慢性应激动脉粥样硬化载脂蛋白E基因敲除小鼠内脏病理变化

目的观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞(hUVEC)Fractalkine表达的影响并探讨其可能的作用机制。方法采用胰蛋白酶消化法原代培养hUVEC,取2～5代用于实验,培养的hUVEC随机分为:①对照组,DMEM培养基;②ox-LDL不同浓度组,不同剂量的ox-LDL(5、25、50和75mg/L)培养细胞48h;③ox-LDL作用不同时间组,50mg/Lox-LDL作用不同时间(6、12、24、48和72h);④ox-LDL+SB203580组,预先用p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)特异性阻....     

鸢尾素改善载脂蛋白E基因敲除糖尿病小鼠动脉粥样硬化

目的:探索鸢尾素(Irisin)对动脉粥样硬化的作用及其可能机制。方法:建立载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠糖尿病模型(n=20)并分为鸢尾素组(n=10)、糖尿病对照组(n=10),同时设立空白对照组(n=10),分别静脉注射鸢尾素或等量生理盐水。鸢尾素干预4周后,测定血管内皮依赖性舒张功能。干预12周后,检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C-反应蛋白、白细胞介素-6(IL-6)及氧化低密度脂蛋白等炎性因子水平;油红O及苏木素伊红(HE)染色分析主动脉粥样斑块表面积及横断面积;抗CD68和抗CD90免疫组化染色测定斑块巨噬细胞及T淋巴细胞浸润;实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉壁IL-6、白细胞介素-10、TNF-α等炎性因子信使核糖核酸(m RNA)转录水平。结果:鸢尾素组与糖尿病对照组相比,小鼠内皮依赖性舒张功能改善,血中炎性因子水平降低,粥样斑块表面积[(22.57±2.17)%vs(35.09±2.38)%,P0.05]及横断面积[(19.36±1.85)%vs(25.53±7.87)%,P0.05]减小,斑块巨噬细胞[(30.5±2.79)%vs(41.34±9.13)%]、T淋巴细胞[(28.11±4.24)%vs(35.79±9.11)%]浸润减少,主动脉壁炎性因子m RNA转录水平下降[IL-6:1.76±0.50 vs 3.78±1.15;TNF-α:1.05±0.30 vs 2.11±0.48;细胞内黏附分子-1:1.96±0.69 vs 2.71±0.72;血管细胞黏附分子-1:0.87±0.21 vs 1.45±0.25;单核细胞趋化蛋白-1:1.34±0.34 vs 1.77±0.55],差异有统计学意义(P0.05)。结论:鸢尾素可改善Apo E-/-糖尿病小鼠动脉粥样硬化,内皮保护及抗炎反应是其保护血管的重要机制。鸢尾素具有潜在的防治动脉粥样硬化的临床价值。     

血脂康对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

观察血脂康对载脂蛋白E基因敲除小鼠高脂血症及动脉粥样硬化的影响.16只6周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为高脂血症组(n=8)和血脂康组(n=8),相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠为正常对照组(n=8).血脂康组每只灌服血脂康4 mg/d,高脂血症组、正常对照组每只灌服生理盐水0.4 mL/d.连续灌胃14周后下腔静脉取血测血脂,再用10%福尔马林灌注后,取主动脉进行形态学观察及图像分析.结果发现,高脂血症组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平明显高于正常对照组(P<0.05),但血脂康组血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平与高脂血症组相比则明显下降(P<0.05).图像分析结果发现,高脂血症组动脉粥样硬化病变显著,与正常对照组相比斑块总面积明显增加(P<0.05);光镜下多为粥样硬化期,管壁厚薄不均,可见由大量泡沫细胞形成的脂纹脂斑期病变和由大量泡沫细胞及胆固醇结晶形成的粥样斑块期病灶;血脂康组病变较高脂血症组明显减轻,血脂康组与高脂血症组相比斑块总面积明显减小(P<0.05),主要为早期粥样硬化,管壁厚薄较均匀,未见明显脂纹脂斑及粥样斑块期病灶;正常对照组为正常动脉壁,厚薄均匀,无动脉粥样硬化病灶.结果提示,血脂康有降低载脂蛋白E基因敲除小鼠血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平及减轻动脉粥样硬化的作用.     

