FA-MNP-MMP-9-ASODN纳米复合物对鼻咽癌的体外抑制研究

目的：观察FA-MNP-MMP-9-ASODN纳米复合物对鼻咽癌HNE-1细胞的体外抑制效应。方法：采用RT-PCR、Western-blot方法、MTT方法、流式细胞技术及Matrigel体外侵袭实验观察转染FA-MNP-MMP-9-ASODN 48h后HNE-1细胞MMP-9mRNA及蛋白表达水平和细胞增殖能力、凋亡和侵袭能力的变化。结果：FA-MNP-MMP-9-ASODN组HNE-1细胞MMP-9 mRNA和蛋白的表达水平较对照组及FA-MNP-MMP-9-NSODN无义序列组明显降低。同时FA-MNP-MMP-9-ASODN组HNE-1细胞生长抑制率约为35.66%,增殖活性较对照组和无义序列组明显降低。且HNE-1细胞周期也受到抑制,细胞凋亡率约为12.60%,明显高于对照组和无义序列组。侵袭实验显示FA-MNP-MMP-9-ASODN组穿膜细胞数约为21.00个,明显低于对照组和无义序列组。结论：FA-MNP-MMP-9-ASODN纳米复合物通过抑制MMP-9的表达,可降低鼻咽癌细胞的增殖和侵袭能力,促进凋亡,体外抑制效果良好。     

头颈肿瘤分子靶向治疗临床研究进展

分子靶向治疗是一种新的肿瘤治疗手段,它能够特异性地作用于肿瘤发生发展中起关键作用的靶分子及其调控的信号传导通路,从而达到治疗肿瘤的目的.     

分子靶向治疗在晚期甲状腺癌中的临床应用

甲状腺癌的发病率逐年上升,总体上治疗效果良好,但仍有一部分难治性甲状腺癌缺乏有效的治疗手段。随着甲状腺癌分子病理机制研究的不断进展,以激酶抑制剂为代表的分子靶向治疗逐步在晚期甲状腺癌治疗中得到越来越广泛的应用,为晚期甲状腺癌患者带来新的希望。     

鼻咽癌靶向放射增敏策略研究进展

放射抵抗是鼻咽癌预后不良的主要原因。在各种放射增敏策略中,目标明确、疗效较好和副作用较少的靶向放射增敏策略已成为当前及今后鼻咽癌放疗领域的研究热点,包括分子靶向放射增敏、基因靶向放射增敏、乏氧靶向放射增敏及纳米靶向增敏等。进一步研究鼻咽癌放射抵抗的机制,寻找关键作用靶点,进行多基因、多环节联合靶向干预,有望破解目前鼻咽癌放射抵抗的难题。     

靶向联合阻断表皮生长因子受体和环氧化酶-2信号通路影响鼻咽癌细胞生长的研究

目的：观察联合阻断表皮生长因子受体（EGFR）和环氧化酶-2（COX-2）介导的信号通路,对鼻咽癌细胞株CNE-2的影响。方法：用EGFR-酪氨酸激酶拮抗剂和COX-2抑制剂单独和联合处理鼻咽癌细胞株CNE-2,采用CCK-8法检测细胞生长抑制率,流式细胞术进行细胞周期、凋亡率的分析,Western blot检测相关蛋白表达。结果：①联合用药组CNE-2细胞生长抑制率显著大于两者单独处理组生长抑制率之和（P〈0．05）;②联合处理组细胞G1期比例大于单独处理组（P〈0．05）。联合处理组细胞凋亡率与单独处理组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;③与单独处理组相比,联合处理组出现明显的p—EGFR,COX-2表达下调。结论：联合阻断EGFR和COX-2信号通路对抑制鼻咽癌细胞株CNE-2生长,增加G1期阻滞及抑制EGFR的磷酸化和COX-2的表达方面具有协同作用。     

