HCMV感染对人神经胶质瘤U251细胞p38MAPK活性的影响

人巨细胞病毒(HCMV)在人群中的感染非常普遍。随着器官移植的广泛开展、艾滋病的传播以及耐药病毒株的出现,对HCMV致病、致畸机制的研究越来越受到重视。MAPK是细胞内的一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,它介导的信号转导通路是生物信号引起核反应的重要通路,参与细胞生长、分化、凋亡等多种生理过程,并在细胞恶性转化等病理过程     

肠道病毒71型对Vero细胞线粒体的损伤作用及机制

目的探讨肠道病毒71型（EV71）对Vero细胞的损伤作用及机制,为分析EV71的致病机制提供新思路。方法将临床分
离的一株EV71接种于Vero细胞,观察细胞的形态改变,用免疫荧光方法检测EV71抗原在Vero细胞中的表达,用透射电镜观察
Vero细胞超微结构的改变,用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件测试分析病毒颗粒直径和面积密度以及空泡化线粒体的比例和
面积密度。结果EV71感染后Vero细胞形态发生改变,由梭形变为圆形或死亡,免疫荧光检测显示EV71抗原定位于胞质,超
微结构观察可见胞质中有大量呈团块状分布、晶格状排列的高电子密度病毒颗粒,颗粒平均直径为16.3 nm,平均面积密度为
38.3%;线粒体肿胀、变性并空泡化、崩解,空泡化线粒体数量约占90.9%,平均面积密度为89.2%;部分线粒体内可见EV71病毒
颗粒。结论EV71感染Vero细胞后在其胞质中增殖,并可侵入线粒体,导致线粒体直接损伤并致细胞死亡;线粒体是EV71在
Vero细胞内的作用靶标。
     

榄香烯联合热疗对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的观察榄香烯联合热疗对人神经胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。方法将培养的U251细胞随机分为4组,其中A组加常规培养液,B、C、D 3组分别进行单纯热疗、单纯榄香烯及榄香烯联合热疗培养。分别通过细胞形态学、MTT法、DNA断端末端标记(TUNEL)法及流式细胞仪法,检测U251细胞增殖及凋亡情况。结果 B、C、D 3组细胞增殖抑制率及凋亡率均升高,但以D组最明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论榄香烯联合热疗对胶质瘤U251细胞具有抑增殖及促凋亡作用。     

HCMV IE1和pp65在人神经胶质瘤U251细胞中的时序表达

目的:研究人神经胶质瘤U251细胞对人巨细病毒(human cytomegalovirus, HCMV)的容许性,并探讨病毒蛋白IE1及pp65的时序表达特点.方法:HCMV感染U251细胞,以透射电镜观察U251细胞的形态学改变,以PCR方法检测HCMV核酸,于不同的时间点分别用抗蛋白IE1及蛋白pp65单克隆抗体进行免疫细胞化学染色,检测IE1及pp65的表达水平.结果:受染的U251细胞出现了明显的形态学改变,并用PCR方法检测到了HCMV核酸.免疫细胞化学染色表明,蛋白IE1在感染后30min～2h无表达,4h开始表达,14h达高峰,随后下降;蛋白pp65在感染后1 h为入侵型pp65,4～96h一直呈低水平表达,至120h表达急剧升高.结论:U251细胞是HCMV的容许细胞,HCMV在其中的表达具有时序性,但是其时序表达较在人成纤维细胞中延迟.     

枸杞多糖联合卡铂对人胶质瘤U251细胞生长抑制和凋亡作用

目的观察枸杞多糖联合卡铂对神经胶质瘤U251细胞生长抑制和凋亡作用。方法将U251细胞随机分为四组,A组（空白组）加常规培养液,B、C、D三组分别加枸杞多糖、卡铂、枸杞多糖＋卡铂联合组;通过细胞形态学、噻唑蓝法（methylthiazdyl tetrazolium,MTT）、DNA断端末端标记法（TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）及流式细胞仪,观察U251细胞生长抑制及凋亡情况。结果 B、C、D三组细胞生长抑制率及凋亡率均升高,但D组升高更明显,P〈0.05。结论枸杞多糖联合卡铂更易使U251胶质瘤细胞生长受抑制,且诱导其凋亡。     

