腹腔热化疗中卵巢癌细胞对顺铂敏感性影响的体外研究

目的:探讨腹腔热疗对卵巢癌细胞顺铂敏感株的化疗增敏作用及对顺铂耐药株的逆转耐药作用,并分析其作用机制,为腹腔热疗增加顺铂化疗敏感性及逆转卵巢癌顺铂耐药提供实验依据。方法:MTT 法研究常温及41℃不同作用时间下温热联合顺铂对卵巢癌细胞敏感株SKOV 3、卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV 3/DDP 的生长抑制作用。Western bloting法检测常温及41℃不同作用时间下ERCC1 基因表达水平。结果:41℃下作用60、90min时对SKOV 3 细胞生长的抑制作用大,差异有显著性,P<0.001。热处理对SKOV 3/DDP 细胞生长有抑制作用,不同时间差异有统计学意义。热疗联合顺铂在常温或41℃下,SKOV 3 细胞对顺铂的敏感性不同,差异有统计学意义（P<0.001）。 且41℃作用90min时敏感性最大（P=0.002）,对顺铂的敏感性提高79.885% 。热处理不同时间,SKOV 3/DDP 细胞对顺铂的敏感性增加,差异有显著性,P<0.001。41℃90min SKOV3/DDP 细胞对顺铂的敏感性提高37.129% 。在SKOV 3 细胞中,ERCC1 表达水平较SKOV 3/DDP 细胞降低,F=32.175,P<0.001。热疗联合顺铂与常温下相比,SKOV 3、SKOV 3/DDP 细胞中ERCC1 基因表达水平差异无统计学意义,F=0.962,P=0.443。结论:热疗对卵巢癌细胞SKOV 3 及其顺铂耐药亚株SKOV 3/DDP 细胞有生长抑制作用;热疗联合顺铂可以增加SKOV 3 细胞对顺铂的敏感性,可以部分逆转SKOV 3/DDP细胞对顺铂的耐药性,且最佳作用时间为41℃90min;ERCC1 表达增加与卵巢癌顺铂耐药有关,但热疗联合顺铂对ERCC1 基因表达水平无明显影响,热疗可能通过其他途径增加肿瘤细胞对顺铂的敏感性。      

野生型p53基因转染对卵巢癌细胞生长及药物敏感性影响

目的：探讨野生型p53基因转染对人卵巢癌细胞株SKOV-3的体外生长及裸鼠体内致瘤性抑制作用。并了解p53基因与SKOV-3细胞对顺铂敏感性之间的关系。方法：利用脂质体介导,将含有人野生型p53cDNA的真核表达质粒pCB6-p53导入SKOV-3细胞中,观察该细胞体外生长和裸鼠体内致瘤性改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,MTT法检测细胞药物敏感性改变。结果：免疫组化法证实外源性p53基因在阳性细胞克隆稳定存在;转染野生型p53基因的SKOV-3细胞体外生长速率下降,裸鼠体内致瘤性丧失;G1/G0期细胞百分比（81.5%)和凋亡细胞百分比（11%）增高;p53表达阳性的SKOV-3细胞对顺铂的敏感性明显增强。结论：野生型p53基因转染能使SKOV-3细胞出现生长抑制和对顺铂的化疗敏感性增强。     

沉默Id1基因表达对卵巢癌细胞生长影响的实验研究

目的:通过构建人卵巢癌SKOV3 Id1特异性siRNA慢病毒载体及其裸鼠移植瘤模型,观察沉默分化抑制因子（inhibitor of differentiation-1,Id1）表达对卵巢癌SKOV3生长的影响。方法:根据Id1基因序列设计并合成的siRNA片段转染SKOV3细胞,将转染细胞分为四组:cell+lv-shRNA-Id1（实验组）、cell+lv-shRNA-NC(质粒对照组)、cell+lv-control(空病毒对照组)、cell(空白对照组),筛选出稳定转染的SKOV3细胞克隆,48小时后检测细胞生长活性。将40只裸鼠随机分为四组,分别接种上述转染成功的细胞,30天后称取瘤体重量,计算抑瘤率;然后通过 Western blotting 法检测移植瘤中Id1蛋白的表达。结果:在体外试验中,实验组的细胞生长活性显著低于空白对照组,具有统计学意义（P＜0.05）,三对照组间无明显差异（P＞0.05）;体内实验显示,实验组平均瘤重均低于其他三对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,三对照组间瘤重差异无统计学意义（P＞0.05）;实验组、质粒对照组、空病毒组抑瘤率分别为45.98%、4.84%、4.50%;Western blotting 结果显示,实验组中Id1表达较对照组明显下调（P＜0.05）。结论:沉默Id1基因能抑制卵巢癌细胞的生长,有望成为卵巢癌治疗新靶点。     

