结核分枝杆菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875、Rv3804c细胞表位融合蛋白的表达及其免疫原性评价

  目的  评价结核分枝杆菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c的细胞表位融合蛋白的免疫原性,为研制新型多阶段结核疫苗提供可靠的靶抗原。  方法  将Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c基因中的细胞表位串联构成融合抗原基因(命名为msv),克隆到原核表达载体pEASY-Blunt E1中,诱导表达后采用亲和层析纯化表达产物,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用纯化的融合抗原蛋白免疫小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度;分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,采用淋巴细胞增殖法检测其免疫原性。  结果  成功构建了能表达融合抗原基因msv的原核表达质粒;SDS-PAGE和Western blot结果表明,表达产物亲和层析纯化后,获得相对分子质量为41.3×103的目的蛋白;ELISA检测免疫小鼠血清抗体滴度,结果表明特异性抗体效价约为1:81 920;淋巴细胞增殖实验结果表明,抗原致敏的淋巴细胞经融合蛋白msv刺激后明显增殖。  结论  成功表达并纯化出融合蛋白msv,该融合蛋白可诱导小鼠特异性抗体表达和刺激细胞免疫应答,可作为结核疫苗的抗原组分。     

结核杆菌PEPCK免疫作用的初步研究

目的 初步研究结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(PEPCK)的免疫作用.方法 用敲除pekA基因的卡介苗(BEG△pckA)和野生型卡介苗(BCG-WT)分别感染小鼠,取肺脏进行病理分析;取脾脏用流式细胞仪检测CD4+、CD8+T细胞、CD4+/CD8+,酶联免疫吸附试验检测IL-12;取脾脏进行结核杆菌的培养,比较两组茵落数量.结果 BCG△pckA感染的小鼠比BCG-WT感染的小鼠肺脏内产生的结核结节少且不典型,炎性程度低;BCG-WT感染的小鼠脾脏内的CD4+T细胞和CD4+/CD8+及IL-12滴度明显高于BCG△pckA感染的小鼠;BCG△pckA株形成菌落的数量明显低于BCG-WT株形成菌落的数量.结论 pckA基因为结核杆菌生长所必需,其编码产物PEPCK能够刺激机体产生免疫反应,可能是一种很好的疫苗候选分子.     

新型结核病疫苗菌株对T淋巴细胞免疫记忆及增殖能力的影响研究

背景　结核病是世界范围内单一致病菌感染导致死亡率最高的慢性感染性疾病,目前缺乏安全有效的疫苗预防成人结核病。而预防接种主要是利用机体具有免疫记忆的特征以阻止病原体的再次入侵,因此,研究T淋巴细胞的免疫记忆及增殖能力对新型结核病疫苗的设计至关重要。目的　探讨新型结核病疫苗菌株（简称B/R菌株）对T淋巴细胞免疫记忆及增殖能力的影响。方法　2019年1月,选取6~8周龄、SPF级雌性C57BL/6小鼠48只,随机分为磷酸盐缓冲液（PBS）组、卡介苗（BCG）组、结核分枝杆菌国际标准毒株（H37Ra）组和新型结核病疫苗（B/R）菌株组,各12只。PBS组、BCG组、H37Ra组和B/R菌株组分别皮下接种PBS、BCG、H37Ra和B/R菌株。4组分别于免疫后8周、12周、16周各取3只小鼠提取脾淋巴细胞体外刺激培养,利用流式细胞技术检测中央型记忆性淋巴细胞（TCM）及效应型记忆性淋巴细胞（TEM）,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测脾淋巴细胞分泌的抗原特异性Th1/Th2型细胞因子〔白介素2（IL-2）、干扰素γ（IFN-γ）和白介素4（IL-4）〕水平;羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记法检测CD4+T淋巴细胞增殖率、CD8+ T淋巴细胞增殖率。结果　免疫后8、12、16周BCG组、H37Ra组、B/R菌株组CD4+的TCM和TEM高于PBS组（P<0.05）;免疫后8周B/R菌株组CD4+的TEM低于H37Ra组（P<0.05）;免疫后16周B/R菌株组CD4+的TCM高于H37Ra组和BCG组（P<0.05）;免疫后16周B/R菌株组CD4+的TEM高于BCG组（P<0.05）。免疫后8、12、16周BCG组、H37Ra组、B/R菌株组CD8+的TCM和TEM高于PBS对照组（P<0.05）;免疫后12周B/R菌株组CD8+的TEM高于H37Ra组和BCG组（P<0.05）;免疫后16周,B/R菌株组CD8+的TCM和TEM高于BCG组（P<0.05）。免疫后8、12、16周PBS组IL-2和IFN-γ低于BCG组、H37Ra组、B/R菌株组（P<0.05）;免疫后12周,B/R菌株组IFN-γ高于BCG组（P<0.05）;免疫后16周,B/R菌株组IFN-γ和IL-2高于BCG组和H37Ra组（P<0.05）。BCG组、H37Ra组和B/R菌株组CD4+T淋巴细胞增殖率、CD8+ T淋巴细胞增殖率高于PBS组（P<0.05）;B/R菌株组的CD4+T淋巴细胞增殖率、CD8+T淋巴细胞增殖率均高于BCG组和H37Ra组（P<0.05）。结论　B/R菌株免疫小鼠后,可促进机体产生更高水平的免疫保护性记忆细胞,以Th1型细胞免疫应答为主,并可增强T淋巴细胞增殖能力。     

