冬虫夏草水提液抗脂质过氧化损伤的实验研究

在细胞水平研究冬虫夏草水提液对心肌细胞缺氧再给氧时细胞内丙二醛（ＭＤＡ）含量、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性及细胞膜脂质流动性的影响，探讨冬虫夏草抗脂质过氧化作用及其可能机制。结果显示缺氧再给氧组心肌细胞ＭＤＡ含量增加，ＳＯＤ活性降低，细胞膜脂质流动性下降，与对照组比较，Ｐ均〈０．０１；缺氧再给氧＋冬虫夏草组上述改变减轻，其中１００μｇ．ｍｌ＾－１．１０００μｇ．ｍｌ＾－１组上述指标与缺氧再给氧组及     

心气虚证心肌细胞模型β受体、ET和NOS基因表达的改变

目的：探讨心气虚证心肌细胞模型β受体、田和NOS基因表达的改变。方法：采取“培养心肌细胞缺氧再给氧损伤方法”建立心气虚细胞模型，设对照组和模型组，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）基因表达检测心气虚细胞模型β受体、ET和NOS基因表达情况。结果：心气虚细胞模型与对照组的β1受体mRNA、ET mRNA和NOS mRNA改变情况相比较，差异非常显著（P〈0.01）。结论：心气虚证的分子基因水平的病理生理学基础与β1受体、田和NOS基因表达有关。     

参芪心复康对心气虚细胞模型ET和NOS基因表达的影响

目的研究参芪心复康对心气虚细胞模型内皮素(ET)和一氧化氮合酶(NOS)基因表达的影响.方法采取培养心肌细胞缺氧再给氧损伤的方法建立心气虚细胞模型.设参芪心复康组、人参组、水蛭组、丹参组、对照组、模型组,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)基因表达检测心气虚细胞模型和各中药治疗组的ET和NOS基因表达情况.结果各中药组ET和NOS mRNA表达与心气虚的细胞模型的ET和NOS表达有显著性差异(P＜0.01);参芪心复康组与其他中药组的ET和NOS mRNA表达情况有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05).结论参芪心复康防治心气虚证的机制与其干预ET和NOS mRNA表达有关.     

益气通络丹抗缺氧再给氧心肌细胞凋亡的实验研究

本实验采用ＰＩ与ＡＮＮＥＸＩＮ－ｖ双染法,用流式细胞仪检测益气通络丹含药血清对缺氧－再给氧心肌细胞凋亡的作用。实验结果表明：缺氧２４ｈ再给氧４ｈ能导致体外培养心肌细胞凋亡,提取ＤＮＡ电泳表现为梯形特征（ＬＡＤＤＥＲ）;益气通络丹含药血清能显著降低缺氧－再给氧心肌细胞的凋亡比率,流式细胞仪检测结果表明,益气通络丹低、中、高剂量含药血清细胞凋亡率较缺氧－再给氧组明显下降（Ｐ〈０．０１）,其作用与剂量相     

参芪心复康对心气虚细胞模型β1受体基因表达的影响

目的:研究参芪心复康对心气虚细胞模型β1受体基因表达的影响.方法:采取"培养心肌细胞缺氧再给氧损伤"的方法建立心气虚细胞模型.设空白对照组、模型对照组、人参组、水蛭组、丹参组、参芪心复康组.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)基因表达检测心气虚细胞模型和各中药治疗组的β1受体基因表达情况.结果:各中药组β1受体mR-NA表达与心气虚的细胞模型的β1受体mRNA表达比较差异有显著性(P＜0.01),参芪心复康组与其他中药组的β1受体mRNA表达情况比较差异有显著性(P＜0.01).结论:参芪心复康防治心气虚证的机制与其干预β1受体mRNA表达有关.     

山楂叶总黄酮对缺氧再给氧心肌细胞的保护作用及机制研究

目的:探讨山楂叶总黄酮(HLF)对培养乳大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用及其机制。方法:采用体外培养的乳大鼠心肌细胞建立缺氧/再给氧心肌细胞损伤模型,实验分为5组:空白对照组;模型组(A/R组),缺氧再给氧组;3个HLF给药组,并于缺氧及再给氧开始时分别加入终浓度为10、30、100 mg/L的HLF,观察HLF对细胞上清液中缺氧及再给氧后LDH、CK、AST漏出量,MDA含量、SOD活性,NO含量、NOS活性的影响;用MTT法检测HLF对缺氧再给氧损伤心肌细胞线粒体的保护作用;用流式细胞仪测定HLF对缺氧再给氧损伤心肌细胞凋亡的影响。结果:HLF可抑制缺氧及再给氧后LDH、CK、AST漏出量,降低MDA含量,提高SOD活性,降低NO含量和NOS活性;升高A/R细胞OD吸光度值,并能明显抑制缺氧再给氧损伤心肌细胞凋亡。结论:HLF对培养心肌细胞的缺氧再给氧损伤具有保护作用,提示其作用机制与增强细胞抗氧化作用,减少自由基及脂质过氧化物导致的细胞膜损伤和抑制细胞凋亡有关。     

