两种不同方法的大鼠小体积肝移植模型建立的比较

目的　探索一种大鼠小体积肝移植模型简单有效的建立方法。方法　选取体重相近的SD大鼠作为供受体 ,采用体外和体外两种方法切除部分肝叶以获取小体积供肝 ,按Kamada两套管法做供肝植入。比较两种方法的技术并发症。结果　体外法在术后肝断面出血、渗血 ,肝后下腔静脉狭窄和继发血栓 ,术中因出血引起的低血压休克 ,相近肝叶静脉误扎引起的回流障碍等并发症发生方面较体内法多。两者总的并发症发生率分别为 35 % (6 / 16 )和 5 % (4 / 78) (P <0 0 5 ) ,而两种方法在无肝期 ,冷缺血时间及总的手术时间上无统计学差异。结论　选取体重相近的供受体进行体内切除减体积是大鼠小体积肝移植模型建立的可行有效方法     

肝脏体积的临床意义

肝脏体积是反映肝脏功能的一项重要指标。国外已有文献将肝脏体积和重量视为与Child-Pugh分级同等重要的因素,并将肝脏体积的测定广泛地应用于临床。     

两种不同肝脏灌注方法对大鼠肝脏保护作用的比较

目的探讨两种不同的肝脏灌注方法对冷保存的离体大鼠肝脏保护作用的差异,为后期离体大鼠肝脏保存实验提供简单而有效的方法。方法制备两种不同的单纯冷保存的离体大鼠肝脏灌注模型,分为实验组（经门静脉和腹主动脉灌注法,10只）;对照组（经门静脉、腹主动脉及肝动脉灌注法,10只）,灌注后取出肝脏置于4℃威斯康星大学保存液保存,12h后切取肝组织。行苏木素-伊红（HE）染色,观察肝组织病理损伤情况,并且用免疫组织化学染色法检测核因子（NF）-κB（SABC法）的表达情况。结果经12h冷保存后,两组大鼠肝脏组织病理示：肝脏小叶结构紊乱,肝细胞变性、肿胀及空泡形成,肝血窦和中央静脉有不同程度的淤血,部分肝窦内皮细胞坏死并脱落,但两组之间无明显差别。两组之间NF-κB阳性表达率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论经门静脉和腹主动脉灌注法与经门静脉、腹主动脉及肝动脉灌注法,对离体大鼠肝脏的保护作用无差异,但前者操作相对简单,更容易在今后研究大鼠离体肝脏的实验中应用。     

三种小体积肝移植大鼠模型的比较

目的 通过对三种供肝选取方法的比较来探索更简便、稳定的小体积肝移植大鼠模型的建立方法.方法 以Kamada"二袖套"法非动脉化原位大鼠肝移植模型为基础,采取供肝冷灌洗后原位剪除肝叶的方法获取供肝,建立小体积肝移植模型,Ⅰ组以肝中叶作为供肝,Ⅱ组以肝右中叶+右叶作为供肝,Ⅲ组以肝中叶+右叶作为供肝,其中Ⅰ组及Ⅱ组供、受者体重相似,Ⅲ组供者体重比受者轻100～120 g.比较3个组的手术成功率、手术各阶段耗时、术后肝功能以及移植肝组织损伤、排斥反应发生、手术并发症和受者存活情况.结果 Ⅲ组肝叶剪除时间为(8.8±0.7)min,明显短于Ⅱ组的(11.5±1.1)min和Ⅰ组的(10.1±1.0)min(P＜0.01).3个组供肝冷缺血时间、无肝期及受者手术耗时等方面的差异无统计学意义.Ⅲ组肝断面出血和胆漏并发症显著少于Ⅰ组和Ⅱ组;Ⅰ组肝后下腔静脉狭窄及血栓形成明显多于Ⅱ组和Ⅲ组(P＜0.05).3组间术后第1、7天血清丙氨酸转氨酶、胆红素总量和血氨水平的差异无统计学意义.术后第7天,3组间肝损伤及排斥反应分级(Banff分级均为轻度)的差异均无统计学意义.Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组的手术成功率分别为80%、85%和85%,3组间的差异无统计学意义.Ⅲ组的7 d存活率为62.5%,高于Ⅰ组的42.9%和Ⅱ组的47.5%,但3组间的差异无统计学意义.Ⅲ组的存活时间为(12.0±2.3)d,长于Ⅰ组的(6.0±0.9)d和Ⅱ组的(7.0±1.3)d,但差异均无统计学意义.结论 采用肝中叶+右叶供肝和供者体重低于受者100～120 g的方案能够简便、快捷的建立稳定的30%小体积肝移植大鼠模型,而且能显著减少肝切除相关并发症.

