p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型中的表达

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)在慢性非细菌性前列腺炎(CNP)大鼠模型中的表达,与细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)的关系及它们在发病机制中可能的作用。方法将成年雄性SD大鼠去势后皮下注射苯甲酸雌二醇连续4周建模,对照组不做任何处理。HE染色,光镜下观察两组前列腺组织的病理学表现,免疫组化检测两组TNF-α、MMP-9、COX-2、磷酸化p38(p-p38)蛋白的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测p38 mRNA的水平变化。结果光镜下对照组前列腺组织无炎症反应,模型组表现为明显的炎症反应。对照组前列腺组织TNF-α、MMP-9、COX-2、p-p38蛋白表达量极少,而模型组明显增加,两组差异有统计学意义(P<0.05)。对照组p38 mRNA的表达为模型组的37.3%。结论在大鼠CNP中p38 MAPK信号转导途径被激活。细胞因子TNF-α、MMP-9、COX-2的表达可能是通过p38 MAPK调节。这为CNP的研究和治疗提供了一条新的途径。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在糖尿病大鼠神经病理性痛中的作用

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）在链脲菌素诱导的糖尿病大鼠神经病理性痛中的作用。方法雌性Wistar大鼠31只，3月龄，体重180～220g，随机分为3组：对照组（C组，n=10）、糖尿病神经病理性痛组（D组，n=11）和p38MAPK抑制剂组（Ⅰ组，n=10）。D组、Ⅰ组单次腹腔注射链脲菌素65mg／kg制备糖尿病模型。糖尿病模型制备成功后，Ⅰ组尾静脉注射p38MAPK抑制剂SB203580 0．5mg／kg，1次／周，连续4周；C组和D组尾静脉注射等体积的生理盐水。给药4周后，测定机械缩足反应阈值（MWT）、左侧坐骨神经传导速率（NCV）、背根神经节（DRG）和脊髓的磷酸化p38MAPK水平。结果与C组比较，D组、Ⅰ组MWT下降，NCV减慢，伴有脱髓鞘现象，DRG和脊髓的磷酸化p38MAPK水平升高；与D组比较，Ⅰ组MWT升高，NCV增快，脱髓鞘程度减轻，DRG和脊髓的磷酸化p38MAPK水平下降。结论p38MAPK信号转导通路参与了糖尿病大鼠神经病理性痛的形成。     

p38MAPK信号转导通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用.方法 成年雄性SD大鼠60只,体重180～230 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组:对照组(C组,n=6)、急性肺损伤组(ALI组,n=24)、p38MAPK特异性抑制剂SB203580+ALI组(SB+ALI组,n=24)和SB203580组(SB组,n=6).ALI组尾静脉注射内毒素5 mg/kg制备大鼠急性肺损伤模型,C组给予等容量生理盐水,SB+ALI组于注射内毒素前30 min经尾静脉注射SB20358010 mg/kg.ALI组和SB+ALI组于注射内毒素后1、3、6 h(T1-3)时随机取8只大鼠,C组和SB组分别于给予生理盐水、SB203580后1 h处死取肺组织,检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达.T3时回收支气管肺泡灌洗液(BALF),测定蛋白浓度.计算细胞凋亡指数,观察肺组织病理学结果.另取32只大鼠,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n=16):ALI组和SB+ALI组,观察48 h内大鼠生存情况.结果 与C组相比,ALI组和SB+ALI组BALF中蛋白浓度、细胞凋亡指数、肺组织p-p38MAPK蛋白表达水平升高(P＜0.05);与ALI组相比,SB+ALI组上述指标降低(P＜0.05).SB+ALI组病理学损伤程度较ALI组明显减轻.ALI组大鼠生存率较SB+ALI组降低(P＜0.01).结论 p38MAPK信号转导通路参与了大鼠内毒素性急性肺损伤的发生和发展,可能与肺组织细胞凋亡有关.

