一种重要的疟原虫循环抗原—乳酸脱氢酶的研究进展及其在疟疾？…

本文主要从分子生物学和对疟原虫循环抗原一乳酸脱氢酶的特征进行了简要综 述，对其应用现状和前景进行了探讨。     

CⅡTA基因调控胰腺肿瘤细胞MHCⅡ类分子表达的体外研究

目的 研究CⅡTA基因对人胰腺癌CaPanC-2细胞和小鼠胰腺癌PanC-02细胞主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子表达的影响.方法 将携带CⅢA基因的腺病毒(Ad-CⅡTA)分别感染人胰腺癌CaPanC-2细胞和小鼠胰腺癌PanC-02细胞,培养24、48、72 h.实时PCR法检测感染细胞CⅡTA mRNA的表达,蛋白质印迹法检测CⅡTA蛋白表达,流式细胞仪检测 MHCⅡ类分子阳性表达细胞百分比.结果 CaPanC-2细胞感染后24、48、72 h的CⅡTA mRNA表达量分别为对照组的(16769±6455)、(261568±348850)和(834816 ±97783)倍(P<0.05);PanC-02细胞为对照组的(548546±87755)、(1242684±624888)和(1401647±726145)倍(P<0.05).CaPanC-2和PanC-02细胞均不表达CⅡTA蛋白,感染后48 h,CaPanC-2、PanC-02细胞CⅢTA蛋白表达量为0.746±0.499和0.631±0.244.感染24、48、72 h组CaPanC-2细胞表达MHCⅡ类分子的细胞百分比分别为(8.1±0.3)%、(18.9±0.3)%、(78.5±0.9)%,显著高于对照组的(7.0±0.1)%(P<0.01);PanC-02细胞表达MHCⅡ类分子的细胞百分比分别为(5.1±0.2)%、(37.3 ±2.0)%、(68.8±2.2)%,显著高于对照组的(2.2±0.2)%(P<0.01).结论 Ad-CⅡTA体外感染胰腺肿瘤细胞可促进CⅡTA基因的表达,从而促进细胞表面MHC Ⅱ类分子的表达.     

恶性疟原虫多价保护性抗原免疫血清对恶性疟原虫在体 …

本文观察人工化学合成与重组的复合基因ＰｆＣＭＲ未纯化抗原与纯化抗原免疫ＢＡＢＬ／ｃ小鼠的免疫血清,对恶性疟原虫在体外生长发育的影响。实验结果显示,抗未纯化抗原和抗纯化抗原两种免疫血清对疟原虫体外生长均有明显的抑制作用,抑制效果与加入抗血清的浓度及抗体作用的时间有关。随着抗体作用时间的延长,抑制效果更明显。当血清稀释度为１：４０,１：８０,１：１６０时,未纯化抗原与纯化抗原免疫血清对疟原虫系２增殖周     

恶性疟原虫组氨酸富集蛋白II抗原基因在大肠杆菌中的表达 …

目的 恶性疟原虫组氨酸富集蛋白Ⅱ（ＨＲＰⅡ）是疟原虫红内期生活史过程中从感染红细胞分泌至血浆中的水溶性抗原,是重要的诊断用抗原。本文通过实现恶性疟原虫ＨＲＰⅡ在大肠杆菌中的表达,为研制用于疟疾诊断的抗ＨＲＰⅡ单克隆抗体奠定基础。方法 将含有ＨＲＰⅡ抗原基因的重组表达质粒ＨＲＰⅡ／ｐＥＴ８ｃ用钙法转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,重组子经聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＢａｍＨＩ与ＢｇｌⅡ双酶切鉴定。重组子Ｈ     

恶性疟原虫杂合45肽抗原与乙肝病毒表面抗原融合基因…

通过ＰＣＲ扩增ＨＢｓＡｇ基因的Ｓ片段，然后将Ｓ基因与恶性疟原虫杂合４５肽基因连接并克隆到酵母表达质粒ｐＹＥＵｒａ３上。重组质粒被转化到酵母受体菌中。融合基因在酵母中获得表达，表达产物ＨＢｓＡｇ／４５肽，该融合蛋白经亲合层析后被纯化。     

乙肝疫苗免疫应答与主要组只相容性抗原(MHC)表达关系的研究进展

有资料表明，全球约有3．5亿乙肝病毒携带者和慢性乙型肝炎患者。约25％的乙肝病毒感染者死于与之相关的肝病和肝癌。自1981年乙肝疫苗获准使用后，乙肝感染率较之前明显下降。疫苗的免疫原性、保护性、安全性获得一致认可。但约5％-10％的健康人在按照标准方案实施一个免疫程序的乙肝疫苗接种后，乙肝表面抗体的滴度达不到保护水平（〈10mIU／ml），称为无／低应答者（抗-HBs水平低于2mIU／ml为无应答，低于10mIU／ml为低应答）。健康人群中即使控制了疫苗接种的外部因素（疫苗抗原含量。注射途径，部位等），机体的一般因素（年龄，性别，体重等）和其他因素（如病毒变异）。     