Abstract：

Objective To explore a simple and effective way of establishing a 30 % small-forsize liver transplantation in rats. Methods SD rats were selected as the donors and recipients. Smallfor-size orthotopic live transplantation was performed using Kamada's two-cuff method. Donor's liver was flushed via abdominal aorta and hepatectomy in situ was done. Animals were divided into 3 groups (40 pairs of rats in each): group Ⅰ , median lobe was used as graft; group Ⅱ, right of median lobe and right lobe were used as graft; group Ⅲ, median and right lobes were used as graft. The body weight of the donor was the same as the recipient in groups Ⅰ and Ⅱ , but 100～ 120 g less than in group Ⅲ. The operating time, 7-day survival and technical complications were compared among these 3 groups. Results The operating time of hepatectomy was shorter in group Ⅲ than in groups Ⅰ and Ⅱ (8. 8±0.7 vs 11.5± 1.1 vs 10.1 ±1.0 min, P＜0.01). The cold ischemia time of graft, the anhepatic time, the operating time of recipient and the transplanting successful rate showed no significant difference among the 3 groups. Compared with groups Ⅰ and Ⅱ , the incidence of bleeding,bile leakage and IVC stricture was significantly decreased in group Ⅲ (P＜0. 05). Other complications after operation showed no significant difference among the 3 groups (P＞0. 05). Group Ⅲ had more 7-days survivors and longer median survival time, but there was no significant difference among the 3groups. Conclusion Small for donor body weight with median and right lobes as graft was a more effective and simple way of establishing a 30 % small-for-size liver transplantation in rats with shorter hepatectomy time and less complications after operation.     

大鼠减体积肝移植模型的改良

小动物肝移植模型的建立是肝移植实验研究的基础,国际上肝移植小动物模型多为大鼠原位肝移植模型,如经典的Kamada“双套管法”大鼠原位肝移植模型等,为了对大鼠肝移植后肝再生进行深入的研究,课题组通过参考Omura的方法,采用改良“双套管法”,建立了稳定的大鼠减体积肝移植(reduced-size liver transplantation,RSLT)模型。     

不同方法测定肝脏体积的实验与临床研究

应用单光子发射计算机断层（ＳＰＥＣＴ）测量幼猪肝脏体积的实验研究及术前应用ＣＴ测量待施肝切除病人肝脏体积的临床研究。结果表明：ＳＰＥＣＴ及ＣＴ均可在活体较准确地测量肝脏的体积。     

大鼠自体肝移植中三种不同肝脏灌注方法的比较

目的比较三种不同的肝脏冷灌注方法的灌注效果。方法建立大鼠自体肝移植模型60例,通过不同的冷灌注方法(A经门静脉灌注法、B经腹主动脉灌注法、C经门静脉和腹主动脉同时灌注法),比较其灌注效果、术后存活情况和手术时间。结果A法灌注后光镜下可见小叶间动脉红细胞残存;B法、C法灌注后小叶间动脉、静脉均未见红细胞残留。各组手术时间分别为(50±3.0)min,(53±4.0)min,(58±3.5)min;术后存活率分别为95%(19/20),90%(18/20),80%(16/20)。结论B法是三种不同冷灌注方法中相对既简单又彻底的一种,对大鼠自体(或异体)肝移植冷灌注可优先选用;但对于非吻合肝动脉及与肝动脉无关的研究也可选用A法灌注;而C法并非必需。     

