多重聚合酶链反应检测流感嗜血杆菌

目的 建立检测流感嗜血杆菌的多重聚合酶链反应(M-PCR)方法 .方法 合成扩增流感嗜血杆菌编码P6外膜蛋白基因的引物(Hi),鉴定流感嗜血杆菌种特异性;合成扩增流感嗜血杆菌编码荚膜基因的引物(Hi-cap),鉴定菌株是否具有荚膜;设计并合成6对扩增流感嗜血杆菌不同血清型(荚膜型)编码摹因的引物(Hia-Hif),鉴定菌株的血清型,以其他呼吸道常见病原体菌株做对照,应用M-PCR方法 对200株临床分离的疑似流感嗜血杆菌菌株进行鉴定和血清分型.结果 M-PCR方法 检测流感嗜血杆菌具有高度的敏感性和特异性.对照菌株应用种(Hi)、荚膜(Hi-cap)和荚膜型(Hia-Hif)特异引物没有扩增出DNA片段.M-PCR方法 检测DNA的最低检测量为0.935 Pg.对临床分离的200株疑似流感嗜血杆菌鉴定,189株为流感嗜血杆菌,与API R NH鉴定结果 一致.其中1株具有荚膜,为f血清型,与玻片凝集法鉴定结果 一致.结论 M-PCR方法 检测流感嗜血杆菌具有较高的敏感性和特异性,可用于流感嗜血杆菌感染病例标本的快速检测和病例诊断.     

聚合酶链反应检测乙肝病毒的研究

应用聚合酶链反应（PCR）对在校大学生进行乙型肝炎病毒（HBV）流行病学调查，同时进行血清乙肝病毒标志物（HBVM）检测。在496名大学生血清中，HBVDNA阳性率为11．90％，HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、HBcAg及抗-HBc阳性率分别为11．29％、8．87％、9．48％、12．5％、11．69％和16．33％。在HBVM全明性的375人中有7人检出HBVDNA，阳性率为1．87％。结果表明，只有通过PCR才能检出具有传染性的潜在的低水平HBV复制。     

军团菌聚合酶链反应检测技术的研究

军团病由于缺乏典型的临床体征以及治疗的特殊性 ,其实验室确诊显得尤为重要。但军团菌人工培养条件的苛刻及其生长代谢的缓慢导致临床与环境标本检出率低下 ,从而造成事实上的假阴性漏检 ,对军团病的预防与治疗十分不利。运用聚合酶链反应技术 (ＰＣＲ)的高敏感度、强特异性和快速报告等特点 ,可以克服常规表型检验技术的多种缺憾。我们采用多对引物及多种ＰＣＲ技术〔1〕 在实验室水平上探究了ＰＣＲ技术在军团菌检测上的特点及其应用价值。材料与方法　 ( 1)菌株 :嗜肺军团菌 (Ｌｐ) 1- 11型、米克戴德军团菌 (Ｌ ｍｉｃ)、博杰曼军团菌 …     

聚合酶链反应检测梅毒螺旋体

利用PCR法对临床梅毒病人皮疹渗出液、全血、血清样本中的梅毒螺旋体进行检测。结果表明：皮疹渗出液检出率最高(30／30)，全血样本检出率较低(8／20)。血清样本26例仅检出1例。在12例早期梅毒病人中。PCR检测全部阳性。结果提出PCR法特异性强。敏感性高，有利于早期诊断。及时治疗。     

聚合酶链反应检测HBVDNA的临床意义

本文应用高度灵敏及特异性的聚合酶链反应(PCR)检测各型乙肝病毒感染者血清中的HBVDNA,同时检测五项乙肝病毒血清标志(HBVM),以探讨PCR检测HBVDNA的临床意义。 1 材料及方法 1.1 研究对象 169例HBV感染者均为我院1994年住院病人。男性125例,女性44例。平均年龄为32.2岁。本组169例均按1990年(上海)全国病毒性肝炎学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准进行诊断。急性肝炎(AH)31例,慢性迁延性肝炎(CPH)30例,慢性活动性肝炎(CAH)52例,重型肝炎16例,肝硬化(LC)10     

