脐带血干细胞制备的检测分析

目的对脐带血干细胞制备进行检测,为临床安全、有效地应用提供依据。方法测定母体和脐带血标本的人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒(HCV)、梅毒螺旋体(TP)、巨细胞病毒(CMV)、内毒素、支原体和病原微生物。应用体外分离纯化试剂盒,分离干细胞,计数提取后单个核细胞数,经台酚兰染色检测干细胞活力。应用流式细胞仪检测CD34干细胞、淋巴细胞亚群。结果提取后有核细胞数为(5.4±1.09)×107,脐血的量和提取干细胞数成正相关。干细胞活力检测分离的活性率为(98.7±1.3)%。流式细胞仪测得脐血干细胞CD34+为(1.55±0.67)%(n=19)。淋巴细胞亚群检测结果显示,脐血CD3细胞数较少,CD4和CD8细胞数之和明显高于CD3细胞数,且选择脐血CD4/CD8小于1.3,这也是脐血移植时GVHD表现轻微的一个重要原因。结论脐血干细胞制剂的制备,符合细胞治疗的相关安全性指标。     

人脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞移植用于大鼠脊髓损伤的实验研究

目的:探讨人脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞(MSCs)移植对脊髓损伤功能恢复的影响,寻找一种更适合治疗脊髓损伤的细胞源。方法:采集新鲜人脐带血和脐带,分离培养单个核细胞和MSCs。将脊髓损伤模型随机分成3组:单个核细胞移植组、MSCs移植组和低糖必需培养基(L-DMEM)培养组。采用免疫组化和免疫荧光检测细胞移植后1—4周细胞在脊髓内的存活情况和迁移情况,使用BBB行为学评分评估大鼠脊髓功能恢复情况。结果:L-DMEM培养液组在术后各时间点观察评分无明显差异,而细胞移植组脊髓功能处于逐渐恢复过程,与L-DMEM培养液比较,差异有显著性意义。单个核细胞移植组对损伤脊髓功能的修复作用较MSCs移植组显著,且差异有显著性意义。结论:与MSCs相比较,人脐血单个核细胞更适合作为治疗脊髓损伤的细胞源。     

护理流程管理在脐血干细胞移植术中的应用

目的 探讨护理流程管理在脐血干细胞移植术中的应用及效果.方法 成立脐血干细胞移植流程管理小组,制订相应的护理流程并组织实施.结果 患者及临床医护人员对干细胞移植室护理满意度高.结论 护理流程管理保障了脐血干细胞移植术的治疗效果,杜绝了护理并发症的发生,可参考和借鉴.     

脐血造血干细胞移植中脐血输注的护理

脐血造血干细胞移植中如何使脐血造血干细胞顺利输注人病人体内是移植成功的重要环节,因此,脐血输注的护理尤为重要。笔阐述9例脐血造血干细胞移植患,脐血输注前输注时的护理,脐血输注后并发症的观察及护理3个部分的护理经验。9例患均成功进行了脐血输注。     

异体脐血干细胞移植导致胃肠移植物抗宿主病的实验研究

目的观察心肌梗死(MI)大鼠接受静脉异体脐血干细胞(HUCBC)移植后发生腹胀的原因。方法大鼠于心肌梗死后5 d经尾静脉注入0.5 ml脐血[含单个核细胞(1～3)×107]或0.5 ml磷酸缓冲盐溶液(PBS)。不使用免疫抑制剂。观察8周,入选移植后发生腹胀的大鼠、未腹胀大鼠、对照(PBS)组大鼠(每组n=8),行超声心动图和血流动力学检查,同时对扩张肠道进行HE染色明确腹胀原因。结果梗死后移植大鼠心功能明显优于PBS大鼠,而腹胀与非腹胀大鼠相比,射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)、左室压力最大变化率(±dp/dtmax)、左室舒张末压(LVEDP)没有显著差异,因此腹胀的发生与心功能恶化及移植效果没有关系。肠道大体解剖和病理分析显示移植大鼠(包括腹胀和未腹胀大鼠)均存在肠道扩张,以回肠周围最为明显,组织学表现符合肠道移植物抗宿主病。结论异体脐血单个核细胞移植可以导致胃肠道移植物抗宿主反应。     