大鼠系列减体积原位肝移植的实验研究

目的探讨不同类型的大鼠减体积性肝移植的存活时间、肝再生及超微结构改变.方法采用二袖套、胆管端端缝合法建立70%、60%、50%、40%和30%大鼠减体积性肝移植模型,观察术后受体鼠的生存时间、肝重/体重、移植肝/受体原肝的变化及肝功能、组织病理和超微结构改变.结果全肝移植和70%、60%、50%、40%和30%大鼠减体积性肝移植(reduced-size liver transplantation,ROLT)的1周存活率分别为95%、90%、85%、70%、15%、0;2周存活率分别为85%、80%、75%、60%、0、0.30%和40%ROLT的生存曲线与其它组相比均有显著性差异;100%OLT、70%ROLT、60%ROLT、50%ROLT、40%ROLT、30%ROLT的移植肝/受体体重分别为3.53±0.36%、2.86±0.37%、2.45±0.25%、1.96±0.26%、1.59±0.18、1.22±0.23;70%ROLT、60%ROLT和50%ROLT术后1周移植肝再生至术前水平,而40%ROLT、30%ROLT术后早期虽有一定的再生,但常死于肝功能栓;术后超微结构基本正常,但40%ROLT和30%ROLT可见肝窦内皮细胞水肿、肝窦充血;光镜可见中央静脉及肝窦扩张.结论成功的大鼠减体积性肝移植其移植肝/受体体重应大于1.96±0.26%(50%ROLT);50%以上的减体积性肝移植后肝再生能力较强,大多1～2周可回复至术前水平.     

减小体积肝脏移植术(综述)

重点复习了减小体积肝脏移植术的技术及其并发症,手术操作还包括尸体供肝减小体积、活体供肝减小体积劈离式肝和肝外叶移植术.     

大鼠减体积肝移植术后移植肝脏应激蛋白的差异表达研究

目的  探讨大鼠减体积肝移植术后肝脏应激蛋白的差异表达情况。 方法  分别将改良大鼠减体积肝移植模型术后1、3、7 d的肝脏组织标本的双向电泳图谱与供体和受体原肝脏组织的双向电泳图谱进行比较, 以变化倍数大于10倍或小于1/10为标准选择差异蛋白点, 再利用质谱技术及数据库对差异表达的蛋白质点进行分析和鉴定。 结果  共发现了72个差异表达的蛋白质点, 通过质谱分析和一系列的鉴定, 最终发现有32种功能明确的蛋白, 其中热休克蛋白-8与肥厚激动剂反应蛋白在减体积移植术后肝脏表达差异较大, 占所有差异蛋白质点的7%(5/72)。 结论  在大鼠减体积肝移植术后移植肝脏中发现参与肝脏应激反应的蛋白质, 为下一步研究这些蛋白与肝移植术后肝脏缺血-再灌注损伤的关系提供了前期研究数据。     

成人标准肝体积预测公式的初步构建

目的 建立一个预测中国成人标准肝体积的公式.方法 收集2005年3月至2007年12月90例活体肝移植供者的临床资料,包括供者的性别(G)、年龄(Y)、身高(BH)、体重(BW)和术前CT扫描测量的全肝体积(TLV).分析TLV与上述其他指标的相关性,通过多重逐步线性回归得出预测标准肝体积的回归方程.并比较该公式和文献报道的公式预测的标准肝体积(ESLV)之间是否有差异.结果 90例供者的平均体重为(62.4±8.7)kg,平均TLV为(1319.1±167.0)ml,二者成正相关(r=0.655,P<0.01),可用公式TLV(ml)=12.5×BW(kg)+536.4来表示.与已发表文章中的公式相比,ESLV与TLV的差异均有统计学意义(P<0.05).结论 该研究建立了一个简单的更准确的预测中国成人标准肝体积的公式.     

大鼠原位肝移植模型不同术式改进的研究

目的比较两种改进后大鼠原位肝移植模型建立的优缺点.方法对三套袖法的修肝技术及套管制作进行改进,实施大鼠原位肝移植30例,采用改进的缝合法实施大鼠原位肝移植70例.结果三袖套法手术成功率80%,1周存活率8%,缝合法手术成功率90%,1周存活率72%.结论改进后的三袖套法虽然明显缩短手术时间及无肝期,但手术后并发症多,缺乏实际应用价值,改进后的缝合法是建立稳定大鼠肝移植模型的有效方法.     

