17β-雌二醇对豚鼠胆囊平滑肌收缩的影响

目的 观察17p-雌二醇对豚鼠胆囊平滑肌的基因组和非基因组效应,初步探究其机制。方法 构建去卵巢豚鼠动物模型,皮下注射17β-雌二醇,检测各组豚鼠血清雌二醇和八肽胆囊收缩素(CCK-8)含量;采用张力换能器观察17p-雌二醇对胆囊离体肌条收缩的影响。观察17β-雌二醇对豚鼠胆囊平滑肌肌条的急性效应及可能机制。结果 与假手术组相比,去卵巢组豚鼠血清雌二醇和CCK-8含量降低(P＜0.05),离体胆囊肌条对CCK-8以及乙酰胆碱的敏感性升高(P＜0.05)。随着皮下注射17β-雌二醇时间（1、3和7 d）的延长,二者含量升高(P＜0.05),离体胆囊肌条对CCK-8和乙酰胆碱的敏感性下降(P＜0.05)。10-9～10-7 mol/L的17β-雌二醇对正常豚鼠离体胆囊肌条收缩无明显影响(P＞0.05),10 6～10 5mol/L的17β-雌二醇可以抑制胆囊肌条收缩(P＜0.05),这种抑制效应可以被尼莫地平、阿托品、地伐西匹、ICI 182,780和Y-27632等阻断剂阻断。结论 17β-雌二醇与胆囊动力相关,可以通过基因组和非基因组机制影响胆囊平滑肌的收缩。     

17β雌二醇对人皮肤成纤维细胞胶原和弹性蛋白合成的影响

目的探讨不同浓度17β雌二醇（17β-estrogen,17β-E2）在不同时间点对体外培养的人皮肤成纤维细胞（Human skin fibroblast,h SFB）合成胶原及弹性蛋白的影响。方法体外培养hSFB,分别加入不同浓度的17β-E2(10^-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11mol/L),继续培养24 h、48 h、72 h,在不同时间点分别提取相应的RNA,RT-PCR检测经17β-E2处理后的hSFB的Ⅰ、Ⅲ型前胶原及原弹性蛋白mRNA的表达情况。结果 RT-PCR结果显示,17β-E2处理组较空白对照组前胶原及原弹性蛋白表达水平在24 h没有变化,48 h时明显上调,72 h时呈现下降;在48 h时,17β-E2对前胶原与原弹性蛋白的影响,10^-10 mol/L组上调作用较其他浓度组明显;在48 h时,同一浓度17β-E2对前胶原蛋白的促进作用较原弹性蛋白明显,尤其是对Ⅲ型的促进作用更强。结论 17β-E2对胶原及弹性蛋白的合成有一定的促进作用,不同时间、不同浓度对其影响不同,在10^-10 mol/l、48 h时作用最强。     

17β-雌二醇对骨外膜来源成骨样细胞增殖及基因表达的影响

目的探讨17β-雌二醇（17β-E2）对骨外膜来源成骨样细胞增殖及基因表达的影响。方法6周龄雌性Wistar大鼠颅骨骨外膜来源的成骨样细胞分别在含有0．01、0．05、0．1、0．25、0．5、0．75、1、5、10nmol／L9种浓度17β-E2的成骨诱导培养液中培养，用MTF法测定3、6、9、12d时细胞的增殖情况。用RT—PCR法测定7d时细胞Ⅰ型胶原蛋白仅。链（COLLI）、骨桥接素（OPN）、骨保护素（OPG）及RANKL基因的表达。结果17β-E2作用6、9d时，雌激素组的增殖水平显著高于对照组（P〈0．05）；12d时，0．05nmol／L及以上组的增殖水平显著高于对照组（P〈0．05），各雌激素组的增殖水平的差异无统计学意义（P〉0．05）。（1）COLLI：对照组的表达水平显著高于雌激素组（氏0．05）；在雌激素组中0．5nmo／／L组的表达水平最高，0．75nmol／L组次之，二者皆显著高于其他各组（P〈0．05）。（2）OPN：0．1nmol／L及以上组的表达水平显著高于对照组（P〈0．05）。（3）OPG和RANKL：OPG表达阴性，RANKL在对照组及雌激素组中均有较高水平的表达。结论雌激素对骨外膜成骨样细胞的调节可能以促进增殖，抑制分化为主。骨外膜来源成骨样细胞对破骨细胞的调节可能以促进其祖细胞分化为主。     

