新疆利什曼原虫同工酶谱的初步研究：Ⅰ.酶谱型的分布

用５种酶ＭＥ，ＧＰＩ，Ｇ６ＰＤＨ，ＭＤＨ，ＥＳＴ的聚丙烯酰胺凝胶电泳法对新疆不同来源分离的５株利什曼原虫进行了同工酶谱的比较研究。所分析的虫株包括１株杜氏利什曼原虫，２株婴儿利什曼原虫，２株都兰利什曼原虫以及作为参比虫株的杜氏利什曼原虫（ＭＨＯＭ／ＩＮ／８０／ＤＤ８），硕大利什曼原虫（ＭＨＯＭ／ＩＱ／００／ＬＨ３２），沙鼠利什曼原虫（ＲＨＯ／ＣＮ／６２／＃ｌ）和蜥蜴利什曼原虫各１株，共分出９个酶谱型。表明不同来源的２株婴儿利什曼原虫是两个不同的酶谱型，２株都兰利什曼原虫为两个不同的酶谱型，新疆的杜氏利什曼原虫与来源于印度的杜氏利什曼原虫标准株也为两个不同的酶谱型。     

我国新疆皮肤利什曼病病原体SSU rDNA多变区序列分析

我国新疆皮肤利什曼病病原体（ＣＬＰ）种株鉴定尚有分歧。本研究用一对利什曼原虫属特异引物Ｒ２２２和Ｒ３３３，直接从皮肤利什曼病病人皮肤病变组织、热带利什曼原虫（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｔｒｏｐｉｃａ）和婴儿利什曼原虫（Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ）基因组ＤＮＡ中扩增出一ＳＳＵｒＤＮＡ特异片段，克隆到ｐＧＥＭ○Ｒ－ＴＥａｓｙＶｅｃｔｏｒ上，并以双脱氧链末端终止法测序。序列分析显示扩增的ＣＬＰ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ和Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａＳＳＵｒＤＮＡ序列皆为３９１ｂｐ长，Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ与ＣＬＰ的序列之间３８７个碱基相同，存在４个点突变；Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ与ＣＬＰ的序列之间３８３个碱基相同，存在７个点突变和２个移码突变；Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ与Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ的序列之间３８７个碱基相同，存在３个点突变和２个移码突变。表明扩增的ＣＬＰ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ和Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａＳＳＵｒＤ－ＮＡ多变区序列高度同源，但仍存在少数点突变，或插入／缺失；该ＳＳＵｒＤＮＡ序列变异可反应种间差异；新疆皮肤利什曼病病原体与Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ较相近。     

用PCR扩增及Southern印迹杂交对新疆克拉玛依地区皮肤利什曼病病原体kDNA同源性研究

本研究自新疆克拉玛依地区皮肤利什曼病（ＣＬ）患者的皮肤病变组织内抽取微量的利什曼原虫ｋＤＮＡ，采用引物１３Ａ、１３Ｂ进行ＰＣＲ扩增，获１２０ｈＰ扩增产物（ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰ），并转移到尼龙膜上，分别与地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ）标记的Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ、Ｌ．ｇｅｒｂｉｌｌｉ、Ｌ．ｍａｊｏｒｋＤＮＡ探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，结果可见病变组织内ｋＤＮＡＰＣＲ－ＡＰ仅与Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａｋＤＮＡ探针有明显的杂交信号带，提示该地区皮肤利什曼病病原体ｋＤＮＡ与Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ有较强的同源性。为进一步分析该病原体与Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ和Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｉ新疆各分离株的同源关系，我们采用杜氏利什曼原虫（Ｌ．ｄ）种特异引物Ⅰ和Ⅱ对患者病变组织进行ＰＣＲ扩增，未见扩增产物。用地高辛标记的ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰ探针对Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｉ新疆各分离株进行打点杂交，结果显示该地区ＣＬ病原体与Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｉ新疆分离株以及其它利什曼原虫呈阴性反应。以上结果证实Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａｋＤＮＡ与克拉玛依地区ＣＬ患者的ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰ之间的同源关系。     

应用长片段PCR扩增全长HIV— 1DNA的研究

目的 探讨长征段ＰＣＲ（ＬＤ－ＰＣＲ）扩增特点,并将它用于对全长ＨＩＶ ＤＮＡ的研究。方法 应用ＬＴＤ（Ｕ５）／ＬＴＤ（Ｒ）,ＣＬ－ＮＳＣ／ＣＬ－ＮＥＦ和ｇａｇＡｌ／ｇａｇＡ２等不同引物,＾３２Ｐｇａｇ,ｐｏｌ,ｎｅｆ和ｔａｔ等为片段探针,对克隆有ＨＩＶ－１完整基因片段,部分基因片段的质粒和ＨＶＩ感染者外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中的ＨＩＶ－１ ＤＮＡ进行扩增。结果 ＬＤ－ＰＣＲ对０．４－９ｋｂ的第     

