西红花酸对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的通过H2O2诱导PC12细胞损伤,建立氧化应激损伤的体外模型,以探讨西红花酸对细胞损伤的保护作用及其相关机制。方法观察不同浓度(0、50、100、200、300、400μmol/L)H2O2损伤PC12细胞12 h,用CCK-8检测细胞活力;不同浓度(0.1、1、5、10μmol/L)西红花酸预处理PC12细胞24 h,观察西红花酸对H2O2(200μmol/L)损伤细胞后的恢复作用,CCK-8检测细胞活力;罗丹明Rh123染色,流式检测线粒体膜电位(MMP);DCF-DA染色荧光照相术检测活性氧(ROS)水平;Western blot检测磷酸化ERK1/2的表达情况。结果 H2O2(0～400μmol/L)作用PC12细胞12 h后,细胞活力分别为(100±4.1)%、(102±1.9)%、(89±11.2)%、(52±2.6)%、(42±1.6)%、(8±0.4)%,细胞损伤呈明显的浓度依耐性;西红花酸预处理后,细胞活力由(45.12±3.15)%,分别上升为(51.88±4.24)%、(65.14±8.19)%、(57.66±5.58)%、(53.61±4.57)%;西红花酸(1μmol/L、5μmol/L)预处理组减少了线粒体膜电位(MMP)的下降,有效清除活性氧(ROS),激活磷酸化ERK1/2。结论上述实验表明西红花酸能对抗H2O2诱导的氧化应激损伤,表明西红花酸有抗氧化作用。     

缺失第8外显子的SIRT1剪接体和SIRT1全长在293T细胞氧化损伤中的不同作用

目的 探讨缺失第8外显子的沉默信息调节因子1（SIRT1）剪接变异体(SIRT1-ΔExon8) 和SIRT1全长(SIRT1-FL)在氧化应激损伤中可能发挥的不同作用。方法 在人胚肾293T细胞分别转染SIRT1-ΔExon8干扰质粒和SIRT1-FL过表达质粒,给予过氧化氢（H2O2）诱导氧化应激损伤模型,应用CCK-8检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)活性测定法检测细胞的损伤程度,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞内活性氧簇(ROS)水平,Real-time PCR法检测细胞SIRT1-ΔExon8和SIRT1-FL mRNA的水平。结果 H2O2(50~800 μmol/L)可剂量依赖性地诱导细胞氧化应激损伤,包括细胞活力下降,LDH释放增加,细胞凋亡和胞内ROS含量增加,并引起SIRT1-FL mRNA水平降低和SIRT1-ΔExon8 mRNA表达增加;此外,过表达SIRT1-FL或干扰SIRT1-ΔExon8也可以部分抑制H2O2(400 μmol/L)引起的细胞氧化应激损伤。结论 SIRT1-ΔExon8可能促进细胞的氧化应激损伤,而SIRT1-FL则发挥相反的作用。     

JAK-STAT通路调制NF-kB介导H2O2预处理的细胞保护作用

目的:探讨核因子-kB(nuclear factor-kB,NF-kB)在H2O3预处理诱导的适应性细胞保护作用中的作用及JAK-STAT通路对NF-kB的调制.方法:在PC12细胞建立H2O2预处理对抗氧化应激(300 μmol/LH2O2)损伤细胞的实验模型.应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Western blotting)测定NF-kB和STAT3的表达水平.结果:用100 μmol/L H2O2预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300 μmol/LH2O2作用12 h引起的细胞凋亡,并明显地上调NF-kB和STAT3的表达,NF-kB抑制剂MG-132(10 μmol/L)和JAK2抑制剂AG-490(10 μmol/L)均可抑制H2O2预处理引起的适应性细胞保护作用及上调NF-kB表达的作用.结论:JAK-STAT通路调节NF-kB介导的H2O2预处理的细胞保护作用.     

