海南地区Zeta链蛋白检测在东南亚型α-地中海贫血筛查中的应用价值

目的以α地中海贫血基因检测结果为标准，探讨Zeta链蛋白检测在α地中海贫血东南亚缺失型临床筛查中的应用价值。方法随机收集634例EDTA—K2抗凝全血标本，采用酶联免疫法检测人外周血细胞中Zeta链蛋白，同时提取全血DNA，采用多重PCR结合电泳法检测标本α地中海贫血基因。结果634例全血标本经酶联免疫法检测Zeta链蛋白阳性113例。阴性521例；Zeta链蛋白阳性标本中经基因检测全部确诊为α地中海贫血东南亚缺失型，阴性中无α地中海贫血东南亚缺失型。Zeta链蛋白检测α地中海贫血东南亚缺失型灵敏度为100％，特异度为100％，假阳性率0％。假阴性率0％，阳性试验的预示值100％，阴性试验的预示值100％。结论酶联免疫法检测Zeta链蛋白是一种简便、快速检测α地中海贫血东南亚缺失型的方法，可用于临床大规模筛查。     

ELISA法检测ら珠蛋白链在广西东南亚缺失型α-地中海贫血筛查中的应用价值

目的 评价并比较酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ら珠蛋白链与聚合酶链反应(PCR).方法 在诊断广西东南亚缺失型α-地中海贫血中的临床应用价值.方法 收集广西壮族自治区人民医院门诊部和产科住院病例210份血样标本(其中82例各型α-地中海贫血,13例各型α-地中海贫血,115例为正常对照;地中海贫血组均有MCV＜80fl、MCH＜27pg,Hb在25～128g/L之间,采用ELISA法和聚合酶链反应(PCR)方法进行检测,最后对ELISA法筛查--SEA携带者总的敏感度、特异度、准确度、阴性预测值、阳性预测值与聚合酶链反应(PCR)方法进行分析并比较其诊断--SEA携带者的临床应用价值.结果 ELISA法诊断--SEA携带者总的敏感度、特异度、准确度、阴性预测值和阳性预测值分别是96.2％、98.3％、97.6％、98.3％和96.2％,而聚合酶链反应(PCR)法检测的相应指标均为100.0％(P＞0.05),两者无显著性差异.尽管ELISA法对--SEA携带者有很高的检出率,但其检测α-地中海贫血时有明显的漏检率,尚不属于成熟检测方法,需要进一步研究变流.结论 ELISA法能很有效地检出--SEA携带者,加之该法简便快速、技术要求不高且经济实用,适用于常规实验室筛查.但从本次评价的结论看,该方法漏检率较高,还不适宜推广作为大规模筛查方法.     

ELISA法检测ζ珠蛋白链在广西东南亚缺失型α-地中海贫血筛查中的应用价值

目的评价并比较酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测ζ珠蛋白链与聚合酶链反应（PCR）。方法在诊断广西东南亚缺失型α-地中海贫血中的临床应用价值。方法收集广西壮族自治区人民医院门诊部和产科住院病例210份血样标本（其中82例各型α-地中海贫血,13例各型β-地中海贫血,115例为正常对照;地中海贫血组均有MCV〈80fl、MCH〈27pg,Hb在25～128g/L之间,采用ELISA法和聚合酶链反应（PCR）方法进行检测,最后对ELISA法筛查--^SEA携带者总的敏感度、特异度、准确度、阴性预测值、阳性预测值与聚合酶链反应（PCR）方法进行分析并比较其诊断--^SEA携带者的临床应用价值。结果 ELISA法诊断--^SEA携带者总的敏感度、特异度、准确度、阴性预测值和阳性预测值分别是96.2%、98.3%、97.6%、98.3%和96.2%,而聚合酶链反应（PCR）法检测的相应指标均为100.0%（P〉0.05）,两者无显著性差异。尽管ELISA法对--^SEA携带者有很高的检出率,但其检测α-地中海贫血时有明显的漏检率,尚不属于成熟检测方法 ,需要进一步研究交流。结论 ELISA法能很有效地检出--^SEA携带者,加之该法简便快速、技术要求不高且经济实用,适用于常规实验室筛查。但从本次评价的结论看,该方法漏检率较高,还不适宜推广作为大规模筛查方法 。     

