我国雷氏按蚊和嗜人按蚊的分子鉴别和分类地位的探讨

[目的 ]论证我国雷氏按蚊与嗜人按蚊的分类地位。 [方法 ]采用分子鉴别法 (鉴别PCR和rDNA ITS2序列 )检测辽宁及山东两省现场按蚊标本 ,并依据ITS2区序列建立分子系统树。 [结果 ]分子鉴别显示 ,辽宁和山东两省均存在雷氏按蚊和嗜人按蚊。我国雷氏按蚊 (辽宁和山东省 ,n =6 )和嗜人按蚊 (辽宁、云南、河南和四川省 ,n =10 )ITS2序列长度和GC含量分别为 45 1bp、 46 2 % ,44 8bp、 46 0 % ;各地雷氏按蚊和嗜人按蚊序列均无差异 ,但各地嗜人按蚊与对照组江苏的嗜人按蚊相比 ,种内序列差异为 0 88% ;雷氏按蚊与嗜人按蚊种间序列差异为 2 5 7%。分子系统树显示雷氏按蚊与中华按蚊、嗜人按蚊与凉山按蚊亲缘关系较近。 [结论 ]根据分子鉴别 ,确认我国雷氏按蚊与嗜人按蚊为同域分布的 2个独立种     

我国嗜人按蚊订正为雷氏按蚊的学术探讨

本文对我国重要传疟媒介嗜人按蚊和雷氏按蚊的分类地位和学名使用作了历史性回顾和探讨。根据当前我国文献记载,已具有充足的形态学和分子生物学论据,表明嗜人按蚊为雷氏按蚊的同物异名,订正并恢复使用雷氏按蚊学名已刻不容缓。     

一种简便的赫坎按蚊复合体近缘种按蚊基因鉴别新技术

目的 建立一种能鉴别赫坎按蚊种团内不同近缘种按蚊的基因鉴别技术。方法 依据赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊ITS2区段的基因序列特征设计特异性引物，建立一种能鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊的简便的PCR基因鉴别技术，并采用传统的形态学分类方法和新建立的基因鉴别技术对从辽宁、河南省以及在朝鲜现场捕获的按蚊分别进行了形态学和基因鉴别及比较。结果与结论 新建立的基因鉴别技术能准确鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4种近缘种按蚊。具有比传统的形态学分类方法准确，比已有的PCR-RFLP蚊种基因鉴别技术更简便、价廉和省时的特点。适用于不同的复合媒介地区的疟疾媒介调查和监测。     

我国按蚊分类进展和若干蚊种学名的订正

本文根据1988-2007年间蚊虫分类学研究的新进展,提出新修订的“中国按蚊校订名表”。新名表中收录我国按蚊共61种（亚种）。以往我国曾记载过的12种按蚊已被证明属无效学名,包括以下情况：①我国记录存疑,迄今未采获典型的平原按蚊（Anopheles campestris）标本;②鉴定错误,已更正为其他蚊种的是小五斑按蚊（An. atroparvus）和印度按蚊（An. indiensis）;③经杂交试验或分子鉴别被确认为近缘种的同物异名共9种,分别为长浮按蚊（An. chang-fus）、大窄按蚊（An. dazhaius）、江苏按蚊（An. kiangsuensis）、嗜人按蚊（An. anthropophagus）、昆明按蚊（An. kunmin-gensis）、小宽按蚊（An. xiaokuanus）、筠连按蚊（An. junlianensis）、八代按蚊（An. yatsushiroensis）（部分）及溪流按蚊（An. fluviatilis）。新名表中增录我国新订正的按蚊学名4种,分别为比伦按蚊（An .belenrae）、雷氏按蚊（An. lesteri）、近黑按蚊（An. pullus）及贝曼按蚊（An. baimaii）。名表中部分蚊种名下增列了蚊媒分子分类鉴别主要文献引证,并对某些近缘种间的鉴别作分析讨论。     

