TPO基因修饰的基质细胞对巨核系细胞的定向扩增作用

目的研究TPO基因修饰的基质细胞对CD34+造血细胞向巨核系细胞定向增殖分化的影响.方法将TPO cDNA构建到pBabe/pura中,通过"乒乓转染法"获得产高滴度逆转录病毒载体的包装细胞;利用所获的病毒上清转染基质细胞HFCL,用Northern blot检测细胞中TPO基因的表达,并利用TPO依赖株检测上清中的TPO活性;以未转基因的HFCL为对照,将CD34+造血细胞在TPO基因修饰的HFCL支持下扩增,用流式细胞仪检测扩增细胞中表型为CD34+CD41+和表型为CD41-CD61+细胞的比例.结果基质细胞HFCL能够有效表达外源性TPO基因,在HFCL/TPO培养上清中有0 75 ng/ml水平的TPO活性;并且在HFCL/TPO支持下,CD34+造血细胞经过7 d扩增后,CD34+CD41+细胞的比例为(13.7±2.0)%,HFCL为(6.5±1.8)%(P＜0.01);CD41+CD61+细胞的比例为(11.9±0.7)%,略高于HFCL的(10.6±1.5)%(P＞0.05).结论基质细胞能够有效表达外源性TPO基因和其蛋白,而且TPO基因修饰的基质细胞能显著促进CD34+CD41+巨核祖细胞的扩增,但对较成熟的CD41+CD61+巨核细胞影响不明显.     

呼出气一氧化氮及血清白介素23水平与成人支气管哮喘相关性分析

目的研究呼出气一氧化氮(FeNO)浓度及血清白介素23(IL-23)水平与支气管哮喘的相关性。方法选取2013年1月至2014年3月大连医科大学附属第一医院收治的86例支气管哮喘患者,同时选取80名健康对照者。分别检测FeNO、血清IL-23、外周血嗜酸细胞(EOS)及FEV1,并对数据进行分析。结果哮喘急性发作期、慢性持续期患者和对照组患者FeNO、IgE、EOS及FEV1%pred差异有统计学意义(P<0.05);除FEV1%pred外,三组间其余炎症相关指标两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);慢性期组与对照组FEV1%pred比较差异无统计学意义(P>0.05)。哮喘急性发作期和慢性持续期患者FeNO水平均与EOS、IgE呈正相关关系,但仅急性期患者FeNO与FEV1%pred呈负相关关系。结论 FeNO不仅可作为哮喘早期诊断的辅助指标,而且还能反映哮喘的发作程度;哮喘患者血清IL-23亦可考虑用于临床辅助诊断。     

哮喘模型小鼠脾脏和肺脏CD8~+T细胞的作用机制研究

目的建立哮喘小鼠模型,探讨CD8+T细胞在哮喘中的作用。方法将32只BALB/c小鼠随机均分为对照组和哮喘组,哮喘组小鼠建立哮喘模型。测定两组小鼠的气道反应性,对肺泡灌洗液(BALF)行细胞学分类和计数,观察肺组织的病理变化。用免疫磁珠纯化柱纯化两组小鼠脾、肺组织的CD8+T细胞,加入卵蛋白(OVA)刺激,用ELISA法检测培养96h后CD8+T细胞上清中IL-4、IL-10及IFN-γ的水平。结果哮喘组小鼠存在气道高反应性,证明模型构建成功。哮喘组BALF中的细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的比例均较对照组明显增加(P<0.05),巨噬细胞比例明显降低(P<0.05)。哮喘组肺间质中有大量炎性细胞浸润,气道上皮损伤,杯状细胞肥大增生,有大量黏液分泌,黏膜下胶原纤维沉积。对照组无明显的炎症改变。哮喘组肺CD8+T细胞分泌的IL-4(203.20±16.59pg/ml)较对照组(3.29±1.61pg/ml)明显增加(P<0.05),IL-4在两组脾CD8+T细胞培养上清中均未检出。哮喘组脾CD8+T细胞分泌IFN-γ水平(4997.05±189.07pg/ml)较对照组(4509.73±378.10pg/m...     