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化早期血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞

目的　探讨动脉外膜成纤维细胞表型转化与早期动脉粥样硬化病灶形成的关系。　方法　选择6周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠和野生型C57BL/6小鼠,高脂喂养2、4和8周后,在各个时间点处死动物后选取升主动脉制备连续切片,用免疫组织化学方法观察不同时间血管外膜α平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β₁的表达变化。体外培养高脂喂养2周的载脂蛋白E基因敲除小鼠和C57BL/6小鼠动脉外膜成纤维细胞,免疫荧光染色检测α平滑肌肌动蛋白的表达,通过透射电镜观察细胞超微结构,Western　Blot检测α平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β₁蛋白的表达。结果　体内实验发现载脂蛋白E基因敲除小鼠高脂喂养2周、4周后血管外膜检测到α平滑肌肌动蛋白的阳性表达,8周后呈现弱阳性,随高脂喂养时间增加,载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉外膜细胞转化生长因子β₁表达增强。而C57BL/6小鼠血管外膜细胞一直未检测到α平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β₁的阳性表达。体外实验观察到载脂蛋白E基因敲除小鼠血管外膜成纤维细胞部分表现为α平滑肌肌动蛋白阳性,肌丝明显增多,　α平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β₁蛋白表达水平都明显高于野生型C57BL/6小鼠（P<0.05）,而C57BL/6小鼠血管外膜成纤维细胞则表现为α平滑肌肌动蛋白阴性,超微结构无明显改变。结论　动脉粥样硬化病灶形成早期血管外膜成纤维细胞表型即转化为肌成纤维细胞。     

磷脂转运蛋白与脂蛋白代谢和动脉粥样硬化

动脉粥样硬化性心脑血管疾病是困扰人类健康的首要慢性炎症性疾病。而脂蛋白代谢异常是公认的动脉粥样硬化主要危险因素。2001年哥伦比亚大学的研究人员发现磷脂转运蛋白可以通过影响脂蛋白代谢进而改变动脉粥样硬化的易感性,从而开启了长达十多年的磷脂转运蛋白热点研究。　从动物实验到人群调查使得人们对磷脂转运蛋白在脂蛋白代谢和动脉粥样硬化中作用的认识不断深入。     

鸢尾素对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的研究鸢尾素对载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化的影响。方法将ApoE~(-/-)小鼠随机分为正常对照组、动脉粥样硬化模型组、鸢尾素组,每组10只,分别给予普通饮食+生理盐水、高脂饮食+生理盐水、高脂饮食+鸢尾素,饲养至12周后处死,处死前测体重,用化学法测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。采用HE染色和整体油红O染色分析主动脉粥样斑块面积大小,实时荧光定量(qRT-PCR)检测主动脉CD36、NF-κB p65的mRNA表达,Western blot检测主动脉CD36、NF-κB p65、SOD的蛋白表达。结果动脉粥样硬化模型组主动脉斑块面积明显高于正常对照组,内膜明显增厚,而鸢尾素组较动脉粥样硬化模型组斑块面积减少,内膜增厚程度下降。与正常对照组比较,动脉粥样硬化模型组小鼠体重、TC、TG、LDLC、MDA水平升高,NF-κB p65、CD36mRNA和蛋白表达增加,而血清SOD活性、HDLC水平减低(P0.05)。与动脉粥样硬化模型组比较,鸢尾素组小鼠体重、TC、TG、LDLC、MDA水平降低,NF-κB p65、CD36 mRNA和蛋白表达下调,而血清SOD活性、HDLC水平升高(P0.05)。结论鸢尾素能减轻ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的发生发展,这可能与其降低小鼠体重和血脂、抑制炎症反应、抗氧化应激有关。     

