联合应用三苯氧胺和吉非替尼对ＮＳＣＬＣ细胞的抗增殖效应

目的:探讨雌激素受体拮抗剂三苯氧胺联合表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼对人小细胞肺癌(NSCLC)细胞株增殖和凋亡的影响及相关的分子机制,为联合分子靶向和激素治疗NSCLC提供理论依据.方法:以吉非替尼及三苯氧胺单独或联合处理NSCLC细胞株,MTF法比较细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡.应用荧光定量PCR及Western blot检测三种肺癌细胞株中表皮生长因子受体(EGFR)及雌激素受体β(Erβ)的表达情况,并分别检测雌二醇.三苯氧胺(TAM)对细胞中EGFR,以及表皮生长因子(EGF)和吉非替尼对Erβ表达的影响,同时还检测了雌二醇对EGFR的磷酸化作用.结果:联合吉非替尼和三苯氧胺增强对EGFR,Erβ阳性的A549,H1650细胞的抑制作用,促进凋亡,但对EGFR,Erβ阴性的H520细胞无明显改变.雌二醇可促进细胞EGFR磷酸化,却也抑制其表达,而三苯氧胺则上调EGFR的表达.同时,EGF及吉非替尼对Erβ的表达也有类似的相反的调控作用.结论:联合吉非替尼和三苯氧胺能够增强对EGFR,Erβ均阳性的肺癌细胞的抗增殖作用,这可能与细胞内EGFR信号转导途径和雌激素信号通路的交叉有关.因此,结合针对EGFR的分子靶向治疗与激素治疗可能为肺癌的治疗提供新的途径.     

雌激素对人涎腺黏液表皮样癌血管内皮生长因子表达的影响

目的: 研究雌激素对人涎腺黏液表皮样癌血管生成的影响. 方法: 应用免疫组化、裸鼠肺移植瘤试验的方法探讨17β-雌二醇对人涎腺黏液表皮样癌高转移细胞系Mc3细胞的血管内皮生长因子的表达和肺移植成瘤能力影响;并应用免疫组化的方法对Mc3细胞的雌激素受体进行检测. 结果: 在体外,0.1 μmol/L 17β-雌二醇可促进Mc3细胞血管内皮生长因子的表达. 在裸鼠体内实验中给药组(5.2 μg/d)及对照组肺表面的转移结节数分别为(119±70)个和(14±12)个;对肺转移瘤组织切片免疫组化结果表明给药组转移瘤组织中血管内皮生长因子的表达明显高于对照组. 同时,在Mc3细胞和瘤体组织中均发现有雌激素受体的表达. 结论: 生理浓度的雌激素可促进人涎腺黏液表皮样癌血管内皮生长因子的表达.     

乳腺癌雌激素受体阳性细胞对雌激素受体阴性细胞增殖的影响

目的探讨雌激素受体(ER)表达不同的乳腺癌细胞间相互作用。方法 PCR法检测MDA-MB-231及MCF-7细胞中ER的基因表达。CCK-8法检测17β-雌二醇对MCF-7和MDA-MB-231细胞生长增殖的影响。将MDA-MB-231(雌激素受体阴性细胞)用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)法标记荧光信号,将其分别与MCF-7细胞(雌激素受体阳性细胞)和未标记荧光的MDA-MB-231细胞(雌激素受体阴性细胞)用Transwell侵袭小室分层共培养,加入或不加入雌二醇,检测MDA-MB-231细胞的增殖差异。结果 MCF-7细胞表达雌激素受体α(ESR1,ERα)和雌激素受体β(ESR2,ERβ),而MDA-MB-231细胞均不表达。17β-雌二醇浓度为10-11 mol/L时促MCF-7增殖作用最大,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),对MDA-MB-231细胞则无明显作用(P>0.05)。在加入雌二醇培养的MCF-7细胞与MDA-MB-231细胞小室分层共培养组,经流式细胞仪检测发现MDA-MB-231平均荧光强度较对照组显著降低。结论雌激素受体阳性细胞在雌激素作用下,可促进雌激素受体阴性细胞的增殖。     