鼠造血干细胞CD34抗原的可逆性表达

目的 :人们一直认为 CD34是造血干细胞的表面标志 ,但近一段时间这一观点受到许多学者的挑战 ,为此探讨了造血干细胞 CD34抗原表达的特点。方法 :自 10～ 12周龄雄性 C5 7BL /6 - L y- 5 .1鼠 (供者 )取骨髓或经静脉注射五氟尿嘧啶 (5 - FU) 15 0 m g/kg,48h后再取骨髓 ,分离出 L in- c- kit Sca- 1 CD34-细胞 (CD34-细胞 )和 L in- c- kit Sca- 1 CD34 细胞 (CD34 细胞 ) ,在 IL- 11和steel fator(SF)条件下观察体外培养效果 ;以 10～ 14周龄全身照射 85 0 Gy的雌性 C5 7BL /6 - L y- 5 .2鼠作为受者 ,把供者的 CD34- 或…     

补充谷氨酰胺和茯苓对五周递增负荷训练青年男性免疫功能的影响

目的:研究营养补剂谷氨酰胺和茯苓对运动诱导的人体免疫功能变化的影响.方法:21名青年男性志愿者随机分为运动对照组(T)、运动+谷氨酰胺组(TG)和运动+茯苓组(TF),依实验方案分别进行5周递增负荷训练(60%～95%VO2max)和营养补充,动态观测分析外周血T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)、NK细胞、外周血淋巴细胞自发性细胞因子(IL-2、IL-4、IFN-γ)的mRNA变化.结果:(1)运动对照组递增负荷训练5周后外周血CD3+和CD4+无显著性变化;CD8+、CD4+/CD8+比值、IL-4 mRNA和IFN-γ mRNA随运动负荷增加有升高趋势,第4周有显著性;NK细胞数和IL-2 mRNA的变化呈波动性,在第3周及第4周时显著降低,第5周有升高的趋势.(2)运动+谷氨酰胺组外周血CD4+/CD8+比值有随运动负荷递增而升高的趋势;NK细胞数随运动负荷的递增无显著性变化,与运动对照组比较,第3周及第4周时显著增加;CD3+、CD4+、CD8+及各细胞因子mRNA随运动负荷增加变化均无统计学意义.(3)与运动对照组比较,运动+茯苓组各指标的变化均无统计学意义.结论:NK细胞对运动应激较为敏感,可先于其他免疫指标因运动负荷累积而受到抑制;补充谷氨酰胺可能对这一免疫抑制的发生具有一定的减弱作用.     

吲哚美辛对慢性粒细胞白血病急变期CD34+细胞的影响研究

目的 探讨吲哚美辛(IN)对慢性粒细胞白血病(简称慢粒)急变期CD34+细胞凋亡和周期的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路初步探讨其可能的分子机制.方法 采用免疫磁珠分选技术分选慢粒慢性期、急变期患者骨髓标本和正常脐带血标本中的CD34+细胞,流式细胞术鉴定其分选纯度,瑞氏染色观察其细胞形态,采用免疫荧光技术检测CD34+细胞中β-catenin和BCR/ABL的表达及定位.使用IN联合伊马替尼(IM)处理CD34+细胞,免疫荧光技术检测β-catenin蛋白变化,瑞氏染色和流式细胞术观察细胞凋亡及细胞周期,定量PCR检测靶基因c-myc和cyclin D1的mRNA水平,流式细胞术和免疫荧光技术检测BCR/ABL蛋白变化.结果 成功分选出CD34+细胞,纯度达90％以上;β-catenin和BCR/ABL均在慢粒急变期CD34+细胞中高表达,主要定位于胞质.IN与IM联用能够显著抑制慢粒急变期CD34+细胞中β-catenin的表达,使慢粒急变期CD34+细胞的细胞周期被阻滞在G0/G1期,明显增加细胞的凋亡,明显降低c-myc和cyclin D1的mRNA水平,并使BCR/ABL的蛋白水平显著下降,但对正常CD34+细胞没有影响.结论 IN通过影响细胞周期和细胞凋亡,增强IM对慢粒急变期CD34+细胞的杀伤力,其机制可能是与降低β-catenin的表达,抑制c-myc和cyclinD1的转录及BCR/ABL的蛋白水平有关.     