萝卜硫素对H2O2诱导人肝细胞氧化应激损伤模型的保护作用

背景:氧化应激损伤在慢性肝炎发生发展中起着重要的作用,而天然产物萝卜硫素具有较好的抗氧化活性。目的:研究萝卜硫素对H2O2诱导人肝细胞(LO2)氧化应激损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养LO2细胞,采用H2O2诱导LO2细胞造模,并同时将细胞分为对照组、H2O2诱导组、H2O2+低剂量萝卜硫素组(10μmol/L)、H2O2+中剂量萝卜硫素组(20μmol/L)及H2O2+高剂量萝卜硫素组(40μmol/L)。采用100μg/L的H2O2处理人肝细胞24 h,诱导细胞氧化应激损伤;H2O2+萝卜硫素组将H2O2与不同浓度萝卜硫素同时处理细胞24 h。采用CCK8法分析萝卜硫素对细胞存活率的影响,分析细胞匀浆中的氧化应激产物水平,Western Blot法分析Nrf2、GCLC、NQO1及血红素加氧酶1蛋白表达水平。研究方案的实施符合恩施土家族苗族自治州中心医院的相关伦理要求。结果与结论:①H2O2能诱导LO2细胞氧化应激损伤;②相比于H2O2模型组,各浓度萝卜硫素能诱导LO2细胞增殖、抑制丙二醛和一氧化氮的产生及促使超氧化物歧化酶活性升高(P<0.05);③Western Blot结果显示萝卜硫素能诱导Nrf2向细胞核内转移,诱导GCLC、NQO1和血红素加氧酶1蛋白表达(P<0.05);④结果说明,萝卜硫素能改善H2O2诱导的LO2细胞氧化应激损伤,其药理学作用与Nrf2信号传导活化有关。     

Survivin在过氧化氢预处理诱导的适应性细胞保护中的作用

目的探讨H2O2预处理对存活素(survivin)表达的影响及存活素在H2O2预处理的适应性细胞保护中的作用。方法在PC12细胞建立H2O2预处理对抗H2O2诱导细胞凋亡的实验模型,应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst染色检测细胞凋亡的形态学改变,免疫印迹法(Westernblot)测定存活素的表达水平。结果用100μmol/LH2O2预处理PC12细胞90min可明显地抑制300μmol/LH2O2作用12h后引起的细胞毒性和细胞凋亡,并可以显著地上调PC12细胞存活素的表达;JAK2抑制剂AG-490不仅可以抑制存活素的表达,而且拮抗H2O2预处理的适应性细胞保护作用。结论存活素是JAK-STAT通路的靶基因,可能在H2O2预处理诱导的适应性细胞保护机制中起着重要的作用。     

JAK—STAT通路调制NF-κB介导H2O2预处理的细胞保护作用

目的：探讨核因子-κB（nuclearfactor-κB，NF-κB）在H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用中的作用及JAK—STAT通路对NF-κB的调制。方法：在PC12细胞建立H2O2预处理对抗氧化应激（300μmol／LH2O2）损伤细胞的实验模型。应用碘化丙啶（PI）染色流式细胞术检测细胞凋亡率，免疫印迹法（Westem blotting）测定NF-κB和STAT3的表达水平。结果：用1000μmol／L H2O2预处理PC12细胞90min可显著地抑制300panol／L H2O2作用12h引起的细胞凋亡，并明显地上调NF-κB和STAT3的表达，NF-κB抑制剂MG-132（100μmol／L）和JAK2抑制剂AG-490（10izmol／L）均可抑制H2O2预处理引起的适应性细胞保护作用及上调NF-κB表达的作用。结论：JAK-STAT通路调节NF-κB介导的H2O2预处理的细胞保护作用。     

