上调miR-126对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用及机制

目的 探讨上调微小RNA(miR)-126对小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的影响及可能的作用机制.方法 将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为control组、ALI组、ALI+agomiR-NC和ALI+agomiR-126组,每组10只.利用腹腔注射脂多糖(LPS)诱导建立ALI小鼠模...     

抑制炎症反应治疗急性肺损伤的实验研究

目的通过观察急性肺损伤（ALI）大鼠血液和肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒ等炎性细胞因子的变化,探讨抑制炎症反应在治疗急性肺损伤中的作用。方法应用气管内滴入内毒素（LPS）复制大鼠急性肺损伤模型。将48只大鼠随机分成4组：对照组（N组）、LPS组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）治疗组（NAC组）、NAC联合地塞米松（Dex）治疗组（NAC＋Dex组）,采用免疫印迹法（Western Blotting）检测NF-κΒ的含量,采用RT-PCR检测肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒmRNA的表达,并采用放免检测血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中的IL-6、TNF-α的含量。结果LPS组大鼠肺病理可见明显的肺损伤表现,NAC组及NAC＋Dex组肺组织病理改变明显减轻;NAC组及NAC＋Dex组肺NF-κB,肺IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒmRNA表达水平及血清和BALF中的IL-6、TNF-α含量明显高于N组（P〈0.01）,而明显低于LPS组（P〈0.05）。结论NAC、Dex等可以抑制炎症反应,减少炎性介质的释放从而减轻肺损伤的程度,达到防治急性肺损伤的目的。     

维生素E对LPS诱导的急性肺损伤中氧化应激的影响

目的:探讨维生素E对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中氧化应激状态的影响。方法:以Wistar大鼠为研究对象,实验分成正常对照组、ALI组及维生素E预处理组。用LPS作用于大鼠6 h后检测各组大鼠肺组织中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,并应用RT-PCR及ELISA法检测大鼠肺组织中TNF-α的水平。结果:ALI组与正常对照组比较SOD活性下降、LDH的活性增强、MDA的含量升高,且TNF-αmRNA及蛋白的表达增加(P﹤0.05);维生素E预处理组与ALI组比较SOD活性增强,LDH的活性减弱,MDA的含量降低,TNF-αmRNA及蛋白的表达降低(P﹤0.05)。结论:维生素E预处理可减轻LPS诱导的ALI大鼠肺组织的脂质过氧化损伤,减少炎症因子的表达,发挥一定的抗损伤效应。     

糖皮质激素对大鼠急性肺损伤炎症反应的影响

目的:通过构建大鼠急性肺损伤(ALI)模型,探讨糖皮质激素对ALI炎症反应的影响。方法:将64只雄性SD大鼠随机分为A、B、C、D、E、F、G和H组,每组8只,A组通过气管内滴入脂多糖建成ALI模型,B、C、D、E、F、G组大鼠也滴入等量脂多糖,但分别于滴入前120、30、0 min,滴入后30、60、120 min静脉注射地塞米松(2 mg/kg),H组为正常对照组。6 h后处死大鼠,并检测支气管肺泡灌洗液白细胞总数和分类计数、蛋白和磷脂含量,测量肺湿重系数,通过肺组织切片、HE染色进行组织病理学评分。结果:与A组大鼠相比,C组大鼠支气管肺泡灌洗液白细胞总数、中性粒细胞计数及肺组织病理学评分显著降低,分别为(0.436 3±0.200 4)×106/L、(0.402 6±0.204 8)×106/L、4.000 0±1.069 0(P<0.05);C、D两组蛋白含量显著下降[分别为(5.350 0±0.856 9)g/L和(5.500 0±0.691 2)g/L,(P<0.05)],而磷脂含量则显著增高[分别为(6.831 9±2.056 3)mol/L和6.973 9±2.202 4 mol/L,(P<0.05)],肺湿重系数显著下降[分别为0.154 0±0.030 4和0.154 4±0.058 8,(P<0.05)]。结论:在适当时机使用糖皮质激素进行干预可以抑制或减轻由脂多糖引起的ALI相关性炎症反应。     