体外照射后人骨髓微环境中粘附分子的表达

粘附分子是人骨髓微环境的重要组成成分。虽然造血细胞和基质细胞的辐射敏感性已被广泛研究,但辐射对微环境功能的影响,尤其是对粘附分子表达的影响却很少研究。伴有TNF-α(种瘤坏死因子-α)和IL-1(白细胞介素-1)产生的炎症反应是照后最重要的机体反应之一。因此,集中研究了与炎症相关的粘附分子ELAM-1(内皮细胞.白细胞粘附分乎-1)、VCAM-1(血管内皮细胞粘附分子-1)和ICAM-1(细胞间粘附分子-1)。     

模拟HCV HVR1免疫7肽对免疫细胞分泌细胞因子的影响

目的 了解在模拟HCV HVR1免疫7肽(7P)的刺激下,正常人免疫细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素4(IL-4)的细胞频数变化,并探讨其作用机制.方法分离正常人外周血单核细胞(PB-MCs),分为CD4~+ CD8~- T细胞组、CD4~- CD8~+ T细胞组、NK细胞组、NKT细胞组四组,各组设阴性对照及豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(PMA)阳性对照,与7P共同孵育后,应用IL-10、IFN-γ、TNF-α、IL4流式抗体进行细胞内因子检测,采用FAGS Calibur流式细胞仪及FACS Calibur软件进行检测分析.结果 与阴性对照组相比,分泌IFN-γ的细胞频数在NK细胞、NKT细胞以及CD4~+ CD8~-、CD4~-CD8~+ T淋巴细胞均明显增高(P<0.01);分泌IL-4的细胞频数变化不明显;分泌IL-10的细胞频数在CD4~+ CD8~-、CD4~- CD8~+ T淋巴细胞表现为升高(P<0.01,P<0.05),在NK细胞、NKT细胞表现为下降(P<0.01);分泌TNF-α的细胞频数在CD4~+ CD8~- T淋巴细胞表现为下降(P<0.01),在NK细胞表现为升高(P<0.01).结论 7P能够通过调节细胞因子分泌改变免疫细胞的免疫反应方式,这种调节在以NK、NKT细胞为代表的固有免疫细胞和以CD4~+ CD8~-、CD4~- CD8~+ T细胞为代表的适应性免疫细胞之间存在差异,可能有利于在清除病毒的同时缓解炎症反应.     

布地奈德联合特布他林治疗支气管哮喘的临床观察

目的 探讨支气管哮喘(Bronchial Asthma, BA)患者采用布地奈德联合特布他林治疗的效果。方法 选取2018年3月-2021年3月100例收治的BA患者,随机数字表法分为两组,各50例。对照组用特布他林治疗,观察组用布地奈德联合特布他林治疗,两组连续治疗7 d。比较两组患者治疗7 d的临床效果,比较治疗前、治疗7 d的肺功能指标[第1 s用力呼气量(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC]、炎症指标[C反应蛋白(CRP)、嗜酸性粒细胞计数(EOS)、白细胞计数(WBC)、白介素-6(IL-6)]及T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD4+/CD8+),统计两组治疗期间的不良反应。结果 治疗7 d,观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。与治疗前相比,两组患者治疗7 d时,FEV1、FVC、FEV1/FVC值升高,观察组更高;两组患者CRP、EOS、WBC、IL-6水平降低,观察组更低;两组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平升高,观察组更高(P<0.05)。治疗期间,两组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结...     

哮喘患者血清Rac1表达水平及其与气道炎症相关性分析

目的探讨哮喘患者血清Rac1的表达水平及其与气道炎症的相关性。方法选取自2020年4月至2021年4月上海交通大学附属新华医院崇明分院收治的57例哮喘患者作为哮喘组,另选取同期的57例健康体检者作为健康组。检测两组研究对象的外周血单个核细胞(PBMC)中Rac1 mRNA表达水平及血清白细胞介素(IL)-5、IL-13、IL-33水平。比较哮喘组与健康组,以及不同严重程度哮喘患者PBMC中Rac1 mRNA及血清IL-5、IL-13、IL-33水平。采用Pearson相关法分析哮喘患者的PBMC中Rac1 mRNA表达与血清IL-5、IL-13、IL-33的相关性。结果哮喘组Rac1 mRNA表达低于健康组,血清IL-5、IL-13、IL-33水平高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。中度组与重度组Rac1 mRNA表达低于轻度组,且重度组低于中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。中度组与重度组血清IL-5、IL-13、IL-33水平高于轻度组,且重度组高于中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。哮喘患者Rac1 mRNA表达与血清IL-5、IL-13、...     

