甲醛对雌性大鼠卵巢结构及卵母细胞超微结构和凋亡的影响

目的:研究甲醛对雌性大鼠卵巢病理组织结构、卵母细胞超微结构及卵母细胞凋亡的影响。方法:将40只SD雌性大鼠随机分为正常组和3个不同浓度甲醛染毒组,腹腔注射甲醛,剂量分别为20.0、2.0和0.2 mg/kg,每天1次,连续14 d,14 d后处死所有大鼠取卵巢组织,应用HE染色光镜观察雌性大鼠卵巢组织病理形态变化,应用电镜技术观察雌性大鼠卵母细胞超微结构的变化,应用TUNEL染色观察卵母细胞凋亡的情况。结果:甲醛可引起雌性大鼠卵巢组织的病理结构变化,其病理变化的程度与甲醛呈剂量依赖性;电镜检查发现甲醛可破坏卵母细胞的超微结构,其超微结构变化的程度与甲醛亦呈剂量依赖性;TUNEL染色观察到甲醛染毒组大鼠卵母细胞的凋亡率均高于对照组,且中、高剂量组和对照组间凋亡率比较差异具有显著性意义。结论:甲醛对雌性大鼠的卵巢组织结构及卵母细胞超微结构造成不良影响,促使卵母细胞凋亡。     

C-kit在卵巢早衰大鼠卵巢中的变化

目的探讨抗肿瘤药物环磷酰胺对大鼠卵巢中c-kit表达的影响,为卵巢早衰的发病机制及临床治疗的研究提供参考依据。方法选用20只10周龄具有正常动情周期的SD大鼠随机分为2组:实验组采用腹腔注射环磷酰胺负荷计量50 mg/kg后以8 mg~(-1)·kg·d~(-1)的维持计量连续注射14 d;对照组注射0.9%的生理盐水。应用苏木精-伊红(HE)染色、免疫组织化学技术,观察卵巢形态学变化、c-kit在各级卵泡数的分布情况和表达。结果 (1)大鼠卵巢体积缩小,卵泡损数目减少,间质增多;(2)免疫组化结果显示c-kit在大鼠卵巢各级卵泡的卵母细胞中均有表达,但在原始卵泡的表达最强。(3)免疫组化结果显示实验组c-kit在各级卵泡的表达均有所下降,其中原始卵泡的卵母细胞中的表达降低最为显著。结论环磷酰胺可致大鼠卵巢早衰可能和通过下调卵母细胞c-kit的表达有关。     

缝隙连接蛋白43和黄体生成素受体在小鼠卵巢中的表达

目的 观察小鼠卵泡发育过程中缝隙连接蛋白43（Cx43）和黄体生成素受体（LHR）在小鼠卵巢中的表达以及黄体生成素(LH)对卵巢Cx43表达的影响,为这两种分子与卵泡发育的关系提供实验依据。 方法 选择出生后1d、4d、7d、2周、3周、4周、6周、8周龄雌性C57小鼠共8组,每组10只,取卵巢。HE染色观察卵巢形态、卵泡发育并测量颗粒细胞体积分数。免疫组织化学和Western blotting观察卵巢组织中Cx43及LHR的表达,Western blotting检测不同浓度黄体生成素（LH）孵育后对卵巢Cx43表达的影响。 结果 HE染色显示,出生1d小鼠卵巢中见原始卵泡,出生7d卵巢内出现初级卵泡,2周时出现窦前卵泡和少量窦卵泡,3周、4周时,出现较多大的窦卵泡,6～8周时出现黄体。卵泡颗粒细胞体积分数在2周后的卵巢中明显增加。Cx43表达在各阶段卵泡的颗粒细胞胞膜上,LHR表达在卵泡膜细胞、颗粒细胞及卵母细胞胞质中。Cx43和LHR出生后2周卵巢中的表达开始明显增加,并随卵泡发育表达逐渐增强,在3周、4周、6周和8周维持相对较高水平。LH体外干预可增加卵巢组织Cx43的表达。 结论 Cx43和LHR在卵泡发育中发挥重要作用,LH可能通过LHR促进卵巢卵泡颗粒细胞Cx43的表达。     

