碱性成纤维细胞生长因子的研究进展

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是成纤维细胞生长因子蛋白(fibroblast growth factors,FGFs)家族中的一员。目前已发现至少22种FGF,其中FGF-1(aFGF)、FGF-2(bFGF)及FGF-7的研究较为深入。bFGF是哺乳动物和人体中一种非常微量的活性物质,因其具有     

人酸性成纤维细胞生长因子双抗体夹心测定方法

用纯化的人酸性成纤维细胞生长因子（ｈａＦＧＦ）免疫家兔，获得了兔抗ｈａＦＧＦ血清。另从含ｈａＦＧＦ单克隆抗体的小鼠腹水中纯化了ＩｇＧ。用纯化的单抗ＩｇＧ和多抗血清建立了ｈａＦＧＦ的双抗体夹心测定方法，检测水平可达０．２５ｎｇ／ｍｌ。用此方法测定了Ｎ端截断型ｈａＦＧＦ和牛酸性成纤维细胞生长因子（ｂａＦＧＦ），结果显示截断型ｈａＦＧＦ的检测灵敏度较低，ｂａＦＧＦ更低，提示单克隆抗体的抗原识别部位在ｈａＦＧＦ的Ｎ端附近。另外，肝素对ｈａＦＧＦ的检测有明显的影响，说明单抗的抗原识别部位与肝素的结合部位有关．     

碱性成纤维细胞生长因子在乳腺癌组织中的表达

肿瘤血管形成 (Ｔｕｍｏｒａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ)是乳腺癌生长、转移的重要机制之一。碱性成纤维细胞生长因子 (Ｂａｓｉｃｆｉ ｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ)参与了肿瘤血管形成过程 ,并与人体多种恶性肿瘤的生长、转移及预后有密切关系。本研究通过检测ｂＦＧＦ在乳腺癌组织中的表达 ,探讨其与乳腺癌预后的关系。1　材料和方法1 1　临床资料　采用我院 1988年～ 1998年收治的女性乳腺癌病例 ,收集性别、年龄、手术日期、手术方式、病理类型、腋窝淋巴结转移情况、ＴＮＭ分期、辅助治疗、死亡日期、终检日期。其…     

脑损伤后碱性成纤维细胞生长因子基因表达与组织病理学改变

目的：从分子水平探讨颅脑损伤发病机制，为临床治疗脑损伤寻救有效手段．方法：选择Ｗｉｓｔａｒ大鼠７５只，利用Ｍａｒｍａｒｏｕ颅脑损伤装置造成动物不同程度弥漫性脑损伤．以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、组织病理学方法，动态观察动物脑损伤后碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）基因表达变化及脑组织病理学改变．结果：轻度颅脑损伤后１２小时，ｂＦＧＦ基因表达增加，伤后３天达峰值．重度颅脑损伤后４小时，ｂＦＧＦ基因表达明显增加，伤后第３天达到高峰，明显高于轻度颅脑损伤组水平．结论：ｂＦＧＦ基因表达与脑损伤程度密切相关，作为生长因子之一，ｂＦＧＦ可能参与颅脑损伤后神经元保护及损伤后修复过程．     

四肢火器伤受紫外线照射后碱性成纤维细胞生长因子的表达

目的 研究四肢火器伤受不同剂量短波紫外线(UVC)照射后伤口肉芽组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达变化.方法 建立兔四肢软组织火器伤模型,UVC 30mJ/cm2和60mJ/cm2分别进行伤道内照射.采用免疫组化和原位杂交的方法观察组织中bFGF的表达.结果 致伤照射后7～21天,60mJ/cm2照射组和30mJ/cm2照射组bFGF在mRNA水平与蛋白水平的表达均高于对照组(P＜0.05),以60mJ/cm2照射组更为显著;照射后21天,60mJ/cm2照射组bFGF的mRNA水平显著降低,低于30mJ/cm2照射组(P＜0.05).结论 在伤口愈合早期UVC照射能促进bFGF的表达,以60mJ/cm2的作用更显著.但不同剂量UVC促进bFGF表达的时相性有所不同.     

碱性成纤维细胞生长因子的生物学功能

碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）是一种能广泛地促进来源于中胚层及神经外胚层细胞增殖的生物活性物质，虽然其在体内的含量甚微，但生理功能相当广泛。最近研究表明：ｂＦＧＦ在体内参予多种组织的创伤修复...     