穿心草山酮对心肌细胞缺氧—再给氧损伤的保护作用

以Ｌａａｒｓｅ‘ｓ方法建立心肌细胞缺氧－再给氧模型,缺糖缺氧６０ｍｉｎ,再给氧３０ｍｉｎ,结果发现心释放ＬＤＨ含量显著增加,细胞膜流动性下降,再给氧组上述各指标改变加剧。山酮能明显提高心肌细胞的成活率,减少乳酸脱氢酶的释放,增加细胞膜流动性,减少心肌细胞膜的损伤。证明有明显抗心肌细胞缺氧－再给氧损伤作用。     

失血再灌注胃体部粘膜损伤及丹参提取物F与甲氰咪胍防治作用的比较

观察失血再灌注胃体部粘膜损伤及丹参提取物Ｆ与甲氰咪胍抗胃粘膜损伤的作用。方法：复制大鼠失血性休克再灌注损伤模型。实验分生理盐水（ＮＳ）组、丹参提取物Ｆ（ＤＳＥＦ）组及甲氰咪胍（ＣＩ）组。结果：（１）ＤＳＥＦ组及 ＣＩ组的胃体部粘膜损伤指数及重度损伤均明显低于 ＮＳ组（ Ｐ＜ ０． ０１），但ＤＳＥＦ组与 ＣＩ组间无显著性差鼻（ Ｐ＞０．０５）。（２） ＤＳＥＦ组的前列腺素 Ｅ２（ＰＧＥ２）、 ６－酮－前列腺素Ｆ１α／ （６－ｋｅＦ－ｔｏ－ＰＧＦ１α）及 ６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α／血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）比值明显高于ＮＳ及ＣＩ组（Ｐ＜０．０１， Ｐ＜０．０５）；而 ＴＸＢ２含量明显低于ＮＳ组及ＣＩ组（Ｐ＜０．０５）。但ＣＩ组与ＮＳ组间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。（３）ＤＳＥＦ组及ＣＩ组的细胞内钙含量明显低于 ＮＳ组（Ｐ＜ ０．０１），而 ＤＳＥＦ组与 ＣＩ组间无显著性差异（Ｐ＞ ０． ０５）。结论：在失血性休克再灌注诱导的大鼠胃体部粘膜损伤中，ＤＳＥＦ与 ＣＩ均具有防治作用，但机制不同。 ＤＳＥＦ既具有增强胃粘膜保护因子的作用又具有削弱攻击因子的作用，甲氰咪胍只有抵抗攻击因子的作用。     

定心方药物血清对H_2O_2致培养乳鼠心肌细胞损伤的研究

目的：研究定心方药物血清对过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）致培养乳鼠心肌细胞损伤的影响。方法：用Ｈ２Ｏ２处理心肌细胞,以建立心肌细胞的Ｈ２Ｏ２损伤模型。用血清药理学研究方法制备定心方药物血清;比色法测定乳酸脱氢酶活性;戊巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化物（ＭＤＡ）的含量;ＭＴＴ法测定细胞活力。结果：Ｈ２Ｏ２对心肌细胞有显著的损伤作用。定心方（Ｄｉｎｇｘｉｎ Ｒｅｃｉｐｅ,ＤＸＲ）能明显地降低心肌细胞损伤指数．减少细胞内 ＭＤＡ的生成和提高细胞活力（Ｐ＜０．０１）。结论：ＤＸＲ对 Ｈ２Ｏ２致心肌细胞损伤有保护作用,其机理可能与其减少膜脂质过氧化物生成有关;ＤＸＲ可用于防治一些与氧自由基密切相关的心血管疾病和冠心病、心肌缺血／再灌注（ＭＩ／Ｒ）损伤等。     

