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1.
TGF-β1基因转染可抑制人晶状体上皮细胞增殖 总被引:4,自引:3,他引:1
目的:探讨脂质体介导的TGF-β1基因(pEGFP-TGF-β1)转染对人品状体上皮细胞(HLEC)系B3(HLEC-B3)增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法:将pEGFP-TGF-β1转染HLEC-B3,观察细胞形态变化;采用乍长曲线法、噻唑蓝比色法分析细胞增殖改变;使用流式细胞仪测定细胞凋亡变化、分析细胞周期改变(DNA 倍体法).结果:pEGFP-TGF-β1成功转染后,HLEC-B3逐渐变圆、脱壁.转染后24~48h细胞的增殖受到抑制,与相应对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);凋亡细胞比例(转染24h为(21.0±1.7)%,转染48h至(43.6±1.4)%明显升高,与相应对照组[24h为(0.42±0.06)%,48h为(0.60±0.02%)]比较,差异均有统计学意义(P<0.01);细胞出现G1期阻滞现象,表现为G1期细胞比例[转染 24h 为(72.0±1.9)%,转染48h为(74.7±2.2)%]增加和S期细胞比例[转染24h为620.4±2.2)%,转染48h为(19.4±1.4)%]下降,与相应对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论:pEGFP-TGF-β1可成功转染HLEC-B3,诱发细胞G1期阻滞,有效抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡. 相似文献
2.
TGF-β1在后发性白内障形成中的作用--TGF-β1对牛晶状体上皮细胞明胶酶表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对牛晶状体上皮细胞明胶酶活性的影响及其在后发性白内障形成中的作用。方法对牛晶状体上皮细胞进行体外原代及传代培养。分别收集原代、1代、2代、3代体外培养牛晶状体上皮细胞培养液;对1代细胞加入TGF-β1(终浓度10ng/mL),收集12h、24h、36h、48h和72h细胞培养液,酶谱法检测明胶酶活性。结果不加TGF-β1的原代、1代、2代、3代细胞培养液中未检测到明胶酶活性;加入TGF-β1后各个时间点均能检测到明胶酶活性,且条代密度随时间呈上升趋势。结论TGF-β1能够诱导牛晶状体上皮细胞明胶酶的表达。TGF-β1和明胶酶共同作用,可能加速后发性白内障的形成。 相似文献
3.
柔红霉素对转染hTERT基因的人晶状体上皮细胞增殖的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 研究柔红霉素(DNR)对外源性人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因转染的人晶状体上皮细胞(HLECs)生长的抑制作用及有效药物质量浓度。方法 采用脂质体转染技术,将编码hTERT基因的真核细胞表达质粒pCI-neo-hTERT的质粒ONA导入培养的HLECs,用G418筛选转染成功的抗性克隆并扩大培养,用细胞计数法分别比较转染前后的细胞生长曲线和群体倍增水平(PDL);用MTT比色法检测柔红霉素对转染后HLECs增殖的抑制作用。结果 获得一个可传代达32个群体倍增水平的HLECs克隆,转染后HLECs的生长率高于原代细胞,DNR质量浓度为0.4μg/ml作用1h和0.1μg/ml作用24h能明显抑制转染后的HLECs的增殖(P<0.01),1h和24h的50%抑制质量浓度(ID_(50))分别为2.4μg/ml和0.35μg/ml。结论 外源性hTERT基因的表达可以提高细胞的增殖能力,DNR能有效抑制转染后HLECs的生长。 相似文献
4.
目的 了解转化生长因子β2(TGF-β2)/Smad-4细胞信号传导通路是否参与B波段紫外线(UVB)辐射诱导人晶状体上皮细胞系(HLECs)的凋亡过程,探讨HLEC紫外线损伤的可能保护机制。方法 HLECs预先在含0.01μg/ml AF-302-NA的培养基中孵育24h,行480mW/cm2的UVB照射。采用流式细胞仪(FCM)和TUNEL方法检测细胞凋亡,采用RT-PCR检测TGF-β受体(TβRs)和bax mRNA表达水平的变化,免疫荧光染色方法进行Smad-4蛋白定位。结果 UVB照射组HLECs凋亡比例明显高于对照组;TβRs和凋亡促进子bax的mRNA表达水平增高,UVB照射后Smad-4表达量明显升高,并从HLECs细胞胞浆转移到细胞核内;AF-302-NA可以抑制UVB引起的Smad-4由细胞浆向细胞核的转移,部分抑制UVB照射引起的TβRs和bax mRNA表达量的增高,并可降低HLECs的凋亡比例。结论 在UVB诱导HLECs凋亡机制中,凋亡信号通过TGF-β2/Smad-4信号传导通路传递,阻断TGF-β2/Smad-4信号传导通路可以在一定程度上抑制UVB照射所引起的HLECs凋亡。 相似文献
5.