载脂蛋白E基因敲除小鼠不同周龄动脉粥样硬化的病理变化

目的研究载脂蛋白E基因敲除小鼠不同时间段的动脉粥样硬化的病理进展，探讨不同饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展的影响。方法采用6周龄40只载脂蛋白E基因敲除小鼠，20只给予高脂膳食饲料，20只给予普通饮食，分别于15周龄、19周龄、24周龄、28周龄、36周龄5个时间段各取4只麻醉处死做病理检测。结果随着时间进展，载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化程度逐渐加重，经历了从脂质条纹到粥样斑块形成典型的动脉粥样硬化病理过程；高脂饮食组比普通饮食组的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化病理改变严重。结论载脂蛋白E基因敲除小鼠是研究动脉粥样硬化的可靠模型，高脂饮食可以加速载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的病理进程。     

厄贝沙坦抑制高胆固醇诱导载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的炎症机制

目的探讨厄贝沙坦对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的影响及炎症机制。方法载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为普食组、高胆固醇饮食组、高胆固醇饮食 厄贝沙坦组,每组15只,分别予蒸馏水、蒸馏水、厄贝沙坦10 mg/(kg.d)灌胃12周。无创血压系统测小鼠血压;内眦动脉取血检测血清总胆固醇和甘油三酯水平;冰冻切片光镜下定位主动脉根部,油红O染色评估斑块大小;实时定量聚合酶链反应和Western blotting方法检测主动脉肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、单核细胞趋化蛋白1和血管细胞粘附分子1的表达。结果高胆固醇饮食组小鼠血脂水平明显升高(P<0.01),且斑块面积明显高于普食组(P<0.01);厄贝沙坦明显减小斑块面积(P<0.01),同时降低肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、单核细胞趋化蛋白1和血管细胞粘附分子1的表达(P<0.01)。结论血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂厄贝沙坦可以通过降低炎症因子的表达,从而达到抑制动脉粥样硬化发生发展的目的。     

凝血因子V莱顿突变对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的 评价凝血因子V莱顿突变(FvL)对动脉粥样硬化的影响.方法 建立FvL与载脂蛋白E(ApoE)基因复合突变小鼠,并分析其动脉粥样硬化形成和纤维蛋白沉积情况.结果 小鼠52周龄时,FvL纯合子ApoE-/-(FvQ/Q APOE-/-)小鼠动脉粥样硬化范围明显大于野生型ApoE-/-(Fv+/+ApoE-/-),小鼠,FvQ/Q ApoE-/-比Fv+/+ApoE-/-为(5.0±1.1)%比(2.2±0.4)%,P＜0.005;FvL杂合子ApoE-/-(FvQ/+ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化范围位于FvQ/Q ApoE-/-小鼠和Fv+/+ApoE-/-小鼠之间,与两者的差异均无统计学意义,FvQ/+ApoE-/-比FvQ/QApoE-/-为(2.9±0.6)%比(5.0.±1.1)%,P＞0.05,FvQ/+ApoE-/-比Fv+/+ApoE-/-为(2.9±0.6)%比(2.2±0.4)%,P＞0.05.FvQ/Q ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块内的纤维蛋白沉积同样明显高于Fv+/+ApoE-/-小鼠,FvQ/Q ApoE-/-比Fv+/+ApoE-/-为(3.4±0.5)%比(1.8±0.4)%,P＜0.05.结论 FvL纯合子明显增加ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化程度及动脉粥样硬化斑块内的纤维蛋白沉积,提示FvL突变可能是重要的促进动脉粥样硬化形成的因素,临床上患者出现严重的动脉粥样硬化可能合并FvL遗传基因缺陷.     

Orai1在载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块形成中的表达

目的探讨Orai1在载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成过程中的表达。方法选取7~8周龄雄性Apo E-/-小鼠及野生型C57BL/6J小鼠,高脂饲喂20、27和33周后,在各个时点处死动物。取主动脉制备连续切片,HE、Masson染色计算机图像分析仪测定斑块面积占管腔面积百分比,及胶原成分占斑块面积百分比;油红O染色分析斑块中脂质含量;免疫组织化学染色测定平滑肌细胞阳性表达Orai1的百分比;Western Blot定量分析Orai1在易损斑块形成过程中的动态表达。结果与同周龄C57BL/6J小鼠相比,Apo E-/-小鼠主动脉Orai1表达增高,且随着其周龄增加,Orai1在Apo E-/-小鼠主动脉的表达动态升高(P0.05)。结论 Orai1参与动脉粥样硬化斑块形成的病理过程,在其形成过程中其表达上调。     