PCR-RFLP技术用于鉴别赫坎按蚊复合体近缘种按蚊的研究

目的区别赫坎按蚊种团内近缘种.方法应用聚合酶链式反应连接的限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)技术,对辽宁省现场捕获的按蚊用特异性ITS2引物进行PCR扩增,限制性内切酶RsaⅠ和HinfⅠ消化,琼脂糖凝胶电泳分析.结果中华按蚊的PCR扩增产物能被限制性内切酶RsaⅠ酶切成350 bp和200 bp两条酶切DNA条带;嗜人按蚊核糖体DNA(rDNA)的PCR扩增产物能被限制性内切酶HinfⅠ酶切成410 bp的酶切DNA条带; 雷氏按蚊的ITS2基因PCR扩增产物能分别被限制性内切酶RsaⅠ和HinfⅠ酶切,分别显示350 bp和400 bp的酶切DNA条带;八代按蚊的PCR扩增产物没有显示明显的限制性内切酶RsaⅠ或HinfⅠ酶切条带.结论依据rDNA的ITS2区段基因特征建立的PCR-RFLP技术可用于鉴别赫坎按蚊种团的中华按蚊、嗜人按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊4个近缘种按蚊.     

海南岛按蚊的鉴定和迷走按蚊的进化研究

目的 阐明海南岛某些按蚊的分类地位,探讨迷走按蚊与其近缘种的亲缘关系. 方法 对采自海南岛8个地点的按蚊依据形态和分子特征进行鉴别研究,应用的分子特征包括核糖体DNA(ribosomal DNA,rDNA)第2内转录间隔区(second internal transcribed spacer,ITS2)和28S第3编码区(third domain,D3)序列,综合分析迷走按蚊及其近缘种的ITS2和D3序列,构建系统发育树. 结果 本研究共鉴定按蚊407只,其中84.9％的成蚊分子鉴定与依据形态鉴定的结果一致.在228条迷走按蚊的ITS2序列中,部分个体在2个位点存在单碱基套峰(G/A),出现的频率分别为57.9％、64.8％,同时有两个套峰的占样本数的57.0％,其他位点保守.迷走按蚊的D3序列,在种内无碱基差异.结合本研究和文献的迷走按蚊及其近缘种ITS2序列构建的ML树,显示迷走按蚊与浅色按蚊MC/D亲缘关系近,与另一支的浅色按蚊B、圣代克按蚊复合体的亲缘关系较远.关于未订名种NBC (Anophelessp.NBG)的分类地位,依据分子特征鉴定其为浅色按蚊B,可能是圣代克按蚊复合体新的成员种.结论 鉴定形态在个体间变异大的种类时,客观的分子特征更具重要性,迷走按蚊与浅色按蚊MC/D具较近的亲缘关系.     

PCRRFLP单酶切法鉴别赫坎按蚊复合体的研究

目的建立一种新的赫坎按蚊复合体近缘种按蚊基因鉴别技术,应用于现场按蚊样本的鉴别。方法用分子生物学软件Vector NTI 9.0,对赫坎按蚊复合体的嗜人按蚊、雷氏按蚊、中华按蚊、八代按蚊4个近缘种按蚊rDNA基因的ITS2区段序列进行限制性内切酶酶切位点预测分析,选择特异性内切酶,建立一种能同时鉴别4种近缘种按蚊的聚合酶链反应限制性片段长度多态(PCR RFLP)单酶切法鉴别技术,并对现场捕获的452只按蚊样本进行基因鉴别。结果软件预测赫坎按蚊复合体近缘种4种按蚊的rDNA基因的ITS2区段可被限制性内切酶Dde I切成大小易于区分的不同片段,PCR RFLP单酶切实验结果和软件预测结果完全吻合。4个疟疾流行区捕获的452只按蚊样本经PCR RFLP Dde I单酶切法鉴定有20只嗜人按蚊、6只雷氏按蚊、391只中华按蚊、35只八代按蚊,与形态学鉴别结果符合率为93.4%,与PCR RFLP双酶切法结果符合率为100%。结论新建立的PCR RFLP Dde I单酶切法基因鉴别技术可准确鉴别赫坎按蚊复合体,比传统的形态学鉴别更为简便、可靠,适合用于复合媒介地区的媒介监测。     