多聚胺胆固醇阳离子脂质体介导CpGODN雾化吸入对哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞的影响

目的探讨雾化吸入多聚胺胆固醇阳离子脂质体(PCL)与CpGODN复合物(CpGODN/PCL复合物)对哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞(EOS)的影响。方法采用卵蛋白激发法建立哮喘小鼠模型,并设置正常对照组、哮喘对照组、CpGODN/PCL干预组、CpGODN干预组,每组6只。在雾化PCL介导转染CpGODN 48h后,分离小鼠左肺组织,切片HE染色,显微镜下检测EOS浸润情况,同时检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞浸润情况。结果用卵蛋白激发法成功地制备了哮喘小鼠模型。哮喘对照组肺组织肺泡腔黏液分泌增加,支气管及血管周围大量炎性细胞浸润,以EOS、淋巴细胞为主,与正常对照组比较,BALF中细胞总数、EOS数目和百分率均明显增加(P<0.01)。而与哮喘对照组比较,CpGODN干预组细胞总数,EOS数目和百分率显著下降(P<0.01)。CpGODN/PCL干预组与CpGODN干预组比较,细胞总数无统计学差异,EOS数目、百分率的差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论哮喘小鼠肺组织EOS浸润和气道黏液分泌,雾化介导CpGODN干预哮喘小鼠模型可减轻以EOS为特征的炎症反应,利用PCL为转染载体包裹CpGODN,可提高转染效率。     

腹腔注射干扰素对小鼠哮喘模型GATA-3及Th2细胞因子表达的影响

目的研究腹腔注射IFN-γ对支气管哮喘的防治作用及机制。方法36只BALB/c小鼠随机分为3组,正常对照组(A组,12只)、哮喘模型组(B组,12只)、腹腔注射IFN-γ组(C组,12只),B、C组采用卵蛋白(OVA)、氢氧化铝建立哮喘模型,并分别于第23~30天激发前腹腔注射0·25mlPBS液和IFN-γ5μg,1次/天。31天时取肺泡灌洗液(BALF)测定细胞成分、IL-4和IL-5的浓度,取血测定血浆IgE水平,观察肺组织病理学变化及GATA-3的表达。结果C组BALF中的嗜酸性粒细胞(EOS)为0·3±0·2,明显低于B组(21·1±6·7,P<0·01)。C组BALF中的IL-4(3·0±2·5)和IL-5(11·4±3·2)的水平明显低于B组的IL-4(90·5±22·4)和IL-5(55·6±10·7),差异有显著性(P<0·01)。C组血浆中总IgE(24·3±7·6)和OVA特异性IgE(12·3±3·6)水平显著低于B组的IgE(67·2±9·7)和OVA特异性IgE(34·6±7·8),差异有显著性(P<0·01)。HE染色示B组支气管平滑肌肥厚,黏膜充血、水肿,黏膜层增厚,并有EOS为主的炎性细胞浸润,管腔内可见黏液栓,支气管壁周围有EOS为主的炎性细胞浸润,而C组小鼠的上述炎症性改变则明显减轻。免疫组化显示B组肺组织中GATA-3的表达明显增加,而C组GATA-3的表达明显减少,B组与A组及C组GATA-3阳性表达细胞数差异显著(P<0·01)。结论腹腔注射IFN-γ可以抑制哮喘鼠IL-4、IL-5的合成,抑制EOS在气道内的炎性浸润及血浆中总IgE和OVA特异性的IgE水平,其机制可能与IFN-γ阻断GATA-3的表达,从而继发抑制Th2型反应有关。     

寡核苷酸靶向阻断STAT6治疗哮喘的研究进展

支气管哮喘(Asthma,Bronchial asthma,简称哮喘)是一种以嗜酸性粒细胞(EOS)浸润为主,伴多种炎症介质(包括相关细胞因子,趋化因子等)异常表达的气道炎症和气道高反应性疾病.哮喘气道炎症的机制复杂,近年来细胞信号传导途径对哮喘作用的研究越来越受到重视.     

吞噬PUVA处理的同种异基因细胞的树突细胞对抗原特异性CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞的体外诱导作用