目的观察转化生长因子β2(TGF-β2)作用于人晶状体上皮细胞(LECs)后2类通路转导蛋白Smad4和p-Smad2/3的动态表达变化。方法体外培养的人LECs中添加10ng/mL人TGF—β2,RT-PCR方法测定不同时间点Smadg mRNA的表达,Western blot观察p-Smad2/3的表达,免疫组织化学法观察p-Smad2/3在LECs表达的特点。结果人LECs添加了外源性人TGF-β2,后1h,可出现Smad 4 mRNA表达增高,16h时达峰值(0.72±0.07),并持续至24h。与对照组比较差异无统计学意义(P〈0.05)。p-Smad2/3在2h后逐渐增强,与对照组比较差异明显,16h达到峰值(2.53g/L)。16h有p-Smad2/3颗粒胞浆表达,24b向核内聚集。结论TGF-β2刺激LECs后,可激活膜受体激活型Smad和通用型Smad,TGF-β2对Smad通路蛋白的激活存在时效关系。TGF—β2可通过特异性激活Smad通路,将信号转导至细胞核内。 相似文献
6.
晶状体上皮细胞凋亡是除先天性白内障以外的所有类型白内障形成的细胞学基础,是防治除先天性白内障以外的其它类型白内障的关键。凋亡相关基因调控的研究是解决晶状体上皮细胞凋亡机制的重要途径,我们综述了关于晶状体上皮细胞凋亡基因调控方面的研究进展。 相似文献
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目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)基因在大鼠白内障发生过程中的表达。方法 给3周龄大鼠单眼球后注射20%半乳糖生理盐水诱导白内障的发生,运用RT-PCR方法测定在不同时相大鼠晶状体中TGF-β1基因的表达。结果 半乳糖注射后晶状体上皮细胞TGF-β1 mRNA于8h开始上升,24h达高峰,是正常对照的4倍,2d后迅速下降,4d完全恢复到正常水平。结论在白内障形成的早期,晶状体细胞中TGF-β1呈高表达,提示TGF-β1基因可能在半乳糖性白内障的发生过程中起重要作用。 相似文献
8.
TGF-β1对晶状体上皮细胞增生和诱导其表达CTGF的作用 总被引:3,自引:0,他引:3
目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对晶状体上皮细胞(LEC)增生的影响及诱导LEC表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响。方法采用不同质量浓度(0·1、1、10ng/ml)的TGF-β1对体外培养的兔LEC进行诱导。8h后,采用免疫细胞化学染色法和医学图像分析软件,检测TGF-β1对LEC诱导表达CTGF的影响;48h后,用MTT比色法检测TGF-β1对LEC增生的影响。结果MTT比色法检测结果表明:不同质量浓度TGF-β1(0·1、1、10ng/ml)对LEC增生影响的A值分别为0·081±0·012、0·078±0·009、0·066±0·014,表明TGF-β1对体外培养的LEC增生起抑制作用,这种作用随质量浓度的增加而增强(P<0·05或P<0·01),抑制率从15·8%增加到31·9%。3种质量浓度的TGF-β1对LEC诱导表达CTGF的影响:A值分别为0·153±0·013、0·190±0·012、0·208±0·019,每两组之间的比较均具有统计学意义(P<0·01或P<0·05)。结论TGF-β1能够抑制LEC生长,促进其下游介质CTGF的表达,这可能是后囊混浊形成的一条重要途径。 相似文献
9.