人参皂苷抑制表皮生长因子诱导的肾近端小管细胞增殖的体外研究

肾近端小管细胞(PTC_s)增殖是肾病的常见特征,而表皮生长因子(EGF)是 PTC_s的强有丝分裂原。作者通过[~3H]-胸苷掺入法和原癌基因 c-fos 或 c-jun 表达研究了皂苷对 EGF 诱导的 PTC_s 增殖的作用,并以17β-雌二醇作对照。     

不同浓度雌激素对卵巢癌细胞VEGF-C和TGF-β_1表达的影响

目的观察在不同浓度的雌激素作用下,卵巢癌细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）、血管内皮细胞生长因子C（VEGF-C）表达的变化。方法在体外不同浓度（10-11、10-10、10-9、10-8mol/L 17β-E2）的17-β雌二醇（E2）作用下,用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及ELISA方法,检测卵巢癌SKOV3细胞株VEGF-CmRNA的表达及TGF-β1分泌量水平的变化。结果 SKOV3细胞在E2的作用下,TGF-β1的分泌量呈剂量浓度反应,随着10-11~10-8mol/L17-βE2浓度的增加,TGF-β1的分泌量明显增加;随着雌激素浓度的增加,SKOV3细胞VEGF-C mRNA的PCR产物表达也呈递增趋势。10-11、10-10、10-9和10-8mol/L 17β-E2组与对照组比较,VEGF-C,TGF-β1的表达有显著性差异（P〈0.05）。结论雌激素可上调SKOV3细胞的VEGF-C mRNA表达、TGF-β1分泌水平,两者均呈浓度递增趋势。     

17β-雌二醇对新生牛血清诱导的血管平滑肌细胞增殖反应的影响及其机制

目的：探讨雌甾-1,3,5（10）-三烯-3,17β-二醇（17β-雌二醇）对新生牛血清诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖反应的影响及其机制。方法：用新生牛血清刺激培养的VSMCs增殖,MTT法检测17β-雌二醇对新生牛血清诱导的VSMCs增殖的影响,并用Western blot检测caveolin-1蛋白,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及NO在此过程中的变化。结果：与对照组比,新生牛血清可促进VSMCs增殖（P〈0.05）,17β-雌二醇作用24 h后能明显抑制上述作用（P〈0.05）;17β-雌二醇预处理可抑制新生牛血清诱导的VSMCs中caveolin-1,iNOS蛋白表达下降及NO释放（P〈0.05）;17β-雌二醇受体阻断剂1-{4-[2-（n,n-二甲氨基）乙氧基]苯}-1,2-二苯-1-丁烯（他莫昔芬）预处理可部分逆转17β-雌二醇的抑制作用（P〈0.05）。结论：17β-雌二醇通过其受体可抑制新生牛血清诱导的VSMCs增殖,此过程与上调caveolin-1蛋白表达,激活iNOS,增加NO释放有关。     

幽门螺杆菌对蒙古沙土鼠胃上皮细胞增殖的影响

目的：在幽门螺杆菌（H.pylori)长期感染蒙古沙土鼠腺胃模型基础上，探讨H.pylori感染诱致胃癌发生的可能机制。方法：采用H.pylori国际标准 株NCC11637灌喂蒙古沙土鼠，建立H.pylori长期感染动物模型，用免疫组化及原位杂交方法检测H.pylori感染致胃上皮细胞增殖的改变。结果：成功建立了H.pylori长期感染蒙古沙土鼠腺胃模型，其胃粘膜的组织学变化显示，H.pylori感染可致正常胃粘膜发生慢性胃炎－胃萎缩－胃上皮肠化生－胃上皮异型增生的发展过程。H.pylori感染能引起胃窦上皮细胞增殖增加（P＜0．05），随着H.pylori感染时间的延长，表皮在子（epidermal growth factor,EGF)mRNA及表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA的阳性信号表达呈逐渐增加的趋势（P＜0．05），结论：H.pylori定植致胃窦上皮细胞增殖的异常，对正常胃窦粘膜向不典型增生进展的过程起重要作用；EGF及EGFR在mRNA水平的异常表达可能是H.pylori定植致胃窦上皮细胞增殖异常的重要原因。     