亚精胺通过抑制NF-κB/NLRP3炎症小体通路减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤

目的 ：本研究旨在观察亚精胺对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）小鼠NLRP3表达与活化的影响。方法 ：采用小动物呼吸机检测亚精胺对ALI小鼠呼吸功能的影响;检测小鼠的生存率;采用肺组织病理评分评估亚精胺对ALI小鼠肺组织形态变化的影响;ELISA检测ALI小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-1β和IL-18的蛋白水平;qPCR检测小鼠肺组织IL-1β、IL-18、NLRP3、ASC及pro-caspase-1、NF-κB的表达;Western Blots检测小鼠肺组织IκB的表达。结果 ：亚精胺可改善ALI小鼠的呼吸功能,提高生存率;减轻LPS诱导的肺病理损伤;降低ALI小鼠炎症因子IL-1β和IL-18的表达;减少ALI小鼠肺组织NLRP3、ASC、pro-caspase-1、NF-κB及IκB的表达。结论 ：亚精胺可通过抑制ALI小鼠肺组织NF-κB的激活,使NLRP3炎症小体的表达及活化减少,从而抑制炎症因子的表达,最终达到减轻ALI的作用。本研究可为从调节内源性能量代谢角度,探索ALI的发生机制提供实验基础     

内毒素性急性肺损伤小鼠肺组织中炎症介质的表达

目的 探讨内毒素性急性肺损伤过程中两类炎性介质的相互关系及其变化规律.方法 腹腔注射脂多糖(LPS)(20mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型.用放射免疫(ELISA)法分别测定各组各时相点肺组织匀浆上清液中TNF-α、IL-8、IL-10 3种细胞因子的含量,同时观察肺组织形态学改变,进行肺湿/干重比(W/D)测定.结果 与对照组比较,ALI组各时相点小鼠肺组织中3种炎症因子水平及W/D值均明显上升,差异有统计学意义(P＜0.05),表达峰值时间:TNF-α为4h,IL-8为2h,而IL-10为8h.结论 内毒素性急性肺损伤过程中相继发生了促炎反应和抗炎反应,促炎/抗炎失衡,炎症反应失控,可能是内毒素肺损伤的重要机制.     

miR-28-5p靶向Nrf2调控LPS诱导的急性肺损伤机制研究

目的 探究miR-28-5p在LPS诱导的急性肺损伤（acute lung injury,ALI）进程中的功能和分子机制。方法 利用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠急性肺损伤3h,6h,12h,取肺组织进行荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,RT-PCR）检测miR-28-5p表达;同时体外利用LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7发生炎症反应,RT-PCR检测细胞中miR-28-5p表达;巨噬细胞中过表达miR-28-5p mimic后利用LPS刺激,RT-PCR检测巨噬细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）表达情况;RT-PCR和蛋白免疫印迹（western blotting,WB）检测抗氧化关键分子核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO1）表达水平;Targetscan 7.0预测miR-28-5p靶向基因,突变结合位点后,并通过荧光素酶报告基因系统检测miR-28-5p对靶基因的转录调控作用。结果 LPS诱导小鼠ALI 3h,6h,12h,肺组织中miR-28-5p的表达水平明显升高（***P＜0.001）;LPS刺激巨噬细胞炎症反应时,细胞内miR-28-5p的表达水平也明显升高（***P＜0.001）;巨噬细胞中过表达miR-28-5p mimic后,炎症因子TNF-α（###P＜ 0.001）和IL-1β（&&&P＜0.001）表达水平明显升高;同时抗氧化关键分子Nrf2（###P＜ 0.001）及其下游HO-1（&&&P＜0.001）、NQO1（$$P＜0.01）表达的明显降低;Targetscan 7.0预测发现miR-28-5p靶向Nrf2基因3'' UTR序列,荧光素酶报告基因实验进一步明确miR-28-5p通过靶向 基因3'' UTR序列调控其转录。结论 miR-28-5p在LPS诱导的ALI中表达上调,并进一步加剧ALI病理进程,其作用机制可能是通过靶向巨噬细胞Nrf2,从而减弱胞内抗氧化能力,促进炎症因子分泌和巨噬细胞的活化。     

脂多糖诱发小鼠急性肺损伤microRNA-199a表达及其对基因表达的调控

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱发的小鼠急性肺损伤中,microRNA-199a(miR-199a)的表达变化及其对基因的表达调控.方法 通过小鼠气道向其肺内注入LPS,构建小鼠急性肺损伤模型,采用Northern blot 分析miR-199a的表达水平;构建miR-199a的过表达...     