17—β雌二醇对增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的：研究雌激素对增生性瘢痕形成的影响。方法：对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）进行体外培养,通过^3H-脯氨酸掺入法及人PCⅢ（hPCⅢ）放免试剂盒测定HSFB胶原合成含量。结果：17-β雌二醇（17-βE2）对HSFB胶原合成呈明显剂量依赖性促进（P＜0．01）;17-βE2对HSFB胶原合成的影响无明显性别差异（P＞0．05）。结论：雌激素可以促进增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成,而且无性别差异。     

17-β雌二醇对不同月龄大鼠成骨细胞雌激素受体β表达的影响

目的探讨17-β雌二醇对不同月龄大鼠成骨细胞雌激素受体β（ERβ）表达的影响。方法雌性大鼠颅盖骨经多次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养得到大量纯净成骨细胞并进行形态学检查和碱性磷酸酶（ALP）染色;免疫组化法（SABC）进行雌激素受体染色;用10-8mol/L17-β雌二醇处理培养的成骨细胞,SDS-PAGE电泳和western blot法检测雌激素受体。结果成骨细胞碱性磷酸酶染色阳性率为90%以上。形态学检查符合成骨细胞的特征。免疫组化染色显示大鼠的成骨细胞存在雌激素受体β,且位于胞核内。Western blot结果表明,与对照组相比,处理组的各月龄大鼠雌激素受体β表达均有上调。结论17-β雌二醇能提高各月龄组大鼠成骨细胞雌激素受体β表达水平,不同月龄间上调水平不同,以4、8月龄组最为显著。     

17β-雌二醇对人成骨样细胞OS-732 增殖和分化的影响

采用绘制生长曲线^3H-TDR掺入、ALP、BGP的定量测定、免疫组化、原位杂交等和光镜等方法，探讨了17β-雌二醇OS-732细胞增殖和分化的影响及骨粘连蛋白（ON）mRNA表达的影响。结果显示：17β-雌二醇以剂量领带性促进OS-732细胞分化有轻微抑制作用。免疫组化实验结果表明OS-732细胞上存在ER受体，且给药后核内ER增多，为雌激素直接作用于成骨样细胞提供了一个例证。原位杂交结果表明OS-732上存在（ON）mRNA的表达，而给药后无明显变化。     

17β-雌二醇对体外培养破骨细胞钙离子浓度的影响

目的 :研究 1 7β -雌二醇对体外培养破骨细胞细胞内钙离子浓度 ( [Ca2 + ] i)的影响 ,探讨雌激素对破骨细胞骨吸收功能的调节机制。方法 :体外培养Wistar大鼠破骨细胞 ,用Fluo 3AM钙离子荧光探针进行细胞内钙离子荧光标记 ,激光扫描共聚焦显微镜测定不同浓度 1 7β -雌二醇 ( 1 7βE2 )对破骨细胞钙离子浓度的影响及观察破骨细胞的形态变化与伸展面积。结果 :1 7βE2 可诱发破骨细胞钙离子浓度的升高 ,伴随细胞变小 ,伪足回缩 ,破骨细胞伸展面积从 ( 1 386± 4 3) μm2 /细胞核下降至 ( 40 6± 31 ) μm2 /细胞核。结论 :1 7βE2 可诱发破骨细胞 [Ca2 + ] i的升高 ,细胞变小 ,伪足回缩。 1 7βE2 可能是通过 [Ca2 + ] i途径抑制破骨细胞的骨吸收功能     

17-β雌二醇、孕酮对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响

目的:研究雌性激素对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响。方法:对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)进行体外培养,利用MTT比色法及3H-TdR掺入法测定17-β雌二醇(17-βE2)、孕酮(P)对HSFB生长增殖的影响;并且对两种激素作用效果加以比较。结果:17-βE2 、P对HSFB生长增殖的抑制作用呈明显的剂量依赖性(P<0.01),17-βE2 总的抑制作用比P强(P<0.05)。结论:在体外环境中,雌性激素可抑制增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖,且雌激素的作用效果比孕激素强。     

17-β雌二醇对人胚肾成纤维细胞生物特性的影响

雌激素作为一种多功能的自分泌和旁分泌激素具有生殖功能以外的重要生理作用［１］。雌激素可抑制肾小球系膜细胞合成和分泌胶原,减少系膜基质的聚集,限制肾小球硬化的发展［２］。在间质纤维化的发展过程中,肾成纤维细胞（ｋｉｄｎｅｙ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ,ＫＦＢ）的增殖起着决定性作用［３］。１７－β雌二醇（１７－β ｅｓｔｒａｄｉｏｌ,Ｅ２）对肾脏病的进展可能具有良性作用,其对ＫＦＢ的影响尚未见报道。本试验拟在细胞水平,观察Ｅ２对ＫＦＢ增生、凋亡及细胞外基质成分（ＥＣＭ）之一的纤连蛋白（Ｆｎ）表达的影响。 一…     