诱导化疗及其联合靶向药物在下咽癌中的应用

下咽癌的治疗理念多为延长生存期、保留喉功能、改善生存质量。诱导化疗后根据患者反应情况进行放化疗或手术的个性化、综合化治疗模式是临床研究关注的热点之一，靶向药物的加入可进一步改善患者预后。值得注意的是，因人种、患者身体状况等差异，药物的选择及用药剂量存在争议。本文分析以往的临床试验资料，总结诱导化疗在下咽癌中的治疗历程，探讨诱导化疗及靶向治疗的应用价值，为未来下咽癌的临床诊疗提供参考。     

诱导化疗及分子靶向治疗在局部晚期喉癌和下咽癌治疗中的应用[综述]

对于局部晚期喉癌和下咽癌传统治疗方案多以手术治疗辅以放疗或放化疗为主,然而患者的5年生存率未得到明显提高,且常以牺牲喉功能为代价,严重影响患者的生活质量和心理健康。因此非手术治疗逐渐成为研究热点,其中诱导化疗在器官保留及减少远处转移方面展现出明显优势,而分子靶向治疗特异性高、不良反应少,已逐渐应用到头颈鳞状细胞癌的治疗中。本文总结相关临床试验,探讨诱导化疗及分子靶向治疗在局部晚期喉癌和下咽癌中的应用,旨在总结比较不同的治疗方案,为临床决策提供参考。     

鼻咽癌的靶向治疗

鼻咽癌是常见肿瘤之一,尤其在我国南方地区多发.靶向治疗作为一种新型的抗肿瘤方法,近年来在鼻咽癌的治疗中取得较大进展.现主要针对表皮生长因子受体抑制剂、血管内皮生长因子抑制剂两种靶向药物在鼻咽癌中应用的相关研究进行综述.     

靶向c-Met嵌合抗原受体T细胞的制备及其对鼻咽癌细胞作用的研究

目的 构建靶向c-Met的嵌合抗原受体(CAR)逆转录病毒载体,制备靶向c-Met CAR-T,观察其对c-Met阳性鼻咽癌细胞的杀伤作用。 方法 利用基因工程技术构建抗c-Met scFv,并将其重组到含有CD28,CD137,CD3ζ等的逆转录病毒载体中,形成c-Met CAR逆转录病毒载体,测序确认。以该病毒载体感染T淋巴细胞,通过Western blotting检测c-MetCAR在T淋巴细胞中的表达。CCK-8检测c-Met CAR-T对鼻咽癌细胞的作用;通过ELISA检测c-Met CAR-T作用后IFN-γ、IL-2的变化。 结果 测序结果显示c-Met CAR病毒载体序列正确;Western blotting可检测到CD3ζ的表达;CCK-8结果显示,c-Met CAR-T明显抑制c-Met阳性的鼻咽癌细胞的增殖(P<0.05);ELISA结果显示,c-Met CAR-T作用后分泌IFN-γ、IL-2明显增加(P<0.01)。 结论 成功制备了靶向c-Met的嵌合抗原受体逆转录病毒载体。该嵌合抗原受体能在T细胞中表达,能有效抑制c-Met阳性鼻咽癌细胞增殖,增加IFN-γ、IL-2的分泌。     

联合靶向阻断EGFR和mTOR信号通路对鼻咽癌细胞生长影响的研究

目的观察联合阻断表皮生长因子受体（EGFR）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）介导的信号通路对鼻咽癌细胞株CNE-1及CNE-2的影响。方法EGFR酪氨酸激酶拮抗剂（Tarceva）、mTOR抑制剂（Rapamycin）单独（单独处理组）和联合处理（联合处理组）鼻咽癌细胞株CNE-1及CNE-2后,CCK-8法检测细胞生长抑制率,流式细胞法检测细胞周期和凋亡率。结果①Tarceva、Rapamycin单独处理组对CNE-1和CNE-2细胞株均产生剂量依赖性抗增殖作用。②联合用药组CNE-1和CNE-2细胞生长抑制率显著大于两者单独处理组生长抑制率之和（P〈0.05）。③联合处理组的G1期细胞比例大于单独处理组之和（P〈0.05）。联合处理组的细胞凋亡率高于单独处理组（P〈0.05）。结论Tarceva及Rapamycin联合靶向治疗能协同性地抑制鼻咽癌细胞生长,这种效应可能通过增加G1期细胞阻滞及凋亡来实现。     