PCNA与EGF在人胎儿晶状体上皮表达的研究

目的：观察增殖细胞核抗原（PCNA）及表皮生长因子（EGF）在人胎儿晶关於 本上皮细胞的表达。方法：用SP免疫细胞化学法对48例人胎狼不同胎龄晶状体上皮细胞进行PCNA，EGF免疫细胞化学染色。结果：PCNA，EGF在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达；免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色；EGF阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的斑块状；经相关分析；EGF与PCNA呈正相关。结论：PCNA，EGF在人胎儿不同胎龄胎晶状体上皮细胞均有表达。且EGF促进晶状体上皮细胞的增殖。     

表皮生长因子对小鼠肝外胆管上皮细胞原代培养的影响

目的 探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠肝外胆管上皮细胞(murine extra-hepatic bile duct epithelial cells,MEBECs)体外培养的影响.方法 先采用胰酶和Dnase Ⅰ,再用Ⅳ型胶原酶消化、分离小鼠肝外胆管组织为单细胞悬液进行接种,接种的细胞分别用含或不含10 ng/mL EGF的DMEM/HamsF12(1:1)培养基进行原代培养.倒置显微镜下观察细胞生长的形态变化,MTT法检测EGF对MEBECs增殖的影响.结果 添加EGF组较未添加EGF组MEBECs体外存活时间明显延长(21 d±1.3 d vs(12.1 d±2.1 d)(P<0.001),细胞活力优于未添加组(P<0.001).结论 培养基中添加EGF可以明显地促进小鼠肝外胆管上皮细胞的增殖,延长细胞体外培养的存活时间.     

多肽生长因子在男性生殖中的研究

多肽生长因子是由多种细胞通过自分泌、旁分泌产生的一类小分子物质。多肽生长因子的分子量一般小于80kD,多以摩尔水平浓度通过细胞表面特异性受体传递细胞间信息,对细胞的生长、分化、增殖,间质增生及血管形成起调控作用。细胞因子之间彼此诱导,相互调节,与男性生殖系统关系密切,现就多肽生长因子在男性生殖中的研究进行综述。1表皮生长因子表皮生长因子家族中,目前研究较多的是表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）。EGF最初作为一种有效的促细胞分裂剂从成年雄性大鼠的颌下腺提取物中分离出来。人类EGF最初从尿液中提取,含53个氨基酸,现已证实EGF存在于包括前列腺液及精液在内的几种体液中。人精液中EGF水平与精子参数没有相关性。     

TGF-β和EGF对人分泌中期子宫内膜间质细胞MMP-9的影响

目的：观察转化生长因子-β（TGF-β）和表皮生长因子（EGF）对人分泌中期子宫内膜间质细胞（ESC）基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响。方法：体外培养ESC,分离、纯化后的ESC以1×105个/孔接种于96孔板,加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液。24h后换无血清的DMEM/F12培养液,每孔200μL,分别加入TGF-β和EGF,终浓度均为2.5、5.0和10.0ng/mL,培养48h后通过ELISA法测培养液中MMP-9的含量。结果：与对照组比较,实验组随着TGF-β浓度的增加,ESC分泌的MMP-9明显下降（P〈0.05,P〈0.01）;而随着EGF浓度的增加,ESC分泌的MMP-9则显著上升（P〈0.05,P〈0.01）,且二者的变化具有剂量依赖性。结论：TGF-β和EGF可能通过调节人子宫内膜间质细胞MMP-9,而参与胚胎植入过程。     

