结直肠腺癌组织Grp78表达及意义

目的 研究葡萄糖调节蛋白78(rp78)在结直肠腺癌组织中表达及其与临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学PV法检测 87例结直肠腺癌组织(其中18例同时具有腺瘤组织)及配对正常黏膜组织rp78的表达.结果 结直肠腺癌组织rp78蛋白表达水平显著高于正常黏膜组织(Z=-8.10,P<0.05), 18例腺瘤组织中rp78蛋白表达水平高于正常黏膜组织而低于癌组织(χ2=3.111,q=3.7～8.2,P<0.05).在结直肠腺癌组织中未发现性别、年龄、分化程度、淋巴结转移等因素与rp78蛋白的表达有关(P>0.05).结论 rp78在正常黏膜组织、腺瘤组织、癌组织中的表达呈逐渐增高的趋势,rp78可能参与了结直肠腺癌的发生过程.     

莱菔硫烷对乳鼠心肌细胞缺血缺氧损伤的保护作用

目的 探讨莱菔硫烷(SFN)对乳鼠心肌细胞缺血缺氧损伤的保护作用及可能机制.方法实验随机分为4组:正常对照组、模型组、SFN低剂量组(10 μmol/L)、SFN高剂量组(30 μmol/L).建立心肌细胞缺血缺氧损伤模型,予以SFN干预6 h后,AnnexinV荧光染色检测心肌细胞凋亡,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量,蛋白印迹法(Western Blot)检测心肌细胞核因子-κB(NF-κB)水平.结果 SFN减少缺血缺氧心肌细胞的凋亡,减少LDH释放,降低MDA水平,增加SOD水平,心肌细胞NF-κB蛋白表达下降,SFN高剂量组则更明显.结论 SFN对心肌细胞缺血缺氧损伤具有保护作用,作用机制与增强心肌细胞抗氧化能力、抑制NF-κB生成有关.     

丁苯酞氯化钠注射液预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠GRP78及caspase-12表达的影响

目的:探讨丁苯酞氯化钠注射液预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及caspase-12表达的影响.方法:健康成年雄性SD大鼠36只,SPF级,体质量260～280 g,月龄2～3月,采用随机数字表法,将其随机分为3组:假手术组(S组)、局灶性脑缺血再灌注组(I/R组)及丁苯酞氯化钠注射液预处理组(NBP组).I/R组和NBP组大鼠采用改良线栓法阻断右侧大脑中动脉2h,再灌注24 h,制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型;S组仅分离血管.NBP组于缺血前1h经尾静脉注射NBP注射液2.5 mg/kg;I/R组经尾静脉注射等容量生理盐水.各组大鼠于再灌注24 h时行神经功能缺陷评分,随后断头取脑组织,采用TUNEL法计数凋亡神经细胞,计算凋亡指数;免疫组化法检测缺血侧皮质GRP78及caspase-12表达.结果:与S组比较,I/R组和NBP组神经功能缺陷评分升高的大鼠例数增多(P＜0.01),神经细胞凋亡指数升高,GRP78及caspase-12表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,NBP组神经功能缺陷评分升高的大鼠例数减少,神经细胞凋亡指数降低,GRP78表达上调,caspase-12表达下调(P＜0.05).结论:丁苯酞氯化钠注射液预处理可通过上调GRP78表达和下调caspase-12表达,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

内质网应激相关蛋白与CXCL12蛋白在特发性肺纤维化中的表达及意义

目的 探讨内质网应激相关蛋白及CXCL12在特发性肺纤维化中的表达及意义.方法 收集荆州市中心医院2004～2014年诊断为特发性肺纤维化且存有活检或手术标本的患者共18例,并收集正常肺组织20例作为对照,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激相关蛋白(GRP78、CHOP)及CXCL12蛋白(SDF-1)的表达,通过逆转录PCR(RT-PCR)检测肺组织中GRP78 mRNA及CXCL12 mRNA的表达.结果 与对照相比,肺纤维化患者肺泡上皮中GRP78、CHOP、CXCL12蛋白表达均上调,且GRP78 mRNA及CXCL12 mRNA也表达上调.结论 内质网应激相关蛋白及CXCL12在特发性肺纤维化的发病过程中起重要作用,可能参与了特发性肺纤维化的发生与发展.     