抑制OGG1增加替莫唑胺对神经胶质瘤细胞U251的敏感性及机制探讨

目的探讨8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶（OGG1）对脑神经胶质瘤细胞增殖及替莫唑胺(temozolomide,TMZ化疗敏感性的影响。方法采用光镜、CCK-8、活性氧（ROS）检测试剂盒DCFH-DA探针、Western blot观察及检测替莫唑胺处理后神经胶质瘤细胞的形态、细胞活力、细胞内活性氧水平及OGG1蛋白的表达水平; Real time-PCR技术检测OGG1m RNA干扰率; OGG1下调后,U251的细胞存活率及OGG1蛋白的表达水平。结果与对照组相比,替莫唑胺处理后,U251细胞的生存能力显著下降（P<0.05）,ROS水平显著增加（P<0.05）,OGG1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,当替莫唑胺剂量为100μmol/L时,对U251细胞的损伤最大（P<0.01）。当OGG1 si RNA干扰U251细胞OGG1后,OGG1 m RNA及OGG1蛋白的表达水平降低（P<0.05）,而利用低剂量的替莫唑胺对U251细胞处理时,细胞存活率显著降低（P <0.05）。结论 OGG1通过ROS通路,介导替莫唑胺对神经胶质瘤细胞U251的氧化损伤,OGG1抑制可增强神经胶质瘤细胞对TMZ的化疗敏感性。     

CDK7抑制剂THZ1对人胶质瘤细胞U251放疗的增敏性

目的 探讨细胞周期蛋白酶抑制剂7(CDK7)THZ1对人胶质瘤细胞U251的体外放射增敏性.方法 体外培养人胶质瘤细胞U251.MTT检测THZ1对U251的毒性作用,绘制不同浓度(0、8、16、32、64、128、256、512 noml/L)THZ1处理下的细胞存活曲线,并计算其IC50及IC20,将IC20作为后...     

氯通道ClC-2反义寡核苷酸对顺铂作用下神经胶质瘤U251细胞侵袭力的影响

目的：探讨氯通道ClC-2 反义寡核苷酸(AON)抑制ClC-2基因表达对顺铂(DDP)作用下神经胶质瘤U251细胞侵袭力的影响,为ClC-2成为神经胶质瘤综合治疗的新基因靶点提供理论依据。方法：U251细胞按处理方法不同分为对照组（转染无义寡核苷酸）、AON组（转染ClC-2反义寡核苷酸）、DDP组（无义寡核苷酸与顺铂联用）和AON +DDP组（ClC-2反义寡核苷酸与顺铂联用）。应用RT-PCR检测相关基因ClC-2、cyclin D1 、MMP-2、MMP-9 mRNA表达;Transwell 小室侵袭实验检测各组细胞侵袭力;Transwell 小室迁移实验检测各组细胞迁移率。结果：与对照组比较,AON组、DDP组和AON +DDP组ClC-2、cyclin D1 、MMP-2、MMP-9 mRNA表达率降低（P＜0.05）;Transwell 小室侵袭实验中对照组、AON组、DDP组和AON +DDP组侵袭细胞数分别为81.00±4.58、42.01±4.36、48.33±2.52和12.67±5.13;与对照组比较,AON组、DDP组和AON +DDP组穿透细胞数明显降低（P＜0.05）。Transwell 小室迁移实验中AON 组、DDP组、AON +DDP组细胞迁移率（%）分别为72.40±2.20、51.48±1.29、37.87±1.50,与对照组比较均明显降低（P＜0.05）。结论：①转染ClC-2反义寡核苷酸能有效抑制ClC-2 mRNA表达;②抑制ClC-2 mRNA能降低U251细胞的迁移力和侵袭力;③ClC-2 mRNA表达降低可促进顺铂对U251细胞迁移力和侵袭力的抑制作用。     