恶性疟原虫杂合113肽抗原基因在减毒鼠伤寒沙门氏菌SL…

我们先前已经将人工合成的恶性疟原虫杂合１１３肽基因克隆到表达载体ｐＷＲ４５０－１中，获得了重组质粒ｐＷＲＡＢ。现将ｐＷＲＡＢ先转化到ＬＢ５０００修饰后，再转化到疫苗菌ＳＬ３２６１，得到重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１。ｐＷＲＡＢ在ＳＬ３２６１中以β－半乳糖苷酶－杂合多肽抗原ＡＢ融合蛋白（ＧＺ－ＡＢ）一约１３．３％，免疫双扩散发现从ＳＬ３２６１中纯化的ＧＺ－ＡＢ可与抗ＧＺ－ＡＢ抗体反应，滴度为１：     

恶性疟原虫云南株丝氨酸重复抗原部分基因的克隆和序列 …

用ＰＣＲ方法特异性扩增ＳＥＲＡ基因片段，并将该基因片段克隆于Ｍ１３噬菌体，用双脱氧链末端终止法进行测定，应用ＰＣＧＥＮＥ软件对该基因序列进行了分析，结果显示该基因片段长度为４５３ｂｐ，Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ为２．６：１，符合恶性疟原虫结构基因的特点。同源性分析显示该基因在不同虫株间高度保守，我国ＰＦＤ－３／ＹＮ虫株ＳＥＲＡ基因片段仅及Ｂ１，Ｂ２，Ｂ３（巴西）株及Ｓ１６（塞内加尔）株在第６６７位氨基酸有不同     

主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因在肠组织中的表达及与溃疡性结肠炎的关系

目的 探讨主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因(MIC)在溃疡性结肠炎(UC)发病中所起的作用.方法 采用荧光定量实时-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测34例UC患者和17例正常人肠黏膜组织中MICA和MICB及其受体NKG2D mRNA表达水平的差异.采用激光共聚焦显微镜观察肠黏膜组织中MICA分子的表达定位.结果 UC组MICA、MICB及NKG2DmRNA水平的表达量(分别为3.5408±2.6658、8.9879±3.2893和2.4395±0.8147)均显著高于正常对照组(分别为1.0477±0.7201、4.6293±1.2616和1.1624±0.3954,P值分别=0.0053、0.0039和0.0078).免疫荧光共聚焦显微镜观察显示,MICA分子在肠上皮细胞胞膜中表达.结论 UC患者肠黏膜组织中MICA、MICB及其受体NKG2D的mRNA表达水平均增高,提示MIC基.因在UC局部起重要作用.     

恶性疟原虫传播阻断抗原pfs25和pfs48／45基因编码序列的体？…

目的：体外扩增编码恶性疟原虫传播阻断抗原ｐｆｓ和ｐｆｓ４８／４５的基因序列，为进一步对其进行克隆和体外高效表达创造条件，方法：特定寡核苷酸引物的设计，合成与纯化；恶性疟原虫ＦＣＣ１／ＨＮ株体外培养，利用碱裂解法从培养的恶性疟原虫ＦＣＣ１／ＨＮ株提取染色体ＤＮＡ；ＰＣＲ扩增和琼脂糖凝胶电泳分析。结果：从恶性疟原虫ＦＣＣ１／ＨＮ株基因组ＤＮＡ中特异扩增出编码ｐｆｓ２５和ｐｆｓ４８／４５基因序列，其，中     

恶性疟原虫杂合45肽抗原与乙肝病毒表面抗原融合基因在酵母中表达

通过ＰＣＲ扩增ＨＢｓＡｇ基因的Ｓ片段，然后将Ｓ基因与恶性疟原虫杂合４５肽基因连接并克隆到酵母表达质粒ｐＹＥＵｒａ３上。重组质粒被转化到酵母受体菌中。融合基因在酵母中获得表达，表达产物ＨＢｓＡｇ／４５肽，该融合蛋白经亲合层析后被纯化。电镜观察到ＨＢｓＡｇ／４５肽呈颗粒状。Ｄｏｔ┐ＥＬＩＳＡ分析表明恶性疟原虫杂合４５肽抗原可能暴露在颗粒表面     

冠心病患者MHC2TA-168A→G多态性与高敏C反应蛋白水平的相关性

目的 探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者Ⅱ类主要组织相容性复合物转录激活子(MHC2TA)5'启动区-168A→G多态性与血清高敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平的关系.方法 对185例CAD患者采用错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(mpPCR-RFLP)检测MHC2TA基因-168A→G多态性并免疫比浊法测定hs-CRP水平,分析两者之间的关系.结果 185例CAD患者MHC2TA基因-168A→G多态性:呈从基因型95例(51.35％)、AG基因型78例(42.16％)、GG基因型12例(6.49％);hs-CRP水平:GG基因型患者hs-CRP(4.5±1.8)mg/L及AG基因型患者(3.2±1.2)mg/L与AA基因型患者(2.7±1.1)mg/L比较差异有统计学意义(t=11.06、9.14,均P＜0.05);hs-CRP ＞3.0 mg/L的高危患者GG基因型占(91.7％)及AG基因型(73.4％)与AA基因型高危患者(45.2％)比较,差异有统计学意义(x2=17.75,28.04,均P＜0.05).结论 MHC2TA-168A→G多态性G等位可能是CAD炎症反应的独立影响因素,MHC2TA-168A→G多态性可能与CAD炎症反应有关.     