目的观察转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导人晶状体上皮细胞(LECs)发生上皮问质转分化(EMT)时,其形态和基因表型所发生的变化。方法在体外培养的人LECs中,加入100pg/mL浓度的TGF-β2,诱导其发生EMT,处理0、6、24、48h后,观察其在形态上的变化,利用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)于各时间点检测其标志性基因E-钙粘蛋白(CDHl)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(VIM)等在表达水平上所发生的变化,并与未处理的空白对照组进行比较。结果加人TGF-β2后,随着时间的推移,人LECs在形态上拉长,呈梭形;上皮细胞标志性基因如CDHl的表达水平逐渐下调,48h时相对表达量为1.10E-06,和对照组2.68E-06相比差异有统计学意义(P=0.002);间质细胞标志性基因如VIM的表达水平逐渐上调,48h时相对表达量为1.64E-02,和对照组1.37E-02相比差异有统计学意义(P=0.006);而α-SMA的表达水平也逐渐上升,48h时相对表达量为9.21E-03,虽和对照组8.67E-03相比差异无统计学意义(P=0.551),但仍呈上升趋势。结论在TGF-132诱导下,人LECs发生EMT,其形态和基因表型均发生与间质细胞相符的变化。 相似文献
10.
目的 探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对胎儿晶状体上皮细胞增殖的作用。方法 用SP免疫对48例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),TGF-β1免疫组织化学染色。结果 PCNA,TGF-β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均表达;免疫阳笥细胞随着胎龄的增加而减少。PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色;TGF-β1阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状;经相关分析:TGF-β1与PCNA呈正相关。结论 PCNA,TGF-β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达;TGF-β1与PCNA呈正相关,具有促进晶状体上皮细胞增殖的作用。 相似文献
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外源性细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因对人晶状体上皮细胞周期的影响 总被引:7,自引:0,他引:7
目的 研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因转染对人晶状体上皮细胞(1ens epithelial cells,LEC)周期调控的影响,在基因水平探讨防治后发性白内障的可能性。方法 构建含人p21基因真核表达的载体质粒pcDNA3/p21,采用基因转染技术将质粒DNA转染至永生性人LEC系HLE-B3,使用流式细胞仪观察细胞生长和周期的变化,并采用逆转录聚合酶链式反应方法检测p21mRNA的表达;分别采用免疫组化和免疫印迹(western blotting,WB)方法检测p21蛋白的表达。结果 体外构建的载体质粒pcDNA3/p21经酶切鉴定含有人p21基因全长cDNA片段。基因转染后细胞HLE—B3经传代培养,48h后出现缓慢生长且部分细胞漂浮死亡的现象,G1期细胞明显增多。与对照细胞比较,转染后细胞的p21mRNA表达明显增多;p21蛋白表达明显增强,在经筛选的阳性克隆细胞中WB方法可检测到相对分子质量为21000的阳性蛋白带。结论 外源性p21基因可在人LEC系HLE.B3中过度表达,并对细胞周期调控产生抑制作用。基因转染抑制LEC增殖可能成为防治后发性白内障的新途径。 相似文献
12.
观察牛磺酸对过氧化氢损伤牛晶状体上皮细胞bcl-2基因表达的影响。方法采用细胞原位杂交法分别检测过氧化氢组及过氧化氢+牛磺酸组的晶状体上皮细胞中bcl-2基因表达,并与正常细胞对照。 相似文献
13.
MMP-9和TGF-β1在STZ-糖尿病大鼠晶状体上皮细胞的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)和转化生长因子-β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)在链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠晶状体上皮细胞中的表达及意义,了解MMP-9与TGF-β1在糖尿病性白内障发病中的作用.方法 8周龄SD大鼠60只随机分为对照组和实验组,给予实验组大鼠20 g·L-1 STZ溶液55 mg·kg-1一次性腹腔注射,诱发糖尿病性白内障.每周裂隙灯观察大鼠晶状体变化.采用免疫组织化学方法检测2周末、4周末、8周末时MMP-9及TGF-β1在大鼠晶状体上皮细胞中的表达.结果 对照组大鼠晶状体始终保持透明,实验组大鼠晶状体逐渐混浊.实验组MMP-9和TGF-β1的阳性表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组MMP-9 和TGF-β1阳性表达逐渐增高,各时段间差异有统计学意义(P<0.05).MMP-9和TGF-β1的阳性表达呈正相关(r=0.937,P<0.01).结论 MMP-9 和TGF-β1的表达增高可能在糖尿病性白内障的发生、发展中有重要作用. 相似文献
14.