二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞中生长因子mRNA表达的比较研究

探讨经二维或三维培养的人皮肤成纤维细胞在细胞因子表达能力方面是否有差异。以平面培养皿作为成纤维细胞二维培养系统 ,用胶原凝胶作为成纤维细胞三维培养系统 ,分别提取二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞总RNA ,采用RT PCR方法检测两种培养系统中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达。结果显示 ,虽然二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞形态不同 ,但二维和三维培养的成纤维细胞均有VEGF/bFGF设计大小的条带显示 ,且两者条带相对灰度无明显差异。提示三维培养对人皮肤成纤维细胞的生长因子mRNA表达无明显影响     

成纤维细胞生长因子23与心房颤动的相关性

目的 评价无慢性肾脏疾病(chronic kidney disease,CKD)人群成纤维细胞生长因子-23(fibroblast growth factor 23,FGF-23)水平与新发心房颤动(new-onset atrial fibrillation,NAF)的相关性.方法 连续入选2012-01至2015-1...     

人胰岛素样生长因子1突变体的构建,表达及其鉴定

目的：根据胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ１）的三维结构及其与ＩＧＦ结合蛋白３（ＩＧＦＢＰ３）的结合位点,构建ＩＧＦ１突变体。方法：以合成的人ＩＧＦ１基因为模板,利用体外定点突变技术,获得［Ｔｙｒ＾１５,Ｌｅｕ＾１６］ＩＧＦ１突变基因,在大肠杆菌中进行表达,重组蛋白经纯化、复性后,还采用蛋白免疫印迹分析、荧光光谱分析和生物活性测定进行验证。结果与结论：成功地构建并表达了ＩＧＦ１突变体,［Ｔｙｒ＾１５,Ｌ     

重组人KGF-2的制备及生物学活性研究

目的:实现重组人角质细胞生长因子-2(rhKGF-2)的原核可溶性高效表达,并获得活性良好的重组蛋白.方法:将编码人成熟KGF-2的cDNA构建至pET/21a表达载体中,利用大肠杆菌BL21进行表达,对表达条件(如诱导温度和诱导时间等)进行优化,并对目的蛋白的表达情况进行电泳分析;利用阳离子交换柱对重组蛋白进行纯化,对纯化的rhKGF-2利用MTT法检测其促IEC-6及NIH/3T3细胞的增殖活性.结果:通过对表达条件的优化,rhKGF-2的表达量可占到全菌总蛋白的25%,并且基本上全部为可溶性形式表达;利用阳离子交换柱对rhKGF-2进行纯化,薄层扫描分析其纯度高于90%.利用MTT法对rhKGF-2的活性进行研究,结果表明,低浓度的rhKGF-2就能够促进IEC-6细胞增殖,但对于NIH/3T3细胞需高浓度的rhKGF-2才能促进其增殖.结论:本研究实现了对rhKGF-2的可溶性高效表达,纯化后的rhKGF-2具有较好的活性,这为进一步的功能研究以及基因工程重组药物的开发奠定了基础.     

重构型人caspase-8基因原核表达载体的构建及其表达

目的：构建三种重构型人caspase—8基因的原核表达载体，转染大肠杆菌并诱导其表达。方法：将人caspase—8催化结构域基因及两种大、小亚基基因次序颠倒的重构型人caspase—8基因克隆人原核表达载体pBV220，转染大肠杆菌并诱导表达。结果：成功构建了三种重构型人caspase—8基因的原核表达载体。转染大肠杆菌后，经温度诱导，重构型人caspase—8基因获得了高效的表达。结论：在大肠杆菌中成功表达了三种重构型人caspase—8基因。     

重组人乙酰肝素酶在大肠杆菌中的表达、纯化

目的：表达纯化重组的人乙酰肝素酶（heparanase,HPA）。方法：以表达乙酰肝素酶全长质粒pcDNA3.1-HPA为模板,扩增不包括信号肽的乙酰肝素酶片段,将其插入pET-28a（＋）载体,转化到大肠杆菌BL21（plysS,DE3）中,在起始诱导菌密度、诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度4个方面对诱导条件进行了优化,实现了重组人乙酰肝素酶的可溶性表达。采用HisTrapTMcrude亲和层析对目的蛋白进行了初步纯化。结果：得到了初步纯化的HPA蛋白,Western印迹证实表达产物可被乙酰肝素酶抗体和His标签抗体识别,证明表达产物具有乙酰肝素酶的免疫学特性。结论：表达纯化的人HPA蛋白为特异性单抗的制备和鉴定提供了实验材料。     

人斯钙素1在大肠杆菌中的重组表达与活性鉴定

目的：通过原核表达的方法得到有活性的斯钙素1（ STC1）重组蛋白。方法将优化合成的STC1 DNA片段克隆到表达载体pET-32 b（＋）上,重组质粒转入大肠杆菌诱导表达,在变性条件下纯化包涵体,经透析复性得到可溶的斯钙素1融合蛋白,凝血酶酶切后用高亲和镍离子树脂吸附多余多肽获得目的蛋白。 Western印迹分析验证目的蛋白免疫活性。动物实验检测目的蛋白的生物学活性。结果构建了pET-32b（＋）-STC1表达载体,表达并纯化了STC1融合蛋白包涵体,经复性、凝血酶切和纯化后获得可溶的目的蛋白。 Western印迹分析验证正确。生物学活性检测表明重组STC1能增加大鼠排泄系统对磷酸盐的重吸收。结论获得了具有生物学活性的斯钙素1重组蛋白,为制备STC1单克隆抗体和进一步研究STC1与肿瘤治疗的关系奠定了基础。     