内质网应激介导蜕皮甾酮对H2 O2 诱导的心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨蜕皮甾酮(EDS)如何通过调节内质网应激对过氧化氢(H2 O2 )诱导的心肌细胞损伤起保护作用。方法:大鼠H9c2 心肌细胞随机分为对照(Control)组,正常心肌细胞;H2 O2 组,不同浓度H2 O2(1*10-3 、1*10-4 、1*10-5 mol/ L)诱导损伤细胞;EDS 组,在H2 O2 组基础上,加入不同浓度的EDS(25、50、100 μmol/ L)处理。MTT 法和流式细胞术分别检测实验各组细胞活力及细胞凋亡率。Western blot 检测各组细胞中Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3、caspase-4、caspase-7、caspase-12、 GRP78 和CHOP 的蛋白水平,同时检测各组细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与Control 组相比,H2 O2 组的细胞活力减弱,凋亡率升高,MOD 含量升高,SOD 活性降低,GRP78 和CHOP 的表达升高(均P<0.05)。H2 O2 组加入EDS 处理后,细胞活力提升,凋亡率下降,MOD 含量降低,SOD 活性升高,GRP78 和CHOP 的表达降低(均P<0.05)。结论:通过抑制内质网的应激过程,蜕皮甾酮能减轻H2 O2 诱导的心肌细胞损伤。     

乙酰左旋肉碱减轻H_2O_2诱导的PC12细胞氧化损伤

目的:探索乙酰左旋肉碱(ALC)对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的作用及其可能的机制。方法:采用H_2O_2诱导PC12细胞造成中度氧化损伤细胞模型,将不同浓度(100、200和400μmol/L)的ALC作用于体外培养的PC12细胞,CCK8法检测细胞的活力。实验分为:正常对照(control)组,模型(H_2O_2)组,低、中、高浓度ALC药物预处理(ALC+H_2O_2)组,共5组。流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测Nrf2和cleaved caspase-3的蛋白水平;免疫荧光染色法检测Nrf2的核转位情况。结果:不同浓度(100、200和400μmol/L)的ALC可显著抑制H_2O_2诱导的PC12细胞凋亡,以中浓度组效果最佳。与模型组相比,低、中、高浓度ALC组均可显著提高H_2O_2诱导的PC12细胞活力,抑制细胞凋亡(P0.05),显著下调cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05),上调Nrf2的表达水平(P0.05),促进胞浆的Nrf2向核内转移。结论:乙酰左旋肉碱对H_2O_2诱导氧化损伤的PC12细胞具有保护作用,抑制细胞凋亡从而提高其活力,其机制可能与激活Nrf2信号通路有关。     

白桦脂酸对 H2O2 诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和细胞凋亡影响 #br#

目的探讨白桦脂酸对 H2O2诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和凋亡的影响。 方法PC12 神经细胞分成 Control、 Model (H2O2刺激)、 BA-L (1 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2刺激)、 BA-M (2 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2刺激)、 BA-H (4 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2 刺激)、 BA-H + PMA 组 (1 μmol / L 的白桦脂酸、H2O2 、 NF-κB 信号通路激活剂 PMA 刺激), CCK-8 方法分析细胞增殖活性变化, 流式细胞术分析细胞凋亡水平变化, Western 印迹分析细胞中 Bax、 Bcl-2、 P65 蛋白表达变化, 黄嘌呤氧化法检测 SOD 水平, 比色法检测 GSH-Px 水平、 硫代巴比妥酸法检测 MDA 水平、 CellROX Green 荧光法检测 ROS 水平。 结果与 Control 组比较, Model 组 PC12 神经细胞增殖活性降低, 细胞凋亡率升高, 细胞中 Bax 蛋白表达水平升高, Bcl-2蛋白表达水平降低, SOD、 GSH-Px 活性降低, MDA、 ROS 水平升高, P65 蛋白水平升高。 与 Model 组比较,BA-L、 BA-M、 BA-H 组 PC12 神经细胞增殖活性逐渐升高, 细胞凋亡率逐渐降低, 细胞中 Bax 蛋白表达逐渐减少, Bcl-2 蛋白表达逐渐增加, SOD、 GSH-Px 活性逐渐升高, MDA、 ROS 水平逐渐降低, P65 蛋白水平逐渐降低。 与 BA-H 组比较, BA-H + PMA 组 C12 神经细胞增殖活性降低, 细胞凋亡率升高, 细胞中 Bax、P65 蛋白表达增多, Bcl-2 蛋白表达减少, SOD、 GSH-Px 活性降低, MDA、 ROS 水平升高。 结论白桦脂酸通过下调 NF-κB 信号抑制 H2O2诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和细胞凋亡。     