目的 研究miRNA-184(miR-184)在转化生长因子β2(transforminggrowthfactorβ2,TGF-β2)诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中的表达及意义。方法 应用不同浓度(0μg·L-1、1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1、15μg·L-1)TGF-β2 诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化,细胞免疫荧光和Westernblot方法观察转分化相关分子波形蛋白(Vimentin)、钙黏附蛋白E(E-Cadherin)的表达;应用qRT-PCR检测miR-184在不同浓度(0μg·L-1、1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1、15μg·L-1)TGF-β2、不同作用时间(0h、6h、12h、24h、48h)TGF-β2(10μg·L-1)诱导人晶状体上皮细胞转分化中的表达变化。结果 随着TGF-β2浓度的增加,细胞胞浆中Vimentin荧光强度增强;E-Cadherin蛋白表达逐渐减少,各组细胞间E-Cadherin表达量差异有统计学意义(F=87.617,P<0.01);Vimentin蛋白表达逐渐增加,各组细胞间Vimentin表达量差异有统计学意义(F=68.923,P<0.01)。随着TGF-β2浓度的增加,细胞中miR-184相对表达量增多,在10μg·L-1TGF-β2诱导组达到峰值;随着TGF-β2诱导时间的延长,细胞中miR-184相对表达量增加,在24h表达达到峰值。结论 TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化时细胞内miR-184表达增加,并与诱导浓度和时间有关,为进一步研究miR-184在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的作用及机制提供实验基础。 相似文献
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目的 探讨蛋氨酸亚砜还原酶B1(methioninesulfoxidereductaseB1,MsrB1)基因沉默对过氧亚硝酸根(ONOO-)诱导的人晶状体上皮细胞(humanlensepithelialcells,HLEC)细胞周期的影响和ERK信号通路在其中的调节作用。方法 将培养的HLEC分为两组:正常组和MsrB1基因沉默组,分别用0μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1和300μmol·L-1ONOO-处理20min后,继续培养12h。用RT-PCR法检测MsrB1基因表达水平变化,流式细胞仪检测细胞周期水平变化,Westernblot法检测MsrB1基因沉默和ONOO-对pERK表达水平的影响。结果 300μmol·L-1ONOO-处理HLEC会导致MsrB1表达水平显著下降(P<0.01),当MsrB1基因沉默细胞经300μmol·L-1ONOO-处理后,MsrB1表达水平进一步显著下调(P<0.05)。经200μmol·L-1或300μmol·L-1 ONOO-处理,HLEC细胞周期分别阻滞在G2/M期和S期,当MsrB1基因沉默细胞经200μmol·L-1或300μmol·L-1ONOO-处理后,更多的细胞阻滞在G2/M期或S期(P<0.05)。pERK检测结果表明,MsrB1基因沉默前后经ONOO-处理导致的细胞周期阻滞和pERK表达水平显著下降有关(P<0.01)。结论 ONOO-可以下调HLECMsrB1表达水平,MsrB1基因沉默细胞经ONOO-处理,pERK表达水平显著下降,导致更多细胞阻滞在G2/M期和S期。 相似文献
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目的 :确定转化生长因子 β1(TGF β1)质粒DNA能否由脂质体携带进入家兔角膜上皮细胞 ,为角膜上皮细胞的研究提供方法。方法 :体外培养家兔角膜上皮细胞 ,用多聚阳离子脂质体携带重组的人的TGF β1质粒 ,向家兔角膜上皮细胞转染 ,在转染 12h后 ,表达 2d时 ,用免疫组化方法(SABC)检测TGF β1质粒DNA在家兔角膜上皮细胞的表达情况。结果 :外源TGF β1质粒DNA在家兔角膜上皮细胞中可以获得表达 ,在转染 12h后 ,表达 2d时的基因转染率为2 3%。结论 :稳定的外源基因可由脂质体介导转入生长中的收稿日期 :2 0 0 2 -0 3 -0 4;修回日期 :2 0 0 2 -0 4-10基金项目 :湖北省自然科学基金资助项目 (NO .98J0 70 )。作者简介 :黄琼 (1977-) ,女 ,湖北人 ,在读博士研究生 ,研究方向 :角膜病。通信作者 :黄琼 (E -mail:joanhuang77@2 1cn .com)。家兔角膜上皮细胞内 ,借此方法 ,可从外源基因入手 ,对角膜上皮细胞的生理、病理活动的机制进行研究 ;作为角膜上皮细胞基因类药物介入的基础研究和应用研究的介导体 ,脂质体显示出有希望的前景 相似文献
17.