桃叶珊瑚苷减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的：探讨预防性给予桃叶珊瑚苷(aucubin,AU)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤 (acute lung injury,ALI)的作用。方法：以成年雄性BABL/c小鼠为研究对象,随机分为对照组、ALI组和AU处理组,每 组16只。气管注射LPS(5 mg/kg)复制ALI小鼠模型,AU处理组于造模前30 min腹腔注射AU(10 mg/kg)。LPS注射6 h后处 死小鼠,采用HE染色检测肺组织形态学改变,并进行损伤评分;采用real-time PCR法检测小鼠肺组织炎症因子肿瘤坏 死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)的mRNA表达;收集小鼠支气管肺泡灌洗 液(bronchoalveolar lavage fl uid,BALF)进行细胞计数、检测BALF中的总蛋白量、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH) 活性以及TNF-α和IL-10的蛋白含量。结果：与ALI组小鼠相比,AU处理组小鼠肺组织病理损伤明显减轻、损伤评分降 低,BALF总细胞、中性粒细胞和巨噬细胞数目显著减少,LDH活性和总蛋白含量亦明显降低(均P<0.01)。同时,AU 可减少ALI小鼠肺内TNF-α mRNA和蛋白的表达,增加IL-10 mRNA和蛋白的表达(均P<0.01)。结论：AU可减轻LPS诱导 的小鼠ALI。     

miR-16表达载体的构建

目的构建miR-16表达载体,为研究miR-16对HBV的干扰作用打下基础。方法根据miRNA的成熟序列以及附近约100多碱基共270个碱基序列,设计PCR引物,PCR扩增,退火后用T4联接到线性化的pSUPER质粒中,并对重组质粒（命名为pmiR-16）进行酶切及测序鉴定。结果成功构建了重组质粒PmiR-16。结论成功构建miR-16表达载体。     

miR-1腺病毒载体的构建及表达分析

目的构建并鉴定microRNA-1(miR-1)的腺病毒表达载体。方法 PCR扩增含大鼠miR-1前体的DNA片断,并将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack。pAdTrack经PmeI酶切线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组。重组质粒pAdprecusor-miR-1线性化后,转染293A细胞,进行病毒包装,得到重组腺病毒颗粒Ad-miR-1。Ad-miR-1与Ad-GFP病毒转染培养的乳鼠心肌细胞,通过实时荧光定量PCR方法检测miR-1的表达效率。结果基因测序及酶切鉴定证实重组Adprecursor-miR-1腺病毒载体构建成功;腺病毒Ad-miR-1转染心肌细胞后,实时荧光定量PCR方法证实腺病毒Ad-miR-1能够显著提高心肌细胞内miR-1的表达水平。结论利用同源重组的方法构建的miR-1腺病毒能够提高心肌细胞内miR-1的表达水平。     

类风湿关节炎患者外周血miR-146a及miR-16的表达及与病情活动的相关性研究

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中miR-146a及miR-16的表达及与RA病情活动的相关性。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应检测RA患者活动组24例、缓解组16例及健康对照16例PBMCs-miR-146a、miR-16的表达水平,并且与RA患者临床指标进行相关性分析。结果 RA患者组miR-146a、miR-16的表达高于健康对照组(P<0.05);在RA活动组与缓解组的比较中发现活动组miR-146a、miR-16表达水平高于缓解组(P<0.05)。RA患者组miR-146a、miR-16的表达与ESR、CRP及DAS28评分之间呈正相关(P均<0.01),与RF无相关性(P>0.05)。结论 RA患者外周血miR-146a和miR-16表达上调,其表达水平与RA病情活动相关,提示miR-146a和miR-16的检测可作为RA病情活动的判断指标。     

人微小RNA-16(miR-16)重组腺病毒的制备和鉴定

目的 制备人微小RNA-16(miR-16)重组腺病毒,研究其在人骨髓间充质于细胞(hMSCS)中的表达及对细胞周期素依赖蛋白激酶6(CDK6)表达的影响.方法 从人基因组DNA中扩增miR-16前体的DNA,定向插人腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV.将经Pme I线性化的重组穿梭载体pAdTrack-CMV-m...     

糖皮质激素对内毒素致急性肺损伤大鼠肺组织Fractalkine表达的影响

目的动态观察内毒素（LPS）所致急性肺损伤（acute lung injury,ALI）大鼠肺组织内趋化因子Fractalkine（FKN）的表达变化,及糖皮质激素对其的影响。方法将42只大鼠随机分为空白对照组、模型组（LPS）及地塞米松干预组（DEX）,其中LPS组和DEX组再分为1h、2h、4h3个时相组,每组6只,LPS组和DEX组大鼠经尾静脉注射LPS（4mg／kg）建立ALI大鼠模型。采用ELISA、RT—PCR等方法,观察ALI大鼠模型肺组织病理学改变、肺湿干重比值（W／D）及血清TNF-a变化,并检测肺组织FKNmRNA的表达,同时观察地塞米松对上述指标的影响．结果模型组1h、2h与4h3个时相组肺损伤病理改变、肺W／D、血浆TNF—α均明显增高,地塞米松能减轻ALl大鼠肺组织炎症反应、肺W／D值及血清TNF—α水平（P均〈0．05）。正常大鼠肺组织FKNmRNA有表达,模型组3个时相亚组肺组织FKNmRNA表达较正常组明显增加（P〈0．05）,在2h时点达峰值,地塞米松能下调ALI大鼠肺组织FKNmRNA表达（P〈0．05）。FKNmRNA的表达量与血清TNF—α水平呈正相关（r=0．674,P〈0．05）．结论早期应用地塞米松可降低TNF-α水平,下调肺组织FKN mRNA的表达,这可能是糖皮质激素对内毒素致急性肺损伤实验大鼠保护作用机制之一。     

