免疫组化和GMS染色对AIDS合并肺孢子菌肺炎的临床诊断价值

目的 探讨免疫组化及六胺银(gomori's methenamine silver nitrate stain,GMS)染色法对AIDS合并肺孢子菌肺炎(pneumocystis pneumonia,PCP)的临床诊断价值.方法 选择50例临床确诊为合并PCP的AIDS患者作为实验组(PCP组)、25例非PCP的呼吸道感染患者作为对照组,分别采用单克隆抗体免疫组化法和GMS染色法对两组患者的支纤镜肺活检标本进行肺孢子菌(pneumocystis jiroveri,Pj)检测,并比较两种方法的敏感性和特异性.结果 免疫组化法检测Pj的敏感性为66%(33/50),特异性为100%(25/25);GMS染色法检测Pj的敏感性为42%(21/50),特异性为92%(23/25).结论 免疫组化法检测Pj的敏感性和特异性均高于GMS染色法,这将有助于提高Pj的检出率及PCP的确诊率.     

实验感染大、小鼠和临床疑似病例肺孢子虫mt LSU rRNA基因检测

为探讨PCR技术对实验感染大、小鼠肺孢子虫肺炎(PCP)和临床疑似病例诊断的可行性。用皮下注射地塞米松法诱导SD大鼠和ICR小鼠PCP并收集临床疑似病例24h深部痰液。受试动物解剖后,制备肺印片,经瑞姬氏复合染色镜检确定肺孢子虫(Pc)感染的阳性率;同时,以针对虫体mtLSUrRNA基因设计的引物,PCR扩增鼠肺组织和支气管灌洗液(BALF),以及痰液样本中的DNA;比较实验动物样本镜检和PCR两种方法的检测结果;测定PCR的敏感性和特异性。结果表明,SD大鼠和ICR小鼠肺印片的阳性率分别为68.8%(1116)和85.7%(1821),肺组织PCR检测的阳性率分别为75%(1216)和80.9%(1721),肺泡灌洗液PCR的阳性率分别为81.2%(1316)和23.8%(521)。肺印片镜检和PCR技术检测结果无显著性差别;可见,PCR对虫体mtLSUrRNA基因的检测具有显著的特异性和敏感性,至少可以检测出0.6pg的肺孢子虫DNA;6例临床疑似病例样本中2例显示肺孢子虫PCR阳性反应。     

肺孢子菌肺炎的临床诊断分析

目的探讨肺孢子菌肺炎的临床诊断方法。方法2010年2月~2013年3月,我院呼吸科有不同程度肺孢子菌肺炎临床症状患者20例,均先行胸部 CT检查,通过影像学显示,拟诊断肺孢子菌肺炎患者19例;行染色镜检法拟诊断肺孢子菌肺炎患者13例,6例行肺组织活体穿刺,综合临床症状和体征进行诊断。结果综合拟诊断20例患者均为肺孢子菌肺炎患者,诊断率为100%,其中胸部CT检查检出率为85%（17/20）;染色镜检查法检出率率为65%（13/20）;肺组织活体穿刺检出率100%（6/6）。结论综合应用多种诊断方法能有效地提高肺孢子菌肺炎的诊断率,提高疾病诊治水平。     

系统性红斑狼疮并发肺孢子虫肺炎的临床病例报告

目的探讨系统性红斑狼疮并发肺孢子虫肺炎（PCP）的诊断和防治措施。方法研究1例系统性红斑狼疮并发肺孢子虫肺炎患者的临床表现、实验室检查结果、影像学资料以及诊断和治疗的方法。结果患者出现发热、干咳、无痰、胸闷、伴阵发性呼吸困难等症状,血氧饱和度下降,胸部CT显示两肺部毛玻璃状改变,肺泡灌洗液找到肺孢子虫。给予复方新诺明、卡泊芬净、调整免疫抑制剂及其它支持对症治疗,痊愈出院。结论免疫功能抑制患者有发热、干咳、呼吸困难等临床症状,应考虑PCP并及时做病原学检查。     

实时定量PCR技术诊断PCP的研究进展

肺孢子菌肺炎(PCP)是一种由耶氏肺孢子菌引起的致死性肺炎,常见于免疫功能低下人群,早期诊断有助于临床治疗.目前常用的病原学检查漏诊率较高;定性PCR检测虽然敏感,但有时难以区分隐性感染和显性感染.实时定量PCR是近年来发展的一种精确、敏感、污染少的核酸定量技术.本文综述结果表明,实时定量PCR技术能快速、敏感、特异地...     

