电离辐射致线粒体DNA 4977 bp缺失质粒构建及其鉴定

目的 建立电离辐射诱导的人线粒体DNA（mtDNA）4977bp缺失片段和对照DNA片段的稳定质粒，用于线粒体基因组相关研究。方法 对无mtDNA 4977 bp缺失的正常人外周血进行离体照射10Gy^60Coγ射线，提取细胞总DNA，用巢式PCR扩增mtDNA 4977 bp缺失片段，普通PCR扩增对照ND1基因片段。PCR产物经纯化后构建质粒；提取质粒DNA，DNA样品经酶切、纯化后测序，将测序结果进行BLAST分析。结果 PCR扩增的跨mtDNA 4977 bp缺失的DNA片段和ND1基因片段大小与预期值是吻合的。对制备的质粒DNA样品进行测序，结果 经BLAST分析，两种质粒DNA与人线粒体序列同源性在99％以上。结论 本研究中所构建的质粒是成功的，可以用于人mtDNA 4977 bp缺失的定性或定量研究。     

STR—PCR定量检测供受者嵌合体方法的建立及临床应用

利用STRs的高度多态性等特性,用竞争性聚合酶链反应（PCR）结合聚丙烯凝胶电泳、染色和凝胶成像分析等技术,建立定量检测异基因造血干细胞移植后供受者嵌合体的方法,用无关个体的DNA混合实验进行可行性和准确性研究,并同时做染色体分带进行对照,以此基础上对2例非清髓异基因造血干细胞移植病人的植入情况进行动态检测。结果显示,扩增产物中供受者DNA含量的百分比同扩增前混合样本的比例呈显著直线相关,STR－PCR检测嵌合体方法简单、快速、可靠、敏感性高,所需标本量少且不受性别限制,是检测NAST供受者嵌合体的新方法。     

DNA测序对Ⅱ型单纯疱疹病毒进行分型鉴定的方法研究

目的建立一种能够对标本中的Ⅱ型单纯疱疹病毒进行准确鉴定分型的方法。方法从生殖器疱疹(GH)患者病变部位采集标本,将标本接种Vero细胞,待出现细胞病变后收获病毒感染物;提取病毒感染物的基因组。根据HSV-1和HSV-2的gD基因序列,设计合成了一对能够同时扩增两个型的病毒引物,PCR扩增感染物中病毒的序列,PCR产物克隆到pMD18-T载体,然后进行序列测定,测定序列与数据库比对,根据比对结果确定HSV的型。结果用PCR成功扩增出200bp大小的片段;测定序列与数据库的比对结果显示,该序列与HSV-2的gD基因同源性最高,表明在标本中有HSV-2病毒。测定的gD序列与国外分离株的序列存在一定的差异。结论通过PCR扩增和产物的克隆测序,能够实现对临床上难以区分的HSV-1和HSV-2的分型鉴定。     

重症急性呼吸综合征病例尸解肺组织中新型冠状病毒部分聚合酶基因的序列测定

目的：从患者尸解肺组织中直接扩增冠状病毒部分聚合酶基因序列，为重症急性呼吸综合征(非典型肺炎)的病原确认提供依据。方法：采用RT—PCR方法，从非典型肺炎病例标本中进行冠状病毒聚合酶基因的扩增与序列测定。采用C1ustal X1.8软件进行系统发生树分析。结果与结论：从非典型肺炎病例尸解肺组织、传代发病小鼠肺组织及分离物感染的细胞培养物中，可分别扩增出冠状病毒的DNA片段。测序结果显示其核苷酸序列与目前已知冠状病毒的同源性在60％左右，而与加拿大和美国最近报道的新型冠状病毒的序列是一致的。     

中国西藏拉萨藏族群体mtDNA环区HVR-Ⅰ序列多态性研究

 目的以无关个体为研究对象,研究中国藏族人群线粒体DNA D环区序列遗传多态性.方法应用PCR扩增产物直接测序法,对30名藏族无关个体线粒体DNA D-环区高变区Ⅰ(hypervariable region Ⅰ,HVR-Ⅰ)进行测序分析.结果HVR-Ⅰ中404个核苷酸序列与Anderson相应序列比较共发现有51处突变,构成28种单倍型.藏族线粒体DNA HVR-Ⅰ基因差异度为0.9862,偶合概率为0.0466.结论线粒体DNA D环区序列多态性在法医学领域具有较高的应用价值.     