内质网分子伴侣GRP78在人肺癌组织中的高表达及其临床意义

ＧＲＰ78 ,即糖调节蛋白 78,也叫免疫球蛋白重链结合蛋白 (ＢｉＰ) ,广泛存在于内质网内 ,在低糖、缺氧等应激条件下合成量明显提高[1] ,并能协助蛋白质的折叠、装配和运输 ,还与许多疾病有关 ,因此被称为内质网分子伴侣[2 ] 。但目前关于ＧＲＰ78的研究主要集中在动物和标准细胞株的体外实验 ,特别是它在人类肺癌中的表达 ,临床研究很少。本研究通过探讨ＧＲＰ78在 5 4例肺癌患者中的表达来说明其在人类肺癌中的作用。一、对象与方法1 材料 :收集 2 0 0 0年 1月至 2 0 0 0年 12月在大连医科大学第一、第二临床学院及中国医科大学第一、第二…     

Caspase-3、-9表达上调参与缺氧诱导心肌细胞凋亡

目的研究缺氧对心肌细胞天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶(caspase)的激活效应.方法培养的心肌细胞分别缺氧0、3、6、12、24 h后,Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡,MTT法检测细胞存活率,Western blot、RT-PCR方法分别检测细胞线粒体与胞浆中细胞色素c(Cyt c)蛋白的变化以及caspase-9,-3 mRNA表达的改变.结果缺氧24 h心肌细胞出现典型的凋亡,细胞存活率显著降低;缺氧3 h线粒体Cyt c未见显著变化,而胞浆中Cyt c开始增多,缺氧24 h 线粒体中已不能检测到Cyt c,胞浆中维持在峰值水平.缺氧可上调心肌细胞caspase-9,-3基因表达,两者表达变化趋势一致,缺氧3 h即开始明显增高,在观察的24 h内持续处于高表达状态.结论缺氧可致心肌细胞线粒体Cyt c大量释放至胞浆中,caspase-9基因表达增高,并进一步导致caspase-3激活,从而证明缺氧可诱导心肌细胞中线粒体依赖的caspases途径激活,从而导致细胞凋亡.     

胡芦巴碱对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞的保护作用

目的：探究胡芦巴碱（T RG ）对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制。方法原代培养SD乳鼠心肌细胞,随机分成3组：正常对照（Control组）、缺氧／复氧组（H／R组）和TRG加缺氧／复氧组（TRG＋ H／R组）;采用流式细胞术分别检测TRG对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞凋亡和线粒体膜电位的影响;采用超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）试剂盒检测SOD活性和MDA水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测procaspase‐9、cleaved caspase‐9、procaspase‐3和cleaved caspase‐3蛋白水平。结果 TRG能够显著降低缺氧／复氧乳鼠心肌细胞凋亡率（P＜0．05）,增强SOD活性（P＜0．05）,减少MDA的生成（P＜0．05）,稳定线粒体膜电位（ P＜0．05）,促进caspase‐9和caspase‐3的活化。结论 T RG可减轻缺氧／复氧对乳鼠心肌细胞的损伤,其机制可能与抗脂质过氧化和稳定线粒体膜电位有关。     

糖脂清对糖尿病大鼠海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12表达的影响

目的 通过观察糖脂清对糖尿病大鼠海马组织的内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的影响,探讨其在改善糖尿病大鼠认知功能的作用机制。方法 采用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射复制2型糖尿病大鼠模型,并给予糖脂清高、中、低剂量组干预8周后,采用ELISA法检测血清空腹葡萄糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）,计算稳态模型的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛素敏感指数（ISI）;qPCR和Western blot法检测海马组织内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达水平。结果 糖脂清各剂量组均能够显著降低FPG及HOMA-IR（ P <0.01）,除低剂量组外,糖脂清均可显著提高ISI（ P <0.01）,3组FINS水平无显著性差异（ P >0.05）。与模型组比较,糖脂清低、中、高3个剂量组GRP78 mRNA和蛋白相对表达均显著增加,CHOP、Caspase-12 mRNA表达均减少（ P <0.01）,中、高剂量组CHOP、Caspase-12蛋白表达显著减少（ P <0.01）。结论 糖脂清能够控制血糖,改善胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性,同时能够调节海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA和蛋白的表达。      

消化酶浓度和消化时间对幼鼠心肌细胞培养的影响

目的观察不同浓度消化酶和消化时间对幼鼠心肌细胞培养的影响。方法用0.08g/L和0.25g/L胰蛋白酶液消化幼鼠心肌组织,时间分别为5、8、15min,用差时贴壁法分离、提纯、收取细胞进行培养,倒置显微镜下观察细胞形态和活力。结果 0.08g/L胰蛋白酶液消化8min的心肌细胞第2天出现明显的搏动现象,第3～4天细胞伸出伪足相互接触交织成网,逐渐形成细胞簇或细胞单层,搏动呈同步性,收缩明显有力,搏动频率为120～180min-1;而经其他浓度胰蛋白酶和消化时间处理得到的心肌细胞形态和活力均不理想。结论选择适宜的消化酶浓度和消化时间可获得形态、活力良好的心肌细胞。     