中成药甘舒胶囊对抗氧化应激诱导的肝细胞损伤

目的探讨中药甘舒胶囊对抗氧化应激损伤的肝细胞保护作用。方法在Chang肝细胞建立氧化应激(H2O2)损伤的实验模型,应用甲氮甲唑蓝(MTT)检测法。PI染色流式细胞仪(FCM)及Hoechst 33258染色法等检测甘舒对抗H2O2诱导Chang肝细胞的细胞毒性及凋亡的细胞保护作用。结果H2O2呈浓度依赖性地降低Chang肝细胞的存活率;在自身不影响Chang肝细胞存活率的浓度(1～100μg/ml)范围内,甘舒呈浓度依赖性地对抗300μmol/L和400μmol/LH2O2对肝细胞存活率的抑制作用;另方面,在0～800μmol/L浓度范围内,H2O2呈浓度依赖性地增加Chang肝细胞的凋亡率;100μg/ml、500μg/ml和1mg/ml的甘舒本身不影响肝细胞的凋亡率,但却能显著地抑制300μmol/LH2O2诱导的肝细胞凋亡。结论中药甘舒胶囊具有抗氧化应激作用,可显著对抗氧化应激(H2O2)诱导的肝细胞损伤。     

能量限制条件下SIRT1和SIRT2的表达变化

目的研究不同程度的能量限制（CR）下,大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达变化。方法 60只大鼠随机分成四组：正常对照组、75%CR组（喂养食物为正常对照组的75%）,55%CR组（喂养食物为正常对照组的55%）和高脂组,喂养8周。免疫组织化学检测大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达与定位。RT-PCR及Western-blot检测各实验组中SIRT1、SIRT2的表达。结果在大鼠脑组织中发现SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞核中表达;SIRT2主要在细胞核中表达。能量限制下,与对照组相比SIRT1表达升高;高脂食物条件下,SIRT1表达相对于对照组增高,但是比CR组减少。75%CR与55%CR相比,后者中的SIRT1的表达增加更多。与对照组相比,55%CR增加SIRT1的表达差异有统计学意义（P〈0.05）,而75%CR和HFa增加SIRT1的表达差异无统计学意义。SIRT2在CR和HFa下表达无明显变化。结论 CR能增加SIRT1而不增加SIRT2的表达,重度CR比中等程度CR对SIRT1表达的影响更大。     

硫化氢对抗过氧化氢对PC12细胞的损伤作用

目的探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对抗过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)对PC12细胞的损伤作用及有关机制。方法应用H2O2在PC12细胞建立氧化应激损伤的实验模型;应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色FCM检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量。应用硫化氢钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体。结果200μmol和400μmolH2O2作用PC12细胞24h均使细胞的存活率明显降低及凋亡率显著增加,200μmolH2O2引起PC12细胞的MMP明显降低及ROS生成显著增多。当NaHS与H2O2(200或400μmol/L)共同作用于PC12细胞时,NaHS(100～400μmol/L)浓度依赖性的阻断H2O2引起PC12细胞的存活率降低及细胞凋亡率增加。400μmolNaHS明显地阻断200μmolH2O2引起PC12细胞的MMP降低及ROS增多。结论H2S能明显地保护PC12细胞对抗H2O2引起的损伤,阻断MMP降低及ROS生成可能是H2S的细胞保护机制之一。     