鼻内糖皮质激素对鼻息肉组织中EGF和EGFR表达的影响

目的：探讨鼻内应用糖皮质激素对鼻息肉组织中表皮细胞生长因子（EGF）和表皮细胞生长因子受体（EGFR）表达的影响。方法鼻息肉患者42例,随机分为激素组（布地奈德鼻喷雾剂128μg/次,2次/d,疗程12周）和对照组（生理盐水喷鼻,2次/d,疗程12周）,每组21例,采用鼻息肉内镜评分评估鼻息肉治疗效果,同时采用免疫组织化学染色方法检测两组鼻息肉组织中EGF和EGFR的表达情况。结果与对照组比较,激素组鼻息肉内镜评分下降（P〈0.05）,黏膜上皮细胞EGF [（0.15±0.04） vs （0.24±0.06）]的表达减少（P〈0.05）,EGFR的表达无差异无统计学意义（P〉0.05）。结论糖皮质激素能抑制鼻息肉黏膜上皮细胞EGF的表达,对EGFR的表达无影响,这可能是其治疗鼻息肉的作用机制之一。     

康复新液对大鼠实验性结肠炎 EGF，HGF 表达的影响

目的：探讨康复新液对葡聚糖硫酸钠（ DSS）诱导的大鼠溃疡性结肠炎的疗效及其对表皮生长因子（ EGF）、肝细胞生长因子（ HGF）表达的影响。方法将40只健康雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照组、模型对照组、柳氮磺胺吡啶（ SASP）治疗组和康复新液治疗组。观察大鼠的腹泻、便血等症状,用免疫组化法检测EGF,HGF表达。结果与模型对照组相比,SASP治疗组和康复新液治疗组大鼠的症状和结肠黏膜组织学损伤显著改善（P＜0．05）。与模型对照组和SASP治疗组相比,康复新液治疗组EGF,HGF表达增高（P＜0．05）。结论康复新液可以改善DSS诱导的急性大鼠结肠炎腹泻、便血等症状,减轻结肠炎性损伤,康复新液促进EGF及HGF表达可能是其作用机制之一。     

转化生长因子-β1和神经生长因子对人牙周膜细胞增殖的生物学作用

目的：研究转化生长因子-β1（TGF-β1）与神经生长因子（NGF）以及两者联用时对人牙周膜细胞（PDLC）增殖的生物学作用,为牙周损伤后修复提供理论依据。方法：采用方差分析的方法对不同浓度的TGF-β1与NGF以及两者联用时的生物学作用进行分析。结果：TGF-β1、NGF单独作用后,PDLC较对照组增殖较。（P〈0．05）,而两者联合作用后的增殖作用较各自单独应用的作用更显著。结论：TGF-β1、NGF两者以最佳效应浓度联合应用具有协同作用。     

EGF调控HepG-2细胞增殖和迁移的分子机制

目的:探讨表皮生长因子(EGF)调控HepG-2细胞增殖和迁移的分子机制。方法:采用MTT法检测EGF和MAPK信号通路抑制剂PD98059对HepG-2细胞增殖能力的影响,Transwell小室检测其对HepG-2细胞体外迁移能力的影响,RT-PCR检测细胞中survivin mRNA的表达水平。结果:EGF能够促进肝癌细胞的增殖,增强其体外迁移能力,而MAPK信号通路抑制剂PD98059对HepG-2细胞的增殖和迁移能力则具有抑制作用;RT-PCR显示,EGF能增加HepG-2细胞中survivin mRNA的表达,而抑制剂PD98059能逆转EGF的作用,使survivin mRNA的表达下降。结论:EGF能够促进HepG-2细胞的增殖和体外迁移能力,其发挥作用的机制可能是通过MAPK信号通路上调survivin mRNA的表达。     