聚合酶链反应检测军团菌的研究进展

由于军团菌病临床缺乏独特的症状与体征 ,常致漏诊、误诊 ,因此寻找一种特异、敏感、灵敏且快速的方法 ,不仅必要而且必需。分离培养和直接免疫荧光技术 (ＤＦＡ)是检测军团菌最常用方法。但前者耗时 ,操作繁琐 ,且在某些标本中因含干扰物质抑制军团菌的生长 ,培养困难较大 ,不利于军团菌的早期诊断。后者虽具快速特异的特点 ,但操作复杂 ,敏感性低。近几年 ,聚合酶链式反应 (ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ ,ＰＣＲ)及其相关技术的发展为军团菌的检测提供了快速、敏感的方法。现将其研究进展综述如下。1　常规ＰＣＲ法此…     

聚合酶链反应检测人胃螺杆菌

人胃螺杆菌（Ｈｈ）是慢性胃炎的又一病原菌，体外尚不能培养。作者用对应于细菌１６ＳｒＲＮＡ的螺杆菌属特异引物和细菌通用引物配对，建立了一套ＰＣＲ直接检测人胃粘膜活检标本中Ｈｈ的方法。１２例形态学检查证实为Ｈｈ感染者，１１例ＰＣＲ结果阳性，而大肠杆菌、空肠弯曲菌、双歧杆菌等８种常见肠道菌均阴性；普通ＰＣＲ灵敏度达０．１ｎｇＤＮＡ水平，巢式ＰＣＲ则可检测出０．０１ｎｇＤＮＡ。     

多重逆转录聚合酶链反应检测流感病毒

目的：建立特异敏感的热速检测流感病毒的分子生物学方法。方法：用多重逆转录聚合酶链反应连接多重聚合酶链反应扩增甲1、甲3和乙型流感病毒的HA基因的HA1片段。根据扩增产物的大小检测流感病毒。结果：以流感病毒的HA基因为模板设计的三对引物能特异性地扩增出942bp、1117bp和751bp的核酸片段，它们分别和甲1、甲3和乙型流感病毒有稳定对应关系。根据扩增产物的大小可以检测流感病毒。用这个方法能检测病毒浓度为0．1TCID50的样品。还可以直接从疑似流感病人的含漱液中检测到乙型流感病毒。结论：多重逆转录聚合酶链反应连接多重聚合酶链反应是检测流感病毒的特异敏感的方法，此法还能直接从疑似流感病人的含漱液中检测到乙型流感病毒。     

利用聚合酶链反应快速检测结核杆菌

利用聚合酶链反应快速检测结核杆菌黄士猷，黄锋庆，杨平目前，聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在结核菌检测方面已得到了应用，它具有快速，特异性高，敏感性强等优点。现仅就我们利用ＰＣＲ检测患者标本中结核杆菌的研究报告于下：－、材料与方法１．材料：（１）标本来源：...     

聚合酶链反应检测慢性淋球菌感染

６８例拟诊慢性淋病患者的尿道和宫颈分泌物标本作淋球菌ＰＣＲ聚合栈链反应检测与淋球菌培养和直接涂片法比较,结果ＰＣＲ阳性率为７２．１％,培养阳性率３３．８％,标本直接涂片阳性率为２７．９％,而培养阳性者,ＰＣＲ检测全部阳性,但在涂片１９例阳性中,有２例培养和ＰＣＲ检测均阴性。由此可见ＰＣＲ对诊断慢性淋病具有灵敏度高、特异性强、简便、快速的新方法,帮笔者认为ＰＣＲ检测既可作为急慢性感染的诊断依据,又可     

巢式聚合酶链反应检测伤寒沙门氏菌

本文采用扩增伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因Ⅵ区一段特异性片段的两对引物，用ＰＣＲ法检测伤寒沙门氏菌与非伤寒沙门氏菌，结果表明阳性符合率达１００％，且反应体系中达１０２ｃｆｕ／ｍｌ浓度时，伤寒沙门氏菌即可检出。检查伤寒确诊患者粪便标本４份，ＰＣＲ扩增均阳性。     

用聚合酶链反应检测肺炎支原体

肺炎支原体是呼吸道疾病的常见病原体,主要引起原发性非典型性肺炎。为此,建立一种高度敏感的微生物学诊断方法十分必要。目前应用的培养分离和血清学方法费     

逆转录酶—聚合酶链反应检测肠道病毒

建立一种特异，敏感的检测肠道病毒的逆转录酶－聚合酶链（RT－PCR）方法，在肠道病毒RNA高度保守的5’端非编码区设计，选择，合成三对引物，采用RT－PCR对175株已知肠道病毒和23份粪便标本进行检测，三对外物RT－PCR均显示高度特异性，敏感性，对23份粪便标本检测，E1E2引物有9份阳性，C1C2引物为7份阳性，P1P2均为阴性 ，与常规检测结果基本一致，这一检测方法具有较高特异性和敏感性，可用于临床快速检测肠病毒。     