Abstract：

Objective To investigate the role of p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) signal transduction pathway in lipopolysaccharide (LPS)-induced acute lung injury (ALI).Methods Sixty male SD rats weighing 180-230 g were randomly divided into 4 groups: control group (group C, n = 6), ALI group ( n = 24),p38MAPK specific inhibitor SB203580 + ALI group (group SB + ALI, n = 24), SB203580 group (group SB,n =6). LPS 5 mg/kg was injected intravenously via tail vein in group ALI and SB + ALI, while the equal volume of normal saline was given instead in group C. Group SB + ALI received iv injection of SB203580 10 mg/kg via tail vein 30 min before LPS administration. Group SB received injection of SB203580. The rats were sacrificed at 1, 3 and6 h agter LPS administration (T1-3) in group ALI and SB + ALI (8 rats at each time point) andat 1 h after administration in C and SB groups. The lungs were immediately removed for microscopic examination and determination of phosphorylated p38MAPK (p-p38MAPK) expression, the concentration of protein in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) and apoptotic index (AI). Another 32 rats were selected and randomly divided into 2 groups for survival study: ALI group and SB + ALI group ( n = 16 each), and then they were treated as mentioned above and observed for 48 h. Results The concentration of protein in BALF, AI and p-p38MAPK expression were significantly increased in group ALI and SB + ALI compared with group C, while decreased in group SB + ALI compared with group ALI ( P ＜ 0. 05 ). LPS-induced pulmonary histological changes were significantly attenuated in group SB + ALI compared with group ALI. The survival rate was significantly decreased in group ALI compgred with group SB + ALI ( P ＜ 0.01 ). Conclusion p38 MAPK signal transduction pathway is involved in LPS-induced ALI, which may be related to the apoptosis in the cells in the lung.     

p38MAPK信号传导通路与重症急性胰腺炎

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号传导通路是细胞外信号引起细胞反应的共同通路,其中p38MAPK在介导炎症、应激等细胞反应中最为引人注目.本文综述了p38MAPK这一信号传导通路的结构特征、激活与生物学效应,及其在重症急性胰腺炎发病机制中的作用,旨在为重症急性胰腺炎的诊治研究提供新的思路.     

脊髓背角COX-1和COX-2在p38MAPK诱发大鼠切口痛中的作用

目的 评价脊髓背角环氧化酶-1(COX-1)和COX-2在p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)诱发大鼠切口痛中的作用.方法 雄性SD大鼠,体重250～300 g,选择鞘内置管成功的大鼠112只,随机分为4组(n=28):假手术组(S组)、切口痛组(IP组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和p38MAPK特异性抑制剂SB203580组(SB203580组).S组鞘内注射0.9%生理盐水20 μl后,吸入异氟烷(呼气末浓度1.4%)min,不做手术;IP组术前10 min鞘内注射0.9%生理盐水20 μl;DMSO组和SB203580组术前10 min分别鞘内注射2%DMSO(SB203580的溶媒)10 μl和SB203580 30 μg(10 μl),然后用0.9%生理盐水10 μl冲洗导管.于鞘内置管后5 d,制备大鼠左后足切口痛模型.各组于术前1 h、术后2、3、6 h和1、2、3、5 d时,测定机械缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL).各组于术后2、3、6 h和1、2、3、5 d痛阈测定结束后各处死4只大鼠,采用Western blotting法测定脊髓背角COX-1和COX-2的表达水平.结果 与S组比较,IP组和DMSO组术后2 h～2 d时MWT降低,术后2 h～3 d时TWL缩短,IP组、DMSO组和SB203580组术后3 h～3 d脊髓背角COX-1表达上调(P<0.05);与IP组和DMSO组比较,SB203580组术后2 h～1 d时MWT升高,术后2 h～2 d时TWL延长,术后6 h～2 d脊髓背角COX-1表达下调(P<0.05);4组术后各时点脊髓背角COX-2表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 p38MAPK诱发大鼠切口痛与脊髓背角COX-1有关,与COX-2无关.     

