rSj26-Sj32融合蛋白用于慢性日本血吸虫病的诊断研究

目的:探讨rSj26-Sj32融合蛋白用于慢性日本血吸虫病的诊断价值.方法:用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫粗抗原(SjAWA)作为包被抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和dipstick三种方法检测慢性日本血吸虫病患者血清特异性IgG抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病和囊型棘球蚴病患者以及健康人血清作为对照.结果:rSj26-Sj32融合蛋白通过三种方法检测慢性日本血吸虫病的敏感性分别为95.00%、92.50%和92.50%;特异性分别为97.67%、95.35%和97.67%.结论:rSj26-Sj32融合蛋白可用于慢性日本血吸虫病的免疫诊断.     

rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值

目的探讨rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法以纯化获得的rSj26-Sj32融合蛋白和SjAWA为包被抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和Dipstick三种方法分别检测急性日本血吸虫病患者血清中IgG抗体,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者以及健康人血清作对照。结果 rSj26-Sj32三种方法检测急性日本血吸虫病患者血清的敏感性分别为90.00%、100.00%和96.00%;特异性分别为97.67%、95.35%和97.67%。结论 rSj26-Sj32融合蛋白作为诊断抗原用于急性日本血吸虫病患者血清的诊断具有较好的敏感性和特异性,对急性日本血吸虫病的诊断有较大的应用价值。     

rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病的诊断价值

目的探讨rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原（SjAWA）建立Immunogold-IgG-Dot-ELISA方法检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照,比较检测结果。结果 rSj26-Sj32和SjAWA检测急性日本血吸虫病患者的阳性检出率均为100%,特异性分别为97.67%和95.35%;SjAWA与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病血清均存在不同程度的交叉反应。结论纯化的rSj26-Sj32融合蛋白是一种较好的免疫诊断抗原。     

rSj26-Sj32-IgG4-ELISA法用于慢性日本血吸虫病疗效考核价值的研究

目的 探讨rSj26-Sj32-IgG4-ELISA法用于慢性日本血吸虫病疗效考核价值的研究。方法 采用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫粗抗原（SjAWA）作为包被抗原建立ELISA方法检测慢性日本血吸虫病患者体内治疗前后血清中特异性IgG4抗体水平的变化。结果 rSj26-Sj32融合蛋白组中,化疗前、化疗后3个月、化疗后6个月和化疗后12个月血清中IgG4抗体阳性率分别为95.00%、77.27%、60.00%和30.43%;而SjAWA组中血清特异性IgG4抗体阳性率分别为97.50%、81.82%、55.00%和34.78%。结论 rSj26-Sj32-IgG4-ELISA法可用于慢性日本血吸虫病的疗效考核。     

点免疫结合法诊断包虫病的研究

本文首次报道应用点免疫结合法检测血液中抗棘球蚴抗原的抗体以诊断包虫病。在以羊肝棘球蚴液原液为抗原和1:400的血清稀释度时,52例包虫病患者血清的阳性符合率为92.3％;32例其它疾病患者血清和60例正常人血清的假阳性率为2.2％。阻断试验、替代试验和诊断试验结果提示此法诊断包虫病敏感性高、特异性强、方法简便,适于农村牧区基层医疗和防疫单位推广应用。     

细粒棘球蚴单克隆抗体的研制和应用

<正> 棘球蚴病的免疫诊断方法主要是检测病人血清中的特异抗体,现有检测方法的敏感性和特异性仍不理想,与所采用的抗原性质有关。由于缺乏标准化的诊断抗原,不同实验室的检测结果不一,也无法比较。因此对棘球蚴囊液抗原有进一步研究必要。本文采用淋巴细胞杂交瘤技术制备了高效特异的单克隆抗体(McAb),对不同宿主的棘球蚴囊液抗原组分的理化特性和抗原性进行了分析。 以初步纯化的人源棘球蚴囊液抗原免疫BALB     