载脂蛋白E及其基因敲除小鼠的研究进展

载脂蛋白E是血浆脂蛋白的重要组成成分,在脂质代谢中发挥着重要的作用。它的缺失或者变异都会引起体内的代谢异常或者组织器官的功能障碍,从而导致一系列的疾病和并发症。载脂蛋白E基因敲除小鼠问世以来,它给研究载脂蛋白E的功能及其在各种相关疾病当中的作用提供了广阔的平台。近年来,载脂蛋白E基因小鼠已成为动脉粥样硬化相关研究中最受欢迎的动物模型之一。     

生长素对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块与炎症因子的影响

目的观察生长素对载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠血浆白细胞介素8(IL-8)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平和血管壁核转录因子κBp65(NFκBp65)表达及动脉粥样斑块的影响。方法8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠12只饲以西方类型膳食12周建立动脉粥样硬化模型,遗传背景相同的6只8周龄雄性C57BL/6J小鼠饲以同类型膳食作对照。第8周时模型组分为腹腔内注射生长素(100μg/kg)组(n=6)和注射生理盐水(0.1mL)组(n=6),C57BL/6J小鼠亦给予生理盐水(0.1mL)腹腔内注射。第12周时眼眶取血,分离血浆,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测IL-8、MCP-1、TNF-α水平。取小鼠主动脉进行苏丹Ⅳ染色,观察主动脉粥样硬化病变面积占主动脉内膜面积的比例,行主动脉窦HE及油红O染色,观察主动脉窦动脉粥样斑块面积占管腔总面积的比例,行主动脉免疫组化染色,观察NFκBp65的表达。结果与C57BL/6J小鼠比较,ApoE~(-/-)小鼠和ApoE~(-/-)+生长素小鼠总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇高[(6.7±0.5),(7.6±2.0)比(5.5±0.2)mmol/L,(5.6±0.3),(6.0±0.5)比(2.2±0.1)mmol/L,均P0.05],ApoE~(-/-)+生长素小鼠高密度脂蛋白胆固醇比ApoE~(-/-)组高[(0.5±0.1)比(0.3±0.1)mmol/L,P0.05]。与C57BL/6J小鼠比较,ApoE~(-/-)小鼠主动脉粥样硬化病变面积占主动脉内膜面积比例增加[(15.1±1.7)%比0],ApoE~(-/-)+生长素小鼠主动脉粥样病变面积占主动脉内膜面积比例较ApoE~(-/-)小鼠降低[(10.1±0.5)%比(15.1±1.7)%,P0.05];C56BL/6J小鼠主动脉窦无动脉斑块形成(0%),ApoE~(-/-)组和ApoE~(-/-)+生长素组均有动脉斑块形成,但ApoE~(-/-)+生长素组小鼠主动脉窦斑块面积占管腔总面积的比例较ApoE~(-/-)组低[(22.6±2.2)%比(32.4±3.2)%,P0.01]。ApoE~(-/-)小鼠TNF-α、IL-8和MCP-1水平较C57BL/6J小鼠增高[分别为(24.5±1.7)比(10.1±0.5)ng/L,(33.5±16.7)比(16.8±8.8)ng/L,(78.0±5.6)比(13.5±1.8)ng/L;均P0.05],ApoE~(-/-)+生长素组TNF-α、IL-8和MCP-1水平较ApoE~(-/-)组降低[分别为(15.5±1.0)比(24.5±1.7)ng/L,(22.0±1.2)比(33.5±16.7)ng/L,(45.5±4.5)比(78.0±5.6)ng/L;均P0.05]。ApoE~(-/-)小鼠血管壁NF-κBp65表达较C57BL/6J增高,ApoE~(-/-)小鼠+生长素组血管壁NF-κBp65表达较ApoE~(-/-)小鼠组降低(P0.05)。结论生长素通过抑制炎症反应减少ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样斑块形成。     

瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因敲除(apoE-/-)小鼠主动脉粥样硬化的影响.方法 取apoE-/-小鼠18只建立动脉粥样硬化模型,C57BL/6小鼠12只为对照组.apoE-/-小鼠予高脂饲料,C57BL/6小鼠予普通饲料.12周后,随机抽取C57BL/6小鼠和apoE-/-小鼠各6只,判断是否成模.将成模后余下的12只apoE-/-小鼠随机分为模型组和瑞舒伐他汀治疗组(瑞舒伐他汀10 mg·kg-1·d-1灌胃),每组6只.余下的6只C57BL/6小鼠作为对照组.再过12周后处死小鼠,行血脂及主动脉HE、Masson、油红O染色观察动脉斑块,免疫组织化学方法检测主动脉组织平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、巨噬细胞表面分子-3(Mac-3)表达.结果 模型组小鼠胆固醇、低密度脂蛋白水平均高于对照组(P均＜0.01),甘油三酯水平与对照组比较差异无统计学意义.模型组小鼠主动脉组织内可见明显动脉粥样硬化斑块形成,α-SMA、TGF-β1和Mac-3表达均较高于对照组(P均＜0.01).瑞舒伐他汀治疗组小鼠胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯水平与模型组比较差异无统计学意义,但斑块内脂肪含量少于模型组,胶原含量多于模型组.治疗组α-SMA表达与模型组比较差异无统计学意义,治疗组TGF-β1、Mac-3表达均低于较模型组(P均＜0.01).结论 瑞舒伐他汀可以减轻apoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中的脂质沉积和炎症反应,可以增加其胶原含量,利于斑块的稳定,具有抗动脉粥样硬化的作用,对血脂无影响.

Abstract：

Objective To investigate the effect of rosuvastatin on atherosclerosis in apoE-knockout ( apoE - / - ) mice. Methods Eighteen 6-week-old apoE - / - mice fed with high fat diet were used as atherosclerosis models, twelve 6-week-old C57BL/6 mice fed with normal diet were used as control. After twelve weeks, six apoE -/ - mice were used to observe the formation of atherosclerosis. Another 12 apoE -/- mice were divided into placebo treated group (n =6) and rosuvastatin group (n =6,10 mg· kg-1 ·d -1 per gavage) and treated for 12 weeks. Then, blood was collected for measuring lipid, aorta was prepared for morphologic study (HE, Oil red O, Masson) and immunohistochemical analysis (α-smooth activor protein, transforming growth factor β1, macrophage surface molecule-3 ). Results Serum cholesterol and low density lipoprotein levels were significantly higher in apoE -/- mice fed with high fat diet than in C57/ BL6 mice( all P ＜0. 01 )while triglyceride level was similar between the two groups, these were not affected by rosuvastatin. Similarly, atherosclerotic lesion area in apoE -/ - mice fed with high fat diet was also not significantly reduced by rosuvastatin, while lipid deposition could be significantly reduced and collagen deposition could be significantly increased in the aortic atherosclerotic lesions by treatment with rosuvastatin.Upregulated TGF-β1 and Mac-3 expression in the aortic atherosclerotic lesions in apoE -/- mice fed with high fat diet could also be significantly reduced by rosuvastatin (all P ＜ 0. 01 ), suggesting reduce inflammatory responses in the atherosclerotic lesion and stable atherosclerotic plaque post rosuvastatin treatment. Conclusion Reducing inflammatory responses and stabilizing plaque properties might contribute to the anti-atherosclerosis effects of rosuvastatin in mice high fat diet fed apoE -/- mice.     

银杏内酯B对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的评价银杏内酯B对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响。方法选用8周龄雄性ApoE-/-小鼠,给予高脂饮食喂养。将动物分为模型组、银杏内酯B(GB)组和阿司匹林(ASA)组。8周后处死小鼠,进行血脂测定和血浆炎症蛋白ELISA测定,免疫组织化学法分析主动脉斑块。用健康人血小板分析血小板聚集,使用检测血小板聚集仪检测血小板聚集。Western Blotting法分析Akt磷酸化。结果银杏内酯B组小鼠血浆趋化因子RANTES水平下降了47%,阿司匹林组下降了69%,与模型组比较差异有显著性。与模型组比较,血小板第4因子(PF4)水平银杏内酯B组下降了45%(P<0.05),阿司匹林组下降了11%(P>0.05)。主动脉油红O染色显示与模型组比,银杏内酯B组脂质沉积减少40%,阿司匹林组减少31%,差异有统计学意义。巨噬细胞染色表明银杏内酯B组和阿司匹林组主动脉斑块处巨噬细胞浸润比模型组分别减少51%和11%,差异均有统计学意义。斑块局部炎症蛋白分析表明,与模型组比较,血管细胞黏附分子1(VCAM-1)表达在银杏内酯B组减少69%,阿司匹林组减少32%,差异有统计学意义。银杏内酯B组RANT...     