聚乙二醇400对体外培养人角膜上皮细胞生长的影响

目的研究聚乙二醇400对体外培养人角膜上皮细胞（CECs）生物学特性的影响及其分子机制。方法制备含0．1％聚乙二醇400的DMEM／F12培养基。采用含0．1％聚乙二醇400培养基培养人CECs,倒置显微镜下观察并照相记录细胞培养24、48、72h时的形态;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测角膜上皮细胞生长曲线;流式细胞术检测角膜上皮细胞细胞周期;RT-PCR检测角膜上皮细胞中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、表皮生长因子（EGF）基因表达水平。结果0．1％聚乙二醇400对角膜上皮细胞的细胞形态无影响,实验组及对照组细胞形态均呈典型的多角形。MTT及流式细胞术检测结果显示,0．1％聚乙二醇400对体外培养人CECs的生长有促进作用（均P〈0．01）。0．1％聚乙二醇400培养人CECs后bFGF和EGF的基因表达水平比对照组高（P〈0．05或〈0．01）。结论0．1％聚乙二醇400可能通过缩短人CECs的细胞周期和上调人CECsbFGF、EGF基因的表达,从而加速CECs增殖。     

雌激素受体β对牙周膜成纤维细胞骨钙素含量的影响

目的研究雌激素受体β（ERβ）对人牙周膜成纤维（HPLF）细胞骨钙素（OCN）含量的影响。方法采用基因干涉方法抑制了HPLF细胞中ERβ基因的表达,用雌激素干预ERβ抑制的和未抑制的HPLF细胞,研究细胞骨钙素含量的变化情况。结果测序鉴定重组质粒后,蛋白质印迹法及RT-PCR结果显示ERβsiRNA载体可特异地抑制HPLF细胞中ERβ的表达。经雌激素干预后,HPLF细胞OCN含量明显高于对照组（P〈0.01）,但ERβsiRNA载体稳定转染的HPLF细胞OCN含量与对照组相比无统计学意义。结论雌激素可能通过ERβ亚基促进人牙周膜成纤维细胞的骨钙素含量增加。     

表皮生长因子诱导人胰腺癌细胞SW1990中人宫颈癌基因的表达及其机制

目的研究表皮生长因子（EGF）诱导人胰腺癌细胞SW1990中人宫颈癌基因（HCCR）蛋白表达的分子信号通路机制。方法 100 ng/ml EGF作用SW1990细胞不同时间后,用Western blot检测其磷酸化AKT和HCCR蛋白表达情况;用LY294002（PI3K/AKT抑制剂）预处理SW1990细胞后用EGF作用SW1990细胞,观察其HCCR蛋白表达情况。结果 Western blot结果显示,与对照组相比,细胞内磷酸化AKT表达水平在4h时明显升高（P〈0.05）,而HCCR表达水平则随着EGF处理时间增加而升高（P〈0.05）;LY294002（PI3K/AKT抑制剂）可阻断EGF诱导的HCCR蛋白表达。结论 EGF通过PI3K/AKT通路诱导人胰腺癌细胞SW1990中HCCR蛋白的表达,这一通路可被PI3K/AKT抑制剂阻断。     

转化生长因子-β1与表皮生长因子在成人增生性瘢痕中的表达及意义

目的:初步探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)在成人增生性瘢痕发生中可能的作用,为临床防治提供一定的依据。方法:通过SP法定性和ELISA法定量检测TGF-β1和EGF在成人增生性瘢痕和成人正常皮肤中的表达情况。结果:TGF-β1、EGF在成人增生性瘢痕中呈高表达,二者在成人增生性瘢痕中表达水平呈正相关。结论:TGF-β1、EGF在成人增生性瘢痕中均呈高表达,TGF-β1和EGF在成人增生性瘢痕中的表达水平呈正相关,这为研究临床预防、治疗皮肤增生性瘢痕提供新思路。