脐血间充质干细胞移植治疗糖尿病足二例并文献复习

目的 观察脐血间充质干细胞移植治疗糖尿病足的疗效和安全性.方法 将脐血间充质干细胞多点注射到自愿接受干细胞移植的2例患者病变下肢,细胞数(3～7)×107/L,每点0.3～0.5 ml,每,点间距3 cm×3 cm,肌肉组织丰富的部位可分层注射.术后第1天至3个月定期观察患者临床症状及各项指标的变化并进行综合分析.结果 脐血间充质干细胞移植后3个月进行评价,2例患者下肢疼痛均明显缓解、皮温升高、皮肤凉感消失、间歇性跛行明显改善和足部溃疡愈合.踝肱指数、经皮氧分压较前有明显升高,血管造影显示治疗后病变下肢均有丰富的侧支血管生成.移植后2例患者均未出现严重并发症和明显不良反应,均未行截肢术.结论 脐血间充质干细胞移植治疗糖尿病下肢缺血性血管病是一种安全、有效的手段,可使一部分患者免除截肢,改善其生活质量.     

钙化胎盘及脐带血中纳米细菌的形态学观察

摘要:目的：研究纳米细菌（nanobacteria,NB）的分布,寻求检测胎盘钙化NB感染的更好组织来源。 方法：收集孕妇胎盘钙化组织和脐带血20例,并以20例正常胎盘组织作对照,分离培养NB;用革兰染色和茜素红染色法、扫描电镜和透射电镜进行形态学鉴定。 结果：培养沉淀物符合NB的特性。脐带血NB分离率为80%（16/20）,钙化胎盘组织为65%（13/20）,均明显高于正常胎盘组织的10%(2/20),χ²分别为12.07、9.09,P均＜0.01;脐带血与钙化胎盘组织比较,差异无统计学意义（χ²=1.33,P＞0.05）。油镜下脐带血和钙化胎盘组织分离的NB为球状或球杆状,形态相似;茜素红染色脐带血中NB较多且聚集成簇;透射电镜和扫描电镜下NB呈球形,大小为80~500 nm,并可见毛刺结构。 结论: 胎盘钙化与NB感染有关,脐带血适用于检测钙化胎盘的NB感染。     

人脐带和骨髓源间充质干细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响

目的：探讨人脐带间充质干细胞（UCMSCs）与骨髓间充质干细胞（BMMSCs）在体外对造血干细胞的支持作用。方法分别从人脐带和骨髓中分离、培养间充质干细胞,通过免疫细胞化学染色等方法对其进行表型鉴定;采用流式细胞仪测定脐血单个核细胞的周期分布,采用甲基纤维素法测定脐血单个核细胞混合集落形成单位（CFU-Mix）,比较 UCMSCs和BMMSCs对脐血单个核细胞细胞周期、CFU-Mix形成能力的影响。结果成功培养获得 UCMSCs和BMMSCs,鉴定结果符合预期;与非共培养组细胞相比,UCMSCs和 BMMSCs共培养均能促进脐血单个核细胞进入增殖周期,并增加其形成CFU-Mix的能力（P＜0．05）,但UCMSCs和BMMSCs共培养组之间比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论成功从人脐带和骨髓组织中培养获得间充质干细胞,两种来源的间充质干细胞均能提高脐血单个核细胞的体外增殖能力及 CFU-Mix形成能力,均具有造血支持作用。     

脐血间充质干细胞在造血干细胞移植中的临床应用

目的研究联合间充质干细胞和造血干细胞移植后的临床效果。方法实验组为联合移植的病例7例,对照组为外周造血干细胞移植的病例8例,通过分别观察每名患者的血小板重建时间、白细胞重建时间、住层流病房时间以及移植前后症状的改善情况、感染情况、GVHD发生率以及1年存活率来进行统计分析,判断2组的移植效果。结果实验组与对照组病例血小板重建平均时间分别为8.714、19.500 d,P<0.01;粒系重建平均时间分别为12.143、19.500 d,P<0.05;住层流病房平均时间分别为23.857、36.750 d,P<0.01;感染发生率分别分别为28.57%、62.50%;GVHD发生率为0、37.50%;一年内死亡率分别为0、12.5%。结论联合脐血间充质干细胞移植对造血干细胞移植后的归巢、发育、分化、成熟以及移植后的造血重建都有促进的作用,有助于减少移植后患者的感染率、GVHD发生率及死亡率,是造血干细胞移植技术的一步大跨越。     