旋毛虫新生幼虫抗原免疫小鼠免疫功能的动态观察

【目的】探讨旋毛虫新生幼虫抗原诱导小鼠产生的保护性免疫机制。【方法】采用免疫组化法分别检测旋毛虫新生幼虫抗原免疫后7、14、28、42d小鼠外周血CD4^＋和CD8^＋ T淋巴细胞的百分率,并同时用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定外周血PBMC培养上清中IL-4和IFN-γ水平。【结果】与对照组相比,旋毛虫新生幼虫抗原免疫组小鼠外周血CD4^＋、CD8^＋ T淋巴细胞的百分率均增高,IL-4和IFN-γ水平亦升高,直至免疫后42d;而CD4^＋／CD8^＋ T细胞比值与对照组相比无显著性差异（P〉0.05）。【结论】旋毛虫新生幼虫抗原能诱导机体产生有效的体液免疫和细胞免疫,有希望成为预防旋毛虫病有前途的候选疫苗。     

具有人免疫系统和异体人黑色素瘤生长的人源化小鼠 模型的构建和鉴定

目的：构建同时具有人免疫系统和人肿瘤生长的人源化小鼠模型,为人肿瘤免疫研究和临床肿瘤免疫药物药效评估提供依据。方法：通过给予重度免疫缺陷NOD/SCID IL2rg-/-小鼠亚致死剂量辐照,联合小鼠肾被膜下移植人胚胎胸腺组织和静脉输注CD34⁺胎肝细胞,构建具有人免疫系统重建的人源化小鼠。构建人源化小鼠模型后3周开始,每3周采集外周血监测人免疫细胞重建情况,包括CD45⁺、CD33⁺、CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺、CD56⁺细胞比例。构建人源化小鼠模型后,第15周给予小鼠皮下接种人A375黑色素瘤细胞,每5 d测量肿瘤体积。接种6周后处死小鼠,流式细胞术检测人源化小鼠外周血、骨髓、淋巴结、脾脏及肿瘤组织中人免疫细胞的组成和表型。免疫组织化学法检测人源化小鼠肿瘤组织中人免疫细胞的组成和表型。结果：在人源化15周时,人源化小鼠模型外周血中人T细胞比例为（33.53±8.57）%、B细胞比例为（43.33±10.05）%。在A375细胞接种后前3周,人黑色素瘤生长较慢,其后加速生长,6周时肿瘤体积达（1 564±334.3） mm³。免疫组织化学和流式细胞术检测,人黑色素瘤内有大量以CD8⁺ T细胞为主的人T细胞浸润;肿瘤组织中CD8⁺/CD4⁺比值明显高于外周血、骨髓、淋巴结和脾脏（P<0.01）。PD-1分子在肿瘤浸润人CD4⁺ T和CD8⁺ T细胞中的表达水平明显高于其在外周血和免疫器官中的水平。结论：成功建立了具有人类免疫系统和异体人黑色素瘤生长的人源化小鼠模型,并在其外周血、淋巴器官以及人肿瘤组织中均检测到包括人T细胞和人B细胞在内的高水平人CD45⁺免疫细胞。     