应用PCR-SSP方法快速检测基因HLA-B＊ 1502

目的通过序列特异性引物-聚合酶链反应（PCR-SSP）方法检测等位基因HLA-B＊1502,并对检测结果进行讨论。方法根据HLA核苷酸碱基序列的多态性和已知的DNA序列,设计一系列等位基因型特异性引物,通过特定PCR反应体系扩增各等位基因型特异性DNA片段,产生相对应的特异性扩增产物条带,并用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果运用4对等位基因型特异性引物,用PCR仪扩增出2份样本等位基因型HLA-B＊1502,并与阴性和空白样本平行对照。结论应用PCR-SSP方法检测基因HLA-B＊1502,快速、简便、安全、有效。     

人类流感病毒多重PCR分型方法的建立

目的建立一种可以同时检测人类A型流感病毒,B型流感病毒及A型流感病毒H1,H3,H5亚型的多重RT-PCR方法。方法根据人类流感病毒的特异性基因设计并合成多对特异性引物,建立可同时扩增出人类流感病毒亚型特异性片段的多重PCR的方法。同时,对该方法的特异性和敏感性进行了评价,并利用该方法对39份疑似swineH1N1的临床标本进行检测。结果该方法可同时扩增出A型流感病毒M基因203bp,B型流感病毒M基因296bp,A型流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为362bp（H1）,112bp（H3）,188bp（H5）,494bp（swineH1）。该实验最低可检测新甲型H1N1（A/Beijing/501/2009）病毒RNA0.5TCID50。该方法的特异性实验结果显示,在多重PCR检测中未检出非特异扩增的PCR产物。同时,使用该方法从39份疑似新甲型H1N1的临床咽拭子标本中检测出新甲型H1N1阳性的标本4份（10.2%）,季节性H1N1亚型2份（5.1%）,H3N2亚型12份30.7%,本次实验结果与WHO通过实时PCR方法检测的结果一致。结论本研究建立的多重PT-PCR方法快速、敏感,特异性强,可用于人类流感病毒的分型检测。     

造血干细胞移植患者营养不良因素分析及措施

1引起营养不良的因素 1．1造血干细胞移植预处理期 患者在造血干细胞移植前，要接受超剂量的化学或放射治疗。化学或放射治疗可能后果：（1）化学治疗可改变机体代谢和DNA合成，直接造成蛋白质能量代谢异常。放射治疗在杀死肿瘤细胞的同时，也损伤了正常组织细胞，头颈部放射治疗可损害口腔黏膜，影响唾液分泌；腹部放射治疗可使小肠黏膜损伤，从而导致营养吸收不良。（2）化学或放射治疗会引起严重胃肠反应，如恶心、呕吐、腹胀和腹泻，味觉异常，食欲缺乏，甚至厌食。（3）造血干细胞移植患者居住在无菌隔离病房，大多数患者会产生焦虑、恐惧和悲观心理，接受造血干细胞移植者在无菌隔离病房出现精神症状的约41％。     

HLA半相合非清髓性造血干细胞与间充质干细胞共移植治疗重症再生障碍性贫血(附1例报告)

重症再生障碍性贫血（SAA）是临床常见的骨髓衰竭性疾病，常规治疗有效率低，造血干细胞移植是SAA尤其是依赖输血维持生命的重症患者的有效治疗方法之一。我们应用非清髓的预处理方案，进行了1例重症再生障碍性贫血患者的HLA半相合的造血干细胞移植，同时为减轻移植物抗宿主病（GVHD）还首次进行了体外扩增培养的间充质干细胞（MSC）的共移植。     

飞行员血管紧张素转换酶基因插入/缺失多态性及其血清水平的研究

目的了解飞行员血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失（I/D）多态性及其血清水平,探讨ACE基因多态性与飞行员耐力可能的关系。方法飞行员118例,健康对照者96例,用聚合酶链反应（PCR）扩增技术检测ACE基因I/D多态性,用比色法测定血清ACE水平。结果位于ACE基因第16内含子的I/D多态性经PCR扩增后呈三种基因型纯合子插入型（II）、纯合子缺失型（DD）和杂合子插入/缺失型（I/D）。飞行员组II基因型（44.07%）和Ⅰ等位基因频率（0.65）显著高于健康对照组(分别为31.25%和0.52)。ACE基因多态性与血清ACE水平明显相关(DD>ID,DD>II)。结论ACEⅠ基因有可能在飞行员的飞行耐力中起重要作用。     