葡萄糖调节蛋白78在大鼠非酒精性脂肪性肝炎中的表达及意义

目的 观察高脂饮食诱导大鼠非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)过程中内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白78的表达变化,探讨内质网应激在NASH发病机制中的作用.方法 建立大鼠高脂饮食诱导NASH模型,检测血清ALT、AST、FFA、TG和肝组织MDA的变化,用RT-PCR与Western blot方法 检测NASH形成过程中肝组织GRF78在基因和蛋白水平的表达变化.结果 NASH组大鼠血清ALT、AST、FFA、TG和肝组织MDA水平均较对照组有不同程度的升高.肝组织GRP78基因和蛋白表达也随NASH加重而增强,16周时升高最为显著(P<0.01).结论 高脂饮食可诱导GRP78表达增强,启动内质网应激,导致脂质异常沉积,其可能与NAsH的发病机制密切相关.     

Grp78用于胸部良恶性肿瘤鉴别诊断的实验研究

目的探讨分子伴侣Grp78用于胸部良恶性肿瘤鉴别诊断的可能性。方法应用免疫印迹技术对36例疑似肺癌病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平进行检测,并将检测结果与胸水脱落细胞学检查结果和临床病理资料对照。结果免疫印迹结果表明Grp78高表达的21例病人,经过临床观察和病理学检查,有19例被临床诊断为肺癌,GW7S表达水平较低15例病人中,没有病例被诊断为肺癌,灵敏度为90％,特异度为85．7％;而应用传统的检测方法对36例肺癌疑似病人胸水进行脱落细胞学检查,有12例病人怀疑为肺癌,经过临床及病理学检查有4例被排除,灵敏度为47％,特异度为85％。结论检测肺癌疑似病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平可以提高肺癌鉴别诊断的灵敏度,有利于胸部恶性肿瘤的早期诊断及鉴别诊断。     

葡萄糖调节蛋白78在胰腺导管腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨在胰腺导管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma,PDCA）中葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein78,GRP78）的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学技术分析30例胰腺癌组织和对应的癌旁组织中GRP78蛋白的表达水平,并分析GRP78的表达与患者临床病理资料的关系。结果免疫组化结果显示GRP78在癌组织中表达明显高于癌旁组织（73．3％ vs 23．3％,P〈0．05）。单因素分析发现GRP78高表达的患者预后较差（P=0．009）。Western blot显示GRP78在中低分化癌细胞中的表达明显高于高分化癌细胞（P〈0．05）。结论GRP78在胰腺癌组织中高表达,可能参与胰腺癌的发生发展,GRP78高表达可能有助于判断胰腺癌患者的预后。     

未折叠蛋白反应参与小鼠急性肾缺血/再灌注损伤

目的 探讨未折叠蛋白反应(UPR)在小鼠急性肾缺血/再灌注损伤中的作用.方法 将C5786小鼠分为正常、假手术组和0、4、12、24 h手术组(分别于术后0、4、12和24 h处死小鼠),留取各组小鼠的左侧肾脏.苏木精一伊红(H-E)、过碘酸雪夫反应(PAS)和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色观察各组肾脏组织学变化,Western印迹法和实时聚合酶链反应(PCR)检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和caspasel2在各组小鼠肾组织中的表达.结果 H-E、PAS染色可见24 h手术组的肾小管上皮细胞坏死明显,病变最重的部位为外髓外带近端小管,肾小管坏死评分为(2.930 0±0.131 1)分,显著高于其他组(P值均<0.01).TUNEL染色可见24 h手术组的肾小管上皮细胞凋亡指数为(36.17±7.53)%,显著高于其他各组(P值均<0.01).Western印迹法.结果 显示,12 h手术组的GRP78和caspase12蛋白水平显著高于其他各组(P值均<0.01).实时PCR.结果 显示,4 h手术组的GRP78和caspasel2 mRNA水平显著高于其他各组(P值分别<0.01、0.05).结论 在夹闭左侧肾动脉致急性肾缺血/再灌注损伤模型中,小鼠左侧肾脏组织学损伤显示再灌注后24 h最严重.GRP78和caspasel2在再灌注后其mRNA和蛋白表达水平明显升高或激活,其变化早于组织学改变.提示UPR可能在急性肾缺血/再灌注损伤中发挥重要作用.     