淫羊藿苷对糖尿病大鼠阴茎组织细胞凋亡及亚硝基谷胱甘肽还原酶表达的影响

目的:探讨淫羊藿苷对糖尿病大鼠阴茎组织细胞凋亡以及亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)表达的影响.方法:采用链尿佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型.分为正常对照组、糖尿病模型组、糖尿病淫羊藿苷干预组(高、中、低剂量分别为30、70、100 mg·kg-1·d-1,灌胃,连用21 d).TUNEL法检测阴茎组织细胞凋亡,免疫印迹检测GSNOR表达.结果:淫羊藿苷高、中剂量组阴茎勃起组织细胞凋亡指数降低,与模型组比较差异有统计学意义.淫羊藿苷干预组阴茎组织GSNOR蛋白表达增加,中、高剂量组与模型组比较差异有统计学意义.结论:淫羊藿苷能抑制糖尿病大鼠阴茎组织细胞凋亡并上调GSNOR蛋白表达.     

阳山鸡出生后早期左卵巢组织结构发育的变化

目的：观察阳山鸡卵巢生后早期发育。方法：采用常规组织学方法,比较1 ～ 7 d 龄阳山鸡左卵巢组织结构 的发育变化过程。结果：出生时双侧卵巢已经显示左右明显的不对称,右侧卵巢于5 d 龄开始退化,而左侧卵巢持 续发育,形状为扁椭圆形,分为2 叶;颜色为灰白色。切片观察可见,出生时鸡左侧卵巢实质由皮质、外髓质和内 髓质构成。皮质主要由处于减数分裂前期的卵母细胞构成,3 d 龄时卵母细胞的染色体进一步凝缩;5 d 龄时皮质的 卵母细胞全部消失,外髓质已开始有成形的卵泡出现;大约7 d 龄时,外髓质的卵泡大而清晰,皮质几乎完全消失, 外髓质最终成为真正的皮质。结论：在生后1 周内,阳山鸡左卵巢皮质发生明显衰退、崩解和丢失,外髓质最终成 为真正的皮质。     

淫羊藿苷对精神分裂症模型大鼠认知及海马组织NRG1/ErbB信号通路的影响

背景:淫羊藿苷是补肾助阳中药淫羊藿的有效活性成分之一,除了可促进生殖系统功能外,还能明显改善精神分裂症,但其具体作用机制仍处于研究与探索阶段。目的:探究淫羊藿苷对精神分裂症大鼠认知功能的影响及机制。方法:采用随机数字表法将48只SD大鼠分4组,每组12只:正常组不造模;模型组、淫羊藿苷低、高剂量组通过腹腔注射N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂MK-801(1次/d)诱导精神分裂症模型,连续注射14 d。确认造模成功后,淫羊藿苷低、高剂量组分别灌胃给予25,50 mg/(kg·d)的淫羊藿苷,对照组、模型组灌胃生理盐水,连续给药28 d。给药结束后,进行行为学检测及海马组织尼氏染色和FJB染色、氧化应激水平、炎症因子水平、NRG1/ErbB4信号通路蛋白表达。结果与结论:(1)与模型组比较,给药两组刻板行为评分、自发活动总路程和逃避潜伏期明显减少(P <0.05),穿台次数明显增加(P <0.05);淫羊藿苷高剂量组刻板行为评分、逃避潜伏期(第3-5天)明显低于淫羊藿苷低剂量组(P <0.05);(2)与模型组比较,给药两组海马组织线粒体膜电位、超氧化物歧化酶活性升高(P...     

玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞和颗粒细胞的影响

目的探讨玻璃化冷冻法保存小鼠卵巢组织对卵泡内卵母细胞和颗粒细胞的影响。方法分别应用两种玻璃化冷冻方案(ED20和EE40)冷冻小鼠卵巢组织,常规组织学检测新鲜和复苏卵巢组织内卵泡形态,同时应用TUNEL方法观察冻融前后卵泡内卵母细胞和颗粒细胞凋亡情况。结果ED20组和EE40组卵泡存活率分别为78.99±5.99%和71.50±5.81%,明显低于新鲜卵巢组织。冻融组织卵泡凋亡率较冷冻前显著升高。ED20组、EE40组和新鲜对照组颗粒细胞凋亡的卵泡比例分别为8.30±2.14%、11.98±2.34%和4.95±1.62%,差异有显著性;而冷冻前后卵母细胞凋亡的卵泡比例无明显差异。结论玻璃化冻融过程对小鼠卵泡中颗粒细胞的损伤较大,而对卵母细胞的影响较小。     

淫羊藿苷调节雄性大鼠生殖功能

目的:探讨淫羊藿苷在环磷酰胺诱导的大鼠睾丸生精障碍动物模型中的作用,研究淫羊霍苷对睾丸功能的影响.方法:分为空白对照组、阴性对照组、模型组、淫羊藿苷治疗组;H-E染色观察睾丸组织结构变化,TUNEL方法检测睾丸生殖细胞凋亡,放射免疫法检测血清睾酮.结果:睾丸H-E染色切片观察显示模型组睾丸生精小管直径缩小,间距增宽,生精上皮变薄,生殖细胞数量减少,生精小管多未见精子形成,与空白对照组比较其生精小管结构变化显著;淫羊藿苷治疗组与模型组比较生精小管壁增厚,含有精子的生精小管明显增多.睾丸生精小管中生殖细胞凋亡的观察模型组与空白对照组比较其生殖细胞凋亡增多,变化显著;淫羊藿苷治疗组与模型组比较生精小管中生殖细胞凋亡数量明显减少.模型组与空白对照组比较血清睾酮明显降低;淫羊藿苷治疗组与模型组比较其血清睾酮明显增加.结论:淫羊藿苷对环磷酰胺诱导生精障碍的睾丸具有改善睾丸生精小管结构、减少生殖细胞凋亡、促进精子发生和间质细胞分泌睾酮的功能.     

PTEN调控大鼠原始卵泡启动和生长

目的探讨PTEN对大鼠原始卵泡激活和生长的调控作用和机制。方法 2日龄大鼠卵巢在Waymouth培养系统中培养0、4和8 d,用HE染色检测慢病毒PTEN siRNA的沉默效率及其对原始卵泡生长启动情况。同步用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学染色检测PTEN mRNA和蛋白在卵泡生长中的表达和动态变化;用慢病毒PTEN-shRNA沉默卵巢中PTEN表达后,观察对原始卵泡启动生长及雌二醇和孕酮分泌的影响;此外,利用PI3K抑制剂LY294002探讨了PTEN在原始卵泡形成过程中的可能信号通路。结果 PTEN mRNA和蛋白在原始卵泡中均有表达,随着原始卵泡的发育,其表达水平降低(P0.01);经PTEN-shRNA慢病毒转染后,荧光成像显示慢病毒在体外已成功转染到卵巢组织,HE染色显示原始卵泡数量减少(P0.01),表明PTEN参与了原始卵泡的起始。结论 PTEN可通过PI3K信号通路和调节雌、孕激素分泌调控原始卵泡发育。它在原始卵泡的发育启动中起着重要的作用。     

毛蕊花糖苷对顺铂诱导小鼠卵巢损害的保护作用

目的研究毛蕊花糖苷对顺铂所致卵巢损害的保护作用。方法 48只昆明雌性小鼠随机分成4组:对照组、顺铂组、顺铂+毛蕊花糖苷低浓度干预组及顺铂+毛蕊花糖苷高浓度干预组。顺铂组、顺铂+毛蕊花糖苷干预组,分别给予腹腔注射顺铂(2.0 mg/kg·d),同时给予等体积生理盐水及不同浓度毛蕊花糖苷(30、60 mg/kg·d)灌胃处理。干预一周后,停止腹腔注射顺铂,毛蕊花糖苷持续干预一周。对照组小鼠给予同等剂量的生理盐水腹腔注射及灌胃处理。分别通过ELISA方法检测各组小鼠血中雌激素(estradiol,E2)及促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)水平、HE染色观察卵巢形态结构、TUNEL染色检测卵巢细胞凋亡情况、免疫组化法及Western blot方法检测卵巢组织中凋亡相关蛋白(cleaved-caspase 3、cleaved-PARP)的表达水平。结果顺铂组小鼠可见血FSH水平升高,卵巢可见发育中窦状卵泡内的颗粒细胞层明显减少,卵母细胞核碎裂及闭锁卵泡增加;凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3、cleaved-PARP的表达水平升高,而毛蕊花糖苷药物干预后在一定程度上能逆转卵巢功能及结构损害,并使卵巢凋亡相关蛋白下调来抑制卵巢组织的凋亡。结论毛蕊花糖苷具有对抗顺铂所致卵巢组织凋亡,保护化疗药物引起的卵巢功能损伤的作用。     