经支气管肺活检术诊断肺移植术后患者的并发症

目的采用经支气管肺活检术（TBLB）观察肺移植术后患者并发症的病理特点。方法回顾性分析2003年1月至2013年08月本院的16例行TBLB的肺移植术后患者的活检组织,常规HE染色后观察各种并发症的发生情况和急、慢性排斥反应患者肺组织的病理特点,感染的病例行病毒包涵体、PAS及六胺银染色观察感染情况。结果16例肺移植术后患者中有6例细菌感染,2例真菌感染,3例巨细胞病毒感染,2例出现急性排斥反应,2例出现慢性排斥反应,1例送检物为纤维素性渗出物,未能提供病理诊断。2例急性排斥反应患者肺组织以血管周单核样淋巴细胞浸润为特点,可往肺间质浸润;2例慢性排斥反应患者肺组织可见小气道和（或）血管内皮下纤维增生伴瘢痕形成。11例感染患者肺组织PAS和六胺银染色可见孢子和菌丝,病毒包涵体染色可见嗜酸性病毒包涵体。结论TBLB可以诊断肺移植术后并发症的发生,感染是肺移植术后最常见的并发症,其次是急、慢性排斥反应。     

黄芪注射液穴位注射足三里治疗肺孢子菌肺炎的临床研究

目的：通过探讨应用黄芪注射液穴位注射足三里治疗肺孢子菌肺炎的临床疗效，旨在为提高治疗效率和患者生活质量提供理论依据。方法选择2012年1月~2014年5月在我院接受治疗的获得性免疫缺陷综合征合并肺孢子菌肺炎患者30例，随机平均分成研究组和对照组，对照组给予患者口服复方磺胺甲噁唑，研究组在对照组患者治疗的基础上用黄芪注射液穴位注射足三里，对比两组患者治疗前后CD4+T淋巴细胞、肺泡灌洗测肺孢子菌包囊数的变化情况、肺部病灶影像学的吸收情况及治疗有效率。结果治疗后研究组患者CD4+T淋巴细胞为219.34个/μl、肺孢子菌包囊数为1.81个、肺部病灶吸收率为86.67%、治疗有效率为80.0%，与对照组比较差异显著，且<0.05差异有统计学意义。结论黄芪注射液穴位注射足三里能显著提高CD4+T淋巴细胞数和病灶吸收率，减少肺孢子菌包囊数，临床疗效显著。     

小剂量复方磺胺甲噁唑预防肾移植后肺孢子菌肺炎

背景：2009年肾脏病预后组织指南推荐所有肾移植受者移植后均应预防性使用复方磺胺甲噁唑预防肺孢子菌肺炎,但疗效有待观察。 目的：观察肾移植移植后预防性应用小剂量复方磺胺甲噁唑预防早期肺孢子菌肺炎的疗效。 方法：回顾性分析珠江医院器官移植科2006/2009期间接受肾移植患者的临床资料,移植后1年内规律随访并有完整的数据资料者,患者均排除肝炎、二次移植、群体反应性抗体阳性以及移植后失访等因素后纳入统计。记录入选患者的年龄、性别、免疫抑制诱导治疗方案、免疫抑制维持方案、皮疹、肝肾损害、急性排斥反应和耶氏肺孢子菌肺炎发病情况。其中部分患者接受复方磺胺甲噁唑预防肺孢子菌肺炎,设为预防组,部分患者未进行预防,设为非预防组。肺孢子菌肺炎通过病程分析、临床表现、影像学检查和实验室检查等确诊。 结果与结论：围手术期中预防组与非预防组在年龄、性别、免疫诱导方案(生物制剂选用)、免疫维持方案和移植后1个月时血肌酐值均差异无显著性意义(P > 0.05)。随访期间患者急性排斥反应、巨细胞病毒感染、移植后1年肾功能等指标以及骨髓抑制、肝功能、药物性皮疹等方面差异无显著性意义(P > 0.05);而肺孢子菌肺炎的发病率预防组较非预防组明显降低(P < 0.05)。结果证实,肾移植后预防应用小剂量复方磺胺甲噁唑能明显降低早期肺孢子菌肺炎的发生率。     