乌司他丁预处理对HepG2细胞氧化损伤保护作用的研究

目的 探讨乌司他丁（UTI）预处理对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。方法 将HepG2细胞常规培养传代,随机分为H2O2组,UTI100+H2O2组、UTI500+H2O2组、UTI1000+H2O2组及对照组,其中对照组不作任何处理,H2O2组,UTI100+H2O2组、UTI500+H2O2组、UTI1000+H2O2组分别加入浓度为0 μmol/L、100 μmol/L、500 μmol/L、1000 μmol/L UTI预处理,24 h后加入300 μmol/L H2O2处理4 h,体外模拟肝细胞损伤。CCK-8试剂盒和LDH试剂盒检测LDH变化评价细胞损伤;TUNEL检测细胞凋亡率;Western blot检测HepG2细胞中LC3-Ⅱ、Cleaved caspase-3的表达变化情况。结果 与H2O2组相比较,CCK-8和LDH检测结果提示,各TUI预处理组能改善细胞生存环境,减轻H2O2对HepG2细胞的应激损伤,提高细胞活力（P＜0.05）;TUNEL检测提示预处理可降低氧化应激导致的凋亡率（P＜0.05）; Western blot结果提示,与H2O2组比较,UTI可上调LC3-Ⅱ的表达（P＜0.05）,促进细胞自噬的发生,降低Cleaved caspase-3表达,抑制细胞凋亡 (P＜0.05)。结论 UTI可以通过激活LC3-Ⅱ表达,促进细胞自噬,发挥保护作用,拮抗氧化应激导致的细胞凋亡。     

米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白8表达的影响

目的观察米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白8（AQP8）表达的影响,探讨药物调控羊膜上皮细胞AQP8表达的可行性。方法将体外培养的人羊膜上皮WISH细胞分为不同浓度米非司酮作用48h组和单一浓度米非司酮作用不同时间组,前者培养基中分别加入终浓度为0．1、1、5、10、15μmol／L的米非司酮,培养48h;后者培养基中加入终浓度为10μmol／L的米非司酮,分别培养6、12、24、36、48h,同时2组均设加入含0．01％二甲基亚砜（DMSO）完全培养液的对照组。采用免疫荧光细胞化学方法检测10μmol／L米非司酮作用48h后细胞AQP8蛋白的分布;RT-PCR和蛋白质印迹技术分别检测不同浓度米非司酮作用组和米非司酮作用不同时间组各组细胞AQP8mRNA和蛋白的表达水平。结果免疫荧光细胞化学检测显示,米非司酮作用后WISH细胞细胞质内及细胞膜上AQP8蛋白黄绿色荧光信号较对照组均明显减弱。在不同浓度米非司酮作用组中,除0．1μmol／L组外,其余各组细胞的AQP8mRNA和蛋白表达水平分别与对照组相比均明显减弱（均p〈0．01）,而0．1、1、5、10μmol／L组细胞的AQP8mRNA表达水平和1、5、10μmol／L组细胞的AQP8蛋白表达水平分别与15pmol／L组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。在米非司酮作用不同时间组中,除6h组外,其余各组细胞的AQP8mRNA和蛋白表达水平分别与对照组相比均明显减弱（均P〈0．01）,而6、12、24、36h组细胞的AQP8mRNA和蛋白表达水平分别与48h组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论米非司酮对人羊膜上皮细胞AQP8mRNA和蛋白的表达具有抑制作用。     

姜黄素对放线菌素D/TNF-α协同诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制研究

目的:观察中药单体姜黄素对ActD/TNF-α协同诱导PC12细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:采用MTT法确定实验药物的最佳浓度;Hoechst33258荧光染色法观察PC12细胞的凋亡;JC-1荧光分子探针检测线粒体膜电位;Real Time PCR检测凋亡基因Bcl-2/Bax的表达。结果:ActD/TNF-α协同作用可导致PC12细胞的活力降低(P<0.05);出现核固缩、核碎裂现象的细胞增多,细胞凋亡率增高(P<0.05);细胞线粒体膜电位下降;细胞内抗凋亡基因Bcl-2的表达降低(P<0.05)。经姜黄素(5μmol/L)处理后,PC12细胞的活力增强(P<0.05);细胞核固缩、核碎裂现象减少,细胞凋亡率下降(P<0.05);细胞线粒体膜电位上升;细胞内抗凋亡基因Bcl-2的表达增强(P<0.05)。结论:姜黄素可拮抗ActD/TNF-α引起的PC12细胞凋亡,可能与升高线粒体膜电位,促进抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