CAR抑制卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移表型的研究

背景与目的:柯萨奇-腺病毒受体(coxsackieandadenovirusreceptor,CAR)最早作为2,5型腺病毒的受体而被人们发现和认识,近年的研究发现它还是粘附分子家族的一员,并参与肿瘤恶性表型改变。本研究通过转染真核表达载体,探讨其对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移表型的影响。方法:利用Westernblot和RT-PCR检测4株卵巢癌细胞CAR的表达;脂质体介导转染含有全长CAR基因的真核表达质粒至SKOV3细胞,经G418筛选出稳定表达的阳性细胞克隆;体外粘附实验及软琼脂克隆形成实验验证CAR对SKOV3侵袭转移表型的影响。结果:4株卵巢癌细胞中,CAR表达水平不同程度下调,其中SKOV3细胞CAR表达缺失。转染后,SKOV3细胞CARmRNA和蛋白质水平表达均明显增高;细胞间粘附力明显增强;软琼脂克隆实验显示转染细胞每孔克隆形成数(25.3±8.9)明显低于未转染组(88.8±14.0)和转染空质粒组(82.5±19.4)。结论:外源性CAR基因的导入可以增强卵巢癌细胞SKOV3间的粘附性,从而抑制肿瘤细胞的侵袭转移表型。     

卵巢癌细胞株SKOV-3ipl对缺氧的适应及其与VEGF、Bcl-2蛋白表达的关系

目的 :研究卵巢癌细胞株SKOV 3ipl在缺氧条件下的适应力及其与VEGF、Bcl 2蛋白表达的关系。方法 :贴壁培养卵巢癌细胞株SKOV 3ipl在缺氧条件下培养 (85 %N2 ,5 %CO2 ,1 0 %H2 ,极低氧浓度 :<1 0 0×1 0 - 6 ) ,在不同缺氧时相收集细胞 ,应用免疫细胞化学PARP标记检测细胞凋亡、免疫细胞化学检测VEGF的表达 ,Westernblot检测PCNA及Bcl 2蛋白表达的改变。结果 :缺氧培养 8至 1 6小时后 ,凋亡细胞增加 (与缺氧 0小时相比 ,P <0 .0 1 ) ,PCNA表达下降 (与缺氧 0小时相比 ,P <0 .0 1 )、VEGF无表达 ;缺氧 2 4小时后细胞凋亡与 0小时相比 ,差异无显著性 ,PCNA表达回升 ,Bcl 2蛋白及VEGF表达明显升高 (与缺氧 0小时相比 ,P <0 .0 1 )。结论 :卵巢癌细胞株SKOV 3ipl在缺氧培养 8至 1 6小时内发生凋亡、细胞增殖抑制 ,2 4小时后对缺氧耐受 ,细胞增殖 ;细胞对缺氧的适应可能与VEGF及Bcl 2蛋白表达增加有关     

内皮抑素抑制卵巢癌细胞生长的初步研究

目的：内皮抑素是一种特异性血管内皮生长抑制因子,本研究目的在于探讨人内皮抑素对卵巢癌SKOV3细胞生长的抑制作用及其机制。方法：MTT法观测内皮抑素对SKOV3细胞的生长抑制作用;透射电镜观察内皮抑素处理SKOV3细胞后细胞的凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;RT-PCR法检测内皮抑素处理SKOV3细胞后凋亡调控基因bcl-2和baxmRNA的表达。结果：内皮抑素具有体外抑制SK-OV3细胞增殖的作用,15μg/ml内皮抑素组的A490值（0.454）明显低于PBS对照组（0.686）（P〈0.01）;内皮抑素能诱导SKOV3细胞凋亡;内皮抑素对SKOV3细胞中bcl-2和bax的表达无明显改变;结论：人内皮抑素具有抑制SKOV3细胞生长的作用,其机制可能与诱发细胞凋亡相关。     