应用单管多重PCR诊断缺失型α-地中海贫血

目的探讨应用单管多重PER对缺失型α地中海贫血进行诊断,并了解-SEA、-α3.7、-α4.2三种缺失型在广西南宁农村地区人群中的分布情况。方法对466例用血液学参数分析初筛为仪地中海贫血患者进行基因诊断。结果初筛为OL地中海贫血466例临床标本,基因检测证实326例为0【地中海贫血。在326例o【地中海贫血患者中,-SEA／αα197例、-α3.7／αα64例、-α4.2／αα50例,占60．43％、19．63％和15．34％。与PCR检测相比,MCV、MCH和HbA2检测的灵敏度分别为86．20％、79．45％、77．61％;检测特异度分别89．29％、66．43％、71．14％。结论与血液学检测方法相比,单管多重PCR检测具有快速、准确的优点,可用于大面积人群和,临床样品的缺失型仪一地中海贫血的分子流行病学调查及产前诊断。     

反向点杂交快速诊断非缺失型α-地中海贫血

目的 建立一种简便快速筛查非缺失型α—地中海贫血点突变的反向点杂交(reverse dot blot,RDB)技术。方法 将生物素直接标记在引物上,选择性扩增人α2珠蛋白基因,将PCR产物与固化在膜条上的寡核苷酸探针杂交,洗膜、显色后分析结果。结果 采用生物素标记的引物：Bio—C1和Bio—C3可选择性扩增α2珠蛋白基因,PCR产物长度为1085bp,该标记片段与固相探针构成的反向点杂交检测体系,可以分辨出中国人群中已知的6种非缺失型α—地中海贫血点突变。结论 该反向点杂交检测体系无需巢式PCR扩增,一步选择性扩增的α2珠蛋白基因产物即可用于杂交;无需进行检测标记物(如生物素)反应,而将生物素直接标记在引物上;无需不同的洗膜条件,故较已报道的同类方法更为简单易行。RDB技术可用于快速诊断中国人非缺失型α—地中海贫血点突变。     

泰国缺失型α地中海贫血1的产前基因诊断

目的对携带泰国缺失型α地中海贫血1,可能生育α地中海贫血高危胎儿的夫妇进行产前基因诊断。方法应用聚合酶链反应、DNA测序等方法对夫妇及胎儿DNA进行基因分析。结果4个家系的孕妇均为泰国缺失型α地中海贫血1复合α地中海贫血2的Hb H病患者,5个家系的孕妇或丈夫为泰国缺失型α地中海贫血1杂合子;其配偶为东南亚缺失型α地中海贫血1杂合子。他们的胎儿检出2例Hb Bart’s胎儿水肿综合征,1例Hb H病,4例α地中海贫血杂合子,2名正常。DNA测序分析证实PCR的检测结果。结论泰国缺失型α地中海贫血1的产前基因诊断研究,对遗传咨询和地中海贫血产前基因诊断具有重要意义。     

非缺失型α地中海贫血的分子基础

非缺失型α地中海贫血的分子基础赵永忠，徐湘民，徐钤地中海贫血（地贫）是一组以珠蛋白合成减少，α－链／非α－链比例失衡为特征的遗传性溶血性血红蛋白病。根据所减少的珠蛋白类型，可分为α－、β－、δ－、δβ－、γδβ－地中海贫血等。α地贫是最重要的地贫类型...     

