DDC递增法诱导大鼠胰腺纤维化动物模型的研究

目的建立DDC剂量递增腹腔内注射诱发大鼠胰腺纤维化动物模型方法,并与常规恒量DDC腹腔内注射方法比较。方法70只Wistar大鼠随机分为4组:生理盐水注射组、低剂量DDC恒量注射组(600 mg/kg/次。每周2次,共8次)、高剂量DDC恒量注射组(1 000 mg/kg/次,每周2次,共8 次)及DDC剂量递增注射组(首次400 mg/kg/次,以10%浓度连续递增,每周2次,共8次)。每周于注射后2d h、48 h、1周、2周、3周、4周6个时间点分别随机处死3只大鼠,并对胰、肝、肾组织进行病理学诊断与胶原纤维测定。实验中观察动物并发症(鼻出血,尿失禁,震颤)的发生率及死亡率。结果DDC递增组大鼠并发症较少,但成模时间及纤维化程度与恒量注射组无显著性差异,纤维化程度增加过程较为渐进,提示更为接近胰腺纤维化的发展过程。结论DDC注射递增法可以建立大鼠胰腺纤维化动物模型, 此模型较常规恒定DDC腹腔注射法更为优越。     

苦参碱抗大鼠胰腺纤维化作用及机制研究

目的 探讨苦参碱对胰腺纤维化的干预作用,为其临床应用提供实验依据.方法 48只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组,每组16只.以腹腔注射DDC(750 mg/kg体重)每周2次,共6周建立胰腺纤维化动物模型,治疗组于DDC注射后2周起每日腹腔注射苦参碱(100 mg/kg体重),6周后处死动物.采用放射免疫法检测血清透明质酸.胰腺常规病理检查、评分,Masson染色判断胶原纤维量.免疫组化和RT-PCR法检测胰腺组织生长因子β1(TGF-β1)及Smad3、Smad7的蛋白和mRNA表达.结果 治疗组血清透明质酸浓度、病理积分及胶原纤维的表达量分别为(105.85 ± 25.69)ng/ml、3.16 ± 1.15及(19.16 ± 4.27)%,TGF-β1和Smad3蛋白表达分别为(23.16 ± 7.68)%和(18.65 ± 9.82)%,TGF-β1 mRNA和Smad3 mRNA表达分别为0.33 ± 0.10和0.23 ± 0.03,均较模型组明显降低(P ＜ 0.01).而Smad7的表达与模型组无显著差异.结论 大鼠腹腔注射DDC可建立胰腺纤维化动物模型.苦参碱具有显著的抗胰腺纤维化的作用,其机制可能与抑制TGF-β1的产生、抑制TGF-β/Smads信号转导通路活性有关.     

苦参碱抗大鼠胰腺纤维化作用及机制研究

目的探讨苦参碱对胰腺纤维化的干预作用,为其临床应用提供实验依据。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组,每组16只。以腹腔注射DDC(750mg/kg体重)每周2次,共6周建立胰腺纤维化动物模型,治疗组于DDC注射后2周起每日腹腔注射苦参碱(100mg/kg体重),6周后处死动物。采用放射免疫法检测血清透明质酸。胰腺常规病理检查、评分,Masson染色判断胶原纤维量。免疫组化和RT-PCR法检测胰腺组织生长因子β1(TGF-β1)及Smad3、Smad7的蛋白和mRNA表达。结果治疗组血清透明质酸浓度、病理积分及胶原纤维的表达量分别为(105.85±25.69)ng/ml、3.16±1.15及(19.16±4.27)%,TGF-β1和Smad3蛋白表达分别为(23.16±7.68)%和(18.65±9.82)%,TGF-β1mRNA和Smad3mRNA表达分别为0.33±0.10和0.23±0.03,均较模型组明显降低(P<0.01)。而Smad7的表达与模型组无显著差异。结论大鼠腹腔注射DDC可建立胰腺纤维化动物模型。苦参碱具有显著的抗胰腺纤维化的作用,其机制可能与抑制TGF-β1的产生、抑制TGF-β/Smads信号转导通路活性有关。     

干扰素α-2b对胰腺纤维化大鼠Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响

目的 观察干扰素α-2b对大鼠实验性胰腺纤维化Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白合成的影响.方法 采用每周2次腹腔内注射二乙基二硫代氨基甲酸盐(diethyldithio carbamate,DDC)1 000 mg/kg体重诱导健康雄性Wistar大鼠胰腺纤维化.干扰素α-2b治疗组(n=10)在造模日起每天1次皮下注射干扰素α-2b 100 000 U,连续6周.对照组(n=10)注射等容积生理盐水.6周末处死大鼠,取新鲜胰腺组织,10%甲醛溶液固定,常规石蜡包埋切片,观察病理改变.免疫组织化学染色检测Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白.结果 干扰素α-2b治疗组腺泡细胞炎症反应和纤维化程度较对照组减轻;干扰素α-2b治疗组Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白量分别为88.14±42.58和2.37±1.56,较对照组的59.95±25.50和1.50±0.31显著减少(P＜0.05).结论 干扰素α-2b可能通过减少胰腺组织内Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白的合成起到治疗胰腺纤维化的作用.     