自体角膜缘干细胞移植与羊膜移植治疗翼状胬肉疗效比较

目的比较自体角膜缘干细胞移植与羊膜移植治疗翼状胬肉的临床疗效。方法将61例(68眼)患者随机分为两组,分别采用角膜缘干细胞移植术[35例(38眼)]和羊膜移植术[26例(30眼)]治疗,术后随访3个月至2年。结果角膜缘干细胞移植组1眼复发,复发率2.63%,羊膜移植组3眼复发,复发率10.00%,两组比较有显著差异(P<0.05)。结论胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植或羊膜移植是治疗翼状胬肉的有效方法、可降低复发率减少术后并发症,自体角膜缘干细胞移植较羊膜移植术后不适症状时间短,复发率低,效果更佳。     

乙型肝炎病毒感染在造血干细胞移植时对造血干细胞植入的影响

目的　探讨恶性血液病患者的移植前、后乙肝病毒 (HBV)感染对其造血干细胞移植 (HSCT)时植活效果的影响。方法　对我院 1 990年 1月— 2 0 0 1年 5月间 1 85例造血干细胞移植的患者中 ,有HBV感染的 48例患者的临床资料进行回顾性分析。结果　HBsAg阳性率、HBV感染流行率 (未包括单纯HBsAb阳性者)分别为 1 3 / 1 85 ( 7.0 2 %)、48/ 1 85 ( 2 5 .95 %)。在自体造血干细胞移植 (AHSCT)和异基因造血干细胞移植 (Allo HSCT)中包括HBsAg( +)组和HBsAb( +)组在内的HBV感染组白细胞恢复到 1× 1 0 9/L所需的平均天数与对照组比较均无统计学的显著差异 (P >0 .0 5 ) ,乙肝病毒感染组白细胞恢复到 1× 1 0 9/L所需的平均天数为 ( 1 4 .5 4±5 .49)d。结论　乙型肝炎病毒感染不影响造血干细胞的植活时间     

Thymic hyperplasia after high-dose chemotherapy and autologous stem cell transplantation: incidence and significance in patients with breast cancer.

OBJECTIVE: The purpose of this study was to determine the incidence and clinical significance of thymic hyperplasia after high-dose chemotherapy and autologous stem cell transplantation for treatment of metastatic or high-risk primary (with at least four positive lymph nodes) breast cancer. MATERIALS AND METHODS: We retrospectively reviewed clinical records and CT scans of 102 breast cancer patients treated with high-dose chemotherapy and autologous stem cell transplantation. Patients were 26-63 years old (mean, 46 years). The length and width of the thymus gland were measured on serial CT scans obtained before and after treatment. Moderate thymic hyperplasia was recorded if a focal or diffuse increase was seen in the oblong, triangular soft-tissue opacity conforming to the configuration of the normal gland within the anterior mediastinum after therapy. Minimal hyperplasia was recorded when a minimal increase was seen in soft-tissue attenuation conforming to the configuration of the normal bilobed thymus gland within the anterior mediastinum, but no discrete mass was visible. RESULTS: CT showed no thymic hyperplasia in 91 (89%) of the 102 patients. CT showed thymic hyperplasia in the other 11 patients (11%). Three patients (3%) had moderate hyperplasia, and eight patients (8%) had minimal hyperplasia. When comparing patients with and without hyperplasia, we found no difference in mean age or survival. CONCLUSION: Thymic hyperplasia is rare after high-dose chemotherapy and autologous stem cell transplantation in adult patients with metastatic or high-risk primary breast cancer. In this population, thymic hyperplasia does not appear to correlate with survival.     