活动性与非活动性肺结核患者的免疫特点

  目的  探讨活动性与非活动性肺结核患者免疫功能的特点和意义。  方法  收集2020年1月至2021年1月昆明市第三人民医院收治的78例活动性肺结核患者为对照组,28例非活动性肺结核患者为观察组,分析2组抗体、细胞因子表达水平及免疫细胞产生情况。  结果  与对照组相比,观察组IFN-γ、IL-6水平降低,差异有统计学意义（P < 0.05）;IgG、IgA、IgM及IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-8等其余10种细胞因子水平,差异无统计学意义（P > 0.05）;CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞及CD4+/CD8+增高,淋巴细胞绝对数、NK细胞绝对数降低,差异有统计学意义（P < 0.05）,B细胞绝对数,差异无统计学意义（P > 0.05）。  结论  细胞因子IFN-γ、IL-6和淋巴细胞亚群可作为非活动性肺结核患者免疫功能的参考指标,对结核是否活动复发有一定的指导意义。     

壳聚糖修饰的纳米乳用于鼻腔疫苗递送的研究

  目的  制备壳聚糖修饰的阳离子纳米乳,用于延长疫苗在鼻腔的滞留时间并提高细胞摄取效率,增强鼻腔疫苗免疫效力。  方法  制备表面包裹壳聚糖的纳米乳疫苗;表征其粒径、电位和抗原包封率,考察其稳定性和细胞毒性;测定其在不同细胞上的摄取效率和小鼠鼻腔的滞留情况;最后对小鼠进行鼻腔免疫,检测小鼠血清和鼻腔灌洗液中抗体水平。  结果  制备的壳聚糖修饰的纳米乳疫苗平均粒径为（167.2±0.75） nm,多分散系数为0.21±0.01,平均电位为（13.7±0.85） mV,对抗原的包封率为92.7%;该纳米乳疫苗稳定性良好,在犬肾上皮细胞上未表现出明显细胞毒性;在树突状细胞和犬肾上皮细胞上均显示了较高的摄取效率,分别为（49.7±3.45）%和（59.7±2.19）%。此外,阳离子纳米乳也显著增加了抗原在小鼠鼻腔的滞留时间,给药后60 min仍有较多纳米乳疫苗滞留于鼻腔;经小鼠鼻腔免疫后,与游离抗原和未经壳聚糖修饰的纳米乳疫苗比较,壳聚糖修饰的纳米乳疫苗诱导了较高的系统及黏膜抗体水平（P<0.01）。  结论  本研究制备的壳聚糖修饰纳米乳能够增强鼻腔疫苗免疫效力,是一个具有较大潜力的鼻腔疫苗递送载体。     

抗原特异性CD4+CD25+ T细胞的制备及功能鉴定

目的: 制备供体抗原特异性CD4+CD25+调节性T细胞,并对诱导的细胞进行免疫生物学功能鉴定?方法:分离供体ICR小鼠的脾细胞经尾静脉免疫BALB/cByJ小鼠,每周1次,连续3周?第4周,体外免疫磁珠分离技术(MACS)分选被免疫小鼠CD4+CD25+ T细胞和CD4+CD25-T细胞?混合淋巴细胞反应和ELISA检测细胞的功能?结果:体外共培养实验显示,被免疫BALB/cByJ小鼠的脾细胞呈低增殖反应?CD4+CD25+T细胞能够抑制同种异体抗原刺激的天然(na?觙ve)BALB/cByJ小鼠CD4+CD25-T细胞的增殖反应和γ干扰素(IFN-γ)的分泌?结论:供体特异性脾细胞输注后分选的CD4+CD25+调节性T细胞是抗原特异性的,在体外具有免疫无能性和免疫抑制性?     

微囊化CEA转基因细胞疫苗对小鼠免疫功能的影响

目的：探讨微囊化癌胚抗原(CEA)转基因细胞疫苗免疫小鼠后,对小鼠免疫功能的影响。方法：采用³H-TdR掺入法,测定ConA诱导荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖作用;采用³H-TdR后标记法,测定荷瘤小鼠脾淋巴细胞NK细胞毒;以ELISA法测定小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFNγ细胞因子水平;利用流式细胞术检测CEA疫苗免疫对小鼠脾T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8百分率,CD4/CD8比值和NK细胞的影响;采用RT-PCR方法检测IL-2、IFNγ mRNA的表达水平。 结果：微囊化CEA疫苗免疫可以有效增强ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖能力,促进IL-2、IFNγ的产生以及增强NK细胞的细胞毒活性（P<0.05,P<0.01,P<0.05）;微囊化CEA疫苗能提高荷瘤小鼠CD4/CD8比值及NK细胞数（P<0.05,P<0.05）;促进脾细胞中细胞因子IL-2、INFγ mRNA的表达。 结论：微囊化CEA转基因细胞疫苗具有增强荷瘤小鼠免疫功能的作用,提示该疫苗可作为有效的抗CEA阳性肿瘤的治疗性疫苗。     