应用单管四重PCR技术检测三种缺失型α-地中海贫血

目的应用单管四重PCR技术检测3种缺失型α-地中海贫血.方法应用单管四重PCR技术进行302例标本的α-地中海贫血基因诊断.结果302例受检者中,发现--sea/αα69例(77.5%)、-α3.7/αα6例(6.7%)、-α3.7/--sea5例(5.6%)、-α4.2/--sea4例(4.4%)、-α4.2/αα 3例(3.4%)、-α3.7/-α3.7α1例(1.1%)、--sea/--sea 1例(1.1%).结论单管四重PCR技术是检测3种缺失型α-地中海贫血的简便、有效方法,适宜在临床上推广应用.     

产前诊断少见的α-基因缺失型突变引起的水肿胎

目的探讨1例Bart’s水肿胎的α基因突变类型。方法利用多种PCR方法对1例Bart’s水肿胎的α基因进行诊断。结果本例Bart’s水肿胎的致病机理为仪基因的SEA缺失和THAI缺失的双重杂合子。结论α基因的THAI缺失也是引起Bart’s水肿胎的原因，在临床中应主意检测。     

1例异常血红蛋白合并东南亚缺失型地中海贫血的报道

目的 报道我国首例异常血红蛋白合并东南亚缺失型地中海贫血的病例1例.方法 在产前筛查中发现1例血红蛋白分析异常峰,即运用西森美康XN 1000进行血细胞分析、高效液相色谱法进行血红蛋白组分分析、采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)结合反向点杂交技术诊断及跨越断裂点的聚合酶链反应...     

单管多重PCR体系快速检测缺失型α地中海贫血

目的采用单管多重PCR体系快速检测三种最常见缺失型α地中海贫血,并探讨该体系应用于临床基因诊断、产前诊断的可行性.方法采用单管多重PCR体系对21例血红蛋白H病和442例临床送检病例血样本进行α地中海贫血基因诊断,另2例取羊水进行产前诊断.结果21例H病中11例为右缺失型H病(-α3.7/--),占52.4%;10例为左缺失型H病(-α4.2/--),占47.6%.442例送检病例中正常(αα/αα)302例;140例为缺失型α地贫,其中东南亚缺失(--SEA/αα)123例,占87.9%(123/140),右失型(-α3.7/αα)10例,占7.1%(10/140),左缺失(-α4.2/αα)7例,占5.0%(7/140).2例羊水中一例为Hb Bart's胎儿水肿胎(--/--),另一例为东南亚缺失(--SEA/αα).结论该体系能快速检测三种最常见缺失型α地中海贫血,方法准确、简便、可靠、重复性好,可望广泛用于临床疑诊病例的基因诊断和产前诊断.     

α-地贫静止型基因分析及临床意义

采用基因扩增法对产前孕妇检查是否携带有α-地贫基因缺陷。并对已检出的α-地贫静止型与平均红细胞体积（MCV）、红细胞脆性进行统计分析。在1432份受检α-地贫血样中有71例α-地贫静止型被检出。其中MCV〉80fl,同时红细胞脆性试验〉60%40例,MCV〈80fl和（或）红细胞脆性试验〈60%31例。结果显示：MCV、红细胞脆性试验对α-地贫静止型的诊断意义不大。对于一方已确诊携带有--^SEA基因的α-地贫夫妇,另一方必须进行α-地贫（包括α-地贫静止型）的基因检测,以防止HbH病的小儿出生则意义重大。     

MCV、RDW参数在筛查新生儿α地中海贫血中的意义

目的　探讨新生儿α地中海贫血 (地贫 )标准型和静止型平均红细胞体积 (MCV)、红细胞体积分布宽度(RDW )的改变及其意义 .方法　分析了 3 2例标准型和 2 6例静止型α地贫的MCV、RDW参数及 3 2例正常组对比分析 .结果　标准型MCV、RDW低于对照组 (p均 <0 .0 1) ,静止型MCV低于对照组 (p <0 .0 5)、RDW与对照组无差异 (p>0 .0 5) .结论　MCV、RDW值可作为筛查新生儿α地贫的简单方法之一     

MCV、RDW参数在筛查新生儿α地中海贫血中的意义

目的探讨新生儿α地中海贫血(地贫)标准型和静止型平均红细胞体积(MCV)、红细胞体积分布宽度(RDW)的改变及其意义. 方法分析了32例标准型和26例静止型α地贫的MCV、RDW参数及32例正常组对比分析. 结果标准型MCV、RDW低于对照组(p均<0.01),静止型MCV低于对照组(p<0.05)、RDW与对照组无差异(p>0.05). 结论 MCV、RDW值可作为筛查新生儿α地贫的简单方法之一.     