白花丹醌对肝纤维化大鼠磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号转导通路的影响

目的 研究白花丹醌对四氯化碳所致肝纤维化大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)信号转导通路的影响.方法 40只雄性SD大鼠分成对照组、模型组、2mg/kg白花丹醌处理组和3mg/kg白花丹醌处理组,每组10只.对照组予0.9％氯化钠溶液2 mL/kg腹腔注射,其余3组均予60％四氯化碳花生油溶液2 mL/kg腹腔注射,均每周3次,共6周.造模后第3周开始,白花丹醌处理组分别给予2 mg/kg和3 mg/kg白花丹醌花生油剂腹腔注射,每周2次,共4周.常规检测大鼠血清ALT、AST、Alb,放射免疫法测定HA和LN,Western印迹检测肝组织中PI3K、Akt和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达量,免疫组织化学法检测p-Akt表达.各组间均数比较采用单因素方差分析.结果 6周后成功建立肝纤维化大鼠模型.模型组大鼠ALT、AST、HA和LN均高于对照组,2mg/kg白花丹醌处理组和3 mg/kg白花丹醌处理组中的ALT、AST、HA和LN水平较模型组下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05).各组PI3K、Akt蛋白表达差异均无统计学意义(均P＞0.05);p-Akt蛋白表达主要集中在肝细胞核;对照组、模型组、2 mg/kg白花丹醌处理组和3mg/kg白花丹醌处理组大鼠p-Akt蛋白分别为0.0821±0.0003、0.7374±0.0037、0.3679±0.0332和0.1327±0.0561,模型组表达高于对照组(t=851.302,P＜0.05),白花丹醌处理后下降(t值分别=71.858和28.363,均P＜0.05).结论 白花丹醌具有抗肝纤维化作用.白花丹醌可下调肝纤维化过程中p-Akt的表达,这可能是其抗肝纤维化的机制之一.     

转化生长因子β1Ⅱ型受体在大鼠慢性胰腺炎中的表达及氧化苦参碱对其的影响

目的:探讨转化生长因子β1Ⅱ型受体(TβRⅡ)在慢性胰腺炎(CP)纤维化病理进程中的作用,研究氧化苦参碱(OM)对胰腺纤维化的作用机制.方法:40只Wistar♂大鼠随机分为4组,即阴性对照组(NC组,n=10),CP模型组(CP组,n=10),OM干预组(OP组,n=10)和OM治疗组(OT组,n=10).NC组隔日给予腹腔注射生理盐水300mg/kg;其他每组均隔日腹腔注射二乙基硫代氨基甲酸盐(DDC)700mg/kg,30d停止.另外OP组于注射DDC同日开始每日腹腔注射OM100mg/kg,OT组于注射DDC1wk后开始每日腹腔注射OM100mg/kg,分别于注射DDC20d、40d后处死动物.胰腺组织行HE染色和Masson胶原染色并进行病理学评分,Western blot检测胰腺组织TβRⅡ的表达.结果:Masson染色测定结果显示,在20d、40d时CP组胶原纤维含量显著高于其余各组(20d:22.54%±4.45%vs13.16%±1.84%,19.58%±2.78%,2.45±0.24%;40d:35.14%±3.27%vs25.14%±3.67%,28.68%±2.55%,3.0%±0.3...     

蛙皮素致大鼠胰腺慢性纤维化模型的建立

目的胰腺纤维化是慢性胰腺炎的主要病理特征,由于缺乏重复性好的研究模型,胰腺纤维化的发生、发展过程尚不清楚.本研究采用CCK类似物蛙皮素反复诱致大鼠胰腺炎,旨在探讨胰腺纤维化发生的分子机制.方法 SD大鼠腹腔注射蛙皮素50 μg/kg,每周3次,分别于第2周、第4周和第8周处死大鼠,采用HE染色和VG胶色观察不同时期胰腺病理组织学变化和结缔组织增生情况.同时,采用RT-PCR法检测胰腺Colα1(Ⅰ)mRNA的表达水平.结果造模第2周和第4周,胰腺间质中可见明显的炎性细胞浸润;第8周,"管状复合体"形成,间质纤维结缔组织大量增生并向小叶内伸展,胶原纤维交织成网状;而且随着造模时间的延长,Colα1(Ⅰ)基因的表达逐渐上调.结论蛙皮素多次大剂量腹腔注射致反复急性胰腺炎发作可以诱导大鼠产生胰腺纤维化,Colα1(Ⅰ)mRNA水平随造模时间延长逐渐升高,其机制可能与细胞信号分子介导的胰腺星状细胞活化而发生表型转化有关.     