单核细胞增生李斯特菌L型对小鼠脾脏树突状细胞免疫调节作用影响的研究

  目的  研究单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)感染对树突状细胞(dendritic cell, DC)免疫功能的影响,探讨细菌型(WT)和L型(L-form)LM对DC的免疫活化能力差异。  方法  将C57BL/6小鼠随机分为对照组、WT组、L-form组,3组小鼠分别经尾静脉感染PBS液、细菌型LM和L型LM,电镜观察脾脏DC超微结构特征;流式细胞术检测小鼠脾脏DC的数量、共刺激分子表达、胞内细胞因子分泌、脾脏T细胞亚群及其活化程度。  结果  透射电镜可观察到对照组小鼠脾脏DC表面有大量丝状伪足,胞浆均匀,细胞核大而偏于一侧;吞噬细菌后,表面丝状伪足减少,胞质内空泡增多;小鼠感染后第1天脾脏中DC绝对值无明显升高或降低(P>0.05),但成熟表型特征性分子表达上调(P < 0.05),L-form感染组DC表面CD80和CD86分子均高于WT组(P < 0.05);小鼠感染LM后TNF-α+DC比例明显升高,L-form感染组分泌TNF-α的DC高于WT组(P < 0.05);感染LM后第7天,3组小鼠脾脏CD4+T细胞和CD8+T细胞在淋巴细胞中所占比例差异均无统计学意义(P>0.05),但L-form组CD69+ T细胞比例高于WT组(P < 0.05)。  结论  L型LM可介导相对高水平的TNF-α,促进DC成熟以增强其抗原递呈的能力。     

寨卡病毒非结构蛋白1对小鼠免疫应答的影响

目的 利用原核系统表达并纯化得到寨卡病毒(ZIKV)非结构蛋白1(NS1),观察NS1对小鼠免疫应答的影响,探讨NS1成为ZIKV疫苗的可能性。方法 通过pET28a-ZIKV-NS1原核质粒表达得到重组蛋白NS1,利用NS1对小鼠进行免疫,酶联免疫吸附法检测小鼠血清中免疫球蛋白G的效价,流式细胞术及酶联免疫斑点测定法检测小鼠脾脏中CD4⁺、CD8⁺细胞数量及干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)的分泌水平。结果 成功构建原核表达质粒pET28a-ZIKV-NS1,纯化得到并鉴定为ZIKV-NS1;NS1免疫2次和3次后小鼠血清IgG效价升高,且随接种次数的增加而升高,与空白对照组比较,P<0.001;小鼠脾脏CD4⁺和CD8⁺细胞数量及IFN-γ、IL-4分泌水平上升,与空白对照组比较,P<0.001。结论 ZIKV-NS1能够激活小鼠体液免疫和细胞免疫,具有成为ZIKV疫苗的可能性。     

绵羊李斯特菌载体结核疫苗株inlB1基因缺失减毒株的构建及评价

目的 对以绵羊李斯特菌（Listeriaivanovii,LI）为载体的结核疫苗候选株LI-Ag85C进行基因减毒,初步评价其体内外生物学特性。方法 构建含有inlB1基因上、下游同源序列的打靶质粒,电转原始菌LI-Ag85C感受态细胞,同源重组敲除inlB1基因;测定减毒株LIΔinlB1-Ag85C和原始株LI-Ag85C的体外生长曲线;测定两株菌对于肝癌细胞系HepG2细胞的黏附、侵袭能力的影响,比较两株菌溶血能力的差异,两株菌对于小鼠的半数致死量（median lethal dose,LD50）差异。结果 敲除inlB1基因的重组结核疫苗候选株LIΔinlB1-Ag85C的基因序列符合预期结果。减毒株与原始株的体外生长情况基本一致;对于HepG2细胞的黏附率分别为6.66%和7.46%,侵袭率分别为0.031%和0.042%,减毒株的黏附、侵袭能力均低于原始株,但差异无统计学意义;减毒株的溶血活性较原始株无明显变化;对小鼠的LD50值分别为3.2×108 CFU/只和6.7×107 CFU/只,减毒株LD50相较于原始株明显提高。结论 成功构建inlB1基因缺失的新型结核疫苗候选株LIΔinlB1-Ag85C,其毒力较原始株降低。     

