子宫肌瘤致病相关基因的筛选与克隆

【目的】研究子宫肌瘤与正常子宫肌组织中的基因表达差异，筛选及克隆子宫肌瘤的致病相关基因。【方法】应用荧光标记的mRNA差异显示技术，比较11例子宫肌瘤及其正常子宫肌组织基因表达的差异．对获得差异片段进行克隆、测序及同源性分析，并对其中5条差异片段在子宫肌瘤及正常子宫肌组织中的表达情况进行RT—PCR分析。【结果】差异片段NO．3，5，11，12在子宫肌瘤正常及异常组织中的表达均存在差异。其中NO.3差异片段在8例子宫肌瘤组织中有表达，而相应的正常组织中仅2例有表达。NO．5，11，12差异片段在子宫肌瘤中的表达水平高于正常子宫肌组织中的表达水平。【结论】在子宫肌瘤的发生和发展过程中存在多个基因的表达异常，其中ulap8基因有可能在子宫肌瘤组织中呈特异性的表达，ulapl4，ulap25，ulap26基因在子宫肌瘤组织中存在表达差异，推测这些基因有可能与子宫肌瘤的发病有关。     

新的癫痫相关基因的筛选及部分cDNA序列的分离鉴定

用ｍＲＮＡ差异显示技术从大鼠癫痫状态的海马分离到２０个ｃＤＮＡ差异片段，对４个ｃＤＮＡ片段进行序列分析并在基因库中进行相同性比较，发现ＥＲＧ８，ＥＲＧ１１，ＥＲＧ１２无相同性序列，ＥＲＧ１４与鼠的微管相关蛋白基因有６４％￣６９％的相同性。由于这些基因的差异表达是致痫剂马桑内酯和抗痫剂ＭＫ－８０１所致，所以，ＥＲＧ８可能是新的候选癫痫基因，ＥＲＧ１１和ＥＲＧ１２可能是新的候选抗痫基因；由于微管相关蛋     

mRNA差异显示筛选卵巢癌相关基因

目的：利用ｍＲＮＡ差异显示技术研究正常卵巢上皮和卵巢上皮癌之间的基因表达差异状况,筛选和克隆卵巢上皮癌相关基因。方法：通过ＤＤ－ＰＣＲ分析正常卵巢上皮和卵巢上皮癌总ＲＮＡ将差异片段分离并显示出来,将其回收,利用基因克隆技术将其筛选和克隆出来作为探针进行斑点杂交鉴定、ＤＮＡ序列测定、通过国际互联网络检索ＧｅｎＢａｎｋ进行同源性分析。结果：共筛选克隆鉴定６个差异显示片段。其中４个为未知基因片段,已收录     

新的癫痫相关基因的筛选及部分cDNA序列的分离鉴定

用mRNA差异显示技术从大鼠癫痫状态的海马分离了20个cDNA差异片段，对4个cD-NA片段进行序列分析并在基因库中进行相同性比较，发现ERG8、ERG11、ERG12无相同性序列，ERG14与鼠的微管相关蛋白基因有64％～69％的相同性。由于这些基因的差异表达是致痫剂马桑内酯和抗痫剂MK－801所致，所以，ERG8可能是新的候选癫痫基因，ERG11和ERG12可能是新的候选抗痫基因；由于微管相关蛋白高表达与惊厥条件下海马苔藓纤维侧枝出芽关系密切，因此，ERG14在癫痫早期高表达可能预示着新的轴突生长和突触形成。     

肾小球硬化相关基因的分离克隆及功能研究

后基因组时代的功能基因组学研究内容丰富而繁杂，基因功能信息的获取将成为基因研究的重点．采用基因差异表达分析策略分离克隆的。肾小球硬化相关基因及其功能研究的结果表明，通过基因的差异表达获取基因功能信息，进而进行基因相关功能研究是克隆和鉴定疾病相关基因的的重要手段．     

荧光差异显示PCR克隆大鼠脑缺血相关基因KIAA0280

[目的]研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血组织与非缺血组织中基因表达的差异，克隆出与脑缺血相关的基因。[方法]应用荧光差异显示PCR(FDD PCR)从同一例大鼠大脑皮层缺血组织和非缺血组织中筛选出有表达差异的基因片段，经反向Northern blot杂交，将杂交阳性的片段且经RT—PCR反复验证，选取差异明显的片段进行克隆测序：经生物信息学分析处理，选取同源性低的EST片段R6，利用cDNA5′端快速扩增PCR(5′RACE法)进行基因全长的克隆。[结果]利用5′RACE法成功地克隆EST片段R6至编码区，扩增并获取全长4821bp及完整的可读框(ORF)，RT—PCR及Northern blot印迹结果证实了克隆的结果，同源性分析发现该基因ORF与人大脑中已知的KIAA0280基因高度同源，同源性96％，编码166个氯基酸，为结构及功能未明确蛋白质，该基因定位于大鼠第11号染色体长臂(11q．13)。[结论]应用荧光差异显示PCR成功地自大鼠体内克隆到与人KAA0280相似的基因，其在大鼠急性局灶性脑缺血中明显上调，该蛋白质结构及功能均未见报道及研究，其显著地差异表达提示其在脑缺血病理过程中具有重要作用。     