绿茶多酚主要成分对百草枯诱导PC12细胞损伤的保护作用

探讨绿茶多酚的主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对百草枯(paraquat,PQ)诱导的PC12细胞损伤的影响及可能机制。建立PQ损伤的PC12细胞体外模型,经不同浓度EGCG预处理后,分别用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活性,Hochest33258染色观察凋亡时细胞核形态的变化,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡比例,免疫细胞化学染色观察细胞色素c蛋白表达水平。1、5、10μmol/LEGCG对PQ诱导的PC12细胞损伤具有一定的保护作用。与PQ组(54.6±3.5%)相比,1、5、10μmol/LEGCG预处理组细胞活力分别上升为66.5±2.7%、74.4±2.6%、83.7±3.2%。Ho-chest33258染色发现PQ组较多胞核出现固缩凝集(43.5±8.4%),而EGCG预处理组则较少(分别为30.7±7.9%、17.9±6.8%、11.2±4.4%)。FCM检测也提示EGCG预处理可降低细胞的凋亡百分率,正常组、PQ组、EGCG预处理组(1、5、10μmol/L)分别为4%、39.9%、32.6%、20.1%和10.4%。另外,免疫细胞化学染色发现EGCG预处理可下调PQ诱导的细胞色素c在胞浆中的过表达。以上结果提示EGCG可减轻PQ诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与下调细胞色素c在胞浆内的过表达有关。     

沉默Apaf-1 基因对氧糖剥夺/ 复氧复糖PC12 细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨RNA干扰沉默Apaf-1基因对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞线粒体凋亡通路的影响。方法:PC12细胞随机分为3组:正常组(Control)、模型组(Model)、Apaf-1基因沉默组(Apaf-1-siRNA)。正常组于CO2培养箱内正常培养,其余2组给予氧糖剥夺2 h、复氧复糖24 h处理,Apaf-1-siRNA组于造模前将化学合成的siRNA通过脂质体转染于PC12细胞靶向沉默Apaf-1基因。用荧光标记的siRNA检测Apaf-1转染效率,Western blot检测转染后PC12细胞Apaf-1蛋白表达,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL染色检测细胞凋亡指数,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光染色检测Bax/Bcl-2比值,Western blot检测线粒体凋亡通路关键蛋白Apaf-1、caspase-9、caspase-3表达。结果:Apaf-1-siRNA可有效沉默PC12细胞Apaf-1蛋白表达(P<0.05)。与Control组相比,Model组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡指数和凋亡率显著升高(P<0.05),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05),线粒体凋亡通路关键蛋白Apaf-1、caspase-9、caspase-3表达显著升高(P<0.05);与Model组相比,Apaf-1-siRNA组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡指数和凋亡率显著降低(P<0.05),Bax/Bcl-2比值降低(P<0.05),Apaf-1、caspase-9、caspase-3蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:靶向沉默Apaf-1基因可有效降低氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞线粒体凋亡通路关键蛋白Apaf-1、caspase-9、caspase-3表达,抑制细胞凋亡,提高细胞存活率。     

选择性环氧合酶2抑制剂塞来昔布对人子宫内膜癌细胞的凋亡诱导

目的 研究环氧合酶2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布诱导人子宫内膜癌细胞凋亡作用.方法 体外培养的人子宫内膜癌细胞HEC-1-B经塞来昔布处理后,采用Giemsa染色、流式细胞术和DNA Ladder观察HEC-1-B细胞凋亡变化;通过半定量RT-PCR方法检测HEC-1-B细胞COX-2及凋亡相关基因Fas、survivin的表达.结果 20 μmol/L塞来昔布处理HEC-1-B细胞后,Giemsa染色即可见细胞核固缩、碎裂,出现凋亡小体等细胞凋亡形态变化;流式细胞学检测示50 μmol/L塞来昔布可使HEC-1-B细胞凋亡率达46.9%,PI荧光直方图出现凋亡细胞峰,DNA电泳可见典型的细胞凋亡梯形条带.塞来昔布处理HEC-1-B细胞后,COX-2 mRNA表达下降,细胞凋亡相关基因Fas表达增加,细胞凋亡抑制基因surviyin表达下降,50 μmol/L塞来昔布可使survivin表达难以检出.结论 塞来昔布对HEC-1-B细胞有明显的凋亡诱导作用,通过抑制COX-2表达进而使Fas表达上调,survivin表达下调可能是其诱导细胞凋亡机制之一.