的相互作用，建立传播疾病的淡色库蚊性别差异表达cDNA文库。从而筛选阻断疾病传播的疫苗候选分子。方法以淡色库蚊雌蚊成蚊为检测方（Tester）、雄蚊成蚊为驱动方（Driver），进行正向抑制性消减杂交；以雄蚊成蚊为Tester、雌蚊成蚊为Driver，进行反向抑制性消减杂交。将获得的正向抑制性消减杂交产物克隆入pGEM-T easy vector，并以菌液PCR扩增鉴定插入片段。随机抽取100个阳性克隆进行DNA序列分析，并将所得ESTs序列进行在线BLAST分析。结果从100个阳性克隆中测得98个ESTs序列，在测定的序列中与已知基因具有同源性的有57个，其余41个ESTs与已知基因不具有同源性。结论抑制性消减杂交技术建立雌蚊特异性基因文库，发现了淡色库蚊雌蚊新的ESTs序列，为性别相关基因的功能及性别调控。探讨媒介与病原、媒介与宿主的相互作用及其筛选传播阻断疫苗候选分子的研究奠定了基础。     

家蝇抗药性的分子遗传机制

综述了近年来家蝇抗药性分子机制的研究进展。脂族酯酶基因(MdaE7)在位置137(Gly)和251(Trp)的氨基酸突变可能与家蝇对有机磷抗性有关;谷胱苷肽S转移酶(GSTs)超量表达在家蝇对有机磷农药的抗性中起重要作用;有机磷抗性家蝇的AChE基因普遍存在Gly262Ala和Phe327Tyr突变。击倒抗性(kdr)和P450介导的代谢抗性是家蝇对DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂抗性的重要机制,电压门控钠离子通道的L1041F突变产生Kdr,而M918T和L1041F双突变导致超击倒抗性(superkdr);P450介导的代谢抗性表现出进化可塑性的特点。有关家蝇抗性机制的阐明,可为抗性的检测和监测提供准确和方便的手段。     

淡色库蚊乙酰胆碱酯酶全基因的克隆鉴定及蛋白同源模拟

根据已知的尖音库蚊乙酰胆碱酯酶 (AChE1 )的全基因序列在非编码区设计一对特异性引物 ,对淡色库蚊的cDNA进行扩增。PCR产物经T A克隆 ,PCR鉴定和DNA测序 ,利用DNAStar软件与部分已知物种的AChE1氨基酸序列进行同源性分析并构建系统进化树。淡色库蚊Ace1基因的ORF序列为 2 1 0 3bp ,翻译成蛋白序列为 70 0个氨基酸。蛋白序列与尖音库蚊的AChE1相比只有 1 2个氨基酸的差异 ,缺失了一段 8个残基的序列。同源性分析表明 ,除尖音库蚊外 ,其与冈比亚按蚊的同源性最高 (79 5 % ) ,与黑腹果蝇AChE2相比则比较低 (31 1 % )。应用SWISS MODEL软件对该蛋白进行了同源模拟     

寡核苷酸微阵列技术用于检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药相关23S rRNA基因多态性

目的 幽门螺杆菌（Hp）克拉霉素耐药与23S rRNA基因A2142G、A2143G和C2182T点突变相关。本研究旨在探索建立一种快速、简便的检测方法，获取Hp克拉霉素耐药相关23S rRNA基因多态性的流行病学资料，为临床合理用药提供依据。方法收集胃黏膜标本，用于病理检查、提取DNA。根据核苷酸位点设计相应探针，探针3′端以氨基修饰，氨基与探针序列之间以间隔臂相连，将探针用芯片点样仪点至玻片上。下游引物5′末端用Cy3荧光标记，进行不对称PCR扩增。其产物与芯片杂交，杂交后洗涤、扫描芯片，观察信号强度。非荧光标记引物扩增PCR产物克隆至T载体，测序验证芯片结果。结果（1）寡核苷酸微阵列技术与测序检测Hb 23S rRNA基因多态性结果完全一致。（2）经病理和PCR证实为场阳性的54例标本，杂交结果显示A2142位点均为野生型（54/54）；A2143G突变率为11．11％（6/54），尚未发现A2143C和A2143T的突变；C2182T突变率为12．96％（7／54），尚未发现C2182A和C2182G的突变，其余均为野生型。结论（1）利用寡核苷酸微阵列技术检测坳克拉霉素耐药的23S rRNA基因多态性，快速、简便而准确，可以高通量并直接检测胃黏膜而不需进行细菌培养，为根除Hp选择用药提供科学依据，推动个体化治疗方案的实施。（2）本研究没有发现场23SrRNA基因2142点突变，A2143G和C2182T突变率分别为11．11％和12．96％。     