中缝核miR-16与5-羟色胺转运体在失眠模型大鼠中的表达

目的研究中缝核miR-16以及5-羟色胺转运体(serotonin transporter,SERT)的表达在失眠症发病机制中的作用。方法 20只雌性SD大鼠,随机分成对照组和失眠组。失眠组大鼠接受腹腔注射对氯苯丙氨酸(pchlorophenalanine,PCPA)350 mg/(kg·d),连续3 d,对照组给予等量生理盐水。取中缝核组织,测定其miR-16、SERT m RNA与SERT蛋白水平,进行注射前后的组间比较。结果失眠组大鼠中缝核miR-16相对水平(1.23±0.33)与对照组(0.71±0.25)比较明显升高,差异具有统计学意义(t=6.68,P=0.000);而失眠组SERT mRNA相对水平(0.68±0.14)以及SERT蛋白相对水平(0.28±0.11)显著低于相应的对照组(1.06±0.30,0.57±0.15)(t=3.94,P=0.004;t=4.69,P=0.002)。结论中缝核miR-16以及SERT的异常表达,可能参与了失眠症的发病机制。     

内毒素致急性肺损伤发病机制研究进展

内毒素(LPS)是临床上引起急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征的重要原因。它直接损伤肺泡细胞是特殊机制;它激活机体导致肺部损伤引起炎性细胞在肺部聚集以及释放各种炎性介质与细胞因子是关键的发病机制;而LPS引起的肺部凝血与纤溶系统失衡均是重要的发病机制。近年来一些新分子的发现,进一步阐明LPS介导急性肺损伤的发病机制。     

miR-221和miR-222在急性髓细胞白血病初发患者中的表达研究

目的探讨miR-221和miR-222在急性髓细胞白血病(AML)骨髓有核细胞中的表达及意义。方法选择16例AML初发患者和44例非白血病患者骨髓标本,分离有核细胞,抽提总RNA,以U6为内参,采用茎环Realtime RT-PCR法检测并比较AML和非白血病患者骨髓有核细胞中miR-221和miR-222的表达,同时比较这两种miRNAs在AML中M3、M4和M5三种亚型间的表达水平。结果 miR-221和miR-222在AML初诊患者骨髓中相对表达量(N=2-ΔCt)明显高于非白血病患者组(P<0.05);这两种miRNAs在M5型AML患者表达最高,但在AML三种亚型间表达水平未见显著的统计学意义(P>0.05)。结论 miR-221和miR-222有可能在为AML的诊断、治疗和预后上,提供一个新的标准和靶点指标。     

赤芍对大鼠内毒素性急性肺损伤时肺iNOS和eNOS表达的影响

目的 :观察赤芍对内毒素性急性肺损伤 (ALI)时肺iNOS和eNOS表达的影响 ,并探讨其保护作用机制。方法 :采用大鼠内毒素ALI模型。 4 0只Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组 (NS)、内毒素组 (LPS)、赤芍治疗组、赤芍预防组和iNOS阻断剂氨基胍 (AG)组。应用免疫组织化学方法和图像分析系统检测肺组织中iNOS和eNOS的表达 ,检测血清NO及肺组织丙二醛 (MDA)含量 ,同时观察肺组织病理形态学改变。结果 :与NS组比较 ,LPS组iNOS表达显著增强而eNOS表达明显降低 (均P <0 .0 1) ;赤芍治疗组和赤芍预防组iNOS表达较LPS组明显降低而eNOS表达明显升高 (均P <0 .0 5 ) ;与LPS组比较 ,AG组仅iNOS表达明显降低。LPS组肺组织MDA和血清NO较NS组明显增加 (P <0 .0 1) ;与LPS组比较 ,赤芍治疗组和赤芍预防组MDA含量和血清NO显著降低 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。病理学检查显示赤芍治疗组和赤芍预防组肺组织损伤程度较LPS组明显减轻。结论 :肺组织iNOS表达增强和eNOS表达降低是内毒素性ALI的重要机制 ,赤芍对内毒素性ALI的防治作用可能与抑制肺组织iNOS异常高表达和增加eNOS表达有关。