鼻咽癌的靶向治疗

鼻咽癌是常见肿瘤之一,尤其在我国南方地区多发。靶向治疗作为一种新型的抗肿瘤方法,近年来在鼻咽癌的治疗中取得较大进展。现主要针对表皮生长因子受体抑制剂、血管内皮生长因子抑制剂两种靶向药物在鼻咽癌中应用的相关研究进行综述。     

肿瘤靶向性人可溶性TRAIL载体的构建及其在鼻咽癌细胞株CNE-2的表达

目的克隆人可溶性TRAIL(sTRAIL)基因并构建肿瘤细胞特异性真核表达载体,为鼻咽癌基因治疗的靶向性奠定实验基础。方法提取人外周血淋巴细胞总RNA,采用RT-PCR扩增含有IL-2信号肽和TRAIL凋亡诱导功能区的融合基因,克隆入真核表达载体pGL3-181hTERT肿瘤特异性端粒酶启动子的下游,构建可分泌表达TRAIL基因的真核表达载体pGL3-181hTERT/TRAIL。用Western blot鉴定鼻咽癌细胞株CNE-2中表达产物。结果RT-PCR扩增得到了613 bp的cDNA片断。经酶切及测序鉴定,与GenBank中报道的IL-2信号肽和TRAIL凋亡诱导功能区cDNA序列完全一致,成功构建了肿瘤特异性高效分泌表达可溶性人TRAIL的重组真核表达载体pGL3-181hTERT/TRAIL。Western blot结果显示,获得的瞬时转染TRAIL在鼻咽癌CNE-2肿瘤细胞中能有效表达。结论重组真核表达载体pGL3/TRAIL的成功构建,为鼻咽癌基因治疗的靶向性提供了可能性。     

靶向增强型TK表达载体在鼻咽癌细胞中的作用研究

目的探讨hTERT启动子及CMV增强子双调控机制的增强型表达载体pGL3-bas-ic-EGFP-TK-hTERTp-CMV enhancer在鼻咽癌细胞中的靶向杀伤效应。方法构建靶向性增强型hTERT启动子及CMV增强子双调控TK表达载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp-CMV enhancer,并以单启动子载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp作为对照组,分别转染端粒酶阳性的人鼻咽癌细胞株5-8F、人乳腺癌细胞MCF-7（阳性对照）及正常人血管内皮细胞ECV（阴性对照）。荧光显微镜下观察其TK基因绿色荧光蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中TK基因mRNA定量表达差异,Stretch PCR法检测肿瘤细胞端粒酶活性,MTT法分析杀灭鼻咽癌细胞的效果等作为检验指标。结果①该增强型表达载体转染5-8F细胞及MCF-7细胞后的绿色荧光表达及TK基因的mRNA表达均强于单启动子pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp组;而ECV细胞只有极微弱的绿色荧光和极弱的TK基因的mRNA表达。实时荧光定量PCR显示,增强型载体组A值较对照组单启动子组明显增高,是单启动子组的2～5倍。StretchPCR法检测转染前后5-8F细胞端粒酶活性明显被抑制。②加入GCV后增强载体组对鼻咽癌5-8F细胞及乳腺癌MCF-7细胞体外增殖均有明显抑制作用,均高于单启动子载体组、不加GCV的增强型载体组、空载体组及空白对照组。结论以hTERT启动子及CMV增强子双调控机制介导TK基因的新型靶向增强型表达载体能够高效靶向性杀灭鼻咽癌细胞,这种新型高效靶向增强型载体有可能成为一种针对包括鼻咽癌在内的具有较为广泛抗癌谱的恶性肿瘤临床靶向基因治疗的新策略。     

甲状腺髓样癌的分子病因学和靶向治疗进展

甲状腺髓样癌（medullary thyroid carcinoma,MTC）与转染重排基因突变、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白细胞间信号通路活化和ras基因突变等多种基因事件密切相关.以分子病因学研究为基础的靶向治疗在转移性或局部进展、难治性MTC中显示了良好的治疗前景.随着随机临床试验的开展和新型靶向药物的应用,必将为MTC患者提供更加有效的、个体化的治疗选择.     