榄香烯对胃癌细胞p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的 探讨榄香烯对人胃癌SGC-7901细胞株增殖的影响,以及与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的关系.方法 用不同浓度的榄香烯处理胃癌SGC-7901细胞,MTT法检测细胞增殖情况;光镜和透射电镜观察形态学改变;Western blot方法检测P38和磷酸化P38(P-P38)的表达.结果 榄香烯抑制胃癌细胞SGC-7901增殖,并呈浓度和时间依赖性;在光镜和透射电镜下可以观察到典型的细胞凋亡形态学改变;经0.08 mg/ml榄香烯作用4 h后,胃癌SGC-7901细胞中p38MAPK通路被激活,p-P38表达与对照组相比升高3.72倍,差异有统计学意义(P＜0.01),而P38总蛋白量未发生明显变化.预先应用p38MAPK通路抑制剂SB203580作用24 h与单用榄香烯作用组比较,p-P38表达下降54.12%,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 榄香烯可以抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,诱发细胞凋亡,其机制可能与p38MAPK通路有关.     

p38丝裂原活化蛋白激酶在肠缺血再灌注损伤大鼠炎性反应中的作用

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）在肠缺血再灌注损伤大鼠炎性反应中的作用。方法健康成年雄性Wistar大鼠30只,随机分为3组（n=10）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）和p38MAPK抑制剂SB203580组（SB组）。采用夹闭肠系膜上动脉（SMA）的方法制备肠缺血再灌注损伤模型。I/R组和SB组夹闭SMA 1 h再灌注6 h,SB组缺血前30 min经股静脉注射p38MAPK特异性抑制剂SB203580 100μg/kg。于再灌注6 h时,处死大鼠,测定血浆肿瘤坏死因子-α（TNF-α）浓度、双胺氧化酶（DAO）活性及小肠组织TNF-α含量、p38MAPK、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达水平,在光镜下观察小肠组织病理学,并进行小肠组织损伤程度评分。结果与S组比较,I/R组血浆TNF-α浓度、DAO活性及小肠组织p38MAPK、ICAM-1表达、TNF-α含量、小肠组织损伤程度评分升高,SB组血浆DAO活性、小肠组织ICAM-1表达、TNF-α含量及小肠组织损伤程度评分升高（P〈0.05）;与I/R组比较,SB组血浆TNF-α浓度、DAO活性及小肠组织p38MAPK、ICAM-1表达和TNF-α含量、小肠组织损伤程度评分降低（P〈0.05）。结论p38MAPK参与了肠缺血再灌注损伤大鼠炎性反应。     

p38 MAPK在沙土鼠前脑缺血再灌注损伤及缺血预处理中的作用

目的 研究p38 MAPK在沙土鼠前脑缺血再灌注损伤及缺血预处理中的作用。方法 雄性蒙古沙土鼠384只，体重50-80 g，随机分为6组，每组64只。假手术组（SH组）：仅游离双侧颈总动脉但不阻断;缺血再灌注组（I／R组）：夹闭双侧颈总动脉，前脑缺血5min后恢复灌注;缺血预处理组（IP组）：前脑缺血3 min后恢复灌注，24 h后再行前脑缺血5 min;P组：于前脑缺血前20 min侧脑室内注射0．8μg p38 MAPK特异性激动剂P79350;SB组：于前脑缺血前20 min侧脑室内注射0．4μg p38 MAPK特异性抑制剂SB202190;溶剂对照组（VE组）：于前脑缺血前20min侧脑室内注射1％二甲基亚砜4μl。各组于再灌注15min、2h、4h、6h分别取8只沙土鼠，测定海马CA1区p-p38 MAPK的表达，再灌注1、3、5、7d分别取8只沙土鼠，采用开阔法观察行为学，然后测定海马CA1区存活神经元计数、凋亡神经元计数及p-p38 MAPK、HSP27、Bcl-2、Bax的表达。结果 I／R组再灌注期p-p38 MAPK表达上调，IP组及SB组再灌注各时点p-p38 MAPK表达水平低于I／R组，P组再灌注各时点高于I／R组、IP组及SB组（P〈0．05）;IP组、SB组较I／R组及vE组沙土鼠探索活动减少，CA1区再灌注期凋亡神经元数减少，HSP27、Bax表达下调，存活神经元数增加，Bcl-2表达上调（P〈0．05）;P组再灌注1 d探索活动增加，再灌注各时点p38 MAPK及HSP27表达均较I／R组上调（P〈0．05）。结论 沙土鼠脑缺血再灌注损伤及神经元凋亡与p38 MAPK的激活有关;缺血预处理可通过抑制p38 MAPK的激活，下调HSP27及Bax的表达、上调Bcl-2的表达。     