mtLSU-巢式PCR检测实验大鼠卡氏肺孢子虫的实验研究

目的对mtLSU-巢式PCR方法检测大鼠卡氏肺孢子虫的应用价值以及基因序列进行评价。方法采用地塞米松免疫抑制法诱导大鼠感染肺孢子虫;实验组10只,对照组1只;诱导至第7周时收集实验组及对照组大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液（BALF）标本,采用mtLSU-巢式PCR方法对人源与鼠源肺孢子虫共有的基因进行扩增和序列测定,同时采用镜检法对实验组大鼠肺组织和肺泡灌洗液标本进行检测,评估两种方法的敏感性。结果采用mtLSU-巢式PCR方法对实验感染大鼠肺组织和BAL进行检测,卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为100%（10/10）、90%（9/10）。而GMS染色镜检法检测的阳性率分别为80%（8/10）、60%（6/10）。所测Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU基因序列长度为155bp,与GenBank的大鼠源肺孢子虫（U20170）及人源肺孢子虫（DQ473446）同源性均为100%（154/154、155/155）。结论 mtLSU-巢式PCR方法应用于大鼠卡氏肺孢子虫检测敏感性高,特异性强;获得与人源耶氏肺孢子虫相同的Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU的基因序列。     

肺炎支原体感染在BALB/c小鼠肺组织不同时间炎症的变化

目的了解肺炎支原体感染的不同时期肺组织的病理变化、用PCR的方法检测肺炎支原体出现时间、阳性率的变化情况。方法建立肺炎支原体经呼吸道感染的BALB/c小鼠模型,对感染后3、7、14、21 d的小鼠的肺组织进行病理变化、肺湿重、PCR检测肺炎支原体出现时间的研究。结果肺炎支原体经呼吸道感染的BALB/c小鼠肺组织变大重量增加,肺指数同正常对照组相比,P﹤0.01,差异有统计学意义;呼吸道感染的BALB/c小鼠肺组织在3、7 d时,肺组织的病理变化最明显,14 d炎症减轻,21 d炎症基本消退;用PCR的方法检测支气管肺泡灌洗液肺炎支原体7 d时全部为阳性。结论肺炎肺炎支原体感染BALB/c小鼠模型制作成功,感染后7 d时肺部炎症最明显。     

人源肺孢子虫纯培养株的建立及基因鉴定

目的建立人源肺孢子虫（PneUmOCySaSj／rovec／，Pj）纯培养株。方法从肺孢子虫肺炎（PCP）患者的支气管肺泡灌洗液（BALF）中分离巧，用改良IMDM培养基做原代、传代和冻存复苏培养；以四胺银染色计数法观察虫体增殖情况；以线粒体rRNA大亚基特异引物扩增培养物中的目的基因，与基因库中的鼠源和人源肺孢子虫基因做序列比较。结果用添加S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等辅助剂的IMDM培养基从2例PCP患者的BALF中分离出2个巧纯培养株。分离培养的巧可进行冷冻保存和复苏培养。培养120h的巧包囊可增殖3．2倍。基因序列分析证实分离出的巧株与鼠源性肺孢子虫的线粒体rRNA大亚基同源性为67．8％，与GenBank中巧的同源性为93．2％。结论用本法建立了2个Pj纯培养株。     

Gomori氏六胺银染色在病理切片方面的应用

Gomori氏六胺银染色(GMS)原为1946年Gomori氏为显示糖原及粘液而设计的一种组织染色。后经Grocott氏改良并推广应用到切片的霉菌染色也得到较好的效果。本文使用GMS法显示病理切片上的各种霉菌,并分别与其他霉菌染色作了比较。此外,我们还应用GMS法染抗酸杆菌并与Wade—Fite(W—F)抗酸染色作对比观察。现将观察结果及体会整理于后,供同道参考。材料与方法一、溶液配制: 1、六亚甲基四胺—硝酸银储备液5%硝酸银溶液5ml 3%六亚甲基四胺溶液100ml 配法—将3%六亚甲基四肢水溶液加入5%硝酸银溶液中即形成一种白色沉淀,在摇动时立即溶解。澄清液在4℃冰     

襄阳市37例艾滋病死亡患者机会性感染分析

目的 总结晚期艾滋病(AIDS)患者机会性感染的特点.方法 回顾性分析我院37例AIDS住院死亡病例机会性感染的种类、临床特点、与原发病的关系以及对患者的影响.结果 37例患者中机会性感染发生率前五位由高到低依次为:肺孢子菌肺炎(PCP) 、肺结核、细菌性肺炎、其他真菌感染、隐球菌脑膜炎.这些机会性感染中直接导致患者死亡的前五位是:PCP、隐球菌脑膜炎、细菌性肺炎、化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎.进行CD4+T淋巴细胞计数检测的29例患者CD4+T淋巴细胞计数平均为37.45/mm3.结论 患者在AIDS晚期伴有各种机会性感染发生:其中最常见的是PCP、结核、细菌性肺炎、其他真菌感染、隐球菌脑膜炎等,这些感染常常导致患者死亡.预防、早期诊断和治疗机会性感染是缓解AIDS患者病情、降低病死率的重要环节.     