辽宁省东港市按蚊多样性和蚊虫种群动态变化研究

目的掌握辽宁省东港市按蚊多样性的本底资料以及蚊虫种群密度动态变化和季节消长的情况。方法对1997年至2005年在东港7个地点采集的按蚊进行形态和PCR分子鉴别,分析1998年至2005年间该地的蚊虫密度和季节消长情况。结果东港市的按蚊有4种,为雷氏按蚊、八代按蚊、Anophelesbelenrae和朝鲜按蚊;其中雷氏按蚊占经分子鉴别的173个样本中的93.6%;An.be-lenrae在中国是首次记录,朝鲜按蚊是辽宁省的新记录种。东港市蚊虫种群密度最高的年份为2001年,最低为1998年;绝大多数年份蚊虫的季节消长基本属单峰型,调查期间每年的7月和8月其密度维持在较高水平。结论辽宁省东港市的蚊虫资料得到了更新和充实。     

赫坎按蚊种群近缘种核糖体基因内转录第二间隔区序列分析

目的　分析赫坎按蚊种群内4个近缘种核糖体基因内转录第二间隔区(rDNAITS2)特征。　方法　采用特异性ITS2引物对中华按蚊和嗜人按蚊江苏实验株、辽宁省沈阳市和朝鲜开城现场捕获的嗜人按蚊、八代按蚊和雷氏按蚊rDNAITS2进行PCR扩增、基因测序和限制性内切酶酶切位点图谱分析。　结果与结论　赫坎按蚊种群近缘种中华按蚊、嗜人按蚊、八代按蚊和雷氏按蚊rDNAITS2分别为472、452、456和456bp,各基因序列存在明显差异并存在不同的限制性内切酶酶切位点     

三种按蚊血淋巴元素含量的比较

应用ＩＣＡＰ－９０００型等离子原子发射光谱仪检测嗜人按蚊，中华按蚊和斯氏按蚊的初羽化和吸血后５ｄ蚊血啉巴元素含量，比较了１２种元素含量的差异。结果表明，嗜人按蚊与中华按蚊相比，２种元素有显著性差异，１０种元素为非常显著性差异，嗜人按蚊与斯氏按蚊相比，１２种元素有非常显著性差异；中华按蚊与斯氏按蚊相比，初羽化蚊有１种元素有显著性差异，１１种元素有非常显著性差异，吸血后蚊１２种元素均有非常性差异。提示     

Physiology of desiccation resistance in Anopheles gambiae and Anopheles arabiensis

Desiccation resistance and water balance were studied in the adult female mosquitoes Anopheles arabiensis and Anopheles gambiae sensu stricto. When the two species were reared from egg to adult under identical conditions, An. arabiensis had significantly higher desiccation resistance than did An. gambiae. Data are presented that indicate that this difference in desiccation resistance is associated with a higher body water content prior to desiccation in An. arabiensis. No differences in rate of water loss during desiccation or water content at death were observed. Measurements of metabolic rate and respiratory pattern also showed no statistically significant differences between the species. This study provides the first physiologic measurements of desiccation resistance in adults of these species and offers insights into the physiologic differences associated with differential resistance to desiccation stress.     

Anopheles maculipennis northeastern and Anopheles beklemishevi southwestern distribution areas' borders

Distribution of An. maculipennis and An. beklemishevi in the Upper Volga area was investigated. Species discrimination was based on the study of polytene chromosomes. The examined material included about 2000 larva and imago from 11 localities, namely: Andropov, Yaroslavl, Rostov (Yaroslavl.), Solnechnogorsk, Protvino (Moscow region), Suzdal, Murom (two localities), Joshkar-Ola, Zelenodolsk, Kujbyshev. It appears to be a 700 X 200 km intergradation zone between the species distribution areas.     