逆转录酶——聚合酶链反应检测肠道病毒

建立一种特异、敏感的检测肠道病毒的逆转录酶—聚合酶链(RT—PCR)方法。在肠道病毒RNA高度保守的5’端非编码区设计、选择、合成三对引物,采用RT—PCR对175株已知肠遭病毒和23份粪便标本进行检测。三对引物RT—PCR均显示高度特异性、敏感性。对23份粪便标本检测,E_1E_2引物有9份阳性,C_1C_2引物为7份阳性,P_1P_2均为阴性,与常规检测结果基本一致。这一检测方法具有较高特异性和敏感性,可用于临床快速检测肠遭病毒。     

聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒的初步研究

应用美国Ａｂｂｏｔｔ公司Ｓｉｍｏｎｓ等人报道的引物序列，以逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测３８例甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）指标均阴性的慢性肝炎患者血中的庚型肝炎病毒核酸（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ）。２０例健康供血员血清作为对照，同时用ＲＴ－ＰＣＲ法测丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶＲＮＡ），结果３８例慢性肝炎患者中４例ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ阳性，其中２例同时有ＨＣＶＲＮＡ阳性。表明本地区有ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染存在。     

聚合酶链反应检测军团菌的国外研究进展

聚合酶链反应检测军团菌的国外研究进展北京市卫生防疫站（１０００１３）彭晓（综述）中国预防医学科学院流行病学与微生物学研究所万超群（审校）军团菌广泛存在于自然环境中，通过呼吸道感染方式引起人类严重的不典型肺炎，其中由嗜肺军团菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌａｐｎ...     

细菌性脑膜炎多重聚合酶链反应检测方法的研究

目的建立8种细菌性脑膜炎多重聚合酶链反应(Multiplex-polymerase Chain Reaction M-PCR)检测方法。方法针对脑膜炎奈瑟菌、流行性感冒嗜血杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生性李斯特菌、猪链球菌、结核杆菌、新生隐球菌的种特异性基因,通过优化单一PCR扩增体系及扩增程序,建立M-PCR方法检测8种导致细菌性脑膜炎的病原体,检测M-PCR体系的灵敏度。结果初步建立了检测8种导致细菌性脑膜炎病原体的M-PCR扩增方法,能够同时检测多种导致细菌性脑膜炎的病原。结论M-PCR方法较常规的分离培养鉴定方法具有较高的灵敏度和检测快速的特点,适合临床疑似细菌性脑膜炎感染病例的检测及筛查,提高临床细菌性感染脑膜炎病例的诊断阳性率。     

逆转录聚合酶链反应检测疟原虫混合感染的研究

〔目的〕建立在同一反应体系中能同时检测和鉴定恶性疟、间日疟的一步逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测方法,并用于国境口岸归国劳务人员的疟疾检测。〔方法〕以疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段,设计恶性疟原虫和间日疟原虫的上游通用引物和各自的下游特异性引物,在同一反应体系中同时扩增恶性疟原虫和间日疟原虫的特异片段,对疟疾患者的PCR产物进行序列测定和分析。〔结果〕用建立的RT-PCR检测方法对广东口岸回国劳务人员中发现的2名疟疾患者的不同采样时间的全血进行检测,2006年10月和2007年1月采集的样本被分别扩增出预期大小为360bp和450bp特异扩增带,推测2名患者为恶性疟原虫和间日疟原虫的混合感染,其在入境时处于恶性疟的发作期和间日疟的潜伏期,均属于典型的集体输入性疟疾案例。〔结论〕RT-PCR检测疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点,对国境口岸疟疾诊断、镜检质量控制和流行病学研究具有较大的实用价值。     

食源性致病菌多重聚合酶链反应快速检测

[目的]建立快速检测食源性致病菌的多重聚合酶链反应(PCR)方法.[方法]以出血性大肠杆菌的编码大肠杆菌不耐热毒素的B亚单位(LTB)基因、福氏志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、霍乱弧菌肠毒素细胞外分泌蛋白(EPSM)基因作为目的基因,分别设计一对引物,优化各种工作条件,建立一种多重PCR诊断方法.[结果]应用所建立的多重PCR方法能快速、特异地检测出出血性大肠杆菌194 bp、福氏志贺菌606 bp、霍乱强菌482 bp的目的基因.[结论]该检测方法简单、快速、准确、灵敏度高,可广泛应用于食品卫生检测和临床检验等领域.