应用脐带血电泳筛查新生儿α-地中海贫血

目的应用脐带血血红蛋白(Hb)电泳筛查新生儿α-地中海贫血(简称α-地贫),为玉林市α-地贫的防治提供依据。方法采用全自动电泳仪对2684名新生儿脐带血进行血红蛋白(Hb)电泳,电泳后对Hb区带进行扫描定量分析,根据巴特血红蛋白(HbBart's)含量判定α-地贫类型,并将筛查阳性的病例进行基因诊断。结果 2684份脐带血中,HbBart's含量≥1%者265例,筛查阳性率为9.87%,其中HbBart's含量在1%～3%者为61例,在3～20%者197例,在20%～40%者5例,80%者2例。根据巴特血红蛋白(HbBart's)含量推算出静止型α-地贫,标准型α-地贫,HbH病,巴氏胎儿水肿综合征的携带率分别为2.27%、7.34%、0.19%、和0.07%。除2例巴氏胎儿水肿综合征外,经基因分析诊断为α地贫的有249例。结论应用脐带血血红蛋白电泳筛查新生儿α-地中海贫血方便、快捷、有效,对指导优生优育,提高出生人口质素质有重要意义,可作为新生儿α-地贫的常规筛查方法 。     

广西地区α2珠蛋白基因密码子30缺失导致非缺失型血红蛋白H病

目的　分析广西地区血红蛋白 (hemoglobin,Hb) H病的基因型 ,了解其表型与基因型的相互关系。方法　对 2 98个病例进行血液学分析、血红蛋白分析 ,及用聚合酶链反应方法和 DNA测序确诊基因突变。结果　在 2 98例 Hb H病患者中发现 1例罕见的 Hb H病。患者为男性 ,2 5岁。自幼有黄疸、脾肿大 ,从未输过血。血液学分析示血红蛋白 10 7g/ L,RBC4 .9× 10 1 2 / L,MCV76 .2 fl,血红蛋白分析 Hb H Hb Bart's34.4 1%。基因分析证实其为 α2珠蛋白基因密码子 30缺失复合东南亚缺失型 α地中海贫血 - 1。结论　我国曾报道的非缺失型 Hb H病主要有 Hb CS- H,Hb QS- H及 α2珠蛋白基因密码子 31基因突变复合东南亚缺失型 α地中海贫血 - 1,临床上表现为中至重度贫血的非缺失型 Hb H病。与之不同的是 ,该患者无贫血 ,但 Hb H Hb Bart's水平高于上述疾病。此基因突变在 α地中海贫血高发区之一的广西地区的认识和发现 ,对该地区的遗传咨询和产前诊断具有重要意义。     