胃癌中葡萄糖调节蛋白78和葡萄糖调节蛋白94表达的临床意义及与预后的相关性

目的确定葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78,GRP78）和葡萄糖调节蛋白94（glucose-regulated protein 94,GRP94）与胃癌（gastric cancer,GC）临床病理特征及预后的相关性。方法应用Western blotting和免疫组织化学方法检测GC和切缘组织中GRP78和GRP94的表达;Kaplan-Meier或卡方检验GRP78、GRP94和临床病理资料与GC术后整体生存期相关性。结果 GRP78和GRP94蛋白主要表达于胃癌细胞的胞质及胞膜,其阳性表达与淋巴结转移、TNM分期呈负相关,与分化程度正相关（P〈0.05）;GRP78、GRP94高表达及低表达GC患者术后平均生存时间分别为（23.51±2.32）个月和（37.54±3.24）个月、（21.31±1.46）个月和（40.02±2.19）个月,5年整体生存率分别为21.23%和41.42%、20.73%和43.86%（log-rank test,P〈0.01）,TNM分期、GRP78和GRP94是影响GC预后的独立因素。结论 GRP78和GRP94高表达可能是GC预后不良的分子标志物之一。     

以葡萄糖调节蛋白78（GRP78）为靶向的胰蛋白酶抑制剂抗肠癌效应研究

 目的  构建以肿瘤细胞表面葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)为靶向的重组绿豆胰蛋白酶抑制剂（trypsin inhibitor,TI)活性片段GBP-TI,并探讨其抗肠癌的分子靶向效应。方法  用带有GRP78结合肽(GRP78 binding peptide,GBP)表达序列的引物PCR扩增胰蛋白酶抑制剂活性片段,构建GBP-TI的原核表达载体;采用GST亲和层析柱纯化获得GBP-TI蛋白;激光共聚焦方法检测GBP-TI与GRP78的相互作用;MTT和DAPI细胞核染色方法分别检测GBP-TI对大肠癌细胞存活和凋亡的影响。结果 GBP-TI能够与大肠癌细胞表面的GRP78相互作用;与GST-TI相比,GBP-TI能够剂量依赖性地诱导大肠癌细胞死亡,而对正常细胞生长无明显影响。结论 GBP-TI可以通过结合肿瘤细胞表面GRP78蛋白特异性杀伤肿瘤细胞。本研究为肿瘤靶向治疗提供了一种新的策略。     

Caspase-3和bax在视网膜母细胞瘤中的表达

目的：观察凋亡及凋亡调控基因caspase-3／bax在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)中的表达及与凋亡的相关性．方法：收集35例RB标本，对其分别进行caspase-3和bax免疫组织化学染色，观察表达情况及染色强度．结果：Caspase-3及bax在未分化型(n=15)分别有较好的表达(11／12例)，caspase-3及bax在分化型(n=20)中也有较好的表达(17／18例)．正常视网膜组织中无caspase-3及bax的表达．结论：凋亡在RB中是存在的，caspase-3及bax在RB的发生发展中起重要作用。     

糖调节蛋白Grp78在幽门螺杆菌感染者胃黏膜中的表达及意义

目的:了解葡萄糖调节蛋白Grp78在幽门螺杆菌(HP)感染人胃黏膜组织中的表达情况.方法:应用半定量RT-PCR及Western blotting方法检测人胃黏膜组织中Grp78 mRNA及蛋白的表达.结果:HP未感染组28例,Grp78 mRNA表达为0.8038±0.0500,感染组32例,Grp78 mRNA表达为1.1586±0.0839;未感染组Grp78蛋白表达为0.4345±0.0545,感染组Grp78蛋白表达为0.6204±0.0412.两组相比差异显著(P<0.01).结论:正常胃黏膜组织有Grp78 mRNA的表达及蛋白的合成.HP感染胃黏膜增加Grp78 mRNA的表达及蛋白的合成,这可能有利于胃黏膜的自身保护.     

胃癌组织中survivin,caspase-3和caspase-9基因表达的变化

Survivin是新近发现的一个抑制细胞凋亡蛋白(inhibitory apoptosis proteins, IAP)家族成员,特异性表达于人和鼠的胚胎发育组织以及多数人类肿瘤细胞.caspase是一类促凋亡蛋白.本实验在有关survivin和caspase在胃癌组织中表达方面进行了研究,现报告如下.