鞘内注射GDNF对神经病理性痛大鼠脊髓背角p38MAPK蛋白表达的影响

目的 评价鞘内注射胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对神经病理性痛大鼠脊髓背角p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白表达的影响.方法 取鞘内置管成功的健康雄性SD大鼠120只,周龄6周,体重180～200 g,随机分为4组(n=30):对照组(C组)、假手术组(S组)、神经病理性痛组(P组)和GDNF组.采用结扎L5.6脊神经的方法建立大鼠神经病理性痛模型.C组不给予任何处理;S组只暴露脊神经,但不结扎;P组脊神经结扎后鞘内注射生理盐水10μl,隔日1次,连续14 d;GDNF组脊神经结扎后鞘内注射GDNF 2μg,用生理盐水稀释至10μl,隔日1次,连续14 d.分别于脊神经结扎后3、7和14 d时,取10只大鼠,测定机械痛阈,然后处死,取脊髓背角,分别采用免疫组化法和蛋白质印迹法测定p38MAPK蛋白的表达水平.结果 与S组比较,P组和GDNF组机械痛阈降低,脊髓背角p38MAPK蛋白表达上调(P＜0.05或0.01);与P组比较,GDNF组机械痛阈升高,脊髓背角p38MAPK蛋白表达下调(P＜0.05或0.01).结论 鞘内注射GDNF可通过抑制脊髓背角p38MAPK蛋白的表达减轻大鼠神经病理性痛.     

吡那地尔超极化停搏对大鼠离体心脏缺血再灌注时p38MAPK表达的影响

目的 评价吡那地尔超极化停搏对大鼠离体心脏缺血再灌注时p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠48只,体重250～300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=8):自然停搏组(A组)、St.Thomas组(B组)、吡那地尔超极化停搏组(C组)、5-羟葵酸(5-HD)组(D组)、HMR-1098组(E组)和5-HD+HMR-1098组(F组).采用Langendorff离体心脏灌注模型,K-H液平衡灌注15 min后,A组阻断主动脉,不予停搏液灌注,使其自然停搏;B组灌注St.Thomas停搏液;C组灌注吡那地尔超极化停搏液;D组、E组和F组K-H液平衡灌注10 min后,分别灌注含5-HD、HMR-1098、5-HD+ HMR-1098的K-H液5min,再灌注吡那地尔超级化停搏液.心脏停跳缺血60 min后,K-H液再灌注30 min.于平衡灌注15 min和再灌注20 min时记录冠脉流量(CF)、心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室收缩压(LVSP)和左室压力瞬时最大变化率(dp/dtmax);于再灌注30 min时取心肌组织,采用Western blot法测定心肌磷酸化p38MAPK和非磷酸化p38MAPK的表达.结果 与C组相比,A组、B组、D组、E组和F组再灌注20min时CF、HR、LVSP、LVDP及dp/dt/dymax降低,再灌注30 min时磷酸化p38MAPK表达下调,非磷酸化p38MAPK表达上调(P＜0.05);与E组相比,D组和F组再灌注20 min时CF、HR、LVSP、LVDP及dp/dtmax降低,再灌注30 min时磷酸化p38MAPK表达下调,非磷酸化p38MAPK表达上调(P＜0.05).结论 吡那地尔超极化停搏可改善大鼠离体缺血再灌注心脏功能,其机制与上调磷酸化p38MAPK表达,下调非磷酸化p38MAPK表达有关,而这种调控作用与线粒体ATP敏感性钾通道关系更密切.     