目的探讨吞噬体外光化学法(PUVA)处理的同种异基因淋巴细胞的树突细胞(DC)对抗原特异性CD4+ CD25 +Foxp3+调节性T细胞的体外诱导作用。方法分离LEW大鼠骨髓细胞,经大鼠重组IL-4和GM-CSF共同诱导培养制备骨髓来源的LEW大鼠DC。分离DA大鼠脾淋巴细胞(SP),制备经PUVA处理的DA大鼠脾淋巴细胞(PUVA-SP)并用流式细胞仪检测其凋亡率。在体外将DA大鼠的PUVA-SP或SP与LEW大鼠骨髓来源的DC共同培养,得到PUVA-SPDC和SPDC,以Luminex液相芯片法检测PUVA-SPDC和SPDC培养上清中IL-10、IL-12的含量。以CFSE标记PUVA-SP,流式细胞仪检测LEW大鼠DC对DA大鼠PUVA-SP的摄取情况。将LEW大鼠CD4+25-T细胞与PUVA-SPDC或SPDC混合培养5d,流式细胞仪检测诱导形成的CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞,同时分离培养体系中的CD4+ CD25+ T细胞,通过混合淋巴细胞反应(MLR)检测PUVA-SPDC诱生的CD4+ CD25+ T细胞对LEW大鼠CD4+ CD25- T细胞(效应性T细胞)体外增殖的抑制作用...     

CD34+造血细胞免疫磁性高效富集仪CMSI-100的研制及应用

根据免疫磁性分离原理,选用能产生高磁场强的磁性材料钕铁硼,其核心是将其设计成由低碳钢间隔的4块钕铁硼,并且使每块钕铁硼的规格必须限制在3.5cm×2.0cm×0.3cm,以确保每块钕铁硼平面所具有的磁场强度平均可达2 700高斯.当所切磨的钕铁硼规格达不到该标准时,由此产生的磁场强度>2 700高斯或<2 700高斯, 对CD34+造血细胞的分离效果均不理想.经对人正常骨髓CD34+造血细胞的免疫磁性分离证实,采用CMSI-100富集后的CD34+造血细胞纯度平均＞90%,细胞活力＞95%,达到国际上最好水平,其性能完全可与国际通用先进的IsolexTM50磁性分离系统相媲美.     

嗜酸性粒细胞及其毒性蛋白与哮喘

支气管哮喘是社会上最常见到的慢性气道疾病之一，以气道高反应性和可逆性气道阻塞为主要临床特征，随着对哮喘病理生理的深入研究，气道粘膜炎症在哮喘发病中的作用日益受到重视，目前认为哮喘是在气道已经存在慢性炎症并有部分阻塞的基础上出现间断的急性气道痉挛发作。在其炎症过程中有多种炎性细胞参与，但目前认为大多数细胞最终通过嗜酸性粒细胞（EOS）而产生效应。哮喘的许多病理生理改变与EOS释放的毒性蛋白关系密切。本丈就此进行文献回顾。1嗜酸性粒细胞很久以前就已有人在死于哮喘的病人气道内发现大量EOS，以后在哮喘病人的…     

维药神香草对治疗哮喘大鼠的免疫机制研究

目的观察维药神香草对哮喘大鼠白介素（interleukin,IL）-6、嗜酸性粒细胞（eosinophil,EOS）的影响,探讨其治疗哮喘的部分免疫机制。方法将健康Wistar大鼠50只随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、神香草多糖低剂量组、神香草多糖高剂量组5组,每组10只。正常对照组腹腔注射1 mL无菌生理盐水;其余4组激发致敏引喘,每天灌胃给药1 mL（地塞米松组给药为0.5 mg/kg,神香草多糖低、高剂量组灌胃分别为0.65、2.60 g/kg）。药物干预1周后,末次激发结束后24 h内,每组随机取8只大鼠,支气管肺泡灌洗,收取支气管肺泡灌洗液,测量EOS。采用免疫组织化学法检测肺组织中IL-6的表达水平。用图像Pro-Plus分析软件进行灰度分析。结果5组间支气管肺泡灌洗液中EOS差异有统计学意义（P<0.001）。哮喘模型组EOS高于正常对照组,差异有统计学意义（P＜0.001）。神香草多糖低、高剂量组EOS明显低于哮喘模型组,差异均有统计学意义（P＜0.001）;神香草多糖低剂量组EOS高于地塞米松组,差异有统计学意义（P<0.01）;神香草多糖高剂量组EOS与地塞米松组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。IL 6在胞浆表达,支气管纤毛柱状上皮细胞和浸润的炎细胞出现阳性表达,肺泡间质也出现少量的表达。哮喘模型组IL-6的表达高于正常对照组,差异有统计学意义（P＜0.001）;神香草多糖低、高剂量组IL-6的表达低于哮喘模型组,差异均有统计学意义（P＜0.001）;神香草多糖低、高剂量组IL-6与地塞米松组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论神香草多糖可抑制哮喘大鼠IL-6的分泌,降低肺泡灌洗液中EOS,减轻哮喘大鼠的炎症反应,提示神香草多糖具有较好的抗炎作用。     