不完全相合造血干细胞移植中GVHD的预测研究:模拟HLA抗原结构的比较与应用

采用通用的微量淋巴细胞毒实验和序列测定方法对拟进行造血干细胞移植的患者及供体进行HLA分型；用计算机分子模拟手段，从HLA分子三维结构方面探讨预测移植物抗宿主病（GVHD）发生程度，以预测移植后GVHD的发生情况。结果发现，8例供受体中，3例为半匹配移植，其中2例发生了Ⅳ度GVHD，1例发生了Ⅱ度GVHD；3例为两个抗原不相合移植，其中1例发生了Ⅱ度GVHD，2例发生了Ⅱ度GVHD；2例口才为一个抗原不相合移植，分别发生了Ⅰ度、Ⅱ度GVHD；GVHD的发生程度与HLA不相合抗原RMSD差异的大小呈正相关。提示异基因造血干细胞移植时，GVHD发生程度与HLA分子三维结构的差异有密切关系，三维结构分子模拟进行GVHD预测可以为临床医生提供较好的预后指标。     

亲代间单倍体相合造血干细胞移植治疗血液病45例临床分析

目的观察亲代间单倍体相合造血干细胞移植治疗血液病的临床疗效。方法第三军医大学新桥医院血液科自2007年7月-2011年1月,对45例患者实施父母供子女的亲代间单倍体相合造血干细胞移植,观察其临床疗效及并发症。结果 43例患者造血重建成功,2例患者植入失败。移植物抗宿主病(GVHD)发生率为62.2%,其中急性GVHD发生率为40.0%,慢性GVHD发生率为22.2%。与母亲作为供者相比,父亲作为供者时患者GVHD的发生率较低。GVHD的发生率与供者年龄、HLA配型相合位点数目有关。移植后并发的感染中以血源性巨细胞病毒感染和肺部感染为多。随访6个月~4年,移植成功的43例患者中共死亡6例,主要死因为感染和原始疾病复发,患者存活率86.7%。7例患者采用联合脐血移植,与单纯采用亲代间单倍体造血干细胞移植者相比,其造血重建时间提前,GVHD发生率占总发生率的7.14%。结论亲代间单倍体造血干细胞移植对治疗血液病有效,应选择HLA配型相合位点数目较多、男性、年轻供者。亲代间单倍体相合造血干细胞移植联合脐血移植,造血重建较快、GVHD发生率较低。     

Use of high-dosage chemotherapy with autologous hematopoietic stem cell transplantation as a first-line therapy for the patients with poor-prognosis testicular tumors

BACKGROUND: High-dose chemotherapy followed by hematopoietic stem cell support can be used as a first-line treatment in patients with germ-cell tumor (GCT) with poor prognosis. Long-term survival rate is attained in 50% of these patients. The aim of this paper was to present the experience at the Department of Hematology, Military Medical Academy, with high-dose cytostatic therapy as first-line chemotherapy in GCT patients with poor prognosis. METHODS: Between 1997 and 2003, five patients with high-risk germ-cell tumors were treated with high-dosage chemotherapy followed by an autologous stem cell transplantation. All the patients were with non-seminomatous germ-cell tumors with mixed histology, and one was with extragonadal retroperitoneal germ-cell tumor. RESULTS: The follow-up period ranged from 8 to 33 months. Three patients achieved complete remision, two patients only partial remision, and one was not followed-up. One patient was with residual tumor resection, using retroperitoneal lymphadenectomy, after autologous stem cell transplantation. All the patients were treated according to standard protocols. CONCLUSION: Early high-dose chemotherapy associated with hematopoietic stem cell support as a first-line treatment in the patients with germ-cell tumor with a poor prognosis, represented an efficient treatment modality.     

Bone marrow transplantation nephropathy after an intensified conditioning regimen with radioimmunotherapy and allogeneic stem cell transplantation.

Intensification of the conditioning regimen with a radioactively labeled anti-CD66 antibody is feasible before allogeneic stem cell transplantation. The use of radioimmunotherapy may deliver a significant dose of radiation to the kidneys. We therefore studied the incidence and clinical picture of bone marrow transplantation (BMT) nephropathy in our patients receiving radioimmunotherapy before allogeneic stem cell transplantation. METHODS: This study was a clinical trial of 114 consecutive patients who received conditioning with a radiolabeled anti-CD66 antibody-188Re (n = 93) or 90Y (n = 21)-between 1998 and 2003. RESULTS: Although BMT nephropathy has developed in none of the patients in the [90Y]anti-CD66 group, 6 of 93 patients receiving [188Re]anti-CD66 presented with signs of BMT nephropathy at a median of 11.5 mo after stem cell transplantation. The absorbed renal dose was significantly lower in the 90Y group (4 vs. 7 Gy, P < 0.0001). Of the patients receiving [188Re]anti-CD66 who are alive, BMT nephropathy developed in 19% (6/32). Five of 6 patients with BMT nephropathy received total-body irradiation. The patients presented with elevated serum creatinine, proteinuria, anemia, hypertension, and signs of microangiopathy. All 6 patients in whom BMT nephropathy has developed are alive at a median follow-up of 58 mo after stem cell transplantation, and 1 patient has entered a dialysis program. CONCLUSION: BMT nephropathy appears to be a significant problem after allogeneic stem cell transplantation with intensified conditioning using the 188Re-labeled anti-CD66 applied in this study, particularly when combined with total-body irradiation.     