丹参对瘢痕疙瘩成纤维细胞基质金属蛋白酶-1的作用

目的探讨丹参对培养瘢痕疙瘩成纤维细胞基质金属蛋白酶-1(matrix metalloprotein-ase-1,MMP-1)蛋白生成和mRNA表达的影响。方法采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和Northern杂交技术检测培养瘢痕疙瘩成纤维细胞MMP-1蛋白的合成分泌和mRNA的表达。结果培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的MMP-1自发分泌量为(95±38)pg/ml;在培养基中丹参浓度分别为5mg/ml和10mg/ml条件下,MMP-1的浓度分别为(128±29)pg/ml(t=3.425,P<0.05)和(151±43)pg/ml(t=5.075,P<0.01)。在培养基中丹参浓度为10mg/ml时,培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的MMP-1mRNA的表达被提高到(125±11)%(t=4.628,P<0.01)。结论丹参可提高培养瘢痕疙瘩成纤维细胞MMP-1蛋白的合成分泌和mR-NA的表达,这为丹参用于瘢痕疙瘩的临床治疗提供了理论依据。     

罗格列酮对肝星状细胞基质金属蛋白酶-2和-9基因表达的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)表达基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的影响.方法 在培养的HSC株中加入不同浓度的罗格列酮(终质量浓度为5、10、15、20 μmol/L),于24 h后收取细胞,利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定MMP-2、MMP-9 mRNA表达.结果 MMP-2表达水平在罗格列酮5、10、15、20 μmol/L组分别为0.5708±0.0609、0.8900±0.0823、1.1348±0.1205、1.4490±0.0832,而空白对照组为0.3237±0.0796.MMP-9表达水平在罗格列酮5、10、15、20 μmol/L组分别为0.5487±0.0770、0.7554±0.0510、0.9497±0.0451、1.1088±0.0777,空白对照组为0.3220±0.0592.结论 罗格列酮可增强HSC对MMP-2、MMP-9的表达,并在一定范围内,呈剂量依赖性.     

利多卡因对脂多糖诱导的巨噬细胞高迁移率族蛋白B1 mRNA表达的影响

目的 观察利多卡因对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1) mRNA表达的影响.方法 取雄性Wistar大鼠腹腔巨噬细胞,置6孔细胞培养板中培养3～5 d后,分为四组:脂多糖组(LPS组),LPS刺激浓度为100 ng/ml;LI组,于LPS刺激前30 min给予利多卡因(终浓度为20 μg/m1)预处理;L2组,于LPS刺激后30 min给予同等剂量的利多卡因处理;L3组分别于LPS刺激后30 min、6、12、18 h给予同等剂量的利多卡因处理.LPS刺激24 h后收取细胞,采用RT-PCR检测细胞HMGB1 mRNA的表达.结果 与LPS组比较,L1、L2、L3组HMGB1 mRNA表达均有不同程度下降(P<0.01).L3组HMGB1 mRNA表达下降程度最大,明显低于L1、L2组(P<0.01).结论 利多卡因能够抑制LPS诱导的体外培养大鼠腹腔巨噬细胞HMGB1 mRNA的表达.     

基质金属蛋白酶3在类风湿关节炎中的表达及调控

类风湿关节炎是一个病因未明的、以慢性关节滑膜炎症和进展性关节破坏为主要表现的自身免疫性疾病。其早期关节改变是滑膜细胞增生和新生血管形成,最终导致局灶性、关节旁和系统性骨丢失。基质金属蛋白酶是一种能降解细胞外所有基质的锌蛋白酶,研究发现,类风湿关节炎患者血清基质金属蛋白酶3(MMP-3)对细胞外间质的降解和关节骨及软骨的破坏均发挥着重要作用,是系统性的炎症标志物,可作为类风湿关节炎特别是早期患者滑膜损害和预后的指标,同时也是评价抗风湿药物治疗疗效的重要指标。因此,本文主要从MMP-3的结构、功能及表达调控方面作一综述,以期对类风湿关节炎的发病机理作进一步的探讨。     

大鼠野百合碱肺高压模型基质金属蛋白酶-1、基质金属蛋白酶-9 mRNA的表达

目的 观察基质金属蛋白酶(MMP)-1、-9在大鼠野百合碱肺高压模型中的表达.方法 SD大鼠24只,随机分为野百合碱注射组(MCT)和对照组(Con).MCT组给予野百合碱60 mg/kg单次右侧皮下注射.饲养6周后,采集肺组织样本进行肺小动脉形态学测量,原位杂交和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果 MCT组肺小动脉横断面的厚度指数(TI)及面积指数(AI)的均值都高于Con组(TI:0.41±0.13比0.13 ±0.07,P＜0.05;AI:0.64±0.15比0.23 ±0.11,P＜0.05).MMP-1、-9主要分布于肺小动脉内皮细胞和外膜成纤维细胞,MCT组肺组织中MMP-1、-9mRNA转录水平高于对照组(0.72±0.13比0.28±0.01,P＜0.05;0.85±0.15比0.39±0.12,P＜0.05).结论 MMP-1、-9活性表达的增强,参与了肺高压肺血管重构的机制.     