IFN-γ预处理骨髓间充质干细胞及其抑制小胶质细胞 活化作用的影响

 目的 探讨干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)预处理大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)及其抑制脂多糖(lipopolysaccharide ,LPS)诱发的小胶质细胞(microglia,MG)活化作用的影响。方法 采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMMSCs,利用含100 ng/ml 的IFN-γ完全培养液对BMMSCs进行预处理;利用LPS(10μg/ml)诱导大鼠小胶质细胞活化。小胶质细胞分离纯化后,以1×10⁵/孔种植于6孔板中,按以下分组将小胶质细胞和BMMSCs以直接接触的方式进行共培养24h:B组(单纯BMMSCs组)、L+B组(LPS+ BMMSCs组)、I+B组(IFN-γ预处理BMMSCs组)、L+I+B组(LPS+IFN-γ预处理BMMSCs组)、M组(单纯MG组)、L+M组(LPS+MG组)、B+L+M组(BMMSCs+LPS+MG组)、I+B+L+M组(IFN-γ预处理BMMSCs+LPS+MG组)。采用ELISA技术检测培养液上清TNF-α、IL-1β水平,免疫荧光法检测小胶质细胞表面标记物CD68表达。结果 L+M组小胶质细胞CD68表达增高,分泌TNF-α、IL-1β含量明显增多;B+L+M组以及I+B+L+M组的小胶质细胞CD68表达水平、TNF-α、IL-1β分泌量低于L+M组,且B+L+M组与I+B+L+M组相比有统计学差异(P＜0.05)。结论 BMMSCs和IFN-γ预处理的BMMSCs均可以直接接触的方式抑制LPS诱发的小胶质细胞的活化且经IFN-γ预处理后的BMMSCs对小胶质细胞活性抑制作用更强。     

黄芪甲苷对哮喘模型小鼠气道炎症及IL-22的影响

目的 观察白介素22(IL-22)在哮喘模型中的作用,研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对哮喘小鼠模型气道炎症及IL-22的调控作用,探讨AS-Ⅳ治疗哮喘的作用机制.方法 32只4周龄BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、布地奈德(BUD)组和AS-Ⅳ组4组,用卵清蛋白(OVA)致敏、激发小鼠以制备哮喘模型.小鼠肺组织行HE及AB-PAS染色,进行气道炎症评分,ELISA法检测4组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中IL-22的水平,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测小鼠肺组织中IL-22 mRNA的表达水平,流式细胞术检测小鼠脾单细胞悬液中Th22的比例.结果 与对照组相比,哮喘小鼠肺组织炎症评分增加(P<0.05),BALF中IL-22水平增高(P<0.01),肺组织中IL-22 mRNA表达水平升高(P<0.01),脾单细胞悬液中Th22比例增加(P<0.01),差异具有统计学意义.给予BUD及AS-Ⅳ治疗后,小鼠气道炎症评分降低(P<0.05),IL-22 mRNA的表达水平及Th22细胞的比例均较哮喘组降低(P<0.01),差异具有统计学意义.结论 AS-Ⅳ对哮喘气道炎症发挥治疗性作用,这可能与AS-Ⅳ通过抑制Th22细胞分化、抑制IL-22的表达和分泌有关.     

人白介素9在大肠杆菌中的高表达

1989年杨育中教授成功地克隆与表达了人成熟白介素9(IL-9),各国学者对其生物学活性进行了深入研究,发现人IL-9与造血调控密切相关。富集人骨髓及外周血中细胞膜表面标志CD34~+DR~+/CD34~+DR~+D33的红系造血祖细胞或早期红系造血细胞,观察IL-9单独或协同促红细胞生成素(EPO)均可明显增加红系爆式集落(BFU-E)及红系集落形成(CFU-E),且与多种造血因子有较好的协同作用。最近还发现IL-9可提高T细胞系存活率,IL-9与其相应受体结合,传递生物信息,进一步拓宽了细胞因子的生物学活性范围。运用基因工程手段获得大量IL-9,无疑对基础医学研究及潜在临床应用具有较重要意义。通过PCR扩增获得IL-9基因片段,然后优化转译起始序列,选取大肠杆菌(E.coli)偏性碱基终止密码子TAA等条件,构建了人IL-9重组表达质粒pBV-HIL-9,重组人IL-9约占菌体总蛋白的20%,实现了人IL-9在大肠杆菌中高表达。