增强型胸苷激酶基因表达载体的构建及其杀伤鼻咽癌细胞的实验研究

目的 探讨改良构建人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit promoter,hTERT)启动子及巨细胞病毒原核(cytomegalovirus,CMV)增强子联合调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(thymidine kinase,TK)的增强型表达载体在鼻咽癌细胞体内外实验中的靶向杀伤效应及体内应用的安全性评价.方法 以pGL3-basic空载体为模板,分别酶切连接hTERT启动子、CMV增强子及TK基因构建靶向性增强型表达载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTERTp-CMV(以hTERT单启动子调控TK基因表达载体作为对照组),转染端粒酶阳性的人鼻咽癌5-8F细胞及用做对照组的人乳腺癌MCF-7细胞和端粒酶阴性的正常人脐静脉内皮细胞ECV-304,分别采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达差异、实时荧光定量PCR检测转染后TK基因mRNA表达差异、TeloChaser法检测上述细胞中的端粒酶活性、四甲基偶氮唑蓝(MTt)联合Boyden小室实验分析增强型载体对鼻咽癌细胞增殖及侵袭抑制的作用.将鼻咽癌细胞接种于裸鼠腋部皮下,构建裸鼠鼻咽癌移植瘤模型,研究增强型载体对裸鼠移植瘤的体内生长抑制作用及对全身的毒副反应情况.结果 ①成功改良构建hTERT/CMV双调控TK基因的增强型表达载体.②转染增强型载体组及单启动子载体组的鼻咽癌5-8F细胞均有绿色荧光表达,但前者荧光数量及强度均较后者强,对照组端粒酶阳性的乳腺癌细胞也有很强的荧光表达,而ECV-304细胞几乎无绿色荧光表达.实时荧光定量PCR结果显示,增强型载体组的TK基因mRNA表达量是单启动子组的2-5倍.③ TeloChaser法结果显示,两种肿瘤细胞(5-8F细胞、MCF-7细胞)端粒酶活性均为阳性,正常对照ECV-304细胞端粒酶活性为阴性.④MTT联合Boyden小室侵袭实验结果显示,增强型表达载体对5-8F细胞体外增殖及侵袭力均有明显抑制作用.相对细胞存活率为37.0%,较对照组明显低(P<0.01).⑤体内实验结果显示,增强型靶向表达载体对裸鼠鼻咽癌移植瘤生长具有明显抑制作用,抑瘤率达56.3%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),而裸鼠肝肾病理检查未发现明显损害.结论 以hTERT/CMV双调控机制介导TK基因的增强型表达载体能够高效、靶向杀伤鼻咽癌细胞及移植瘤,实验动物体内应用无明显毒副作用.     

靶向阻断COX-2信号通路对喉癌细胞生长的影响

目的观察赛来昔布靶向阻断COX-2信号通路对喉癌细胞生长的影响。方法用不同浓度的赛来昔布处理喉癌细胞Hep-2,通过MTT法检测赛来昔布对喉癌细胞的生长抑制率的影响。用浓度为15μmol/L的赛来昔布处理Hep-2细胞,通过流式细胞学检测药物处理前后细胞周期、凋亡率的差异,运用Western blot检测药物处理前后相关蛋白EGFR和COX-2表达的差异。结果赛来昔布处理后的Hep-2细胞与药物浓度成比例地出现生长抑制率增高;赛来昔布干预组细胞G1期比例大于对照组（P〈0.01）,凋亡率明显升高（P〈0.05）;与对照组相比,赛来昔布干预组出现明显的p-EGFR,COX-2表达降低（P〈0.05）。结论赛来昔布能抑制喉癌细胞株Hep-2生长,增加Hep-2细胞G1期阻滞,降低肿瘤细胞增殖能力和诱导细胞凋亡;赛来昔布可抑制喉癌细胞COX-2的表达和EGFR的磷酸化。提示COX-2抑制剂可能作为喉癌靶向治疗的新方法。     