墨西哥利什曼原虫无鞭毛体蛋白的基因克隆化与序列分析

目的 克隆墨西哥利什曼原虫（Ｌ．ｍｅｘ）ＷＲ９７２株的无鞭毛体蛋白（ａｍａｓｔｉｎ）的编码基因,并对其同源核苷酸序列进行分析。方法 根据已克隆的亚马逊利什曼原虫无鞭毛体蛋白的编码基因序列,设计并合成成无鞭毛体蛋白基因特异性引物,以墨西哥利什曼原虫ＷＲ９７２株的基因组ＤＮＡ作为模板,进行多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增。将扩增的ＤＮＡ片段克隆到ｐＣＲ２．１Ｔ载体中,进行测序,并对同源的核苷酸序列分析、比较     

重组利什曼原虫表面糖蛋白GP63的表达生产及其免疫学鉴定

本报道应用从国外引进的由硕大利什曼原虫ＤＮＡ克隆的原虫细胞表面糖蛋白ＧＰ６３基因与ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｍ１３质粒构建的重组质粒ｐＡＳ２６转化大肠菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ进行生产性表达及免疫学鉴定的结果。每２５０ｍＬ ＬＢ培养物可获取融合蛋白包涵体５３ｍｇ。表达产物在降解条件下与β半乳糖苷酚分离后的分子量为５５ｋＤ。重组ＧＰ６３及其免疫家兔血清与细菌来源的β半乳糖苷酶有低滴度交叉,与婴儿利什曼原虫９     

我国新疆皮肤利什曼病病原体SSU rDNA多变区序列分析

我国新疆皮肤利什曼病病原体（ＣＬＰ）各株鉴定尚有分歧。本研究用一对利什曼原虫属特异引物Ｒ２２２和Ｒ３３３，直接从皮肤利什曼病病人皮肤病变组织，热带利什曼原虫和婴儿利什曼原虫基因组ＤＮＡ中扩增出一ＳＳＵ ｒＤＮＡ特异片段，克隆到ｐＧＥＭ－ＴＥａｓｙ Ｖｅｃｔｏｒ上，并以双脱氧链末端终止法测序。序列分析显示扩增的ＣＬＰ、Ｌ．ｉｎｆｏｎｔｕｍ和Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ ＳＳＵ ｒＤＮＡ序列皆为３９１ｂｐ长。     

新疆利什曼原虫同工酶谱的初步研究：Ⅱ.等电聚焦分析

我们用薄层等电聚焦方法对新疆不同来源分离的６株利什曼原虫的ＧＰＩ、Ｇ６ＰＤＨ、ＭＤＨ、ＡＣＰ和ＥＳＴ ５种酶进行了同工酶谱的分析。对照株包括社氏利会曼原虫、硕大利什曼原虫、沙鼠利什曼原虫以及昕蜴利什曼原虫各１株。结果发现ＧＰＩ在不同种利什曼原虫之间有微小区别，没有种下分类的价值。Ｇ６ＰＤＨ原虫各１株。结果发现ＧＰＩ在不同种利什曼原虫之间有微小区别，没有种下分类的价值。Ｇ６ＰＤＨ在不同种利什曼原虫之     

利什曼原虫抗原对草原兔尾鼠感染婴儿利什曼原虫的免疫保护作用

目的： 测定利什曼原虫主要表面分子抗原对内脏利什曼病的免疫保护作用。方法： 用重组利什曼原虫表面糖蛋白ｒ Ｇ Ｐ６３ 和脂磷酸聚糖（ Ｌ Ｐ Ｇ） 为抗原, 以短棒状杆菌菌苗（ Ｃ Ｐ） 为佐剂免疫草原兔尾鼠后, 用婴儿利什曼原虫强毒株攻击, 观察免疫保护效果。结果： ｒ Ｇ Ｐ６３ 加 Ｌ Ｐ Ｇ 加 Ｃ Ｐ 抗原组合免疫后用２ ×１０７ 前鞭毛体攻击, 免疫动物的肝印片上 Ｌ Ｄ 数量明显降低, 减虫率为８９８ ％ 。 Ｌ Ｐ Ｇ 加 Ｃ Ｐ 免疫组减虫率为６０６ ％ 。ｒ Ｇ Ｐ６３ 包涵体加 Ｃ Ｐ 免疫组减虫率为４２４ ％ , 而纯化ｒ Ｇ Ｐ６３ 加 Ｃ Ｐ 免疫组未显示保护作用。以ｒ Ｇ Ｐ６３ 加 Ｌ Ｐ Ｇ 加 Ｃ Ｐ 免疫后用１ ×１０６ , ５ ×１０６ 和１ ×１０７ 前鞭毛体攻击时, 感染率亦有明显降低。结论： 利什曼原虫主要表面分子抗原 Ｇ Ｐ６３和 Ｌ Ｐ Ｇ 在以 Ｃ Ｐ 为佐剂的条件下, 对草原兔尾鼠婴儿利什曼原虫有明显的免疫保护效果。     