宫颈癌相关新基因的筛选、克隆及鉴定

目的:筛选、克隆及鉴定宫颈癌相关基因———BLCAP。方法:利用基因芯片技术对1例原发性宫颈癌患者的癌组织及其癌旁正常组织进行分析;将在宫颈癌组织中表达显著降低的BLCAP基因克隆到pET-28(a)表达载体上,以构建原核表达重组质粒pET-28(a)-BLCAP,通过PCR、限制性内切酶酶切和DNA测序等技术鉴定阳性重组子。结果:通过基因芯片分析发现存在表达差异的原癌和抑癌基因共11条,其中表达降低最明显的是BLCAP基因。构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,即BLCAP基因共264 bp,基因序列无改变,基因插入后阅读框(ORF)正确。结论:筛选出了在宫颈癌中表达显著降低的BLCAP基因并成功构建了pET-28(a)-BLCAP原核表达质粒,为表达BLCAP目的蛋白及研究该蛋白的性质奠定了基础。     

应用mRNA差异显示技术进行肝癌相关基因的筛选

目的采用mRNA差异显示技术寻找肝癌及非肝癌组织的差异表达基因，筛选肝癌相关基因，为进一步研究创造条件。方法提取手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA，逆转录获得eDNA片段，以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因。对所获得的差异表达基因进行序列分析，并通过CenBank／BLAST数据库进行序列的同源性比较，并以Northern杂交方法对有意义片段予以来源确认。结果自720余条扩增条带中选出28条差异条带，其中“上调”者16条，“下调”者12条。对其中5条差异最为明显的片段进一步分析，其中2条为可能的新基因片段，其中一条经Northern印迹杂交证实确来自源标本组织，且在肝癌组织中有明显高表达趋势。结论mRNA差异显示技术是一种快速、灵敏、高效的差异表达基因的克隆技术，已采用这种技术获得了1条可能的肝癌相关新基因片段，有必要进一步研究。     

用mRNA差异显示技术初步筛选食管癌相关基因

用ｍＲＮＡ差异显示技术初步筛选食管癌相关基因王尧河１）张云汉１）高冬玲１）付淑莉１）王宏２）夏贞彪２）李春海２）罗庆良２）１）河南医科大学第一附属医院病理科，河南省肿瘤病理学重点实验室郑州４５００５２２）军事医学科学院北京１００８５０关键词食管肿瘤...     

人食管癌相关基因cDNA片段的克隆、筛选与初步鉴定

目的：筛选和鉴定人原发性食管癌组织的相关基因,揭示食管癌的癌变机理。方法：用高效、灵敏的荧光mRNA差异显示技术,以食管癌及相应的正常食管粘膜组织为对照,通过对其基因表达的比较,找出差异条带,利用Reverse Northern Dot Blot、DNA序列分析和Northern Blot,并结合mRNA 原位杂交技术对被筛片段进行鉴定。结果：①在实验中分离、鉴定了74条差异片段,其中包括正常组织表达而癌组织中不表达的差异片段54个,癌组织中表达而正常组织不表达的差异片段20个。②其中1个片段C57（337bp）在GenBank数据库中没有发现同源的已知基因或片段,推测其可能为食管癌相关基因。③经Northern Blot检测C57在癌组织中有表达信号。④原位杂交技术检测C57在癌组织中具有较高的阳性表达率（74％）。结论：食管癌组织中C57可能是新的食管部相关的候选癌基因,它与食管癌的发生发展可能有关。     

子宫动脉栓塞术在治疗子宫肌瘤中的应用

子宫动脉栓塞术治疗子宫肌瘤是一项非手术治疗方法。与传统的手术切除术相比较子宫动脉栓塞术具有治疗操作简单、微创伤、安全的特点，保留了子宫，患者痛苦少、住院时间短，容易为患者接受，临床应用于治疗子宫肌瘤的短期效果尚佳，远期疗效需长期随访观察。     