牛蒡子苷元抑制鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤生长及其分子机制研究

目的　研究牛蒡子苷元（arctigenin，ARG）对鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤生长影响及其分子机制。方法  建立鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤模型，随机分为对照组、10 μg/g ARG 组和20 μg/g ARG组。实验组按体重分别给予10 μg/g和20 μg/g牛蒡子苷元，对照组则给予等体积1640培养液。每天腹腔注药，持续2周。绘制生长曲线，计 算抑瘤率；Real-time PCR法及Western blot法检测mRNA及蛋白表达水平。结果　ARG能抑制鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤生长；与对照组相比，10 μg/g ARG组和20 μg/gARG组表皮生长因子（epidermal growth factor receptor，EGFR）、蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）、雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）的mRNA表达水平降低（P＜0.05）；EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT、mTOR蛋白表达水平降低（P＜0.05）。结论　ARG可抑制鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤的生长，其机制可能与下调EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT、mTOR蛋白的表达有关。     

甲状腺未分化癌的分子机制研究

甲状腺未分化癌(ATC)是一种罕见的侵袭型甲状腺恶性肿瘤,进展迅速、预后差,目前缺乏疗效显著的治疗方法和早期诊断方案。有学者研究显示,ATC预后不良是由于肿瘤早期突变以及肿瘤侵袭性生长,因此针对ATC发病机制的驱动突变及靶向药物的研究成为新方向。在ATC中涉及与肿瘤进展相关的不同分子途径,并且有学者探讨实施作用于这些分子途径的新疗法,以改善患者生活质量。对ATC分子结构特征的研究成果,为新的靶向治疗带来希望,新的分子机制将有助于发现更多潜在的治疗靶点,综述近年来ATC的分子机制研究概况。     

表皮生长因子受体为靶向的多肽基因导入系统介导 p21 WAF1对人喉癌的基因治疗

目的：评价靶向性非病毒载体系统介导的p21^WAF1对人喉癌基因治疗的可行性和有效性。方法：利用组建的表皮生长因子受体(EGF-R)介导的多肽基因导入系统与p21^WAF1基因构成基因载体复元物，分别体外转染人喉癌Hep-2细胞，通过荧光显微镜观察和通过转染喉癌细胞生长曲线及流式细胞仪检测等方法观察新的受体介导多肽基因导入系统对外源基因的导入和导入后对人喉癌细胞的抑制作用。结果：荧光显微镜观察到标记基因的表达产物绿色荧光蛋白，转染后48h呈弱阳性，72h呈强阳性；p21^WAF1基因转染后喉癌细胞生长受到明显抑制，第4天抑制率为79％；流式细胞仪检测到p21^WAF1转染的Hep-2细胞发生了明显的凋亡。结论：EGF-R介导的多肽基因导入系统可靶向性地将治疗基因导入Hep-2人喉癌细胞，p21^WAF1基因可明显抑制Hep-2细胞的生长并有效诱导基因凋亡。     

人类鼻咽癌端粒酶活性的研究及其临床意义

目的　探讨端粒酶在鼻咽癌中的表达及其临床意义。方法　采用TRAP 银染法对 42例鼻咽部低分化鳞状细胞癌、10例鼻咽部正常粘膜和 8例鼻咽纤维血管瘤进行端粒酶活性检测及血清VCA/IgA检测 ,并分析其与临床病理的关系。结果　鼻咽部正常粘膜和鼻咽癌端粒酶阳性率分别为 2 0 %和 88.1% ,8例鼻咽纤维血管瘤均未检测到端粒酶活性。鼻咽癌伴颈部淋巴结转移者端粒酶阳性率高于无颈部淋巴结转移者 (P =0 .0 35 ) ,临床晚期 (III、IV)端粒酶阳性率高于临床早期 (I、II) (P=0 .0 48) ,而端粒酶与鼻咽癌患者的年龄、性别及远处转移均无明显相关性 (P >0 .0 5 )。鼻咽癌患者血清EB病毒VCA/IgA阳性率明显高于鼻咽粘膜正常者 (P <0 .0 0 1)。结论　端粒酶活性表达在鼻咽癌发病机制中起着重要作用。端粒酶活性结合血清EB病毒抗体的检测有利于鼻咽癌的早期诊断。