高血糖对小鼠卵母细胞发育及颗粒细胞凋亡的影响

目的 研究高血糖对排卵前小鼠卵母细胞发育及颗粒细胞凋亡的影响.方法 出生后20d ICR雌鼠,建立急性高血糖模型;取高血糖模型雌鼠和正常雌鼠超排卵,分别于hCG注射后的0、2、6和10h取卵巢组织,石蜡切片,TUNEL检测凋亡,免疫组织化学ABC法检测连接蛋白connexin-43的表达,相同时间点取生发泡期(GV期)卵母细胞统计生发泡破裂(GVBD)和第一极体(FB1)的发生率.结果 1.高血糖组卵巢湿重与小鼠体重的比值与排卵数目均低于正常组(P＜0.01);2.免疫组织化学显示,hCG注射后6h、10h颗粒细胞表达connexin-43在高血糖组明显低于正常组(P＜0.05);3.高血糖组卵泡颗粒细胞的凋亡率明显高于正常组,hCG注射后6h、10h差异最显著(P＜0.05);4.高血糖组卵母细胞GVBD发生率低于正常组,于注射后2h差异最显著(P＜0.01).结论 高血糖环境下卵母细胞发育延迟,颗粒细胞的凋亡率增高.这种发育延迟与颗粒细胞间connexin-43低表达呈正相关.     

生育年龄妇女早期卵泡细胞凋亡和Bcl-2/BAX蛋白表达

目的:研究生育年龄妇女早期卵泡的细胞凋亡和Bcl-2/BAX蛋白表达。方法:12例卵巢组织标本来自进行妇科手术的生育年龄妇女(年龄23-38岁),并经过组织病理学检查证实无明显形态异常。利用末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学方法研究早期卵泡(包括始基卵泡、间期和初级卵泡)细胞凋亡和Bcl-2/BAX蛋白表达。结果:早期卵泡内18.75%卵细胞表现TUNEL阳性,但是卵泡内未见TUNEL阳性颗粒细胞。BAX在早期卵泡的卵细胞内表达,阳性表达率76.07%;相反未见Bcl-2在卵细胞表达。另外,早期卵泡内颗粒细胞也没有表达Bcl-2和BAX。结论:生育年龄妇女早期卵泡的卵细胞发生凋亡,促凋亡蛋白BAX在卵细胞凋亡过程中发挥调节作用,由此提示BAX介导的卵细胞凋亡可能是生育年龄妇女早期卵泡闭锁的机制。     

SAS1B protein [ovastacin] shows temporal and spatial restriction to oocytes in several eutherian orders and initiates translation at the primary to secondary follicle transition

Background : Sperm Acrosomal SLLP1 Binding (SAS1B) protein (ovastacin) is an oolemmal binding partner for the intra‐acrosomal sperm protein SLLP1. Results : Immunohistochemical localization revealed that SAS1B translation is restricted among adult tissues to the ovary and oocytes, SAS1B appearing first in follicles at the primary‐secondary transition. Quiescent oocytes within primordial follicles and primary follicles did not stain for SAS1B. Examination of neonatal rat ovaries revealed SAS1B expression first as faint signals in postnatal day 3 oocytes, with SAS1B protein staining intensifying with oocyte growth. Irrespective of animal age or estrus stage, SAS1B was seen only in oocytes of follicles that initiated a second granulosa cell layer. The precise temporal and spatial onset of SAS1B expression was conserved in adult ovaries in seven eutherian species, including nonhuman primates. Immunoelectron micrographs localized SAS1B within cortical granules in MII oocytes. A population of SAS1B localized on the oolemma predominantly in the microvillar region anti‐podal to the nucleus in ovulated MII rat oocytes and on the oolemma in macaque GV oocytes. Conclusions : The restricted expression of SAS1B protein in growing oocytes, absence in the ovarian reserve, and localization on the oolemma suggest this zinc metalloprotease deserves consideration as a candidate target for reversible female contraceptive strategies. Developmental Dynamics, 242:1405–1426, 2013. © 2013 Wiley Periodicals, Inc.     