重组杜氏利什曼原虫39kD抗原的诊断价值

为了给内脏利什曼病（ＶＬ）患者提供较为准确的实验诊断方法。我们将表达杜氏利什曼原虫３９ｋＤ抗原的大肠杆菌制备物进行电泳并转移至硝酸纤维滤膜上，以１１例确诊ＶＬ病人的不同稀释度血清对其识别，当稀释度达１∶４００时，全部病人血清均能明显识别３９ｋＤ抗原带．而正常人血清和其他病人血清不识别３９ｋＤ抗原带，说明重组杜氏利什曼原虫３９ｋＤ抗原具有一定的诊断价值，用其检测病人血清中相应抗体可以诊断内脏利什曼病。     

用RAPD技术分析利什曼原虫DNA多态性

为了建立ＲＡＰＤ技术分析利什曼原虫ＤＮＡ多态性的方法，并进一步揭示Ｌｉｎｆａｎｔｕｍ和Ｌｔｒｏｐｉｃａ之间的亲缘关系，本文应用筛选的两种随机引物（Ｍ１３，３３０１）分别扩增了Ｌｉｎｆａｎｔｕｍ和Ｌｔｒｏｐｉｃａ的ｎＤＮＡ和ｋＤＮＡ。结果显示，两种利什曼原虫ｎＤＮＡ及ｋＤＮＡ均扩增出各自特有的带型，两虫种间ｎＤＮＡ、ｋＤＮＡ的扩增片段共享度Ｆ值分别为０７２７２和０８５７１。表明ＲＡＰＤＰＣＲ可作为利什曼原虫虫种分析鉴别的工具     

重组杜氏利什曼原虫39kD抗原的诊断价值

为了给内脏利什曼病患者提供较为准确的实验诊断方法。我们将表达杜氏利什曼原虫３９ｋＤ抗原的大肠杆菌制备物进行电泳并转移至硝酸纤维滤膜上，以１１例确诊ＶＬ病人的不同稀释度血清对其识别，当稀释度达１：４００时，全部病人血清均能明显识别３９ｋＤ抗原带，而正常人血清和其他病人血清不识别３９ｋＤ抗原带，说明重组杜氏利什曼原虫３９ｋＤ抗原具有一定的诊断价值，用其检测病人血清中相应抗体可以诊断内脏利什曼病。     

我国不同流行区内脏利什曼原虫分离株kDNA的PCR-SSCP分析

目的： 分析我国不同类型流行区内脏利什曼原虫 （Ｌ．ｄ．） 分离株ｋＤＮＡ。方法： 应用利什曼原虫属特异引物１３Ａ, １３Ｂ及据杜氏利什曼原虫四川人分离株ｋＤＮＡ 微环特异片段序列设计合成的引物Ⅰ、引物Ⅱ, ＰＣＲ扩增不同流行区利什曼原虫分离株ｋＤＮＡ, 获特定片段, 进行ＳＳＣＰ分析。结果： 用引物Ⅰ和引物ⅡＰＣＲ扩增内脏利什曼原虫分离株ｋＤＮＡ, 在同样试验条件下, 山丘地区和荒漠地区Ｌ．ｄ． 分离株扩增出２９７ ｂｐ 特定片段, 而平原地区Ｌ．ｄ．分离株及新疆皮肤利什曼原虫未扩增出２９７ ｂｐ 特定片段。将上述各虫株的２９７ ｂｐ 特定片段进行ＳＳＣＰ分析, 可见两个山丘地区的Ｌ．ｄ．分离株ｓｓＤＮＡ 迁移率相同, 而与荒漠地区新疆７７１分离株则相差较大。用引物１３Ａ, １３ＢＰＣＲ 扩增平原地区的Ｌ．ｄ．山东分离株和Ｌ．ｄ．江苏分离株、山丘地区的Ｌ．ｄ．汶川分离株、Ｌ．ｄ．甘肃分离株,均扩增出１２０ ｂｐ 特定片段。经ＳＳＣＰ分析,平原地区的Ｌ．ｄ．山东分离株和Ｌ．ｄ．江苏分离株的ｓｓＤＮＡ迁移率完全相同; 山丘地区的Ｌ．ｄ．汶川分离株和Ｌ．ｄ． 甘肃分离株ｓｓＤＮＡ迁移率相同, 但与平原地区者明显不同; 婴儿利什曼ｓｓＤＮＡ迁移     

杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因真核表达重组质粒构建

目的 构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白（amastin）编码基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin。方法 提取杜氏利什曼原虫基因组DNA进行PCR扩增,将扩增出的无鞭毛体蛋白基因片段导入质粒载体pcDNA3.1（＋）,构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin。结果 扩增出大小约550bp的无鞭毛体蛋白基因;重组质粒pcDNA3.1-amastin经鉴定正确。结论 成功构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin。     

杜氏利什曼原虫23kDa抗原编码基因克隆的表达

将已建立的杜氏利什曼原虫ｃＤＮＡ文库基因,亚克隆于ｐＵＣ１８质粒载体,诱导表达筛选两个克隆,即Ｐ１、Ｐ２,表达的蛋白分子量皆为２３ｋＤａ,Ｐ１克隆表达的２３ｋＤａ蛋白分子,经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析显示,可被兔抗杜氏利什曼原虫前鞭毛体抗血清及内脏利什曼病病人血清识别。     

BALB／c小鼠感染都兰利什曼原虫后抗原／抗原抗体复合物的检测

采用能使动物及人致皮肤什曼病的都兰利什曼原虫接种２只ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，分别于５、１０、３０、６０和９０天剖检，结果仅在小鼠后足垫皮肤组织涂片中查见原虫，而肝脏、脾脏和骨髓组织涂片均未能查到利什曼原虫。同时以ＨＲＰ－Ｗ１Ｃ１０８．３进行ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验，检测感染小鼠足垫皮肤组织内抗原及血清内抗原抗体复合物的情况，结果显示，ＢＡＬＢ／ｃ小鼠在感染都兰利什曼原虫的第５天起，其皮肤组织与血清妤 呈阳     

基于荧光重组酶介导等温扩增技术的利什曼原虫核酸检测方法的建立

目的 建立一种基于荧光重组酶介导等温扩增(recombinase-aided isothermal amplification,RAA)技术的检测利什曼原虫核酸的方法.方法 针对利什曼原虫内转录间隔基因序列1(ITS1)基因设计用于RAA检测的特异性引物和探针,通过引物配对筛选、引物和探针浓度优化,建立检测利什曼原虫核...     

河南省1例输入性内脏利什曼病的实验室诊断

目的　分析河南省1例输入性内脏利什曼病病例，探讨内脏利什曼病的实验室诊断方法。方法　分析患者的流行病学资料和临床资料，镜检观察骨髓涂片中杜氏利什曼原虫无鞭毛体；rK39试纸条检测血清中利什曼原虫抗体；用两对引物K13A?K13B和 LITSR?L5.8S分别扩增利什曼原虫动基体DNA和核糖体DNA内转录间隔区基因片段。结果　 该患者曾去过内脏利什曼病流行区，有不规则发热、脾肿大、全血细胞减少、白蛋白/球蛋白比例倒置等症状，骨髓涂片查见杜氏利什曼原虫无鞭毛体，rK39试纸条检测阳性，两对引物K13A?K13B和 LITSR?L5.8S分别扩增出87 bp和285 bp的片段。两片段序列与杜氏利什曼原虫相应序列的相似性分别为94%和100%。结论　结合患者的流行病学资料和临床表现以及实验室检测结果，确诊该病例为内脏利什曼病病例，病原体为杜氏利什曼原虫。     

用RAPD技术分析利什曼原虫DNA多态性

为了建立ＲＡＰＤ技术分析利什曼原虫ＤＮＡ多态性的方法，并进一步提示Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ和Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ之间的亲缘关系，本文应用筛选的两种随机引物（Ｍ１３，３３０１）分别扩增了Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ和Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ的ｎＤＮＡ和ｋＤＮＡ。结果显示，两种利会曼原虫ｎＤＮＡ及ｋＤＮＡ均扩增出各自特有的带型，两虫种间ｎＤＮＡ、ｋＤＮＡ的扩增片段共享度Ｆ值分别为０．７２７２和０．８５７１。表明ＲＡＰＤ－     

新疆奇台及阜康两地利什曼原虫致病力的研究

本文对新疆奇台及阜康两地大沙鼠与白蛉体内利什曼原虫引起的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠及背纹仓鼠组织病变作了观察。结果发现其损害与克拉玛依地区利什曼原虫所致的相似，从而在致病力方面进一步证实了两地原虫均为都兰利什曼原虫的鉴定。在实验条件下，组织病理学的原虫阳性检出率远较涂片的为高。ＢＡＬＢ／ｃ小鼠皮肤血管内原虫的发现，为都兰利什曼原虫全身性转移的途径，提供了组织病理学的依据。