6种不同染色方法在检测肺组织中新型隐球菌的应用比较

目的探讨6种检测肺组织中新型隐球菌(cryptococcus neoformans,CN)不同的染色方法及其意义。方法采用常规HE染色法、PAS染色法、六胺银染色法、阿尔辛蓝染色法、亚甲蓝染色法、改良Hale胶体铁组合染色法,对20例病理诊断为肺隐球菌病的石蜡样本进行染色。结果 6种方法均可显示肺组织中有CN,其中在HE染色中CN孢子着色不佳,轮廓不清晰,较难辨认; PAS法检测的CN细胞壁呈紫红色,胞质呈浅红色;六胺银法检测的CN呈黑褐色,菌壁四周深黑,菌体中间空白;阿尔辛蓝法检测的CN荚膜呈蓝色,细胞核呈红色;亚甲蓝法检测的CN呈蓝色,菌壁四周浅蓝色,菌体中间透亮,对比和背景较差;改良Hale胶体铁组合染色法检测的CN在肺泡腔、肺间质的结缔组织中成堆或散在分布,呈深蓝色,圆形或卵圆形,轮廓清晰,单核细胞及多核巨细胞中亦可见较多吞噬的CN,细胞核呈红褐色,胶原纤维呈紫红色,背景淡黄色,镜下极易辨认。结论改良Hale胶体铁组合染色法是检测CN效果最佳的染色方法。     

雾化吸入联合机械振动排痰对COPD患者肺部感染疗效观察与护理

目的：探讨慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭患者下呼吸道感染患者,应用雾化吸入联合机械辅助排痰的疗效。方法将23例慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭患者下呼吸道感染患者,在雾化吸入30min后,应用振动排痰机辅助排痰,观察患者指尖血氧饱和度或SPO2是否升高,痰液排出是否顺利。结果振动排痰后有效率为100%。结论雾化吸入联合机械振动排痰治疗,有利于患者痰液的引流,更好地改善肺部感染患者血氧。     

奴卡菌肺炎4例临床病理学观察

目的 探讨奴卡菌肺炎的临床病理特征、诊断、鉴别诊断及预后。方法 收集4例奴卡菌肺炎临床资料，采用手工特殊染色、PMseq-DNA感染病原微生物高通量基因检测等方法进行分析，并复习相关文献。结果 4例患者年龄54～84岁，平均66.5岁；均有基础疾病、发热，多数患者有咳嗽、咳痰症状。4例患者影像学表现为胸腔积液2例、空洞2例、结节或肿块4例；血常规示白细胞计数多数明显升高，而血液中降钙素原仅轻度升高。4例患者中3例有泥土接触史，4例患者肺部活检组织主要表现为化脓性病变。特殊染色：病变部位的奴卡菌Gram染色可见分支菌丝细长，呈断裂竹节样；特殊染色抗酸、PAS及六胺银染色结果阴性，弱抗酸染色结果阳性。病原微生物高通量基因检测有奴卡菌。结论 奴卡菌肺炎以肺部化脓性病变为显著特征，特殊染色的弱抗酸可见阳性分支细长菌丝，病原微生物高通量基因检测有奴卡菌是重要的鉴别点。     

肾小球肾炎患者免疫抑制治疗后并发卡氏肺孢子虫肺炎

目的 研究糖皮质激素联合细胞毒药物治疗肾小球肾炎并发卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）的临床表现。方法 回顾性分析3例糖皮质激素联合细胞毒药物治疗肾小球肾炎并发PCP的临床，并复习相关文献资料。结果 3例患者年龄为28～67岁，男性2例，女性1例。1例为原发性肾小球肾炎、1例为狼疮性肾炎、1例为显微镜下多血管炎致新月体肾炎。PCP表现均出现在接受糖皮质激素联合细胞毒药物（包括环磷酰胺、雷公藤多甙片、甲氨喋呤）过程中，其中1例曾给予甲基强的松龙冲击治疗。3例均表现为发热、进行性呼吸困难、Ⅰ型呼吸衰竭，影像学检查提示双肺弥漫性间质病变；2例痰涂片发现号氏肺孢子虫（PC）包囊，1例痰聚合酶链反应检测Pc阳性。2例经复方新诺明治疗后痊愈，1例死亡。结论 肾小球肾炎患者免疫抑制治疗后出现进行性低氧血症应考虑PCP的可能性，需早期诊断、治疗。     