淡色库蚊不敏感乙酰胆碱酯酶与抗药性关系的研究

经过选育的淡色库蚊抗敌敌畏(Rd)、抗残杀威(Rp)、抗氯氰菊酯(Rc)品系及其降解品系(Rd降解、Rp降解、Rc降解)的抗性水平分别为敏感(S)淡色库蚊品系的12.17倍、11.21倍、534.31倍、6.10倍、8.38倍、83.26倍,不敏感乙酰胆碱酯酶蚊虫个体频率分别为49.47%、73.47%、4.76%、17.71%、42.86%、3.57%,S淡色库蚊品系不敏感乙酰胆碱酯酶个体频率为4.65%.表明淡色库蚊对敌敌畏和残杀威的抗性伴随着不敏感乙酰胆碱酯酶蚊虫个体频率的改变,而对氯氰菊酯的抗性不伴随着不敏感乙酰胆碱酯酶蚊虫个体频率的改变.     

济宁地区淡色库蚊幼虫对苏云金杆菌的抗性水平研究

通过苏云金杆菌对采集的几株野外淡色库蚊种群幼虫的灭杀作用,分析不同环境下,该蚊对苏云金杆菌抗药性的差异.采用幼虫液浸法,测定不同淡色库蚊种群幼虫对苏云金杆菌的LC50.结果显示,苏云金杆菌BTH-14对采集的几株淡色库蚊种群幼虫有不同的灭杀效果,其中采集于苇坑种群的试虫对苏云金杆菌表现出一定程度的抗性,但到F2代,该种...     

Molecular analysis of a para sodium channel gene from pyrethroid-resistant head lice, Pediculus humanus capitis (Anoplura: Pediculidae)

The problem of pyrethroid-resistance in head lice, Pediculus humanus capitis (De Geer), is growing worldwide, and an insensitive sodium channel is suspected as the major mechanism of this resistance. We sequenced an open reading frame (ORF) encoding for the para-orthologous sodium channel from an insecticide-susceptible strain of the body louse, Pediculus humanus humanus (L.), based on conserved peptide sequences and a known partial gene sequence. Phenothrin-susceptible and -resistant head louse colonies from Japanese were individually analyzed for point mutations of the sodium channel cDNA; susceptible head and body lice differed in double homozygous synonymous substitutions. The resistant head lice shared 23 base substitutions homozygously, in which four resulted in amino acid substitutions: D11E in the N-terminal inner-membrane segment; M850T in the outer-membrane loop between segments four and five of domain II; T952I and L955 F in the trans-membrane segment five of domain II. The latter two substitutions coincided with those of pyrethroid-resistant head lice in the U.S. and U.K. (Lee et al. 2000), within the available published information on the peptide sequences. The potential mechanisms of head louse pyrethroid-resistance are discussed based on the four structural changes of the target molecule.     

淡色库蚊与致倦库蚊三个地理株杂交的研究

本文针对我国重要的媒介蚊虫淡色库蚊和致倦库蚊，进行了３个地理株的实验室内杂交研究。结果发现淡色库蚊北京株与淡色库蚊南京株杂交，以及淡色库蚊南京株与致倦库蚊广州株杂交，都可以产生具有能育性的杂种子一代并且也得到了杂种子二代，但是杂种子二代成成蚊率很低，介于０％—５．５４％之间，提示这可能是尖音库蚊复合组蚊虫的分化在遗传学上的反映     