葡萄糖浓度对培养的兔晶状体上皮细胞的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:观察不同浓度葡萄糖培养基对培养的兔晶状体上皮细胞形态、生长状态、细胞分化及TGF-β 2表达的影响.方法:以4.5,9,18和36g/L葡萄糖培养基处理原代培养的第2代兔晶状体上皮细胞,MTT法检测细胞生长状态,免疫组化法检测TGF-β2,α-SMA及PCNA.结果:相对于4.5g/L葡萄糖培养基,高浓度葡萄糖培养基可增强晶状体上皮细胞α-SMA与TGF-β 2的表达,而PCNA的表达无明显差异;MTT所反映的细胞生长状态呈下降趋势.结论:高浓度葡萄糖培养基可促进晶状体上皮细胞分化,对细胞的增殖有抑制作用,在此过程中TGF-β 2可能发挥着重要的作用. 相似文献
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目的探讨阿魏酸对高糖诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)损伤的保护作用。方法以HLEC为研究对象,将细胞随机分为对照组(HLEC+DMEM)、DMSO组(HLEC+DMEM+DMSO)、高糖组(HLEC+DMEM+30 mmol·L-1高糖)、高糖+阿魏酸组(HLEC+DMEM+DMSO+30 mmo·L-1高糖+阿魏酸)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Q-PCR检测p53、Bcl-2、Bax mRNA表达水平;免疫细胞化学和Western blot法检测p53、Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果高糖抑制HLEC的细胞活性,不同浓度阿魏酸干预后,HLEC的细胞活性均明显升高,差异均具有统计学意义(均为P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,高糖组HLEC凋亡率高于对照组(P<0.05),高糖+阿魏酸组细胞凋亡率低于高糖组(P<0.05);高糖组p53、Bax mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组,而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平... 相似文献
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基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶2组织抑制因子及转化生长因子β1在糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞的表达及意义 总被引:19,自引:0,他引:19
目的探讨基质金属蛋白酶2(matrix
metalloproteinase-2, MMP-2)、金属蛋白酶2组织抑制因子(tissue inhibitor of
metalloproteinase 2,TIMP-2)及转化生长因子β1(transforming growth foctor beta,TGF-β1)在糖尿病性白内障患者的晶状体上皮细胞中的表达及意义.方法应用免疫组化技术检测23例糖尿病性白内障患者和7例正常人的晶状体上皮细胞中MMP-2、TIMP-2及TGF-β1的表达,并进行比较.结果糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞中MMP-2和TGF-β1的阳性表达率与正常人比较,差异均有非常显著意义(χ2=24.548,16.78;P<0.01),而糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞中TIMP-2的阳性表达率与正常人比较,差异无显著意义(χ2=0.621,P>0.05).经Spearman等级相关分析,晶状体上皮细胞中,MMP-2和TGF-β1的阳性表达率存在正相关(r=0.516,
P<0.01);MMP-2和TGF-β1与TIMP-2阳性表达率间均无相关(r=-0.045,0.042;P>0.05).结论TGF-β1介导的MMP-2和TIMP-2表达失衡在糖尿病性白内障患者晶状体前、后囊膜下纤维化的发生和发展过程中起重要作用. 相似文献
20.
目的 研究转化生长因子-β1transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)在2型糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞(LECs)中的表达;探讨TGF-β1在2型糖尿病性白内障发生、发展过程中的作用.方法采用蛋白质免疫印迹(Westernblot)方法 检测75例伴糖尿病视网膜病变不同分期的2型糖尿病性白内障眼和20例无糖尿病的老年性白内障眼晶状体上皮细胞中TGF-β1蛋白水平,并进行统计分析.结果 糖尿病组TGF-β1的蛋白表达水平高于非糖尿病组平均水平(P=0.00);糖尿病各组间TGF-β1表达水平存在差异.结论 TGF-β1有促进2型糖尿病患者白内障发展的作用. 相似文献