Pentosidine accumulation in human oocytes and their correlation to age-related apoptosis

Age-related atresia of ovarian follicles is characterized by apoptosis of the constituent cells. Recent studies have indicated that dysfunction of the proteasome and endoplasmic reticulum and subsequent apoptosis in the presence of oxidative stress have relevance to aging. The aim of this study was to assess the involvement of these processes in age-related follicular atresia. Formalin-fixed, paraffin-embedded sections of ovaries obtained at surgery from 74 women (age: 21-54 y) were examined with the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated, dUTP-biotin nick-end labeling (TUNEL) method and an immunohistochemical technique. Primary antibodies used in immunohistochemistry were against pentosidine, ubiquitin and caspase 12. Histological localization of these substances in oocytes was observed by light microscopy, and labeling indices of these cells were evaluated by regression analysis. Positive signals for pentosidine, ubiquitin, caspase 12, and TUNEL were detectable in oocytes of the primordial, primary and their atretic follicles. Regression analysis revealed an age-related increase in the labeling indices for pentosidine, ubiquitin, caspase 12, and TUNEL. These results suggest that pentosidine accumulation in human oocytes is related to apoptosis and increases with age. Further studies will be necessary to clarify the involvement of pentosidine accumulation, proteasome inhibition, and endoplasmic reticulum stress in age-related apoptosis of oocytes in human ovaries.     

Rescue of oocytes from antral follicles of cryopreserved mouse ovaries: competence to undergo maturation, embryogenesis, and development to term

Only primordial and primary follicles of frozen-thawed mouse ovaries survive after grafting to the ovarian bursa; large secondary follicles and antral follicles together with the oocytes contained in them degenerate. This study was undertaken to determine whether fully grown oocytes isolated from the antral follicles of frozen-thawed mouse ovaries are viable and can be rescued to undergo maturation, fertilization, and embryo development in vitro. Ovaries were cryopreserved after removal from 22-day-old (C57BL/6J x SJL/J)F(1) mice, with or without prior priming with equine chorionic gonadotrophin, and fresh non-frozen ovaries were used as controls. Only cumulus cell-denuded oocytes were recovered from frozen unprimed ovaries while both cumulus cell-enclosed and denuded oocytes were retrieved from frozen primed ovaries. Oocytes from both groups of frozen-thawed ovaries were able to undergo maturation, fertilization, and development to the blastocyst stage in vitro, though at lower percentages than oocytes from control unfrozen ovaries. Moreover, 19% of 2-cell stage embryos derived from frozen-thawed primed ovaries, compared with 42% of embryos derived from control primed ovaries, developed to term after transfer to pseudopregnant foster mothers (not significantly different). Therefore, fully grown oocytes in antral follicles survive the cryopreservation protocol, as demonstrated by maturation, fertilization and embryo development in vitro, and development to term after embryo transfer.     

Peroxiredoxin II mRNA在小鼠卵泡发育中定位的研究

目的　观察PeroxiredoxinIImRNA在小鼠卵巢各级卵泡和MII卵中的分布 ,为了解PeroxiredoxinII在卵母细胞发育及成熟过程中的功能意义提供形态学依据。　方法　原位杂交方法。　结果　在小鼠卵巢内 ,原始卵泡的初级卵母细胞未检到PeroxiredoxinIImRNA的杂交信号 ,初级卵泡的初级卵母细胞可检到杂交信号 ,次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的信号明显增强。离开卵巢的GV卵也能检到较强的杂交信号 ,排到输卵管的次级卵母细胞 (MII卵 )杂交信号与GV卵相比明显减弱。从原始卵泡到近成熟卵泡周围的卵泡细胞均可检到杂交信号 ,其信号强度在卵泡发育成熟过程中未见有明显变化。卵母细胞和卵泡细胞的PeroxiredoxinIImRNA杂交信号均分布在胞质。　结论　提示PeroxiredoxinII可能参与了卵母细胞生长发育和卵母细胞成熟过程的调节。     