神经干细胞治疗甲基丙二酸血症继发脑损伤4例临床观察

目的观察神经干细胞治疗甲基丙二酸血症继发脑损伤儿童的临床疗效。方法2008年4月—2010年10月在我院治疗的甲基丙二酸血症继发脑损伤儿童4例,所有患儿均在磁共振头皮定位下行侧脑室穿刺神经干细胞移植。移植后1个月对患儿综合评估,并随访至移植后6个月,对患儿行Gesell发育量表评估。结果4例中,3例在移植后1个月内出现大运动、精细动作、视听反应及智力反应等方面的进步;跟踪随访至移植后6个月,3例均持续出现不同程度进步。细胞治疗均未出现不可逆不良事件。结论神经干细胞治疗安全可靠,能在短时间改善甲基丙二酸血症继发脑损伤患儿的运动和智力表现,并能持续至移植后6个月。在维持基础对因治疗的前提下,为甲基丙二酸血症继发脑损伤患儿提供了新的治疗方法,但远期疗效有待进一步随访观察。     

造血生长因子在医源性急性放射病的临床应用

目的 探讨造血生长因子对使用全身照射(TBI)进行干细胞移植预处理患者造血重建的影响,进而起到模拟事故性急性放射病,了解细胞因子在急性放射病患者救治中的作用。方法对1990-2012年75例预处理含TBI的造血干细胞移植患者及其供者的造血生长因子应用、植入情况、不良反应发生等进行回顾性分析,了解细胞因子在造血功能重建、造血干细胞动员中的作用以及不良反应。结果 造血干细胞移植患者除1例因预处理不良反应死亡外,其他患者全部恢复造血功能重建。应用rhG-CSF组粒细胞植入的中位时间自体移植为10 d、异基因移植为12 d。自体移植患者应用rhIL-11组与未应用rhIL-11组血小板植入的时间分别为(11.67±1.53)、(13.70±6.27) d。所有TBI患者中口腔溃疡发生率为48%,腹泻发生率为44%。造血重建过程中细胞因子不良反应不明显,动员过程中半数出现轻度不良反应。结论 细胞因子在TBI后造血功能重建以及移植时的造血干细胞动员中起关键作用。     

造血干细胞移植中预先全身照射对全身及造血系统的影响及并发症治疗

目的 探讨全身照射联合高剂量化疗对造血干细胞移植患者全身和造血系统影响的特点和治疗,为急性放射病的诊治提供临床经验。方法 回顾分析64例接受造血干细胞移植患者,系统观察急性照射及大剂量化疗后患者血液学改变及临床不良反应,并分析其骨髓重建特点。结果 移植相关病死率3.12%。移植后随访9～72个月 (中位随访时间26个月)。1、3、5年生存率分别为(95.8±3.3)%, (89.8±4.7)%和(81.7±6.9)%。全身照射联合高剂量化疗后,所有患者均出现了血液学不良反应,以白细胞及血小板下降最为明显,白细胞总数最低值为(0.18±0.13) ×10⁹个/L,血小板最低值为(14.48±8.85)×10⁹个/L;在造血干细胞支持及粒细胞集落刺激因子(G-CSF)应用后,均可恢复。此外患者不同程度出现消化道反应、感染、肝功能受损及出血等不良反应,经相关治疗后好转。结论以TBI联合高剂量化疗为预处理,随后进行造血干细胞移植,患者恶性血液系统疾病治疗效果好,并且其临床情况在一定程度上模拟了急性放射病的临床过程,为急性放射病的救治提供了一定的临床经验。