应用温度梯度凝胶电泳分析非缺失型〆-地中海贫血突变

目的　建立用于非缺失型 α-地中海贫血 (α-地贫 )突变筛查的温度梯度凝胶电泳(temperature gradientgel electrophoresis,TGGE)技术。方法　以不同基因型人基因组 DNA为模板 ,选择性扩增全长 α2 -珠蛋白基因 ,继以巢式 PCR扩增突变热点区域 ,然后建立并优化 TGGE参数。在此基础上 ,筛查表型阳性的 15例非缺失型 α-地贫疑诊样品 ,阳性样品经 DNA序列测定确认突变。结果　建立了分析5 43bp PCR片段和 α2珠蛋白基因全长 10 85 bp片段的 TGGE技术 ,可检测出中国人群中常见的两种 α-地贫点突变 :Hb Constant Spring(Hb CS)和 Hb Quong Sze(Hb QS)及 Hb Westmeadα2 CD12 2 CAC→ CAG(His→ Gln)。15例样品中 ,10例为 Hb CS,2例为 Hb QS,2例为 Hb Westmead,1例为新的与 Hb H病相关的突变 α2 CD31AGG→ AAG(Arg→ L ys)。结论　所建立的 PCR- TGGE技术可用于非缺失型 α-地贫点突变和 α-珠蛋白基因多态性的分子筛查     

PCR技术快速检测常见缺失型α-地中海贫血-2基因

目的 建立一套设有内对照的稳定、可靠的检测缺失型α-地中海贫血-2的PCR技术,用于α-地中海贫血的分子诊断和人群筛查。方法 α-珠蛋白基因簇的高度同源性和高鸟嘌噙胞嘧啶核苷酸含量,使引物的选择和PCR扩增受到限制,对于左缺失型-α^4,2基因,在疾病基因序列测定的基础上,设计了一套全新的三引物PCR体系,用于区别正常和缺失等位基因,为检测右缺失型-α^3,7基因,则设计了四引物多套全新的三引物PCR体系,用于区别正常和缺失等位基因,为检测右缺失型-α^4.2基因和-α^3,7基因的分子诊断,正常人只有1条内对照扩增条带,而α-地中海贫血-2杂合子可见对应的2条扩增条带。结论 该体系可检测-α^3,7和-α^4,2缺失型α-地中海贫血-2基因,有望用于临床样本分子诊断稿发人群基因筛查。     

血常规MCV、MCH对静止型α地中海贫血的筛查意义

目的探讨血常规MCV、MCH对静止型α地中海贫血(以下简称地贫)的筛查价值。方法回顾性分析,2010年1月至2011年5月间在我院行相关检查者。研究组:110例静止型α地贫患者;对照组:100例健康体检者。比较两组间MCV、MCH均值的差异,并对两组资料进行ROC曲线分析。结果静止型α地贫组MCV、MCH均值与健康对照组有明显差异。ROC曲线分析,MCV曲线下面积0.926,MCH曲线下面积为0.954。结论血常规MCV、MCH可作为静止型α地贫的有效筛查指标,但存在漏检风险。     

单管多重PCR快速检测中国人三种常见缺失型α-地中海贫血基因

目的建立一种简单快速、准确可靠、经济实用的检测常见缺失型α-地中海贫血(α-地贫)突变(--^SEA、-α^3.7和-α^4.2)的单管多重PCR技术以用于α-地贫的分子筛查和产前诊断。方法采用gap—PCR方案设计4组PCR引物并对PCR反应条件进行系统优化以扩增代表这3种地贫和α2基因存在的特异性DNA片段。此外，还设计1对引物扩增LIS1基因3′-端非翻译区片段作为整个PCR体系扩增成功与否的内在对照。采用盲法分析对该技术的特异性、准确性和可靠性进行评价并应用于产前分子诊断中。结果所建的单管多重PCR技术成功地检出这3种常见缺失型α-地贫突变的纯合子、杂合子和双重杂合子。正常人出现LIS1和α2基因特异扩增片段，而--^SEA、-α^3.7和-α^4.2杂合子除了出现正常人的2条扩增带外，还分别出现1条指示这些突变存在的特异性扩增片段。盲法分析结果显示，该技术对α-珠蛋白基因型经过Southern印迹法或DNA直接测序确证的DNA标本的诊断准确性达到100％，并被成功地应用于9个重症α-地贫高风险家庭的产前诊断中。结论该技术可准确、快速地检测--^SEA、-α^3.7和-α^4.2 3种常见缺失型α-地贫突变，且具有经济和实用的优点，非常适合于α-地贫的大人群分子筛查和临床样品的基因诊断。