用PCR-RFLP技术鉴别嗜人按蚊和中华按蚊的研究

目的　依据嗜人按蚊和中华按蚊rDNA的ITS2区段基因特征 ,建立一种新的嗜人按蚊和中华按蚊基因鉴别技术。方法　对不同地区的嗜人按蚊、可疑嗜人按蚊和中华按蚊样本通过采用特异性ITS2 引物PCR扩增 ,限制性内切酶RsaI和HinfI消化 ,以及琼脂糖凝胶电泳分析进行PCR -RFLP基因鉴别。 结果　不同地区嗜人按蚊rDNA的ITS2 基因PCR扩增产物能被限制性内切酶HinfI酶切 ,并显示一条 4 5 0bp的酶切DNA条带 ;中华按蚊的ITS2 基因PCR扩增产物则能被限制性内切酶RsaI酶切 ,并显示 4 0 0bp和 2 0 0bp两条酶切DNA条带 ;辽宁可疑嗜人按蚊的PCR -RFLP结果与嗜人按蚊相同而广东珠海可疑嗜人按蚊的PCR -RFLP结果与中华按蚊相同。结论　依据rDNA的ITS2 区段基因特征建立的PCR -RFLP技术可用于嗜人按蚊和中华按蚊的基因鉴别。采用该PCR -RFLP基因鉴别技术发现辽宁可疑嗜人按蚊的基因与中国大陆的嗜人按蚊属同种 ,而广东可疑嗜人按蚊的基因与中华按蚊属同种。     

Comparative studies on several biochemical indices of Anopheles anthropophagus and Anopheles sinensis

Proteins, sugars and esterase isoenzymes of An. anthropophagus and An. sinensis were compared by IEF and two dimensional gel electrophoresis. The results show that there are some differences in the electrophoretic patterns between An. anthropophagus and An. sinensis. The glycoprotein, lipid protein, glycolipidprotein, protein, polysaccharide and esterase isoenzymes showed 10, 0, 6, 14, 2 and 13 bands in An. anthropophagus; 10, 1, 5, 16, 3 and 15 in An. sinensis. There exist 234 and 240 polypeptide spots in An. anthropophagus and in An. sinensis, respectively, altogether 27.8% of polypeptide spots being different.     

拜虫杀对中华按蚊和嗜人按蚊毒杀效果的实验观察

目的观察拜虫杀对中华按蚊和嗜人按蚊的毒杀效果。方法采用拜虫杀10、15、20mg/m2(有效成分)浸泡棉纱布和尼龙纱布,以实验室饲养的中华按蚊和嗜人按蚊为试虫,进行击倒力、致死力和持效观察。结果采用拜虫杀10、15、20mg/m2浸泡两种材料蚊帐,中华按蚊和嗜人按蚊接触药帐后的半数击倒时间(KT50)在3.98~7.30min之间,被击倒的蚊虫恢复饲养24h,死亡率均为100%;接触药帐3min,恢复饲养24h,蚊虫死亡率均>90%;杀虫剂浸泡过的蚊帐悬挂180d后,对媒介按蚊的击倒力仍在8.57~16.31min之间,且恢复饲养24h,死亡率仍为100%。结论拜虫杀对中华按蚊和嗜人按蚊有很强的杀灭效果,持效可达180d以上。     

Larvicidal activity of Bacillus sphaericus 2362 against Anopheles nuneztovari, Anopheles darlingi and Anopheles braziliensis (Diptera, Culicidae).

In this present study, preliminary data was obtained regarding the mortality rate of the Amazonian anophelines, Anopheles nuneztovari, Anopheles darlingi and Anopheles braziliensis when subjected to treatment with Bacillus sphaericus strain 2362, the WHO standard strain. Initially, experiments were conducted to test the mortality rate of the three species of anopheline larvae. The third larval instar of An. nuneztovari and the second and third larval instars of An. darlingi proved to be the least susceptible. In other experiments, the same three mosquito species were tested with the standard strain 2362, An. nuneztovari was the least susceptible to this insect pathogen, while An. braziliensis was the most susceptible. This latter species showed a difference in the level of LC50 concentration, when compared to the former, of 2.4, 2.5 and 1.8 in readings taken 24, 48 and 72 hours after exposure to the bacillus.