细粒棘球蚴AgB亚单位基因的联合表达和血清学评价

目的为进一步提高AgB抗原在诊断中的敏感性和特异性,将细粒棘球蚴AgB1和AgB2两个亚单位基因在同一载体中进行联合表达,并对联合表达的重组抗原和单基因表达的AgB1、AgB2在血清抗体检测中的差异进行比较研究。方法在表达载体PET32a中构建AgB1＋AgB2（AgBs）联合基因的重组质粒,用ELISA检测重组抗原与病人血清的反应性。结果构建了AgBs重组质粒,经测序证实插入的联合基因片段序列正确。AgBs重组质粒表达的融合蛋白分子量为38kDa,为不溶性蛋白。联合表达抗原AgBs对细粒棘球蚴病（CE）血清的敏感性为84．4％,特异性为80．5％;单基因表达的AgB1和AgB2的敏感性分别为75．6％和57．8％,特异性分别为72．6％和91．2％。结论成功构建了AgB亚单位联合表达基因,联合表达的AgBs抗原对CE血清的诊断价值优于单基因表达的AgB1或AgB2抗原。     

生物素-抗生物素系统点免疫结合试验诊断棘球蚴病的研究

<正> 本文建立了生物素-抗生物素系统点免疫结合试验(BAS-DIBA),并以棘球蚴病患者血清、非棘球蚴病患者血清、健康人血清和纯化的细粒棘球蚴(Echinococcus granulo-sus)抗原进行BAS-DIBA和常规DIBA的诊断试验。     

日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的诊断价值

为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原（sjAWA67)对血吸虫病的诊断价值。本研究通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔。进行常规ELISA检测。结果对急,慢性血吸虫病患血清的检出率分别为100%和95%,与正常人血清,肝吸虫病和肺吸虫病患血清均未出现明显的变叉反应,44例血吸虫病患治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45.7%,75.0%和90.09%。表明SjAWA67蛋白具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

重组抗原Em18双抗原夹心酶联免疫吸附试验法检测泡球蚴抗体的建立及初步评价

目的 建立双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测泡状棘球蚴抗体的方法.方法 重组抗原Em18(rEm18)作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记rEm18抗原为检测抗原,建立检测人血清中泡状棘球蚴抗体的双抗原夹心ELISA方法;应用方阵滴定法对包被抗原、酶标抗原等条件进行优化,并对该系统的灵敏性、特异性、重复性进行初步分析评价.结果 rEm18最佳包被浓度为2.5μg/mL,HRP标rEm18稀释度为1∶800.灵敏度为92％(46/50),特异性为94％(47/50),假阴性率为8％ (4/50),假阳性率为6％ (3/50),批内变异≤9.55％,批间变异≤14.79％,与Em2-ELISA试剂盒检测结果有良好的一致性.结论 本研究成功建立了快速检测泡球蚴特异性抗体的ELISA法,其可以用于人泡球蚴病的早期诊断.     

日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST—Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达

目的构建日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST—Sj32,分析该质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达情况。方法超声粉碎日本血吸虫成虫提取总RNA,通过RT—PCR扩增获得Sj26GST和Sj32抗原编码基因,然后采用基因拼接法（geneSOEing）剪接Sj26GST和Sj32,得到Sj26GST—Sj32融合基因,克隆至原核表达载体pET32α（＋）,构建重组质粒pET32α一Sj26GST—Sj32,转化人大肠埃希菌BL21（DE3）,经异丙基硫代-β—D．半乳糖苷（IPTG）诱导表达后用SDS—PAGE和Westem—blot对表达产物进行分析和鉴定。结果基因拼接法扩增出约1991bp的Sj26GST—Sj32融合基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST—Sj32融合基因成功插入pET32α（＋）中,SDS—PAGE分析显示表达产物为分子质量约82000Mr的重组蛋白．与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的22％：Western—blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论成功构建了日本血吸虫重组质粒pET32α一Sj26GST—Sj32,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原一件     

日本血吸虫病患者血清对噬菌体随机7肽库的免疫筛选

目的 从噬菌体随机多肽文库中,筛选出能与慢性血吸虫病患者血清特异性结合的短肽分子。方法 采用慢性血吸虫病患者血清球蛋白作为配基,免疫筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体Ｍ１３外壳蛋白Ⅲ表达的随机７肽文库。按吸附－洗脱－扩增的淘筛过程,经３轮免疫淘筛后,随机挑取菌体克隆用ＥＬＩＳＡ检测其牧场 划性,并用斑点ＥＬＩＳＡ分析其诊断血吸虫病的价值。结果 经３轮免疫淘筛后,特异性结合的噬菌体富集增加近１００倍,有     