干扰素α-2b对胰腺纤维化大鼠Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响

目的观察干扰素α-2b对大鼠实验性胰腺纤维化Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白合成的影响。方法采用每周2次腹腔内注射二乙基二硫代氨基甲酸盐(diethyldithio carbamate,DDC)1000mg/kg体重诱导健康雄性Wistar大鼠胰腺纤维化。干扰素α-2b治疗组(n=10)在造模日起每天1次皮下注射干扰素α-2b100000U,连续6周。对照组(n=10)注射等容积生理盐水。6周末处死大鼠,取新鲜胰腺组织,10%甲醛溶液固定,常规石蜡包埋切片,观察病理改变。免疫组织化学染色检测Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白。结果干扰素α-2b治疗组腺泡细胞炎症反应和纤维化程度较对照组减轻;干扰素α-2b治疗组Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白量分别为88.14±42.58和2.37±1.56,较对照组的59.95±25.50和1.50±0.31显著减少(P<0.05)。结论干扰素α-2b可能通过减少胰腺组织内Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白的合成起到治疗胰腺纤维化的作用。     

脂质过氧化在胰腺纤维化形成中的作用

目的 研究脂质过氧化对胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells, PSC)活化的影响及其在胰腺纤维化形成中的作用.方法 实验大鼠每周2次腹腔内注射二乙基二硫代氨基甲酸盐(diethyldithiocarbamate, DDC),共10周建立胰腺纤维化模型.分别于注射后第2,4,6,8,10周处死大鼠,检测胰腺组织中丙二醛(MDA)含量,各时间点胰腺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测α1-Ⅰ型胶原(ColⅠα1)、TGF-β1 mRNA水平.结果 注射DDC后,胰腺组织内MDA含量逐步升高,8周时高达(6.21 ± 0.70)nmol/mg prot(P ＜ 0.01).4周时可见明显的细胞外基质沉积和纤维化形成,8周时小叶及小叶内广泛纤维化,大量腺体萎缩,形成瘢疤组织.α-SMA、TGF-β1的阳性表达在2周时已出现,4周时明显增加,且阳性细胞多位于胰腺小叶间及腺泡旁纤维化区域.胰腺组织ColⅠα1 mRNA在造模2周时少量表达,4周表达增加,8周后维持在较高水平;对照组TGF-β1 mRNA表达水平较低,TGF-β1 mRNA在造模4周时表达明显增强,与对照组相比有显著性差异(P ＜ 0.05),6周后表达增加不明显.结论 随着造模时间的延长,胰腺组织MDA含量的增加与胶原纤维形成、TGF-β1表达及活化PSC的增加相一致,提示脂质过氧化产物通过激活PSC及刺激TGF-β1的分泌,增加胰腺组织中胶原的沉积,促进胰腺纤维化的形成.     

蛙皮素致大鼠胰腺慢性纤维化模型的建立

目的胰腺纤维化是慢性胰腺炎的主要病理特征,由于缺乏重复性好的研究模型,胰腺纤维化的发生、发展过程尚不清楚。本研究采用CCK类似物蛙皮素反复诱致大鼠胰腺炎,旨在探讨胰腺纤维化发生的分子机制。方法SD大鼠腹腔注射蛙皮素50μg/kg,每周3次,分别于第2周、第4周和第8 周处死大鼠,采用HE染色和VG胶色观察不同时期胰腺病理组织学变化和结缔组织增生情况。同时,采用RT-PCR法检测胰腺Colα1(Ⅰ)mRNA的表达水平。结果造模第2周和第4周,胰腺间质中可见明显的炎性细胞浸润;第8周,“管状复合体”形成,间质纤维结缔组织大量增生并向小叶内伸展,胶原纤维交织成网状;而且随着造模时间的延长,Colα1(Ⅰ)基因的表达逐渐上调。结论蛙皮素多次大剂量腹腔注射致反复急性胰腺炎发作可以诱导大鼠产生胰腺纤维化,Colα1(Ⅰ)mRNA水平随造模时间延长逐渐升高,其机制可能与细胞信号分子介导的胰腺星状细胞活化而发生表型转化有关。