融合基因重组卡介苗对肿瘤的抑制作用

目的 研究EB病毒基因BZLF1 和LMP2 融合基因重组卡介苗(recombinant BCG, rBCG)对肿瘤的抑制作用。方法 建立EB病毒阳性肿瘤(NPRC18)荷瘤小鼠(C57BL/6J)模型,根据注射的药物不同,分为rBCG组、BCG组、转pMV261载体BCG组(pMV261+ BCG)、PBS组。采取颈背部皮下多点注射方式进行免疫,对荷瘤小鼠肿瘤重量、成瘤时间、存活情况进行分析,C57BL/6J小鼠肿瘤抑瘤实验结束后,将小鼠的肿瘤裂解后用流式检测CD4⁺T、CD8⁺T细胞增殖情况,HE染色分析小鼠肿瘤组织中淋巴细胞浸润情况;使用统计学软件SPSS 19.0对rBCG抑瘤效果进行单因素方差分析(One-way ANOVA)。结果 重组BCG组分别用BZLF1和LMP2一抗杂交后,出现杂交目的蛋白,其蛋白质分子量约为70 KD,与对照相比,重组卡介苗对肿瘤抑制作用明显,小鼠成瘤时间延迟,平均成瘤时间约22 d,与对照PBS注射组8 d相比,其差异均有统计学意义(P ≤0.01);PBS组肿瘤重量为6.8 g,重组BCG组肿瘤重量为1.01 g,抑瘤率约为81%。经流式分析,重组BCG组产生的CD4⁺T、CD8⁺T细胞高于对照组。与对照组相比,rBCG延长了小鼠的生存时间,延缓了肿瘤生长和形成时间。结论 重组卡介苗在小鼠体内对肿瘤细胞具有抑制作用。     

M2e-HA2串联表位的自组装纳米颗粒流感疫苗的构建及血清学检测

  目的  构建M2e-HA2串联表位的自组装纳米颗粒通用流感疫苗，并进行免疫血清学检测。  方法  将流感病毒M2e和HA2抗原表位与Ferritin蛋白串联表达，非变性条件下提取并经亲和层析纯化获得纳米自组装颗粒，经Western blot和电镜验证后免疫小鼠。2次免疫后采集小鼠血清，使用Western blot进行抗原性检测，使用ELISA进行抗体水平检测。  结果  成功制备M2e-HA2串联表位的自组装纳米颗粒，将其免疫小鼠后血清中产生高水平的M2e和HA2特异性抗体。  结论  M2e-HA2串联表位的自组装纳米颗粒可以刺激小鼠产生高水平的M2e和HA2特异性抗体，为通用流感疫苗研发奠定基础。     

T细胞酶联免疫斑点试验在2 348例儿童结核病中的诊断价值

  目的  评价T细胞酶联免疫斑点（T-cells enzyme linked immunospot, TSPOT.TB）试验在儿童结核病中的诊断价值。  方法  收集2017年1~12月在重庆医科大学附属儿童医院住院并完善TSPOT.TB试验的2 348例患儿,结合患儿的病例资料,分析TSPOT.TB试验在儿童结核病中的诊断价值。  结果  本研究中TSPOT.TB试验诊断儿童结核病的敏感度为84.0%,特异度为99.1%,阳性预测值为93.1%,阴性预测值为97.8%。TSPOT.TB试验受试者工作特征（ROC）曲线下面积（area under the curve,AUC）为:A抗原的AUC值为0.893（P<0.05）,B抗原AUC值为0.883（P<0.05）。当A抗原或B抗原的斑孔数≤50时,随着TSPOT.TB试验斑孔数的增加,TSPOT.TB试验诊断儿童结核病的敏感度亦增加,但无明确线性关系;当A抗原或B抗原的斑孔数>50时,TSPOT.TB试验诊断儿童结核病具有高度的敏感度。TSPOT.TB真阳性病例组中,肺结核组的敏感度高于肺外结核组（P<0.05）。不同年龄结核病患儿中,随着患儿年龄的增长,TSPOT.TB试验的敏感度亦随之升高。  结论  TSPOT.TB试验在儿童结核病中有较高的诊断价值,可以快速辅助诊断儿童结核病。     