检测日本血吸虫感染者血清中特异性IgG4的诊断价值

为评价日本血吸虫感染者血清中特异性IgG4的诊断和疗效价值,本研究以SEA为抗原,胶体金．抗人IgG4单抗结合物为检测标记物,以金标免疫渗滤法（DIGFA）检测急性和慢性血吸虫病患者治疗前后血清中特异性IgG4抗体。结果显示,急性和慢性血吸虫病病人血清中IgG4阳性率分别为90．9％（30／33）和98．0％（98／100）;检测非疫区健康者血清及其他寄生虫（包括肺吸虫、华支睾吸虫、囊虫等）感染者血清共235人份,未有阳性出现（特异性为100％）;检测急性血吸虫病病人治疗后6个月和12个月血清,IgG4抗体的阴转率分别为52．0％（13／25）和87．5％（21／24）,均明显高于IgG阴转率;检测血吸虫病病人治后6个月血清,慢性病人与急性病人IgG4抗体阴转率无差异。结果表明DIGFA法检测病人血清特异性IgG4诊断血吸虫病敏感性高,与IgG相比有更高的特异性,具有一定的疗效考核价值。     

日本血吸虫铁蛋白基因的克隆、表达及其免疫诊断的研究

目的：构建、表达、纯化日本血吸虫铁蛋白基因的原核表达重组蛋白，并初步观察其免疫诊断价值。方法：将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆于pGMC载体，转化重组体到大肠杆菌E．coli 2566进行表达；采用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋白；用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达纯化产物；用Dot-ELISA分别检测了血吸虫病人及正常人的血清。结果：重组的日本血吸虫铁蛋白以GMC(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)．日本血吸虫铁蛋白融合蛋白的形式在细菌中得到高效表达，分子量为40kD，能被日本血吸虫感染兔血清识别。用重组铁蛋白检测30例日本血吸虫病人血清和30例正常人血清，阳性率和假阳性率分别为93．3％和3．3％。结论：成功地表达纯化日本血吸虫重组铁蛋白．且该蛋白具有一定的免疫诊断价值．     

Production of a recombinant antigen of Echinococcus multilocularis with high immunodiagnostic sensitivity and specificity

A cDNA library derived from mRNA of metacestodes from Echinococcus multilocularis was constructed in the Escherichia coli expression vector lambda gt11 and screened with human patients' sera. The recombinant proteins of 11 positive phages were further evaluated for their potential as immunodiagnostic reagent. One isolated clone (from lysogen II/3) synthesized a fusion protein which was rapidly degraded. This intracellular degradation process provided two distinct polypeptides with Mr of about 31,000 and 33,000, both showing strong binding activity with specific patients' antibodies. The diagnostic value of the II/3-antigen was evaluated by mini-Western-blot with sera from 41 patients infected with E. multilocularis and sera from 77 patients with other helminthic infections, resulting in a diagnostic sensitivity of 98% and an over-all specificity of 96%. These results suggest the usefulness of the recombinant II/3-antigen for immunodiagnosis of human alveolar echinococcosis.     

Sera of Schistosoma japonicum-infected patients cross-react with diagnostic 31/32 kD proteins of S. mansoni.

Schistosoma mansoni adult worm antigens were tested for cross-reactions with sera obtained from patients infected with S. japonicum. The sera consistently recognized a doublet of bands, in immunoblots, which had molecular weights of approximately 31 and 32 kilodaltons (kD). This reaction was found to be markedly reduced with sera of patients who had received chemotherapy and who had a low risk of reinfection. Sera obtained from uninfected persons or from patients infected with other parasites never reacted with the antigen doublet. Schistosoma japonicum-infected mice produced antibodies during prepatency which predominantly recognized antigens of this molecular weight range in immunoblots performed with S. mansoni or S. japonicum proteins. Sera from S. mansoni-infected patients with a high specificity for the diagnostic S. mansoni-antigen cross-reacted with a corresponding component also in S. japonicum worms. Immunofluorescence assays performed with sera of schistosomiasis japonica patients confirmed earlier results localizing the diagnostic 31/32 kD antigens in the gut of S. mansoni. These cross-reacting 31/32 kD S. mansoni protein antigens may be applied for the immunodiagnosis of schistosomiasis japonica.