RNA干扰survivin基因对卵巢癌细胞生长凋亡及药物敏感性的影响

目的 探讨下调survivin基因对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞株SKOV3/DDP细胞生长、凋亡及药物敏感性的影响.方法 构建survivin基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体pSilencer-survivin,用脂质体方法转染SKOV3/DDP细胞株,另设未转染组和转染pSilencer-control组作为对照.显微镜下观察转染前后细胞的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测survivinmRNA及蛋白的表达,二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化.各组细胞加入DDP,检测其对DDP药物敏感性的影响.结果 survivin siRNA可明显下调SKOV3/DDP细胞中survivin mRNA及蛋白表达水平.SKOV3/DDP细胞生长受到明显抑制,生长曲线低平.转染48 h后,转染pSilencer-survivin组细胞凋亡率为19.1%,明显高于末转染组(2.6%)和转染pSilencer-control组(3.5%),G1/G0期细胞所占的比例增高,而G2/M期细胞所占的比例降低.转染pSilencer-survivin组细胞的IC50明显降低,为1.16 μg/mi.结论 survivin siRNA可下调SKOV3/DDP细胞中survivin的表达,使细胞生长减慢,凋亡增加,对DDP的药物敏感性增强.     

SPAG6促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨抑制精子相关抗原6（sperm-associated antigen 6,SPAG6）对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养正常卵巢上皮细胞（NOE-71）和卵巢癌细胞（SKOV-3、OVCAR-3）,采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）实验检测细胞中SPAG6基因的表达。将4种潜在抑制SPAG6基因表达的“SPAG6-shRNA”质粒分别转染到SKOV-3细胞,RT-qPCR和Western blot实验筛选有效抑制SPAG6基因表达的细胞株;采用细胞计数法和平板克隆实验检测抑制SPAG6基因表达对卵巢癌细胞增殖的影响;运用细胞划痕实验和Transwell实验检测抑制SPAG6基因表达对细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞实验检测抑制SPAG6基因表达对细胞周期的影响;免疫荧光实验和Western blot检测在SKOV-3细胞中抑制SPAG6表达对p27kip1分布的影响。结果:SPAG6基因在卵巢癌细胞SKOV-3和OVCAR-3中的表达均显著高于正常卵巢上皮细胞NOE-71,且在SKOV-3细胞中表达最强。RT-qPCR和Western blot实验显示2种“SPAG6-shRNA”质粒能够有效抑制SKOV-3细胞中SPAG6基因的表达;与对照组细胞相比,抑制SPAG6基因表达能够降低SKOV-3细胞的增殖,差异有统计学意义（P＜0.01）;平板克隆实验显示抑制SPAG6基因表达能降低SKOV-3细胞的克隆形成率,差异有统计学意义（P＜0.01）;细胞划痕实验和Transwell实验显示抑制SPAG6基因表达能够降低卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力（P＜0.01）;流式细胞实验显示抑制SPAG6基因表达能使细胞G0/G1期显著上调,S期显著下调(P＜0.01)。SKOV-3细胞中抑制SPAG6表达可降低细胞质中p27kip1的水平而增加细胞核中p27kip1的水平。结论:SPAG6促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

洛铂诱导顺铂耐药卵巢癌SKOV3/ DDP细胞的凋亡

 目的 探讨洛铂体外诱导人卵巢癌顺铂耐药SKOV3／DDP细胞凋亡及其机制。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定不同浓度和时间洛铂对SKOV3／DDP细胞的生长抑制作用，并与其亲本细胞SKOV3（敏感株）相比较；进一步通过光镜及透射电镜观察SKOV3／DDP细胞的形态学改变；并采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 洛铂作用SK0V3／DDP细胞的增殖呈时间剂量依赖模式受到抑制，与SKOV3细胞相比，差异无统计学意义（P〉0．05）；一定浓度的SKOV3／DDP作用一定时间，可诱导SKOV3／DDP细胞发生凋亡；光镜和透射电镜下可见典型的凋亡细胞形态学改变；流式细胞技术分析发现洛铂作用首先引起细胞周期分布的改变，随用药时间的延长，凋亡率逐渐升高。结论 洛铂通过诱导凋亡而抑制体外培养的SKOV3／DDP细胞生长，其机制可能与细胞G0／G1期阻滞有关。     