血管内皮生长因子和碱性成纤维生长因子在子宫内膜异位症中的表达及临床意义

 目的 探讨有关血管生长因子在血管生成及子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法 应用免疫组织化学法分析血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)与子宫内膜组织中微血管密度及其阳性表达率的关系。结果 在异位内膜中VEGF、bFGF的阳性表达率分别为75％和63.89％,明显高于正常内膜组42.86％和39.29％(P<0.01,P<0.05)。VEGF、bFGF的阳性表达率在卵巢子宫内膜样囊肿组织、子宫肌腺症组织中无差异(P>0.05)。微血管密度在VEGF、bFGF的阳性组表达明显高于VEGF、bFGF的阴性表达组(P<0.01)。结论VEGF、bFGF与子宫内膜异位症的血管生成密度相关,VEGF、bFGF在子宫内膜异位症的发生发展中发挥作用。     

贮存温度对携带HGF基因的重组腺病毒Ad-HGF稳定性的影响

目的：探讨不同温度对重组腺病毒Ad-HGF保存时问的影响。方法：以含10％甘油的Hanks液保存Ad-HGF(携带人肝细胞生长因子基因)、Ad-GFP(携带绿色荧光蛋白基因)，用快速细胞病变(CPE)法、ELISA方法、流式细胞仪分别检测在不同贮存温度(-60℃，-20℃，4℃，25℃和37℃)、不同保存时间的重组腺病毒对其感染滴度、目的基因表达和转染细胞效率的影响。结果：-60℃保存最长时间44个月，其转染效率、HGF蛋白表达、病毒滴度未见明显下降；-20℃保存12个月各指标未见明显变化；4℃冰箱保存2个月，其各项指标已有所下降，但不是很明显，而保存7个月时，其转染效率、HGF蛋白表达量及病毒滴度均明显下降；25℃和37℃保存，除病毒滴度外，其余指标呈逐日下降趋势。结论：该病毒保存于-20℃以下性能是稳定的，可以满足临床贮存和应用条件。     

甲状旁腺全切术对血清FGF-23及炎性因子的影响

 目的 分析继发性甲状旁腺功能亢进(secondary hyperpar hyroidism,SHPT)患者行甲状旁腺全切术(T-parathyroidectomy,T-PTX)前后血清成纤维细胞生长因子-23(fibroblast growth factor -23 ,FGF-23)及炎性因子的变化,并探讨其变化的意义。方法 选取2011-01至 2013-01武警总医院肾内科行T-PTX术成功的患者40例做为研究对象,术后均行普通血液透析治疗,排除血液透析滤过及灌流对实验的影响,收集其术前、术后1 d、1、3、6个月血清,对比不同时间点血清FGF23、全段甲状旁腺激素(iPTH)和血清钙、血磷、hsCRP检测结果。结果 (1)术后1 d及1、3、6个月血清FGF-23、iPTH、血清钙、血磷水平明显低于术前,差异有统计学意义(P<0.05);(2)术后1 d血清hsCRP水平较术前无统计学意义,术后1、3、6个月血清hsCRP水平[(2.64±1.32 vs 20.31±8.56)mg/L、(2.16±1.08 vs 20.31±8.56)mg/L、(1.38±0.17 vs 20.31±8.56)mg/L]明显低于术前的(11.72±5.21 vs 20.31±8.56)mg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 T-PTX可有效降低患者血清FGF23、PTH及炎性因子水平,纠正钙磷代谢紊乱,对减少远期心血管事件及骨矿物质代谢疾病有重要意义。     

＋GZ重复暴露对大鼠脑组织神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子基因表达的影响

目的了解＋ＧＺ重复暴露后大鼠脑组织神经生长因子（ＮＧＦ）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达的变化,探讨两种生长因子在＋ＧＺ暴露所致脑损伤中的作用和意义。方法２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成对照组、＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ四组,每组６只。对照组大鼠Ｇ值为＋１ＧＺ,实验组大鼠在动物离心机上经历了３次＋１０ＧＺ／３ｍｉｎ（两次间间隔３０ｍｉｎ）作用。分别于暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ处死大鼠取脑,提取总ＲＮＡ,用半定量反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测方法检测＋ＧＺ重复暴露后大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达水平。结果＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ和６ｈ,大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ明显升高,２４ｈ降至正常。结论＋ＧＺ重复暴露可诱导大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ的表达增加,这两种生长因子的表达增加可能对神经细胞具有保护和损伤修复作用,是脑的自身保护机制之一。