骨形态发生蛋白4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控作用

目的 探讨骨形态发生蛋白（BMP）4/Smad 信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控作用。方法 取出生3d的雌性昆明小鼠卵巢,采用两步酶消化法,分离纯化卵母细胞,进行原代培养。将卵母细胞分为3组:正常对照组(Con组)、添加重组人BMP4组(BMP4组)、添加BMP4和BMP4抑制剂6-{4-［2-（1-呱啶基）乙氧基］苯基}-3-（4-吡啶基）吡唑并（1,5-A）嘧啶（dorsomorphin）组（BMP4+抑制剂组)。采用TUNEL法, 检测BMP4对卵母细胞凋亡的影响;采用免疫组织化学染色与实时定量PCR,检测BMP4对卵母细胞中p-Smad1/5/8、sohlh2、c-kit及foxo3a表达的影响。采用RNA干扰技术、转染sohlh2质粒和LY294002处理,探讨BMP4/Smad 信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控机制。结果 TUNEL 结果显示,BMP4组凋亡卵母细胞比例明显低于Con组(P<0.05)和BMP4+抑制剂组(P<0.05);加入BMP4可明显促进细胞Smad入核,上调 sohlh2和c-kit表达,抑制foxo3a入核; 转染sohlh2 siRNA 后,可明显阻断BMP4抑制卵母细胞凋亡的作用;转染sohlh2质粒后,p-foxo3a表达量显著增加,LY294002可明显抑制sohlh2促进foxo3a磷酸化的作用。 结论 激活BMP4/Smad信号通路可抑制小鼠原始卵泡卵母细胞的凋亡,其作用机制可能是通过上调sohlh2和c-kit基因表达,进而调控foxo3a入核而实现的。     

人胎卵巢的组织发生

本文收集10～38周女性胎儿26例,取卵巢固定于Carnoy液,采用HE、PAS及Unna法显示一般结构、多糖类及RNA。胎期卵巢的发育可分为三期。1.卵原细胞期(第10～15周):可观察到繁殖中的卵原细胞群遍布于皮质,卵原细胞含有糖原颗粒。2.初级卵母细胞期(第15～20周):卵原细胞群的部分细胞分化为卵母细胞,并逐渐增多,核处于分裂前期,胞质内含有RNA颗粒,同时皮质内出现成群退化的生殖细胞。3.原始卵泡期(第20～38周):皮髓交界区于15～17周出现原始卵泡;20周后,大量原始卵泡存在于皮质。26周后可观察到少数生长卵泡,此乃母体促性腺激素作用于胎儿卵巢的结果。胎期卵巢内的间质腺细胞少而分散,存在于皮髓交界区,第12周后出现,胎期一直很少,新生儿期稍增多。     

Cdc42在小鼠卵母细胞发育中与纺锤体定位的关系

目的研究Cdc42与小鼠卵母细胞发育过程中纺锤体定位的关系。方法以小鼠卵母细胞为模型,利用特异性抑制Cdc42活性的Cdc42T17N（GDP结合形式Cdc42）,显微注射小鼠卵母细胞。共聚焦显微镜下观察Cdc42T17N mRNA注射组和空质粒注射对照组小鼠卵母细胞发育过程中纺锤体的定位,对结果进行统计分析。结果与对照组小鼠卵母细胞相比,Cdc42T17N mRNA注射组小鼠卵母细胞发育过程中纺锤体的定位分布有所改变。Cdc42T17N mRNA注射组的小鼠卵母细胞,纺锤体一端与卵母细胞皮质层接触百分率下降,与卵母细胞皮质层平行接触百分率上升,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论Cdc42可能参与小鼠卵母细胞发育过程中纺锤体的定位。