孕妇静脉血与新生儿脐血的成分差异及关联性研究

目的探讨孕妇静脉血与新生儿脐血的成分差异及关联性。方法选取319例孕妇及其新生儿作为研究对象,所有孕妇均在分娩当天空腹抽取静脉血送检,而新生儿则在分娩结束时取近脐端脐血送检。对孕妇静脉血和新生儿脐血标本进行碱性磷酸酶(ALP)、拟胆碱酯酶(PCHE)、前清蛋白(PA)、视黄醇结合蛋白(RBP)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、尿酸(UA)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)等指标检测。结果孕妇静脉血血清ALP、PCHE、PA、RBP、TC、TG显著高于新生儿脐血,差异有统计学意义(P0.05),孕妇静脉血与新生儿脐血之间血清BUN、CR、UA水平差异无统计学意义(P0.05)。孕妇静脉血与新生儿脐血之间血清PCHE、PA、RBP、BUN、CR、UA呈正相关(P0.05),而ALP、TC、TG无相关性(P0.05)。结论孕妇静脉血与新生儿脐血之间某些物质的浓度存在差异,新生儿脐血中PCHE等指标的浓度受母体影响。     

Outcomes of a program to evaluate mother and baby 6 months after umbilical cord blood donation

BACKGROUND: A routine program of evaluating mothers and infants 6 months after umbilical cord blood donation was started at the Milano Cord Blood Bank (MCBB) in 1996. This study evaluated the main outcomes of this program. STUDY DESIGN AND METHODS: All mothers donating cord blood at this bank from February 1996 through May 1999 were invited to visit the bank or the collection suite 6 months after delivery to report on the health condition of their babies and to provide a fresh blood sample for repeat basal serologic tests (HBsAg, anti-HCV, anti-HIV-1/2, and syphilis). A bank volunteer contacted the mothers by telephone to schedule their visits just before the expiration of the 6-month period. Before collection of the new sample, a trained operator interviewed the mothers to review the mother's medical history information collected at donation and to obtain the baby's postnatal medical history. RESULTS: Of the 2450 mothers enrolled in the study, 2315 (94.5%) attended the bank in agreement with the program, 4 promised to attend, 95 could not be traced, 26 declined the invitation, and 10 were unable to attend. Of the 135 mothers who could not be traced, 29 (21.4%) belonged to non-European ethnic groups. The average time spent with each mother was approximately 20 minutes. In serologic testing, one indeterminate anti-HCV seroconversion (c22) was detected. Collection of the baby's postnatal history reported one case of congenital urinary malformation not known at delivery, one of protein C deficiency, one of phenylketonuria, one of mucoviscidosis, and one of 10q- chromosomal abnormality. The cord blood components from all these births were discarded. CONCLUSION: These data support the feasibility of a routine 6-month program of evaluating mothers and babies giving cord blood at a cord blood bank. Such programs may increase the quality of components stored for transplantation.     

人脐带血干细胞移植防治兔急性心肌缺血的实验研究

目的:利用人脐带血干细胞(humanumbilicalcordbloodstemcells,HUCBSC)移植治疗兔急性心肌缺血,探索防治缺血性心脏病的新方法。方法:新西兰白兔40只,雌雄不拘,随机等分为细胞移植组和对照组。两组均结扎冠状动脉左前降支中1/2,复制心肌梗死模型。缺血60min后将108/mlHUCBSC0.3ml注入细胞移植组兔的缺血区心肌组织;对照组兔缺血区心肌组织中注射等体积的人静脉血。3周后观察两组心功能、心肌梗死面积及缺血区心肌内血管计数。用Northern印迹和ELISA法观察缺血区心肌组织中血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblasticgrowthfactor,b-FGF)基因的转录和表达。结果:细胞移植组的左心室收缩压(leftventricularsystolicpressure,LVSP)和左心室最大变化速率(±LVdp/dtmax)均显著高于对照组(P<0.01);其左心室舒张末期压(leftventricularenddiastolicpressure,LVEDP)显著低于对照组(P<0.01);其心肌梗死面积显著小于对照组(P<0.01);缺血区心肌的血管计数显著多于对照组(P<0.01)。Northern印迹和ELISA试验显示,细胞移植组VEGF和b-FGF基因的转录和表达均显著强于对照组(P<0.01)。结论:HUCBSC移植能明显改善兔急性心肌缺血的心功能,促进缺血区心肌细胞和血管的再生,从而显著减小心肌梗死的面积,有望成为防治缺血性心脏病的一种新的治疗策略。     