二种大鼠供肝原位肝移植术后近期死因的分析

目的　分析大鼠正常心跳供体 (HBD)和心跳停搏供体 (NHBD)原位肝移植术后近期死因的异同。方法　雄性SD大鼠随机分成HBD和NHBD两组 ;NHBD组又分别设心跳停搏 30min(NHBD 30 )和 45min(NHBD 45 )两组。每组各行原位肝移植 5 0、30和 30次。结果　HBD和NHBD组冷缺血、无肝期、IVC阻断、受体手术时间分别为 6 9 76± 1 5 2和 70 32± 1 5 3min、16 46± 0 96和 16 40± 0 73min、2 2 5 6± 1 73和 2 2 75± 1 16min、89 38± 3 75和 90 5 8± 3 76min ;HBD组术后近期 (1周 )共有 5只受体分别死于原发性移植肝无功能 (1)、麻醉过深 (1)、肺部感染 (2 )和SVC吻合口漏 (1) ;而NHBD组术后近期共有 36只受体分别死于原发性移植肝无功能 (17)、麻醉过深 (4)、无肝期较长 (3)和供肝再灌注后渗血 (12 )。结论　二种供体原位肝移植术后的近期死因确实存在着差异。     

不同品系大鼠之间肝移植排斥反应的比较研究

目的 比较不同品系大鼠之间肝移植排斥反应特点。 方法 依据大鼠不同品系分成对照组SD→SD(A组),实验组Wistar→SD(B组)、Lewis→BN(C组)以及DA→Lewis(D组)4个组,采用Kamada双袖套法建立大鼠原位肝移植模型。比较各组受体大鼠术后10 d血清肝功能指标[丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)和白蛋白(Alb)]、血清白细胞介素(IL)-2和IL-10水平、急性排斥反应组织病理学分级和术后平均生存时间。 结果 与A、B组比较,C组和D组的血清ALT和TB明显升高,Alb明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与C组比较,D组的TB明显升高,Alb明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与A组比较,B、C、D组大鼠血清IL-2和IL-10水平均明显升高,C组和D组的IL-2/IL-10亦明显升高,差异有统计学意义(均为P<0.05)。与B组比较,C组和D组大鼠血清IL-2水平明显升高,D组的IL-2/IL-10亦明显升高,差异有统计学意义(均为P<0.05)。与C组比较,D组大鼠血清IL-2水平明显升高,D组的IL-2/IL-10亦明显升高,差异有统计学意义(均为P<0.05)。肝组织病理学检查显示,A组大鼠肝组织未见明显排斥反应,排斥活动性指数(RAI)评分(1.8±0.7)分;B组RAI评分(3.1±1.3)分,属轻度或不明确性排斥反应;C组RAI评分(6.9±0.8)分,属中~重度排斥反应;D组RAI评分(8.8±0.5)分,属重度排斥反应。各组间RAI评分比较以及组间两两比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。A组、B组、C组、D组受体大鼠术后平均生存时间分别为(119.3±1.9)d、(116.9±8.3)d、(53.4±6.1)d、(12.1±2.4)d,A组与B组的生存时间比较差异无统计学意义,余各组两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。 结论 4种组合中,大鼠DA→Lewis模型排斥反应最剧烈,Lewis→BN次之,而Wistar→SD最轻,接近于免疫耐受。     

用余肝体积预测半肝切除耐受性的安全标准

目的 探索用余肝体积作为半肝切除的安全标准。方法 拟行半肝切除的肝癌病人术前以CT测定余肝体积，以病人体表面积计算标准化的肝脏体积。评价病人术后的安全性及其影响因素。结果 2003年12月至2005年3月对拟行半肝切除的病人测定余肝体积25例。以标化余肝体积〉250ml作为耐受半肝切除的标准。实际行半肝切除20例，其中右半肝切除15例，左半肝切除5例。接受右半肝切除的病例SFLV和SFLVR的中位值分别为298．6ml和42．2％；在左半肝切除病例组，SFLV和SFLVR的中位值分别为650ml和91．8％。术后出现并发症9例，其中8例为少量一中等量的腹水，无手术死亡。以腹水定义为术后肝功能不全，结果术中是否输血是术后肝功能不全的惟一影响因素。结论 标准化余肝体积〉250ml，或标准化余肝体积比例〉35％可作为Child A的乙型肝炎病人耐受半肝切除的一个指标。     