脂多糖对离体大鼠胸主动脉和肺组织HO-1mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察离体大鼠胸主动脉和肺组织脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS)孵育后血红素氧合酶－1（HO－1）mRNA及蛋白表达时间依从性的变化。方法 24只Wistar大鼠颈椎脱臼处死，取其胸主动脉和肺组织，随机分成四组：对照组（n=6)，实验组包括LPS3、8、24组（均为n=6)，分别与LPS（1μg/ml）孵育3、8、24h。采用蛋白免疫杂交（Western blot）和半定量聚合酶链反应（RT－PCR）分别测定HO－1蛋白和mRNA表达，结果 与对照组相比，胸主动脉HO－1蛋白表达LPS3组即达最高值（P＜0．05），LPS8和LPS24组仍处于较高水平（P＜0．05）；肺组织HO－1蛋白表达LPS3组已开始升高（P＜0．05）,LPS8力LPS24组仍处于较高水平（P＜0．05）；肺组织HO－1蛋白表达LPS3组已开始升高（P＜0．05），LPS8组达最高水平（P＜0．01），LPS24组有下降趋势，但仍与对照组有差异（P＜0．05）。与对照组相比，胸主动脉HO－1mRNA表达LPS3组即达最高值（P＜0．05），LPS8组较LPS3组无明显变化（P＞0．05），而LPS24且则恢复至始水平；肺组织HO－1mRNA表达LPS3组开始升高（P＜0．05），LPS8组达到最大值（P＜0．01），LPS24组回到基础水平（P＞0．05）。结论 脂多糖可以明显促进大鼠胸主动脉和肺组织HO－1mRNA及蛋白表达，且两种组织表现出不同的时间依从性变化，可能与感染性休克体肺循环不同变化的病生理机制有关。     

右美托咪啶对脂多糖诱导大鼠外周血单核细胞Toll样受体4mRNA表达的影响

目的 探讨右美托咪啶对脂多糖(LPS)诱导大鼠外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠40只,取外周血分离培养单核细胞,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=8),A组:阴性对照;B组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml);C组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml)+右美托咪啶(终浓度为0.5 ng/ml);D组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml)+右美托咪啶(终浓度为5.0 ng/ml);E组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml)+右美托咪啶(终浓度为50.0 ng/ml).孵育24 h后,收集上清液,采用ELISA法测定TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA的表达.结果 与A组比较,B组TNF-α、IL-1p、IL-6的浓度升高,TLR4 mRNA表达上调(P＜0.01);与B组比较,C组、D组和E组TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度降低,TLR4 mRNA表达下调(P＜0.05或0.01);与C组比较,D组和E组TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度降低(P＜0.01),TLR4 mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);D组和E组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪啶可通过下调TLR4 mRNA表达,抑制TLR4的合成,从而抑制LPS诱导大鼠外周血单核细胞TNF-α、IL-1β和IL-6的生成与释放.