银杏提取物(GBE)对人胶质瘤U251细胞增殖凋亡的影响

目的观察利用银杏提取物对人脑胶质瘤U251细胞增殖与凋亡的影响。方法将传代的U251细胞随机分为四组,A组加培养液,B、C、D组分别加浓度为50mg/ml、100mg/ml、200mg/ml的银杏叶提取物;观察倒置显微镜下TrypanBlue染色后各组U251脑胶质瘤细胞形态,用MTT法测算U251细胞增殖率,用流式细胞仪检测U251细胞凋亡率。结果 B、C、D组细胞增殖指数逐渐下降,与A组比较,P均<0.05;A、B、C、D组细胞凋亡率分别为0.3%±0.3%、10.6%±1.7%、21.9%±4.3%、33.5%±2.1%。B、C、D组与A组比较,P均<0.05。结论银杏叶(GBE)可抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖,并诱导其凋亡。     

人肠道病毒71型动物模型研究进展

人肠道病毒71型是婴幼儿手足口病的致病原之一,其严重的并发症可导致神经系统疾病,甚至死亡,是近期威胁中国儿童健康的因素之一.目前尚无临床疫苗可以预防该病毒感染,而EV71的动物模型是进行致病机理、疫苗评价和药物等研究的基础.本文对EV71的两种常用动物模型:小鼠和猕猴(Macaca mulatta)模型进行了描述,并对其在研究中的应用给与概括,为研究者选择合适的动物模型提供了依据.     

Effect of Human Cytomegalovirus Infection on Nerve Growth Factor Expression in Human Glioma U251 Cells

Objective To explore the change of endogenic nerve growth factor （NGF） expression in human glioma cells infected with human cytomegalovirus （HCMV）. Methods U251 cells were cultured in RPMI 1640 culture medium and infected with HCMV AD 169 strain in vitro to establish a cell model of viral infection. Morphologic changes of U251 cells were observed under inverted microscope before and after infection with HCMV. Expression of NGF gene and protein of cells was detected by RT-PCR and Western blotting before and after infection with HCMV. Results The cytopathic effects of HCMV-infected cells appeared on day 5 after infection. However, differential NGF expression was evident on day 7. NGF expression was decreased significantly in U251 cells on day 7 after infection in comparison with control group （P〈0.05）. Conclusion HCMV can down-regulate endogenous NGF levels in human glioma cell line U251.     

人胶质瘤细胞株U-251及其诱导肿瘤干细胞对化疗药物敏感性的研究

目的 观察替尼泊苷 (VM-26)、依托泊苷 (VP-16) 及氟尿嘧啶 (5-FU) 对U-251人胶质瘤细胞及U-251胶质瘤干细胞的生长抑制作用,探讨胶质瘤干细胞对传统化疗药物敏感性.方法 运用无血清培养法从人胶质瘤细胞株U-251中培养分离出胶质瘤干细胞,然后用MTY比色法测定氟尿嘧啶、依托泊苷、替尼泊苷对U-251胶质瘤细胞及U-251胶质瘤干细胞的增殖抑制作用,比较U-251胶质瘤细胞及U-251胶质瘤干细胞对这3种化疗药物的敏感性.结果 U-251胶质瘤细胞对血浆峰浓度值的VM-26、VP-16和5-FU的敏感性明显高于U-251胶质瘤十细胞.结论 对U-251胶质瘤的生长起关键作用的U-251胶质瘤干细胞,对血浆峰浓度值下的VM-26、VP-16和5-FU 不敏感,胶质瘤的治疗应靶向胶质瘤干细胞.     

天然红心鸭蛋紫杉紫素对人胶质瘤细胞增殖、凋亡的干预作用

目的:研究天然红心鸭蛋紫杉紫素对人星形胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的干预作用。方法:研究对象为U251人星形胶质瘤细胞系,细胞增殖采用MTT比色法检测,细胞凋亡采用荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术法检测,U251细胞浆中钙离子浓度采用LSCM测定。结果:天然红心鸭蛋紫杉紫素对胶质瘤细胞的生长具有明显的抑制作用,使用小剂量(0.25μmol·L-1)的紫杉紫素能有效地诱导胶质瘤细胞凋亡,并显著提高胶质瘤细胞内Ca2+浓度。结论:天然红心鸭蛋紫杉紫素可以显著抑制U251细胞增殖,且呈时间-效应和剂量-效应依赖关系,同时使U251细胞内Ca2+浓度升高,诱导U251细胞凋亡。     