益气通络方对缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达影响的血清药理学研究

目的：观察益气通络方含药血清对缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达的作用。方法：采用流式细胞仪检测缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达强度。结果：1．缺氧24h、再给氧4h组心肌细胞bcl-2阳性表达比率增加,与正常对照组比较具有显著差异（P＜0．01）;2．益气通络方低、中、高剂量含药血清组bcl-2阳性表达比率较单纯缺氧再给氧组增加,组间比较呈显著差异（P＜0．01）。讨论：缺氧再给氧能诱导心肌细胞bcl-2基因表达,益气通络方含药血清可增强其表达,可能是益气通络方保护缺氧再给氧心肌细胞,发挥抗缺血再灌注损伤的重要机制之一。     

芳香新塔花黄酮抗氧化活性及对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的 探讨芳香新塔花黄酮(ZCF)的抗氧化活性,以及对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响.方法 采用二苯代苦味酰基自由基(DPPH自由基)清除法测定ZCF的自由基捕获清除能力.体外培养原代SD乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧-复氧损伤模型,用MTT法测定药物对心肌细胞存活率的影响,测定给药后丙二醛(MDA)的变化.结果...     

缺氧复氧联合连二硫酸钠损伤制备心气虚细胞模型

目的：探讨心气虚细胞模型的制备方法。方法：体外培养心肌细胞,分成正常培养组、缺氧3h、4h复氧2h模型组和药物组及分别加入1mmol／LNa2S2O4、2mmol／LNa2S204、3mmol／LNa2S204-4-缺氧3h、4h复氧2h模型组和药物组。MTF法检测含药血清对细胞的毒性。以检测培养上清心肌细胞乳酸脱氢酶（LDH）为指标。结果：单纯缺氧／复氧以及连二硫酸钠合并缺氧／复氧均可造成心肌细胞损伤,随着缺氧时间的延长和连二硫酸钠浓度的增加,对心肌细胞的破坏程度不断加重。加入益气活血方药物血清干预后,对心肌细胞有一定的保护作用。结论：根据实验结果,选择1mmol／LNa2S2O4合并缺氧无糖4h复氧2h做为心气虚细胞模型的造模条件较好。     

四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞细胞凋亡的影响,探讨其心肌细胞保护作用。方法采用胰蛋白和胶原酶联合消化的方法原代培养的SD乳鼠心肌细胞,利用高纯氮气建立心肌细胞缺氧／复氧模型。实验分为正常组、模型组和药物干预组（予四妙勇安汤合生脉饮）。采用流式细胞术AnnexinV-FITC／PI双染法检测心肌细胞凋亡率。结果与正常组比较,模型组及药物干预组心肌细胞凋亡率均升高（P〈0．05）。与模型组比较,药物干预组心肌细胞凋亡率下降（P〈0．05）。结论四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧后心肌细胞凋亡有保护作用。     

黄芩茎叶总黄酮对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮(scutellaria baicalelensis stem leaf total flavonoid SSTF)对培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧时凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,缺氧(hypoxia H)2h后,复氧(reoxygenation R)4h制备缺氧/复氧损伤模型。以免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达变化。心肌细胞损伤程度以心肌细胞存活率表示。结果:缺氧2h再复氧4h,心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达指数(positive expressionindex PEI)显著低于对照组(P<0.01),Bax蛋白PEI显著高于对照组(P<0.01)。细胞存活率明显低于对照组(P<0.05)。SSTF干预组Bcl-2蛋白PEI明显高于缺氧/复氧组(P<0.05),Bax蛋白PEI显著低于缺氧/复氧组(P<0.05),细胞存活率明显高于缺氧/复氧组(P<0.05)。结论:心肌细胞缺氧再复氧时,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增强;细胞存活率降低。SSTF可通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,减少细胞凋亡,从而减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

黄连干预心肌缺血损伤的体内外实验研究

目的利用体内、体外实验模型研究单味黄连对心肌(细胞)缺血、缺氧的保护作用及机制。方法结扎左冠状动脉复制大鼠心肌缺血模型,灌胃给予黄连粗提物61.27 mg/(kg.d),每日1次,7 d后测定心电图、血清酶学指标;建立缺氧复氧心肌细胞模型,给予黄连粗提物(25μg/mL),测定细胞培养液中乳酸脱氢酶的漏出和细胞活力。结果黄连能对抗心肌缺血引起的Ⅱ导联心电图ST-T段的抬高(P0.05),降低血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙二醛(P0.05),升高超氧化物歧化酶(P0.05);减少缺氧复氧心肌细胞乳酸脱氢酶的漏出(P0.05),而不影响细胞相对活力。结论黄连具有保护心肌(细胞)作用,其机制是通过改善心肌(细胞)缺血、氧化损伤状态而实现。     