胎儿脐带血血红蛋白分析在珠蛋白生成障碍性贫血产前诊断中的应用价值

目的探讨胎儿脐带血血红蛋白分析在珠蛋白生成障碍性贫血(又称地中海贫血)产前诊断中的应用价值。方法收集夫妻双方均为相同基因类型地中海贫血携带者113对,且女性处于妊娠期,孕24~30周,进行产前诊断。应用全自动毛细管电泳技术分析胎儿脐带血血红蛋白成分,同时检测胎儿地中海贫血基因。结果 113对夫妻所孕育的113例胎儿中,11例重型α地中海贫血胎儿脐带血HbBart′s水平为85.0%~95.5%,9例中间型α地中海贫血胎儿脐带血HbBart′s达22.0%~39.5%;6例重型β地中海贫血胎儿脐带血HbA水平为0%~0.4%,17例轻型β地中海贫血胎儿脐带血HbA水平为2.1%~12.5%。结论胎儿脐带血血红蛋白分析能快速产前诊断重型α、重型β和中间型α地中海贫血,可作为地中海贫血产前诊断的辅助方法。     

广州市三级甲等医院产科护士脐血采集知识认知状况调查

目的针对产科护士脐血采集知识、技能的薄弱环节,提出可行性建议和对策,以提高脐血采集的质量。方法采用便利抽样法对广州市7所三级甲等医院共98名产科护士进行调查。结果产科护士脐血采集知识培训率59．55％,其中取得助产士资格的护士脐血采集知识培训率95．83％;本组得分为25～41（35．50±4．22）分;得分少于满分60．00％的有6人（6．74％）。产科护士对脐血采集知识回答正确率低于60．00％的项目是：采血针适宜穿刺的次数、供者需满足的条件、知情同意权、脐血质量有保证的最小孕周、脐血采集的结束步骤、采血针针头斜面的方向。结论广州市三级甲等医院产科护士对脐血采集知识的认知存在薄弱环节,应加强对产科护士的脐血采集培训,以多种方法普及采血知识。     

脐血血浆替代胎牛血清培养脐带间充质干细胞及冷冻保存

背景：采用胎牛血清扩增培养及冷冻保存的间充质干细胞,在临床应用中存在一定的风险。目的：探讨以脐血血浆替代胎牛血清体外分离培养、扩增及冷冻保存脐带间充质干细胞的可行性。方法：选择符合广州脐血库供者合格性筛选标准的脐血,收集脐血干细胞制备过程中去除的血浆,经病原学及微生物检测合格,多份混合用于细胞培养。采用酶消化法从健康足月分娩新生儿的脐带组织分离获得脐带间充质干细胞,分为两组,分别以DMEM/F12为基础培养基,添加胎牛血清或混合脐血血浆,经培养扩增后,采用流式细胞仪检测细胞免疫表型,并进行间充质干细胞成骨、成脂分化鉴定。在含有10%二甲基亚砜的DMEM/F12培养基中,分别添加体积分数为20%的胎牛血清或混合脐血血浆作为冷冻保存液,对扩增至第3代的细胞冷冻保存至6个月以上,观察复苏后细胞的活率、贴壁情况、增殖、免疫表型及向成骨细胞分化的能力。结果与结论：两种培养体系下的脐带间充质干细胞均呈现典型的梭形漩涡状生长,间充质干细胞免疫表型的表达谱系基本无差异,均具有成骨、成脂分化的能力,但脐血血浆培养条件下细胞的增殖速度显著高于胎牛血清。冻存复苏后的细胞可正常贴壁,且具有向成骨细胞分化的能力,采用脐血血浆冻存的细胞具有更高的贴壁效率及扩增能力。上述结果表明,脐血血浆可以替代胎牛血清用于脐带间充质干细胞的扩增培养及冷冻保存,并维持了间充质干细胞的基本生物学特性,是大量扩增间充质干细胞用于临床治疗较为安全的选择。     