细胞凋亡与子宫肌瘤相关性研究

目的 探讨细胞凋亡与子宫肌瘤发生发展的关系。方法 应用免疫组化SP法检测40例子宫肌瘤（肌瘤组）及其邻近正常平滑肌组织（正常组）中凋亡基因Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L的表达。结果 Bcl-2在子宫肌瘤组织中的表达明显高于其邻近正常平滑肌组织（P〈0．001），Bax、Fas、Fas-L在子宫肌瘤组织中的表达明显低于邻近正常平滑肌组织（P〈0．001）。结论 细胞凋亡异常与子宫肌瘤的发生发展有关。     

谈情志—心理应激与子宫肌瘤发病的相关性

子宫肌瘤是妇科常见病、多发病,近年来发病率升高,其发病受多种因素影响。作者从主要中医基本致病因素肝郁入手,结合现代医学提到的心理应激等因素,论述了与子宫肌瘤发病的相关性。     

子宫肌瘤的彩色多普勒血流显像

应用Acuson 128XP/10电脑声像仪检查诊断32例子宫肌瘤(19例经病理证实)和19例正常子宫。发现子宫肌瘤多为富血供型肿瘤(81.25%),其彩色血流显示率随体积增大而增加,所显示的彩色血流丰富程度与肌瘤内部结构回声类型有关,且与各型肌瘤的血管病理变化相符合。子宫肌瘤的血供以动脉为主,瘤体内血流的阻力指数(RT)值显著低于正常子宫肌壁。     

谈情志—心理应激与子宫肌瘤发病的相关性

子宫肌瘤是妇科常见病、多发病,近年来发病率升高,其发病受多种因素影响。作者从主要中医基本致病因素肝郁入手,结合现代医学提到的心理应激等因素,论述了与子宫肌瘤发病的相关性。     

子宫动脉栓塞治疗子宫肌瘤的临床疗效

目的 总结运用聚乙烯醇(PVA)微粒栓塞子宫动脉治疗子宫肌瘤的临床疗效。方法 71例子宫肌瘤患者，伴有月经量增多、尿频、腹部坠胀感和腹部肿块等，采用PVA微粒(直径350～700μm)进行子宫动脉栓塞治疗。结果 71例中栓塞成功69例(97．2％)，患者临床症状均有改善。随访1～12个月，B超或MR复查肌瘤缩小率58％～100％。无一例发生严重并发症。结论 子宫动脉栓塞治疗子宫肌瘤是一种安全、有效的治疗方法。此疗法可部分替代肌瘤切除术和子宫切除术。     

米非司酮治疗子宫肌瘤32例疗效分析

目的：研究米非司酮治疗子宫肌瘤的中远期疗效。方法：32例35－52岁的子宫肌瘤患者应用国产米非司酮25mg/d连续治疗3个月后停药，治疗前后检测血液中E2，P，FSH，LH，ACTH和血脂，结果：3个月后子宫总体积平均比用药前缩小了38．10％，停药后随访观察1年，米非司酮停药后肌瘤呈进行性增大，基本恢复用药前体积，随访期间需手术8例，结论：米非司酮治疗子宫肌瘤短期疗效好，中远期疗效不稳定。     

Survivin、瘦素在子宫肌瘤中的表达及其相关性

目的探讨Survivin及瘦素（Leptin）在子宫肌瘤中的表达意义及其相关性。方法用免疫组化SP法、SABC法和图像分析技术分别检测45例正常子宫肌层组织和45例子宫肌瘤组织中的Survivin、Leptin的表达情况。并对二者的表达行Spearman等级相关分析。结果Survivin、Leptin在子宫肌瘤中的阳性表达率（80．0％，64．4％）明显高于在正常子宫肌层组织的表达（17．8％，40．0％），差异有极显著性意义（P〈0．01），且子宫肌瘤组织Survivin和Leptin的表达强度呈正相关（r=0．964，P〈0．01）。结论Survivin、Leptin可能在子宫肌瘤细胞的增殖和凋亡中起协同作用，共同参与子宫肌瘤的发生发展。     

经导管动脉栓塞治疗子宫肌瘤的临床分析

目的对经导管动脉栓塞治疗的子宫肌瘤患者的临床资料进行回顾性分析,以总结临床经验.方法采用Seldinger's插管方法作超选择子宫动脉栓塞,治疗52例肌瘤患者,对其术前术后的临床资料进行分析.结果治疗后临床症状明显改善者占84.6%,23例患者贫血明显改善,16例患者血红蛋白已达正常.观察33例患者手术前后血液流变学改变,术后血液流变学增高者为16例,P＜0.005.所有病例均无子宫坏死及严重并发症.结论介入治疗用于子宫肌瘤患者是一种相对安全的治疗手段,但有一定的并发症,需加强观察.