17β-雌二醇对大鼠破骨细胞内钙浓度影响的研究

目的探讨雌激素调节破骨细胞活性机制。方法以Ｃｈａｍｂｅｒ方法加以改良,常规体外培养新生Ｗｉｓｔｅｒ大鼠破骨细胞（Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ,ＯＣ）。镜下观察细胞形态,测定不同浓度１７β－雌二醇（１７βＥ２）有在钙与无钙溶液中对破骨细胞钙浓度（ＯＣ「Ｃａ＾２＋」ｉ）的影响。结果３０ｍｉｎ后ＯＣ贴壁生长,胞浆伸展。２ｈ后细胞形态为多形性,有片状或丝状伪足,常规生存５２ｈ。１７βＥ２使细胞变小,除去１７βＥ２     

17β-雌二醇对体外培养破骨细胞凋亡及其骨吸收调节作用

目的 观察17β-雌二醇对体外培养破骨细胞凋亡率的影响及其与骨吸收功能的关系。方法 在培养液中加入17β-雌二醇，透射电镜（transmission electron microscopy，TEM）观察破骨细胞内超微结构的改变，流式细胞仪（flow cytometry，FCM）观察不同浓度的17β-雌二醇在不同时间段对破骨细胞凋亡率的影响，同时用扫描电镜（scanning electron microscopy，SEM）观察破骨细胞在骨片上形成骨吸收陷窝数目及面积的变化。结果 17β-雌二醇可增加破骨细胞的凋亡率，这种作用具有剂量、时间依赖效应，同时，破骨细胞在骨片上形成的骨吸收陷窝的数目和面积减少。结论 17β-雌二醇可促进破骨细胞凋亡，从而抑制破骨细胞的骨吸收功能。     

机械压力对人脐静脉内皮细胞ET-1、NO合成的影响和意义

目的探讨压力增高对血管内皮细胞分泌血管活性物质功能的影响及其在门静脉高压症发病机制中的作用。方法用RT-PCR方法半定量研究人脐静脉内皮细胞ET-1、eNOS、i-NOS mRNA的表达;用硝酸还原酶法检测各组细胞培养液中NO代谢产物NO2-/NO3-的含量,免疫荧光标记激光扫描共聚焦显微镜检测培养细胞的ET-1蛋白表达。结果ET-1和eNOS mR-NA在正常培养的内皮细胞中即有表达,iNOS mRNA则几乎无表达。生理水平压力刺激下各组各待测基因mRNA表达与对照组无显著性差异。超生理范围压力刺激后,ET-1 mRNA有显著性升高。eNOS mRNA在40 mm Hg 24 h后才有显著性差异。iNOS mRNA在不同条件下均无显著变化。在细胞培养液中分别加入细胞外钙螯合剂EGTA、PKC抑制剂后,则见ET-1、eNOS mRNA表达下降。结论压力增高可刺激血管内皮细胞合成ET-1、NO,其作用在转录水平,其作用机制分别与PKC信号通路和细胞外钙浓度有关。门静脉压力增高与血管内皮细胞合成ET-1、NO增多之间存在相互作用。     

辛伐他汀联合雌二醇对去卵巢大鼠骨质疏松的影响

目的探讨辛伐他汀联合雌二醇对大鼠骨质疏松的影响。方法 75只雌性SD大鼠随机分为5组:假手术组、去势组、辛伐他汀组、雌二醇组、联合药物组,15只/组,构建去卵巢大鼠骨质疏松模型,给予不同药物干预。检测骨代谢相关生化指标及骨生物力学指标,测定骨组织骨密度(bone mineral density,BMD)和骨矿物含量(bone mineral content,BMC),HE染色观察骨组织形态结构。结果去势组血清骨代谢相关生化指标(ALP、BGP、PICP、TRAP)水平较假手术组均显著增高(P0.05),辛伐他汀组、雌二醇组、联合药物组较去势组均降低,尤以联合用药组降低最显著(P0.05)。去势组骨组织BMD和BMC、骨生物力学指标(最大载荷、最大应力、最大位移和刚度)较假手术组显著降低(P0.05),辛伐他汀组、雌二醇组、联合药物组较去势组均增高,尤以联合药物组增高最显著(P0.05)。去势组骨组织骨小梁减少稀疏,排列紊乱,网状结构破坏,大量纤维组织,髓腔内大量空泡状脂肪细胞。联合药物组骨组织结构较完整,骨小梁数目增多,致密均匀粗壮,连接成网状结构,脂肪细胞明显减少。结论辛伐他汀联合雌二醇可调节大鼠骨代谢,增加骨密度和骨矿物质,改善骨生物力学和骨组织形态学,起到抗骨质疏松疗效和骨保护作用。     