中西药物对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的干预作用

美国洛克菲勒大学生化遗传与代谢实验室和北卡罗莱那大学病理遗传实验室应用胚胎干细胞基因敲除 ( geneknockout)技术 ,于 1992年培育成功载脂蛋白E (apolipoproteinE ,ApoE)基因敲除小鼠 ,亦称ApoE基因缺陷小鼠或ApoE基因摧毁小鼠(本文中统称为ApoE基因敲除小鼠 )。ApoE是清除乳糜微粒和极低密度脂蛋白的受体的配体 ,因此 ,缺乏ApoE则会导致血液循环中富含胆固醇的物质积累而更加容易引起动脉粥样硬化(atherosclerosis ,AS)病灶形成。ApoE基因敲除小鼠无论正常或高脂饮食均可形成严重的高脂血症及AS病灶[1,2 ] ,成为高脂血症及AS…     

慢性间歇低氧激活载脂蛋白E基因敲除小鼠补体系统促进动脉粥样硬化进展的研究

目的:观察慢性间歇低氧(CIH)下载脂蛋白E(ApoE-/-)小鼠补体系统激活情况,探讨CIH激活补体系统的机制.方法:将18只ApoE-/-小鼠,随机分为常氧组(n=9)和低氧组(n=9),给予所有小鼠高脂饮食喂养,以电脑程序控制低氧舱内氧浓度在5％～21％内循环以建立CIH诱导的动脉粥样硬化模型.HE染色检测斑块面...     

Exendin-4对高脂饮食载脂蛋白E基因敲除小鼠脂代谢及炎症因子的影响

目的观察Exendin-4对高脂饮食载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠脂代谢、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响。方法将40只雄性ApoE^-/-小鼠随机分为普通饮食组(10只)和高脂饮食组(30只),喂养8周后再将高脂饮食组分为非药物干预组、Exendin-4低剂量组、Exendin-4高剂量组,每组10只。Exendin-4低剂量组、Exendin-4高剂量组ApoE^-/-小鼠分别给予20μg/(kg·d)、100μg/(kg·d)Exendin-4腹腔内注射;普通饮食组、非药物干预组ApoE^-/-小鼠给予0.1 mL生理盐水腹腔内注射。第12周末处死小鼠,进行相关检测,采用全自动生化分析仪检测小鼠总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;RT-PCR及Western Blot法分别检测主动脉IL-6、MCP-1及VCAM-1 mRNA和蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中IL-6、MCP-1及VCAM-1水平。结果与普通饮食组相比,非药物干预组ApoE^-/-小鼠TC、LDL-C水平明显升高(P<0.01),应用Exendin-4干预后,Exendin-4高剂量组TC、LDL-C水平明显降低(P<0.05或P<0.01);各组小鼠血清中TG、HDL-C含量虽有变化,但差异无统计学意义(P>0.05)。与非药物干预组相比,Exendin-4处理可以降低主动脉IL-6、MCP-1及VCAM-1 mRNA及蛋白表达,同时下调血浆中IL-6、MCP-1及VCAM-1蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论Exendin-4可以改善高脂饮食ApoE^-/-小鼠脂代谢并降低主动脉IL-6、MCP-1及VCAM-1的表达。     