淡色库蚊对一些化合物的触角电生理及行为反应

本文利用触角电位技术和嗅觉仪测试了几种气味化合物对淡色库蚊雌蚊的触角电生理和行为影响。触角电生理结果显示，淡色库蚊雌蚊对L-乳酸、苯甲醛和氨水产生明显的触角电位反应，且对苯甲醛和氨水的触角电位反应呈正相关。L乳酸在μL／mL剂量时产生最大的触角电位反应；氨水在10μL/mL剂量引发了最大的触角电位反应；淡色库蚊雌蚊对”蒎烯4个剂量的刺激没有产生明显的触角电位反应。行为实验结果显示，．氨水在10μL/mL时对淡色库蚊雌蚊产生明显的吸引作用；苯甲醛和壬醛显示出潜在的驱避作用，两者的反应率在1μL/mL和10μL/mL剂量仅10％左右；L-乳酸、苯甲酸、壬酸和α-蒎烯在测试剂量下都没有对淡色库蚊雌蚊产生明显的引诱作用。     

白僵菌对不同生境淡色库蚊的致病力研究

为了测定球孢白僵菌对不同生境淡色库蚊幼虫的致病力,为白僵菌应用于蚊虫的生物防治提供参考依据,从济宁市唐口镇医院污水（A组）、市郊区养猪场废水沟（B组）、微山湖稻区排水沟（C组）、山东省寄生虫病防治研究所院内水缸（D组）中采集的蚊虫直接用于致病力研究,室内饲养蚊虫作为对照组（E组）。利用白僵菌的孢子悬浮液处理不同栖境的淡色库蚊幼虫,记录幼虫死亡数,计算各处理组幼虫的致死中时LT50.结果显示,经白僵菌处理后,淡色库蚊幼虫均有不同程度的死亡率,试验10d后,淡色库蚊幼虫的累计死亡率均达95％以上。A、B、C、D、E组幼虫的致死中时LT50分别为：6．2、6．4、5．7、5．8、3．8d,野外采集蚊虫比室内饲养蚊虫的死亡高峰期推迟2～3d。结果表明白僵菌有望应用于蚊虫的生物防治中。     

上海市中心城区成蚊种群动态及新变化研究

为全面掌握上海中心城区蚊虫种群动态及新变化,选取城区蚊虫较易出现的公园和绿化区域环境类型（人民广场及人民公园地区）,采用CO：诱捕法进行连续超过220d的成蚊动态监测研究。结果显示,2012年224d共捕捉到蚊虫20826头,包括3属6种;淡色库蚊和白纹伊蚊为上海中心城区优势蚊种（构成比分别为71．8％和19．7％）;不同蚊种季节分布差异性显著,淡色库蚊和白纹伊蚊高峰期分别位于5～6月和7～8月,且整体上淡色库蚊密度高于白纹伊蚊（除8月下旬外,其余均P〈0．05）,三带喙库蚊在7月中下旬显著上升（分别为681和580头／旬）;蚊虫13变化趋势波动幅度较大,在相同的月份或季节亦出现较大日变化差异;将2008～2011年历史监测数据与2012年进行趋势比较,仅个别年份间有显著相关性：不同年份间的旬分布亦存在统计学差异。本研究提示,上海市中心城区的优势蚊种仍为淡色库蚊和白纹伊蚊,该两种蚊种的季节分布与某些文献报道存在差异,主要由上海城区的气候特点决定;上海城区的蚊媒防治工作仍应针对这两种蚊虫的季节分布采取针对性的有效防控措施,此外三带喙库蚊对城市环境的适应性不断提高,为上海城区的蚊媒防治工作提出了新的挑战。     

A new mechanism conferring unprecedented high resistance to chlorpyrifos in Culex pipiens (Diptera: Culicidae)

The cause of high resistance to chlorpyrifos observed in Tunisian Culex pipiens (L.) was investigated by comparing a Tunisian strain G (> 10,000-fold resistance), a French strain T (approximately 50-fold resistance), and a susceptible reference strain S. Strains G and T had the same level of propoxur resistance (approximately 1,000-fold) and were homozygous for an autosomal propoux-insensitive acetylcholinesterase (AChE-1). In G and T strains, as well as in the offspring of different F1s and backcrosses using these F1s and the S strain, the effect of DEF and Pb synergists on chlorpyrifos resistance was low or absent, indicating that increased detoxification by enzymes inhibited by these chemicals had a minor role. Chlorpyrifos resistance in the G strain was caused by a major gene (or group of genes) tightly linked to the Ace-1 gene (coding AChE-1 enzyme). The possibility of allelism between this gene and the Ace-1R allele present in the T strain was rejected by showing that AChE-1 inhibition by chlorpyrifos-oxon was not different between G and T mosquitoes.