降钙素基因相关肽免疫反应纤维在大鼠心肌内的分布和密度

目的 观察降钙素基因相关肽免疫反应(CGRP-IR)纤维在大鼠心肌内的分布和密度，为心肌病的研究奠定形态学基础。方法 用免疫组织化学法显示大鼠心肌内的CGRP-IR纤维，计算其分布密度。结果在心房肌内和心室肌内均可见CGRP-IR纤维分布于心肌纤维之间，心房肌内CGRP-IR纤维的面积密度和数量密度均高于心室肌。结论 CGRP-IR纤维在大鼠心肌内分布广泛，其分布密度存在部位差异。     

恶性疟原虫疫苗研究X.MSP1中类表皮生长因子1与PfCMR基因？…

目的 克隆并表达恶性疟原虫重组复合抗原，为疟疾疫苗研究奠定基础。方法 将恶性疟原虫ＭＳＰ１中类表皮生长因子１（ＥＧＦ－１）基因与人工化学合成的抗原复合基因ＰｆＣＭＲ串接，插入高效非融合型蛋白表达载体ｐＢＶ２２０，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，转化菌经４２℃热诱导表达，表达产物用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ分析。结果 构建成功重组质粒ｐＢＶ２２０／ＰｆＣＭＲ－ＥＧＦ－１，经热诱导后表达出含外     

恶性疟原虫FCC—1／HN株EBA—175和HRP—Ⅱ基因片段在HeLa细？…

目的 在ＨｅＬａ细胞中表达恶性疟原性红细胞结合蛋白ＥＢＡ－１７５和富组氨酸蛋白ＨＲ－Ⅱ,进一步研究其生物学功能和免疫学特性。针ＥＢＡ－１７５和ＨＲＰ－Ⅱ部分基因串接插入ＰＣＤＮＡ３真核表达载体,获得重组表达质粒ＰＣＤＮＡ３／ＥＢＡ１７５－ＨＲＰⅡ。采用磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法将重组质粒转染ＨｅＬａ细胞进行体外表达,对表达产物进行ＳＤＳＰＡＧＥ、Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ鉴定。结果 表     

Ⅱ类反式激活因子启动子Ⅳ区C-1350T和G-944C多态性与乙型肝炎肝硬化易感性的关系

目的探讨Ⅱ类反式激活因子（CIITA）启动子Ⅳ区1350和-944位点单核苷酸多态性（SNP）与乙型肝炎肝硬化易感性的关系。方法在191例慢性乙型肝炎、353例乙型肝炎肝硬化与125名无HBV感染的健康献血员人群中，应用序列特异性引物PCR技术对CIITA基因启动子Ⅳ区C1350T和G-944C位点进行基因分型研究。结果慢性乙型肝炎患者CC：37．2％、TG：42．2％、CG：18．9％，肝硬化患者CC：35．3％、TG：34．0％，CG：29．3％，肝硬化患者CC、TG单倍型频率较低，而CG单倍型频率显著升高，差异有统计学意义（CG比CC：x^2=8．274，df=1，P〈0．01；CG比TG：x2=15．027，df=1，P〈0．01）；两组患者间CC与TG单倍型频率比较，x^2=1．231，df=1，P〉0．05，差异无统计学意义。与慢性乙型肝炎患者（CC／CC：12．6％；TG／TG：18．3％；含CG的基因型：33．5％；不含CG的基因型：35．6％）相比，肝硬化人群中CC／CC（1组，19．6％）和含CG的基因型（3组，53．5％）频率显著升高，而TG／TG（2组，11．9％）和不含CG的基因型（4组，15．0％）频率显著降低（1组比2组，X2=7．176，df=1，P〈0．01；1组比4组，x^2=19．818，df=1，P〈0．01；3组比2组，x2=11．423，df=1，P〈0．01；3组比4组，x2=34．226，df=1，P〈0．01；1组比3组，x2=0．009，df=1，P〉0．05；2组比4组，x2=2．176，df=1，P〉0．05）。结论CIITA基因启动子Ⅳ区中1350和-944位点多态性与慢性HBV感染者肝硬化的易感性密切相关，携带含CG单倍型的基因型人群更容易发展为肝硬化。