NOD/SCID小鼠脐血单个核细胞骨髓腔内移植的实验研究

目的观察骨髓腔内移植(iBM)人脐血单个核细胞(MNC)对小鼠造血重建和免疫功能恢复的作用。方法NOD/SCID小鼠经137Cs全身照射后,在4h内无菌条件下局部麻醉后从尾静脉或骨髓腔内输注分离脐血MNC。受体小鼠随机分为5组:①对照组:骨髓腔内输注培养液;②阳性对照组(iTV):尾静脉输注脐血MNC3×107/只;③实验Ⅰ组(iBM1):骨髓腔内输注脐血MNC3×106/只;④实验Ⅱ组(iBM2):骨髓腔内输注脐血MNC1×107/只;⑤实验Ⅲ组(iBM3):骨髓腔内输注脐血MNC3×107/只。对照组4只小鼠,实验Ⅱ组7只小鼠,其余每组5只。24h后观察iBM22只小鼠未移植侧胫骨骨髓腔脐血细胞的迁移分布,动态观察移植后小鼠的存活和造血重建情况,7～8周后处死各组小鼠,检测骨髓细胞表面CD分子表达、碳青花(DilCM)染料示踪研究和脐血βactin的DNA标记。结果①照射后骨髓腔内输注脐血MNC,24h后在未输注脐血MNC的一侧胫骨骨髓细胞膜有DilCM标记;②7～8周后小鼠存活14只,其中对照组存活1只,iTV组、iBM1组各存活2只,iBM2组存活4只,iBM3组存活5只;③外周血常规检查结果显示iBM组白细胞的恢复速度比iTV组和对照组快而且稳定;④移植后存活小鼠骨髓细胞表面CD45标记、DilCM染料示踪研究和βactin均显示人源的标记。结论经iBM途径移植脐血MNC至NOD/SCID小鼠骨髓可以重     

胎心监护联合脐血流测定对胎儿宫内窘迫诊断的意义

目的：观察和评价胎心监护联合脐血流测定对诊断胎儿宫内窘迫的意义。方法选取208例单胎分娩孕妇作为研究对象,根据脐血流测定与胎心监护检查结果,将其分为A、B、C、D4个组,A组为脐血流测定、胎心监护均正常;B组为脐血流测定、胎心监护均异常;C组为脐血流测定异常而胎心监护正常;D组为脐血流正常而胎心监护异常。对研究对象产前、产时胎儿宫内窘迫发生率及胎儿预后进行观察和分析。结果4个组胎儿的1min新生儿评分（Apgar评分）均在4～10分,其中,A组中评分为8～10分的胎儿比例明显高于其他3个组,差异有统计学意义（P＜0．05）,而B、C、D3个组之间的差异无统计学意义（P＞0．05）;4个组胎儿间羊水污染程度的差异无统计学意义（P＞0．05）;A组和C组之间胎心异常率的差异无统计学意义（P＞0．05）,B组和D组之间胎心异常率的差异无统计学意义（P＞0．05）,但B组均明显高于A组与C组,且差异有统计学意义（P＜0．05）。结论胎心监控联合脐血流检查对于诊断胎儿宫内窘迫具有较高的意义和价值,可弥补单独应用一种方法的不足,提高诊断的可靠性,值得在临床上推广使用。     

Potential role of N-Succinyl-Chitosan in immune reconstitution after umbilical cord blood transplantation in mice

How to shorten the immune convalescence required after transplantation in recipients is still an austere medicinal problem. Speed-up recovery means less infection opportunity and high survival. In this study, an immune-deficient mouse model was developed by lethally irradiation to evaluate the immune reconstitution effect of N-Succinyl-Chitosan (NSC), a water soluble low molecular weight chitosan derivative, after umbilical cord blood stem cells transplantation, including hematopoiesis parameters detection, T-cell phenotype analysis and pathological comparison; effects of NSC on proliferation of umbilical cord blood stem cell has also been evaluated in vitro. By comparison and analysis, we found the combination of NSC and hematopoietic growth factors could dramatically shorten the time required for the recovery of hematopoiesis, T-cell phenotype and injured spleen after transplantation, suggesting that NSC may hasten the immune recovery and therefore may shorten the time of exposure to life-threatening opportunistic infections in transplant recipients. Moreover, we demonstrated that NSC was effective on the proliferation and clone of umbilical cord stem cell in vitro, suggesting NSC could speed up the immune reconstitution in umbilical cord blood transplantation by enlarge the number of umbilical cord blood stem cell.     

1例神经母细胞瘤患儿脐带血造血干细胞移植术后的护理

研究发现,脐带血中含有可以重建人体造血和免疫系统的造血干／祖细胞,可用于造血干细胞移植,治疗多种疾病。造血干细胞移植整个过程是给予患者大剂量化、放疗等预处理后,将保存在-196摄氏度的液氮中经37～40摄氏度的温水解冻后快速输入患者体内,可以有效杀灭肿瘤细胞并重建造血系统,它的临床应用为恶性肿瘤患者提供了先进有效的治疗方法。本院于2009年10月收治了1例神经母细胞瘤的患儿,经采用造血干细胞移植后,取得较好的效果,现报道如下。