17β-雌二醇对大鼠肝纤维化门静脉压力的作用

目的观察17β-雌二醇（E2）对四氯化碳（GEl4）诱导大鼠肝纤维化中门静脉压力变化的作用。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为A、B、C和D共4组，均采用CCl4诱导肝纤维化12周。另外，A组同时采用肌注E2（2mg／kg体重），2次／周；B组采用肌注E2（1mg／kg体重），2次／周；C组作为对照组；D组采用每日口服他莫昔芬6mg／kg体重。第13周将全部大鼠麻醉后测定门静脉压力（PVP）、并采用实时荧光定量（Real—Time）聚合酶链反应（PCR）技术测量大鼠肝脏组织中核转录因子p65（NF-kappaBIN55）mRNA和转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA的表达，采用Massion染色检测大鼠肝组织中胶原纤维（CF）含量情况，并将不同组别大鼠肝组织中NF-kappaBIN55mRNA值、TGF-β1mRNA值、CF含量以及PVP作相关性分析。结果（1）各组大鼠PVP高低为：A〈B〈C〈D，各组比较差异有统计学意义（F=54．712，P〈0．05）；（2）各组大鼠肝组织中NF-kappa Bp65 mRNA的表达情况为：A〈B〈C〈D，各组比较差异有统计学意义（F=109．024，P〈0．05）；（3）各组大鼠肝组织中TGF．1mRNA表达高低比较：A〈B〈C〈D，组间比较差异有统计学意义（F=224．969，P〈0．01）；（4）各组大鼠肝组织CF含量比较：A〈B〈C〈D，组间比较差异有统计学意义（F=6．929，P〈0．01）；（5）各组大鼠肝组织中NF-kappa Bp65 mRNA值和TGF-1mRNA值呈直线相关（r=0．724，P〈0．05），TGF-β1 mRNA值和cF含量呈直线相关（r=-0．871，P〈0．05），CF含量和PVP也呈直线相关（r=0．902，P〈0．05）。结论E2通过抑制大鼠肝纤维化肝组织中NF-kappa Bp65 mRNA的表达，减弱了TGF-β1 mRNA的表达，使得肝组织中CF含量减少，以致PVP降低。     

17-β雌二醇对肾间质纤维化防治作用的探讨

目的探讨17-β雌二醇对肾间质纤维化防治作用可能的机制。方法雌性SD大鼠30只,随机分为4组：①对照组;②生理雌激素组;③低雌激素组;④17-β雌二醇组。21d后光镜观察单侧梗阻肾组织病理改变;通过免疫组化方法检测转化生长因子（TGF-β1）、α-平滑肌动蛋白（α-SMA）;并用RT-PCR方法检测肾组织α-SMAmRNA的表达。结果单侧输尿管梗阻各组出现肾小管间质纤维化改变,其肾组织TGF-β1。和α-SMA表达上调（P〈0．01）;与生理雌激素组相比,低雌激素组纤维化病变加重,上述物质表达均明显增多（P〈0．05）;而17-β雌二醇组则病变均减轻（P〈0．05）。结论注射17-β雌二醇可能通过下调TGF-β1,和α-SMA的表达,抑制细胞外基质的生成,进而韶到延绣肾间后纤维化的作用．     

17-β雌二醇对去卵巢大鼠小肠粘膜钙结合蛋白基因表达的影响

用硫氰酸胍一步法提取小肠、肾脏和骨组织总ＲＮＡ，用ＰｓｔＩ和ＳｍａＩ双酶切携带钙结合蛋白（ＣａＢＰ）９Ｋ基因的ｐＵＣ１２质粒，获取ＣａＢＰ９ＫｍＲＮＡ在各组雌性大鼠中的变化。结果：卵巢切除组，小肠粘膜ＣａＢＰ９ＫｍＲＮＡ明显低于对照组；而卵巢切除后注射１７－β雌二醇治疗组（０．５μｇ／１００ｇ体重）未出现降低。１７－β雌二醇可影响小肠粘膜ＣａＢＰ９Ｋ的基因表达。本结果提示，雌激素可能通过钙结合蛋白参与钙在大鼠体内的代谢。     