Abstract：

Objective To investigate the effects of different concentrations of dexmedetomidine on the expression of Toll-like receptor 4 (TLR4) mRNA in rat peripheral blood monocytes exposed to lipopolysaccharide ( LPS ). Methods Peripheral blood monocytes isolated from male Wistar rats were seeded in 24-well plate in RPMI 1640 liquid culture medium in CO2 incubator at 37 ℃ and 5% CO2 for 2 h, and were randomly divided into 5 groups ( n = 8 each): group A negative control; group B was exposed to LPS 1 μg/ml and C, D and E groups were exposed to LPS 1 μg/ml + dexmetomidine 0.5, 5.0 and 50.0 ng/ml respectively. The monocytes were then incubated for 24 h. The concentrations of TNF-α, IL-1β and IL-6 in the supernatant of the cultured monocytes were detected by ELISA. The expression of TLR4 mRNA in the monocytes was detected by RT-PCR.Results Exposure to LPS significantly increased the expression of TLR4 mRNA and the concentrations of TNF-α, IL-1β and IL -6 in group B as compared with group A ( P ＜ 0.01 ). Dexmedetomidine attenuated the LPS-induced increase in the expression of TLR 4 mRNA and the concentrations of TNF-α, IL-1β and IL-6 in a dose-dependent manner ( P ＜0.05or 0.01 ). Conclusion Dexmedetomidine can inhibit the synthesis of TLR4 and inhibit the secretion and dilivery of TNF-α, IL-1β and IL-6 by down-regulating the gene expression of TLR4 in rat peripheral blood monocytes exposed to LPS.     

Nitric oxide modulates expression of matrix metalloproteinase-9 in rat mesangial cells

Nitric oxide modulates expression of matrix metalloproteinase-9 in rat mesangial cells. BACKGROUND: High-output levels of nitric oxide (NO) are produced by rat mesangial cells (MCs) in response to proinflammatory cytokines such as interleukin-1beta (IL-1beta) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) by the inducible isoform of NO synthase (iNOS). We tested modulatory effects of NO on the expression and activities of matrix metalloproteinases-9 and -2 (MMP-9 and MMP-2), respectively. Temporal and spatial expression of these MMPs and their specific inhibitors, the tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs), seems to be critical in the extensive extracellular matrix (ECM) remodeling that accompanies sclerotic processes of the mesangium. Methods and Results. Using the NO donors S-Nitroso-N-acetyl-D,L-penicillamine (SNAP) and DETA-NONOate, we found strong inhibitory effects of NO mainly on the IL-1beta-induced MMP-9 mRNA levels. NO on its own had only weak effects on the expression of MMP-9 and MMP-2. The addition of the NOS inhibitor NG-monomethyl L-arginine (L-NMMA) dose dependently increased steady-state mRNA levels of cytokine-induced MMP-9, suggesting that endogenously produced NO exerts tonic inhibition of MMP-9 expression. MMP-9 activity in conditioned media from MCs costimulated with IL-1beta and NO donor contained less gelatinolytic activity than media of cells treated with IL-1beta alone. Exogenously added NO did not alter gelatinolytic activity of MMP-9 in cell-free zymographs. The expression levels of TIMP-1 were affected by NO similarly to the expression of MMP-9. CONCLUSION: We conclude that NO modulates cytokine-mediated expression of MMP-9 and TIMP-1 in rat MCs in culture. Our results provide evidence that NO-mediated attenuation of MMP-9 gelatinolytic activity is primarily due to a reduced expression of MMP-9 mRNA, and not the result of direct inhibition of enzymatic activity.     

基质金属蛋白酶2 mRNA表达量与乳腺癌转移的关系及临床意义

目的探讨乳腺癌基质金属蛋白酶2(MMP2)mRNA表达量与乳腺癌转移的关系及临床意义。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法,检测30例乳腺原发癌和配对淋巴结转移癌以及116例乳腺原发癌的MMP2mRNA表达量,比较30例乳腺原发癌和配对淋巴结转移与116例乳腺原发癌的MMP2mRNA表达量,分析MMP2mRNA表达量与乳腺癌临床病理因素的关系。结果30例乳腺淋巴结转移癌MMP2mRNA表达量低于原发癌(t=-3.293,P<0.05)。肿瘤>2cm的MMP2mRNA表达量低于肿瘤≤2cm(t=1.936,P<0.05),临床Ⅱ期和Ⅲ期的MMP2mRNA表达量低于Ⅰ期(t=2.466,P<0.05),淋巴结4个以上阳性组MMP2mRNA表达量低于1～3个阳性组(t=3.202,P<0.05)。MMP2mRNA表达量与病理类型、组织学分级、雌、孕激素受体及Her2表达无关。结论MMP2mRNA表达量在临床早期及淋巴结转移早期上调,随着肿瘤的进展表达量下调。MMP2mRNA转录水平的表达与乳腺癌转移有关。