PAS联合六胺银染色诊断局限性马尔尼菲青霉菌感染的应用

目的探讨建立快速诊断局限性马尔尼菲青霉菌感染的方法,以期早期诊断,降低死亡率。方法采用高碘酸一无色品红（PAS）染色联合六胺银染色对4例非AIDS马尔尼菲青霉菌感染者活检组织进行马尔尼菲青霉菌的特殊染色,分析感染者的临床表现和病理组织学诊断特点。结果患者均为广东本地居民,属局限性马尔尼菲青霉菌感染。除1例有发热外,临床上未见以发热、失重、贫血、白细胞增高为主的马尔尼菲青霉菌感染症状以及多器官损害症状。HE染色显示病理组织学类型为肉芽肿型和化脓型。病变组织经PAS染色与六胺银染色后,在油镜下增生的泡沫状巨噬细胞胞浆内,呈现大量红色或黑色的卵圆形及腊肠状酵母样青霉菌孢子。无荚膜,在腊肠状菌体中可见马尔尼菲青霉菌特有的裂殖时出现的横隔膜。结论PAS联合六胺银染色清晰显示组织中马尔尼菲青霉菌的特征性结构和形态,结合病理组织学特点、中国南方地区生活或旅游史,可以快速诊断局限性马尔尼菲青霉菌感染。     

艾滋病合并呼吸道感染患者的病原菌分布及药敏分析

目的了解我院艾滋病合并呼吸道感染患者的病原菌分布及药敏情况,为临床治疗艾滋病合并呼吸道感染患者提供依据。方法收集2015年至2017年北京地坛医院住院的艾滋病合并呼吸道感染患者的合格痰液及支气管肺泡灌洗液(BALF)的细菌培养和药敏结果,回顾性分析病原菌的分离情况,采用Whonet 5.6软件对细菌进行药物敏感性分析。结果共检验1239例艾滋病合并呼吸道感染患者的合格痰液及肺泡灌洗液标本,去除同一患者的重复培养结果后,共培养阳性135例(痰液93例,肺泡灌洗液42例),阳性率10.89%。包括细菌121例(89.6%),酵母菌11例(8.1%)和双相真菌3例(2.2%)。其中细菌包括结核分枝杆菌31例(22.9%),非结核分支杆菌16例(11.85%),革兰氏阴性菌58例(43.0%),革兰式阳性菌16例(11.9%)。革兰氏阴性菌中排名前五位的是铜绿假单胞菌(11例),大肠埃希氏菌(10例),肺炎克雷伯菌(8例),鲍曼不动杆菌(7例),阴沟肠杆菌(6例)。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南的耐药率为0,但对氨苄西林的耐药率分别是100%和62.5%,铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率为44.4%。然而,7例鲍曼不动杆菌全部为泛耐药菌株,除对多粘菌素B敏感外,对所有抗菌药耐药。真菌对多种抗真菌药物敏感。结论艾滋病合并呼吸道感染病原菌主要以革兰氏阴性菌为主,并且耐药现象明显,尤其鲍曼不动杆菌的耐药应当引起极度重视。     

大鼠卡氏肺孢菌肺炎肺泡灌洗液中炎性细胞及TNFα水平变化

为探讨使用糖皮质激素 (GC )患者诱发大鼠卡氏肺孢菌肺炎 (PCP )的炎症反应强度及TNF α对PCP的防御作用 ,采用清洁级SD大鼠 ,皮下注射醋酸可的松配合低蛋白饮食建立免疫抑制诱导的PCP模型。分PCP组、细菌性肺炎组、阴性组、健康对照组 ,支气管肺泡灌洗液 (BALF )沉淀行细胞计数及分类 ,ELISA法测定BALF中TNF α值。结果显示 ,免疫抑制后 ,并发PCP鼠BALF中细胞计数、中性粒细胞比例比未并发PCP鼠高 ,但增高幅度低于并发细菌感染鼠 ;并发PCP鼠的BALF中TNF α明显低于未并发PCP鼠 ,而并发细菌感染后TNF α升高。GC致免疫抑制状态下 ,TNF α分泌减少 ,可能为PC感染创造条件 ,PCP与细菌性肺炎在炎症免疫反应上存在差异。