人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及生物学性状的鉴定

目的　建立人卵巢上皮性癌裸鼠皮下移植瘤模型 ,为人卵巢癌的诊断及治疗诸方面提供理想的在体研究工具。方法体外培养人卵巢上皮癌细胞株SKOV 3 ,采用皮下注射方式接种至裸小鼠 ,待肿瘤直径达 0 .8cm～ 1.0cm时 ,将其切下剪成直径为1mm～ 2mm小块 ,再接种至另一裸鼠皮下进行传代。病理组织学检查或透射电镜观察肿瘤 ,并观察染色体特征 ,检测裸鼠血清和肿瘤组织中肿瘤标志物CA12 5、CEA、AFP的浓度。结果　成功地建立了人卵巢上皮性癌细胞株SKOV 3裸小鼠皮下移植瘤模型 ,并传至第二代 ,原代接种成功率为 69.2 % (2 7/ 3 9) ,鼠间传代移植成功率为 10 0 .0 % ,具备人肿瘤生物学特点 ,但未观察到转移行为。裸鼠血清CA 12 5浓度低 ,但在肿瘤冻融产物中较高。结论　建立的人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型具有人卵巢癌特征 ,可用于研究卵巢癌的生物学特性 ,为卵巢癌临床诊断及治疗研究提供有用工具。     

FAP-1分子对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响

目的探讨Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响.方法采用免疫印记法(Western blot)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,检测了经FAP-1反义寡核苷酸(FAP-1ASODN)封闭前后FAP-1蛋白与核酸在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达水平;应用四唑盐比色法(MTT法)和流式细胞术(FCM)检测了经抗Fas激活性抗体DX2诱导凋亡后FAP-1分子对SKOV3细胞凋亡行为的影响.结果FAP-1蛋白与mRNA在卵巢癌细胞株SKOV3中均有明显表达.当用DX2以不同时间和不同浓度诱导凋亡后,DX2 FAP-1ASODN组在12、24、48和72 h的细胞抑制率约为DX2组的1～2倍,细胞凋亡率约为后者的2～4倍,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);在DX2低、中、高3个浓度时,DX2 FAP-1ASODN组的细胞抑制率为(20.94±1.15)%、(34.70±1.24)%、(45.45±2.80)%,DX2组分别为(11.42±0.38)%、(18.33±1.29)%、(28.75±1.81)%,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);而在DX2组与DX2 FAP-1SODN组间无显著性差异(P＞0.05).结论FAP-1分子在卵巢癌细胞SKOV3中有明显表达,且具有抵抗Fas介导凋亡的功能,而FAP-1ASODN可以明显提高卵巢癌细胞对凋亡的敏感性,可能对卵巢癌的发病与治疗具有重要意义.     

RNA干扰Survivin基因沉默对卵巢癌SKOV3及SKOV3/ADM细胞凋亡的影响

背景与目的:RNA干扰技术被广泛应用于肿瘤基因治疗、抗病毒感染、基因药物筛选等许多领域。Survivin基因在卵巢癌细胞株SKOV3及其耐药株SKOV3/ADM中高表达,是进行卵巢癌基因治疗理想的靶点。本研究探讨Survivin基因沉默后对卵巢癌细胞SKOV3及其耐药株SKOV3/ADM凋亡的影响。方法:将重组质粒pshRNA鄄Survivin以脂质体转染至SKOV3、SKOV3/ADM细胞。分别用半定量RT鄄PCR、Westernblot检测细胞内SurvivinmRNA和蛋白表达的变化,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色法、TUNEL及流式细胞仪检测重组质粒诱导细胞凋亡的情况。结果:转染pshRNA鄄Survivin后,SKOV3、SKOV3/ADM细胞中SurvivinmRNA拷贝数明显减少,抑制率分别为83.79%和91.56%,蛋白质的表达水平显著降低;干扰组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,Survivin沉默后48h,SKOV3、SKOV3/ADM的细胞凋亡率分别为14.05%和21.02%,而在对照组未检测到明显凋亡。结论:重组质粒pshRNA鄄Survivin可明显抑制SKOV3、SKOV3/ADM细胞内SurvivinmRNA和蛋白的表达,介导卵巢癌细胞凋亡。     