SARS冠状病毒S蛋白多价核酸疫苗的构建和免疫学原性

目的构建以SARS冠状病毒（severe acutere spiratory syndrome coronavlrus,SARs．c0V）S蛋白3个保守片段基因的组合为抗原基因DNA疫苗,采用肌肉注射的方法接种小鼠后观察机体产生免疫应答的情况。方法将人工合成的S蛋白3个保守片段基因组合（称为Sa）克隆至真核表达载体pcDNA3、1（-）,随之将重组质粒进行小鼠肌肉免疫,定期检测血清中抗SARS—CoV的病毒特异性抗体水平,流式细胞仪观察其淋巴细胞表型变化,PCR法检测质粒分布,免疫组化检测抗原表达。结果疫苗注射后15d就能在血清中检测出病毒特异性抗体,并且疫苗能在机体中持续表达抗原引发机体持续的免疫应答,直到注射后45d免疫应答都不见减弱;以CTLT淋巴细胞为主的CD8＋T淋巴细胞的百分比含量增加极显著,引起强大的体液免疫和细胞免疫;而空载体质粒对照组未检测出明显的特异性免疫应答。结论以S蛋白3个保守片段基因组合为抗原基因的DNA疫苗通过肌注能诱导小鼠针对SARS病毒强大的免疫应答。     

抗结核药物性肝损伤患者感染指标的特征分析

  目的  回顾性分析肺结核合并HIV与单纯肺结核患者抗结核药物性肝损伤的感染指标特征，评估临床危险因素及相关性。  方法  收集服用抗结核药物诱导肝损伤的患者，其中肺结核患者55例，肺结核合并HIV感染患者39例。记录临床资料，采集空腹静脉血，流式细胞术检测CD3+、CD4+、CD8+T 细胞比率，ELISA 检测血清降钙素原（procalcitonin, PCT）、白细胞介素-6（interleukin-6, IL-6）、C-反应蛋白（C-reactive protein, CRP）、血清淀粉样蛋白A（serum amyloid A protein, SAA）、红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate, ESR）。  结果  在年龄、性别构成、身高、体重、体质指数等方面两两比较差异无统计学意义（P > 0.05），免疫功能2组比较CD4+T淋巴细胞及CD4%、CD4/CD8%表达不同，差异具有统计学意义（P < 0.05）。炎症指标中CRP及SAA在单纯肺结核患者中明显升高，差异具有统计学意义（P < 0.05），同时本研究显示在抗结核药物性肝损伤的肺结核组中，SAA与肝损伤严重程度密切相关，差异有统计学意义（P < 0.05）。在肺结核并HIV感染组中，IL-6与肝损伤严重程度密切相关，差异有统计学意义（P < 0.05）。  结论  感染指标在不同类型患者的抗结核药物性肝损伤中表达不同，感染指标SAA与IL-6升高，与不同类型患者的抗结核药物性肝损伤严重程度有关。     

负载抗原DC联合CIK对肝癌免疫微环境的影响

  目的  探讨负载肝癌抗原树突状细胞（dendritic cell，DC）联合细胞因子诱导杀伤细胞（cytokine-induced killer，CIK）对肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）微环境的影响。  方法  采用手术切除HCC组织制备HCC抗原，采集健康志愿者单个核细胞，诱导并分离出DC，CIK，按是否加入HCC抗原及共培养将细胞分为DC、Ag-Dc、CIK、Ag-DC-CIK四组，流式细胞仪测定各组细胞表型后，ELISA检测IL-6、IL-10及IFN-γ水平；免疫细胞化学SP法检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达；RT-PCR检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2，MMP-3，MMP-9mRNA表达水平。  结果  负载抗原后DC组CD80及CD86表达阳性率，Ag-DC-CIK组CD3+CD56+、CD8+CD56+双阳性细胞均显著升高（P < 0.05）； Ag-DC-CIK组IL-6及IFN-γ浓度显著低于其余各组；而IL-10浓度最高（P < 0.05）；Ag-DC-CIK组VEGF及MMP-2、MMP-3、MMP-9mRNA表达水平均显著下降（P < 0.05）。  结论  在DC负载自身抗原的基础上，与CIK共培养，可显著增强DC及CIK活性，有效降低HePG2微环境中血管形成，炎症反应及纤维化相关因子表达。