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块中血小板因子4和Toll样受体2的表达

目的观察高脂饲养的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块表达Toll样受体2和血小板因子4的情况,探讨血小板因子4对内皮细胞Toll样受体2表达的影响。方法高脂饲料喂养载脂蛋白E基因敲除小鼠12周,建立动脉粥样硬化模型。安乐死处死动物,原位灌流固定,取主动脉于10%中性缓冲福尔马林中固定,石蜡包埋连续切片,HE染色观察动脉粥样硬化斑块形态,免疫组织化学检测斑块中Toll样受体2和血小板因子4的表达。结果载脂蛋白E基因敲除小鼠血脂水平明显增高,主动脉HE染色可见态动脉粥样硬化病变。在载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉富含脂质斑块中Toll样受体2表达上调,其中血管内皮细胞、巨噬细胞表达Toll样受体2明显增多。载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉斑块中也发现有血小板因子4表达,主要在内皮细胞和动脉粥样硬化斑块肩部。结论1.载脂蛋白E基因敲除小鼠粥样斑块中Toll样受体2表达上调,并且Toll样受体2主要表达在粥样斑块的内皮细胞和巨噬细胞上。2.载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块中可见血小板因子4表达。     

巨细胞病毒感染的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生的可能机制

目的研究巨细胞病毒感染引起的免疫损伤导致动脉粥样硬化发生的可能机制。方法载脂蛋白E基因敲除的8周龄C57BL/6雌性小鼠,随机分成对照组、高脂饮食组、鼠巨细胞病毒感染组和高脂饮食 鼠巨细胞病毒感染组。在不同时间段分别处死小鼠,截取主动脉,利用逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学等方法检测主动脉单核细胞趋化因子1、生长相关癌基因α、Fractalkine和调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子的表达。结果第8周时,巨细胞病毒感染后可显著提高生长相关癌基因α在主动脉的表达,并可诱导Fractalkine、活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子和单核细胞趋化因子1的表达,而在高脂饮食 巨细胞病毒感染的小鼠主动脉组织中,Fractalkine的表达较其它组明显升高。第12周时,高脂饮食 巨细胞病毒感染组中Fractalkine和活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子和单核细胞趋化因子1的表达较其它组更高些。免疫组织化学结果发现,高脂饮食后,生长相关癌基因α、Fractalkine和单核细胞趋化因子1的表达均有明显升高,但Fractalkine的表达较局限,单核细胞趋化因子1和生长相关癌基因α在整个血管壁都存在,但以内膜较高。单纯巨细胞病毒感染组与高脂饮食组相似,可诱导单核细胞趋化因子1、生长相关癌基因α和Fractalkine的表达,但不同的是Fractalkine的表达广泛存在。而高脂饮食 巨细胞病毒感染组单核细胞趋化因子1、生长相关癌基因α和Fractalkine表达的升高更为明显,尤其是斑块部位。结论巨细胞病毒感染后通过调节趋化因子表达水平的改变,从而促进炎症细胞的迁移,促进动脉粥样硬化的发生。     

苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成及小肠胆固醇转运相关基因表达的影响

目的 探讨苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠胆固醇转运相关基因表达的影响,阐明苦瓜蛋白在动脉粥样硬化发生中的作用机制.方法 选用36只6周龄的雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠,随机分为普食组(对照组)、高脂高胆固醇饲料组(高脂组)、高脂高胆固醇+苦瓜蛋白组(苦瓜蛋白组).喂养12周后处死,比较各组血脂水平,苏丹Ⅳ染色观察全主动脉粥样硬化病变程度,主动脉窦冰冻切片油红O染色检测脂质沉积,逆转录聚合酶链反应和Western Blot分别检测ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达.结果 高脂组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的水平比对照组明显升高(P＜0.05),而苦瓜蛋白组总胆固醇(14.52±1.06 mmol/L比18.21±1.95 mmol/L)、甘油三酯(0.51±0.11 mmol/L比0.92±0.07 mmol/L)和低密度脂蛋白胆固醇(4.12 mmol/L±0.95比7.16±0.98 mmol/L)水平显著低于高脂组(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇的水平与高脂组比差异无显著性(P＞0.05).苦瓜蛋白组主动脉斑块面积(31.2%±3.6%比69.6%±4.8%)和主动脉窦脂质面积(26.02±3.07 μ m2/比45.23±11.2 μm2)比高脂组显著减少.苦瓜蛋白组小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达都比高脂组明显升高(P＜0.05).结论 苦瓜蛋白可通过增加载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的表达,降低血脂水平,减少主动脉斑块及主动脉窦脂质沉积.