中华眼镜蛇毒组分对神经胶质瘤细胞U251生长的抑制作用

目的:探讨中华眼镜蛇毒卡迪(KD)中进一步分离纯化的10个组分KD Ⅰ-l、KD Ⅰ-1 H、KD Ⅰ-2、KDQ Ⅰ-2、KDⅡ、KDⅡ-2、KDⅡ-3,KDⅢ-1,KDⅢ-2和KDⅢ-2'对神经胶质瘤细胞U251的抑制作用.方法:采用MTT法和台盼蓝拒染法观察各组分对U251细胞增殖的影响.结果:在l～100 μg/mL的浓度范围内用MTT法筛选出3个具有显著抑制作用的组分KD、KDⅡ-3和KDⅢ-1.对以上3种组分再次细分浓度后(5、10、30、50、80、100 μg/mL)的MTT结果显示以上三种组分仍然具有显著的抑制作用.选取了KDⅢ-1和KDⅡ-3进一步细分浓度后(1、3.75、7.5、15、30 μg/mL)的MTT结果显示KDⅢ-1和KDⅡ-3组分在7.5 μg/mL时的抑制率分别为63.94%和62.15%,且2种组分在1～30 μg/mL呈现剂量效应关系(r=0.694,P＜0.05;r=0.732,P＜0.05).半数抑制浓度分别为6.65 μg/mL和10.54 μg/mL.KDⅡ-3的生长曲线显示药物的各个浓度(1、3.75、7.5、15、30 μg/mL)对肿瘤细胞均有抑制作用,以24 h的抑制作用最为明显.在7.5～15 μg/mL浓度范围内呈现明显抑制作用.结论:分离纯化的10组分对U251细胞有不同程度的抑制作用,尤以KDⅡ-3的抑制作用最为显著,并有明显的剂量效应关系.     

去泛素化酶USP9X对胶质瘤细胞U251放射敏感性的影响

目的:通过检测放疗对胶质瘤细胞β-catenin及去泛素化酶USP9X表达的影响,以期了解去泛素化酶USP9X与胶质瘤细胞放射敏感性的关系。方法:培养胶质瘤细胞U251细胞株,通过不同放疗剂量照射后,Realtime PCR法检测细胞中USP9X与β-catenin基因表达,Western Blotting法检测USP9X与β-catenin的蛋白表达,流式细胞仪检测不同放射剂量处理后U251细胞凋亡水平。结果:Real Time PCR结果显示在1Gy放疗剂量照射时USP9X和β-catenin的表达水平最高,随后随放疗剂量增加,USP9x和β-catenin基因表达成下降趋势,WesternBlotting结果显示USP9x、β-catenin的蛋白表达量与基因表达水平成正相关,凋亡实验结果显示细胞凋亡率与放射剂量成正相关。结论:在1Gy放疗剂量照射时USP9X和β-catenin的表达水平最高,证明小剂量放疗可提高U251细胞的放射抵抗,随后随放疗剂量增加,USP9x和β-catenin的表达成下降趋势,证明USP9x与胶质瘤细胞的放射后凋亡水平相关。     

HIF-1α反义寡核苷酸体外对人脑胶质瘤细胞U251的作用

目的:研究缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,探讨以H IF-1α为靶点进行反义寡核苷酸转染治疗胶质瘤的有效性。方法:设计合成针对H IF-1α的寡核苷酸片段.实验分6组:空白对照组、脂质体组、正义组和反义组(1.0μmol/l、2.5μmol/l和5.0μmol/l)。利用脂质体包裹瞬时转染人胶质瘤细胞系U251,MTT法检测细胞增殖;采用AO/EB染色及末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的变化。结果:转染后各组细胞增殖抑制率分别为(1.30±0.05)%、(1.98±0.35)%、(2.47±0.48)%、(22.30±2.08)%、(33.60±4.19)%和(56.20±4.22)%。转染H IF-1α反义寡核苷酸组较各对照组相比细胞增生下降,凋亡增加(P<0.01)。结论:H IF-1α反义寡核苷酸转染人胶质瘤U251细胞系可以抑制细胞增生并诱导胶质瘤细胞凋亡,H IF-1α有望成为一个极具潜力的肿瘤治疗的靶点。     