格尔德霉素对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的:研究格尔德霉素(geldanamycin,GA)对人卵巢癌SKOV3细胞的体外抑制作用,探讨GA抑制SKOV3细胞增殖及诱导其凋亡的可能机制。方法:MTT法检测GA单独或联合顺铂(cisplatin)对SKOV3细胞的增殖抑制作用;FCM法检测GA作用后SKOV3细胞周期及凋亡率的变化;分别应用免疫细胞化学法(immunocytochemistory,ICC)和FCM法检测GA处理SKOV3细胞48h后细胞内Akt、Raf-1蛋白的表达变化。结果:GA对SKOV3细胞的体外增殖可产生明显的抑制作用(P<0.05),该作用随着GA浓度的增高和作用时间的延长而增强。而且,GA可增强顺铂对SKOV3细胞的增殖抑制作用,在一定浓度范围内随着GA浓度的增高,两药联合应用对SKOV3细胞的增殖抑制作用越强。经0～2000nmol/L GA作用SKOV3细胞48h后,G2/M期细胞逐渐增多,细胞凋亡率也显著升高(P<0.05)。ICC和FCM法检测结果均表明,经0～2000nmol/L GA处理48h后,SKOV3细胞中Akt、Raf-1蛋白的表达水平随着药物浓度增高而逐渐降低(P<0.05)。结论:GA能够对卵巢癌SKOV3细胞产生明显的体外增殖抑制作用,并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调卵巢癌细胞中Akt和Raf-1蛋白表达相关。     

Gankyrin基因沉默对人卵巢癌SKOV3/CDDP细胞顺铂耐药性的逆转作用和机制

背景与目的：卵巢癌是常见的妇科肿瘤,抗肿瘤药耐药性的产生是卵巢癌治疗失败的主要原因之一,Gankyrin基因被认为与肿瘤耐药性密切相关,本文探讨了Gankyrin基因沉默对卵巢癌耐顺铂细胞系SKOV3/DDP顺铂耐药性的逆转作用及机制。方法：应用real-time PCR技术考察Gankyrin在SKOV3和SKOV3/DDP细胞中的表达,应用MTS法检测Gankyrin对SKOV3/DDP细胞顺铂耐受性的影响,应用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡和细胞内罗丹明-123(Rhodamine-123,Rh-123)含量的变化,Western blot和real-time PCR技术检测肿瘤细胞耐药相关蛋白MDR1、Caspase-3/8、Survivin和Bcl-2蛋白表达,Western blot法检测p53、NF-κB和PTEN蛋白表达和AKT磷酸化水平。结果：Gankyrin在SKOV3/DDP细胞中表达升高,沉默Gankyrin基因后可增加SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性。基因沉默前后耐药逆转倍数(resistant factor,RF)为1.81和2.45,肿瘤细胞中Rh-123含量提高了1.73和2.42倍,细胞凋亡率是对照组的2.23倍和4.23倍,耐药相关蛋白MDR1、Survivin和Bcl-2蛋白水平显著下降,MDR1 mRNA表达是对照组的62.8%和21.6%,Survivin mRNA表达是对照组的24.5%和10.3%,Bcl-2 mRNA表达是对照组的47.5%和18.4%,Caspase-3/8、p53和PTEN表达水平上升,AKT磷酸化和NF-κB水平下降。结论：沉默Gankyrin基因可逆转SKOV3/DDP对顺铂的耐药性,可能与抑制药物外排,促进细胞凋亡有关,PTEN/AKT/NF-κB/p53信号通路可能是其中心环节。     

雄黄抑制卵巢癌细胞株SKOV3增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 研究中药雄黄主要成分As₄S₄对卵巢癌细胞株SKOV3细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法 不同浓度As₄S₄(20 μmol/L、40 μmol/L、60 μmol/L、80 μmol/L),处理SKOV3细胞24 h,48 h,72 h后,透射电镜观察细胞形态变化;MTT法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化;RT-PCR法和Westernblot法检测As₄S₄对卵巢癌细胞株SKOV3细胞Bcl-2和Bax mRNA和蛋白的表达影响。结果 不同浓度As₄S₄处理的卵巢癌细胞株SKOV3,细胞增殖受到抑制,作用呈明显的浓度、时间依赖性,差异有统计学意义(P＜0.01);流式细胞仪进行细胞周期DNA成分分析结果显示,随着As₄S₄浓度的增加SKOV3细胞G₀/G₁期细胞百分比明显降低,S期细胞百分比上升;Bcl-2的表达随药物作用浓度的增加而递减,Bax的表达随药物作用浓度的增加而增强。结论 四硫化四砷具有抑制SKOV3细胞生长增殖的作用,其作用机制与诱发细胞凋亡和调节Bcl-2与Bax表达有关。     