提高大鼠原位肝移植手术质量的技巧和注意事项

目的探讨提高大鼠原位肝移植手术质量的技巧和注意事项。方法通过改良的双袖套法对115只大鼠进行了原位肝移植(不包括预试验),设定供肝冷保存时间为60min。观察手术成功率和术后生存率以及手术并发症。结果手术成功率为95.6%,1周存活率为88.7%。结论熟练的显微外科技术和缩短无肝期时间是手术成功的关键,采用各项改良措施并注意手术的细节是手术成功的有效保障。     

右半肝活体肝移植验证标准肝体积公式

目的 分析216例活体肝移植患者的临床资料,探讨适合中国成人活体肝移植肝体积评估标准.方法 华西医院移植中心2001年7月至今共实施216例活体肝移植,选取符合标准的成人间活体右半肝(不含肝中静脉)179例肝移植供体,将供体的术中实测右半肝体积与CT测量右半肝体积以及各公式计算的标准右半肝体积进行比较,评估哪种公式更适合中国成人.结果 CT测量右半肝体积大于实际右半肝体积(P＜0.01).德国Heinemann、美国Yoshizumi、日本Urata、美国Vauthey、韩国Lee公式计算的右半肝体积结果显著大于实际肝脏体积(P＜0.01).香港Sheung Tat 公式计算的右半肝体积结果小于实际肝脏体积,差异有统计学意义(P＜0.05).华西Lünan-yan公式计算的右半肝体积结果与实际肝脏体积比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 华西Lünan-yan 标准肝体积公式适合中国成人活体肝移植标准肝体积评估.     

多层螺旋CT半自动法测量肝体积在成人活体肝移植中的应用

目的 探讨多层螺旋CT(MSCT)半自动法测量右半供肝体积的准确性,及该方法在活体肝移植(LDLT)中的应用价值.方法 对56例供者术前行MSCT四期增强扫描,然后分别根据MSCT图像手动绘图(简称:手动法)计算右半供肝体积(V手)和应用IQQA(R)-liver肝脏诊断辅助分析系统进行半自动化绘图(简称:半自动法)计算右半供肝体积(V半),将两种方法计算的右半供肝体积与术中经水置换法实测的右半供肝体积(V术)进行相关分析和Bland-Altman检查,得出其线性回归方程.结果 V半、V手和V术分别为(818.60±161.43)、(880.16±169.92)和(669.84±141.37)cm3;半自动法和手动法测量供肝体积与术中实测肝体积均显著相关(r值分别为0.778和0.746,P＜0.05),其线性回归方程分别为V术=V半×0.681+112.26,V术=V手×0.620+123.81.半自动法测量肝体积与术中实测肝体积的差值为148.76cm3,95%可信区间为121.57～175.95 cm3,吻合限为-354.135～56.62 cm3,手动法测量肝体积与术中实测肝体积的差值为210.33 cm3,95%可信区间为180.09～240.56 cm3,吻合限为-438.66～18.01cm3.结论 半自动法测量LDLT右半供肝体积比目前最常用的手动法更为准确.

Abstract：

Objective To evaluate the accuracy of multi-detector spiral CT (MSCT) semiautomated volumetric measurement of right lobes and its value in living donor liver transplantation (LDLT). Methods Fifty-six donors underwent four phases MSCT. Pre-operative liver volumes of two measurements [IQQA(R)-liver semi-automated (Vs) and manual volume (Vm) measurements] in portal vein phase were compared with intra-operative measurement (Vio) by means of water displacement. Results Correlation analysis and Bland-Altman tests were used for statistical analysis.Results Pre-operative measurements of grafts resulted in a mean Vs, Vm, Vio of (818. 60 ± 161.43)cm3 , (880. 16 ± 169. 92) cm3 and (669. 84 ± 141.37) cm3 respectively. All corresponding pre-and intra-operative data were correlated significantly with each other. There was a good correlation between Vs and Vio(r= 0. 778, P＜0. 05), so did Vm and Vio(r= 0. 746, P＜0. 05). The equations of linear regression were Vio = Vs × 0. 681 + 112. 26, and Vio = Vm × 0. 620 + 123. 81 respectively. Exact 95 % CIs and the extent of concordance were 121.57-175. 95 cm3, -354. 135-56. 62 cm3 for semiautomated measurements, and 180. 09-240. 56 cm3 , - 438. 66-18. 01 cm3 for manual measurements,respectively. Conclusion Semi-automated method for the volumetric measurements of the right liver lobes in LDLT is more accurate than the manual method.