心宁复方抗心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的：从氧自由基损伤角度探讨心宁复方有效部位群心肌保护作用机制。方法：用原代培养的心肌细胞复制SD大鼠乳鼠缺氧／复氧损伤模型,设立空白对照组,缺氧／复氧组,合贝爽注射液组,心宁复方大、中、小剂量组共6个组。各给药组在缺氧期及复氧期分别给药,测定各组心肌细胞活力、乳酸脱氢酶（LDH）、心肌细胞SOD活性、MDA含量。结果：心宁复方能明显提高受损心肌细胞的活力,降低LDH活性表达,增强SOD活性,减少MDA的含量。结论：抑制心肌细胞氧自由基损伤可能是心宁复方心肌细胞保护作用机制之一。     

黄芪多糖抑制缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞凋亡与自噬机制研究

目的:探讨黄芪多糖(APS)对缺氧/复氧(H/R)所致乳鼠心肌细胞凋亡与自噬抑制作用的相关机制.方法:分离并体外培养乳鼠心肌细胞3 d后制备H/R损伤细胞模型,设正常对照组、H/R组、APS低、中、高剂量(20、40、80μmol/ml)组,各组于造模前30 min给药处理.复氧2 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率...     

黄连解毒汤有效成分对缺氧/复氧时脑微血管内皮细胞核因子-κB的影响

目的:研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对缺氧/复氧损伤时大鼠脑微血管内皮细胞的保护机制。方法:建立离体大鼠脑微血管内皮细胞缺氧4 h复氧12 h损伤模型。用0.128,0.064,0.032μmol.mL^-1栀子苷,0.028,0.014,0.007μmol.mL^-1黄芩苷和0.024,0.012,0.006μmol.mL^-1小檗碱分别作用于损伤的细胞,采用免疫细胞化学方法和图象定量分析技术检测核因子-κB(NF-κB)亚单位p65的表达,计算平均吸光度和平均面积,比较NF-κB蛋白表达的变化,计算核移位百分率和细胞核与细胞浆的透光度比值比较NF-κB核移位的变化。结果:模型组NF-κB蛋白表达和核移位显著高于正常组(P<0.01)。所有给药组的平均吸光度值低于模型组,但差异无统计学意义。所有给药组的平均面积均低于模型组(P<0.01)。所有给药组的核移位百分率低于模型组且高于正常组(P<0.01,P<0.01)。所有给药组细胞核与细胞浆的透光度比值高于模型组(P<0.01)。结论:栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄连解毒汤有效成分能够保护缺氧/复氧损伤的大鼠脑微血管内皮细胞,其保护机制之一是抑制NF-κB蛋白表达和核移位。     

太白楤木对成纤维细胞增殖及功能的影响

目的探讨太白楤木对成纤维细胞增殖、活力及对培养上清中透明质酸(HA)产生的影响,研究太白楤木抗肝纤维化机制。方法采用体外培养的NIH3T3(成纤维细胞)作为肝星状细胞(HSC)的替代模型,常规培养,太白楤木中药血清作用于细胞,用MTT法检测太白楤木中药血清对NIH3T3细胞增殖的影响;用放射免疫法测定培养上清中HA的生成。结果太白楤木对细胞无明显毒性,5%浓度太白楤木中药血清可显著抑制细胞增殖(P<0.01),降低NIH3T3细胞培养上清中HA含量,与对照组比较差异显著(P<0.05)。结论太白楤木中药血清可显著抑制NIH3T3细胞增殖和HA的合成,在体外具有一定的抗肝纤维化作用。     

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??OBJECTIVE To observe the effect and mechanism of Bauhinia championii flavones (BCF) on anti-hypoxia/reoxygenation injury in cardiomyocytes via inhibiting necroptosis. METHODS The cardiomyocytes hypoxia/reoxygenation injury model was developed and pretreated with Bauhinia championii flavones. ELISA was used to evaluate the contents of TNF-??, and the activities of T-AOC were determined by ultraviolet spectrophotometric method. The protein expression of RIPK3 was observed by Western-blotting, and the necroptosis rate was determined by using Annex v-FITC/PI double staining.RESULTS Compared with model group, Bauhinia championii flavones pretreatment alleviated cardiomyocytes injury, increased T-AOC level, decreased the activity of TNF-??, down-regulated the expression of RIPK3, and inhibited cardiomyocytes necroptosis(P<0.05). It had synergistic effect when combined BCF with necrostatin-1(P<0.05). CONCLUSION BCF can inhibit necroptosis and has protective effects on hypoxia/reoxygenation injury, which are associated with increasing the level of T-AOC, down-regulating TNF-?? and RIPK3, and decreasing the cardiomyocytes necroptosis rate.