重组改构人TNF逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药性及其机制

目的: 探讨重组改构人肿瘤坏死因子（recombinant mutant human tumor necrosis factor, rmhTNF）体外逆转人卵巢癌多药耐药细胞株SKOV3/DDP的耐顺铂（cisplatin,又称DDP）效应及其可能存在的作用机制。方法: 体外培养人卵巢癌多药耐药细胞株SKOV3/DDP，以MTT法检测rmhTNF对此耐药株的细胞毒作用，确定其对此细胞株的无毒剂量;同法测定无毒剂量rmhTNF干预后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化，通过流式细胞术检测rmhTNF干预不同时间段SKOV3/DDP细胞株中GSTπ蛋白的表达，RTPCR方法分析rmhTNF处理SKOV3/DDP细胞前后MDR1基因的表达水平。结果: （1）50～12234 U/ml rmhTNF对SKOV3/DDP细胞增殖无明显抑制作用（细胞存活率均﹥90%），因此选用100 U/ml 作为逆转剂量（无毒剂量）;（2）单用DDP 24、48、72 h 的IC50为(23.29±0.43)、(8.97±0.69)、(6.43±0.79)μg/ml，联合100 U/ml rmhTNF和DDP用药使SKOV3/DDP的IC50分别降至（19.50±0.50）、（4.34±0.43）、（2.44±0.02）μg/ml，逆转倍数分别为1.19、206、2.64倍;（3）100 U/ml rmhTNF干预0、24、48、72 h后SKOV3/DDP细胞内GSTπ蛋白的表达随作用时间延长降低，MDR1基因的表达随作用时间延长降低。结论: rmhTNF对SKOV3/DDP有逆转耐药作用，其机制可能与下调GSTπ蛋白及MDR1基因表达有关。     

Roles of clusterin in progression,chemoresistance and metastasis of human ovarian cancer

Clusterin (CLU) is a multivalent glycoprotein with ubiquitous tissue distribution. To address the possible differential functional roles assumed by different isoforms of CLU in the progression of human ovarian cancer, we constructed 2 human ovarian cancer cell models that represent examples of contradistinctive CLU expression levels. One is constitutively overexpressing different clusterin isoforms in SKOV3 cells by transfection of the 3 different expression vectors, another is silencing the intrinsically expressing clusterin in cisplatin‐resistant human A2780‐cis(CP70) tumor cells with the usage of shRNA‐mediated CLU gene silencing. Then, the different cellular localization, biological effects, and functional roles played in tumor progression and drug resistances were studied. We found that (i) in the distinct cellular contexts of human ovarian carcinoma SKOV3 and CP70 cells assayed, sCLU is a central molecule in cell homeostasis that functions as a cytoprotective protein, whereas nCLU is proapoptotic; (ii) In SKOV3 cells, nuclear localization of the truncated CLU is NLS dependent, without which the pnCLU protein was sequestrated in cytoplasm to prevent cytotoxicity. (iii) sCLU plays a significant role in the development of the chemoresistance phenotype in ovarian cancer cells. Moreover, with the CLU‐specific shRNA oligonucleotides, we successfully sensitized cells for chemotherapy, and inhibited cells' proliferation, migration and invasion. Collectively, our results reveal that, CLU gene expression might play a crucial role in ovarian cancer progression, adaptation and eventual resistance to chemotherapy through differential processing of CLU isoforms. Specifically, sCLU as an antiapoptotic protein, upregulated in an adaptive cell‐survival manner by chemotherapy, confers resistance to various cell‐death triggers. © 2009 UICC     

Survivin反义核酸诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡及对 docetaxel的增敏作用

背景与目的:Survivin在大多数肿瘤组织中特异性高表达,并与肿瘤细胞的凋亡和耐药密切相关。本研究探讨Survivin反义真核表达载体(anti-pcDNA3-svv)对卵巢癌细胞SKOV3凋亡的诱导作用及对docetaxel的增敏作用。方法:采用Survivin反义核酸瞬时电转染法转染SKOV3细胞,筛选出阳性细胞株。以RT-PCR检测survivinmRNA的表达,Westernblot检测Survivin蛋白的表达。用流式细胞仪和透射电镜观察Survivin反义核酸对SKOV3细胞凋亡的诱导作用,MTT法检测其对docetaxel的增敏作用。结果:稳定表达anti-pcDNA3-svv的SKOV3细胞survivinmRNA及Survivin蛋白均比未转染者明显降低,透射电镜下可见稳定转染组细胞呈凋亡晚期变化,流式细胞仪显示其凋亡率为19%,docetaxel对实验组细胞的IC50值为(13.3±2.2)ng/ml,而对照组为(53.2±2.4)ng/ml,差异具有显著性(P<0.05)。结论:Survivin反义核酸可诱导SKOV3细胞凋亡,增强SKOV3细胞对docetaxel的敏感性。