17β-雌二醇对体外培养人成骨细胞CTGF和PAIP-1基因表达的作用

目的　观察结缔组织生长因子 (CTGF)和多聚腺苷酸结合蛋白相互作用蛋白 1(PAIP 1)mRNA在体外培养的人成骨细胞增殖分化不同阶段的表达 ,研究 17β- 雌二醇 (E2 )对成骨细胞CTGF和PAIP 1mRNA表达的作用 ,探讨雌激素对骨组织保护作用的新机制。方法　用改良的钙 钴法ALP染色 ,vanGieson法 1型胶原染色 ,0. 1%茜素红矿化结节染色 ,半定量RT- PCR检测成骨细胞碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙素 (OC)和 1型胶原mRNA的表达 ,半定量RT- PCR和Northernblot方法检测成骨细胞CTGF和PAIP- 1mRNA表达。结果　半定量RT -PCR和组织化学染色的结果均表明 ,成骨细胞接种培养后 0～11d为细胞增殖阶段 ,7～ 15d为骨基质成熟阶段 ,15d后为骨基质矿化阶段 ;在成骨细胞培养的不同阶段 ,均检测到CTGF和PAIP- 1mRNA的表达 ,E2 可显著下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,呈时间剂量依赖关系 (P <0 . 0 1) ,但对PAIP 1mRNA表达无明显作用。结论　E2 时间剂量依赖性下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,但对PAIP 1mRNA表达无明显影响。     

17β-雌二醇下调人成骨细胞CTGF表达的信号转导机制研究

目的 探讨17β-雌二醇下调人成骨细胞CTGF表达的信号转导机制。方法 人成骨细胞分别用10^-8mol／LE2及雌激素受体拮抗剂ICI182780、PKA阻断剂H-89、PKC阻断剂H-7、NF-kB阻断剂PDTC、PKA活化剂forskolin干预24h，采用Northern blotting、Western blotting分析CTGFmRNA、蛋白表达水平的变化。结果 10^-8mol／L雌二醇可明显下调人成骨细胞CTGFmRNA及蛋白的表达；PKA阻断剂H-89可完全阻断雌二醇对CTGF的降调节作用，而雌激素受体拮抗剂ICI182780、PKC阻断剂H-7、NF-kB阻断剂PDTC对雌二醇介导的CTGF降调节无明显作用。PKA活化剂forskohn可明显下调人成骨细胞CTGFmRNA、蛋白的表达，雌二醇组与forskolin组相比，CTGFmRNA、蛋白的水平无明显差异。结论 17β-雌二醇下词人成骨细胞CTGF表达由PKA介导，雌激素核受体、PKC、NF-kB信号转导通路均不参与雌激素介导的CTGF降调节。     

17-β-雌二醇对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的 探讨17-β-雌二醇对雄性大鼠肝脏缺血再灌注(I／R)损伤的保护作用及其机制。方法 采用大鼠部分肝脏缺血再灌注损伤模型，将健康雄性SD大鼠96只随机分成两组：A组(缺血再灌注组)，B组(17-β-雌二醇处理组)。每组分别随机取6只于缺血前、肝脏再灌注后1h、2h、4h、1d、3d、5d、7d时检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平，并进行统计学处理。结果 除缺血前和再灌注7d外A组动物在相应时点ALT、AST、LDH、TNF-α水平均高于B组，且A组动物肝功能恢复正常时间(与缺血前相比)迟于B组。结论 17-β-雌二醇对肝脏缺血再灌注损伤有显著的保护作用，并可缩短病程，其作用机制可能与17-β-雌二醇降低肝脏I／R时血清TNF-α水平有关。     

17-α雌二醇对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的 观察17—α雌二醇对体外培养成骨细胞增殖和成骨功能的影响。方法 用植块培养法从乳鼠中分离出成骨细胞，倒置显微镜观察其形态，碱性磷酸酶(ALP)染色来鉴定细胞。然后用不同浓度的17—α雌二醇作用于成骨细胞，使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析、ALP含量测定、细胞钙含量测定来检测其对成骨细胞增殖和成骨功能的影响。结果 17—α雌二醇以剂量方式促进各项指标的表达，促进成骨细胞的增殖和骨形成。结论 17—α雌二醇具有促进成骨细胞的增殖和骨形成作用。值得作进一步的研究。