反义PCNA基因片断抑制胶质瘤U251细胞增殖

目的 研究反义PCNA基因片断对胶质瘤细胞株U251的细胞增殖的抑制作用。方法 用脂质体介导寡核苷酸转染培养的U251胶质瘤细胞，以MTT法检测细胞增殖活性，RT-PCR、原位杂交和免疫组织化学方法分别检测相关基因和蛋白的表达，通过流式细胞仪检测细胞周期和TUNEL法检测细胞凋亡。结果 不同浓度的反义寡核苷酸对肿瘤细胞的增殖活性均有抑制作用，且有一定的剂量依赖性。PCNA反义寡核苷酸能够诱导胶质瘤细胞凋亡，且与反义寡核苷酸浓度和作用时间有关。结论 反义PCNA寡核苷酸片断能有效地抑制胶质瘤细胞的体外增殖，且能够诱导胶质瘤细胞的凋亡。     

胶质瘤U251干细胞的培养、分离以及体内成瘤的实验研究

目的 以U 251为研究对象探索恶性胶质瘤的新治疗方案,培养恶性胶质瘤干细胞并同时建立肿瘤模型,为下一步体内靶向治疗奠定肿瘤模型基础.方法 培养普通的U251细胞,并在无血清的条件下加入EGF、bFGF、LIF、B27因子,培养获得U251干细胞;分别制备浓度为3.5×107/mL的U251和U251干细胞悬液,并分别种植于BALB/c Nude小鼠左右臀部皮下,观察并测量荷瘤体积.结果 通过以上方法培养,获得U251干细胞:在相同浓度的条件下,干细胞移植组荷瘤生长速度明显比普通的恶性胶质瘤快,并且荷瘤体积明显大于普通的U251细胞组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 U251恶性胶质瘤干细胞比普通U251胶质瘤细胞更具有高生长率、高侵袭性、和高表达CD133抗原;应用U251恶性胶质瘤干细胞建立肿瘤模型更优于普通U251胶质瘤细胞.     

miR-382-5p过表达介导PTEN的表达下调对人脑胶质瘤U251细胞恶性生物学行为的影响

  目的  探究miR-382-5p过表达对人脑胶质瘤U251细胞恶性生物学行为的影响。  方法  将miR-382-5p mimic转染入U251细胞,逆转录-聚合酶链反应检测miR-382-5p、磷酸酶-张力蛋白同源物（PTEN） mRNA水平;生物信息学预测miR-382-5p与PTEN存在碱基结合位点,构建PTEN pcDNA载体过表达,荧光素酶报告实验检测miR-382-5p与PTEN靶向关系,将细胞随机分为4组:Control组、mimics组、pc-PTEN组和mimics+pc-PTEN组进行后续实验,逆转录-聚合酶链反应检测各组细胞PTEN水平;克隆形成法检测细胞增殖;逆转录-聚合酶链反应检测Ki67、 Survivin、 c-Myc mRNA水平;Transwell检测细胞侵袭能力;蛋白免疫印迹检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。  结果  miR-382-5p和PTEN存在直接靶向作用关系,与Control组相比较,mimics组miR-382-5p mRNA水平升高（P<0.05）,PTEN mRNA水平降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,Ki67、Survivin mRNA水平降低（P<0.05）,c-Myc mRNA水平升高（P<0.05）,细胞侵袭数降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平升高（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白水平降低（P<0.05）。pc-PTEN组miR-382-5p mRNA水平降低（P<0.05）,PTEN mRNA水平升高（P<0.05）,细胞克隆形成率升高（P<0.05）,Ki67、Survivin mRNA水平升高（P<0.05）,c-Myc mRNA水平降低（P<0.05）,细胞侵袭数升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平降低（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白水平升高（P<0.05）;与pc-PTEN组相比较,mimics+pc-PTEN组miR-382-5p mRNA水平升高（P<0.05）,PTEN mRNA水平降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,Ki67、Survivin mRNA水平降低（P<0.05）,c-Myc mRNA水平升高（P<0.05）,细胞侵袭数降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平升高（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白水平降低（P<0.05）。  结论  miR-382-5p过表达介导PTEN的表达下调可抑制胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、生长和上皮细胞-间充质转化。