拉米夫定治疗HBV感染患者血清HBV-DNA定量水平与YMDD变异的相关性研究

目的 观察拉米夫定治疗慢性乙型肝炎（CHB）患者过程中,CHB患者血清HBV-DNA水平与YMDD变异的关系.方法 将服用拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者按治疗前血清中HBV-DNA水平高低分成两组,低于1.00×105copies/ml为Ⅰ组,高于或等于1.00×105copies/ml为Ⅱ组,对在治疗过程中患者血清中HBV-DNA水平与YMDD变异率及变异类型之间的关系进行比较分析.结果 血清HBV-DNA水平高于或等于1.00×105copies/ml组发生YMDD变异显著高于HBV-DNA水平低于1.00×105copies/ml组（P〈0.01）.YMDD变异类型与血清HBV-DNA定量水平无明显相关性（P〉0.05）.结论 CHB患者血清HBV-DNA水平越高,应用拉米夫定治疗越容易产生YMDD变异,YMDD变异类型与血清HBV-DNA水平无明显相关性.     

慢性乙型肝炎患者应用拉米夫定治疗发生HBV YMDD变异的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者应用拉米夫定治疗发生HBV YMDD变异后与患者血清HBVDNA载量关系的临床意义.方法 选择46例应用拉米夫定治疗并发生HBV YMDD变异的CHB患者,另选择未发生HBV YMDD变异的CHB患者作对照组.探讨血清HBVDNA载量与HBV YMDD变异类型、变异发生时间的关系.结果 CHB患者接受拉米夫定治疗前,HBV YMDD变异组HBVDNA载量明显高于HBV YMDD未变异组（P〈0.01）.HBV YMDD变异类型（YVDD、YIDD、YVDD/YIDD）的分布与血清HBVDNA载量无相关性.HBVDNA载量与发生HBV YMDD变异的时间有相关性.随着HBVDNA载量的升高,发生HBV YMDD变异的时间越来越早.结论 应用荧光定量PCR方法检测血清HBVDNA载量和HBV YMDD变异,可动态观察CHB患者拉米夫定治疗后发生HBV YMDD变异的情况,对临床治疗和观察预后具有重要的临床意义.     

慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗后出现YMDD变异的相关因素分析

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者在服用拉米夫定治疗后发生YMDD变异的相关因素.方法 选择应用拉米夫定治疗后产生YMDD变异和未产生YMDD变异的CHB患者各50例,分析两组治疗前血清病毒载量水平、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HBeAg状态与发生YMDD变异的关系.结果 YMDD变异组治疗前HBV DNA水平高于未...     

血清HBV DNA反跳发生时间与YMDD变异的关系

目的:研究拉米夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB),血清HBVDNA反跳发生时间与YMDD变异的关系。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法,分别检测拉米夫定治疗前的血清样本和治疗后不同时间发生HBVDNA反跳时的血清样本中是否存在YMDD变异株。结果:40例发生血清HBVDNA反跳的HBeAg阳性CHB病人,拉米夫定治疗前的血清中均未检出YMDD变异株。拉米夫定治疗6个月时发生HBVDNA反跳的6例病人,血清中也未检出YMDD变异(0/6);于治疗9个月时发生HBVDNA反跳的13例病人中有3例病人的血清检出YMDD变异(23·08%);于治疗12个月时发生HBVDNA反跳的21例病人中有18例病人的血清检出YMDD变异(85·71%);P<0·01。结论:拉米夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎,血清HBVDNA反跳发生时间与YMDD变异呈正相关,治疗9个月以后发生的血清HBVDNA反跳主要是由YMDD变异所致。     

拉米夫定耐药感染者HBV基因与YMDD变异的相关性探讨

目的探讨拉米夫定耐药感染者HBV基因型与YMDD变异的相关性。方法采用PCR扩增后测序的方法,对162例拉米夫定耐药感染者进HBV基因型的分析。实时荧光定量PCR法检测HBVYMDD变异及HBVDNA载量。率的比较采用Y2检验法,两组均数间的比较采用t检验法。结果162例拉米夫定耐药感染者中,B基因型102例（63．0％）,C基因型60例（37．0％）。YMDD变异111例（68．5％）,其中YIDD变异30例（18．5％）,YVDD变异32例（19．7％）,YIDD／YVDD混合型变异49例（30．3％）。统计结果显示,不同性别之间HBV基因型分布没有显著性差别（P〉0．05）。B型患者的年龄（29．7岁±10．2岁）显著低于C型患者的年龄（35．3岁±11．3岁）,差异有统计学意义（P〈0．05）。YMDD变异的发生率在B、C基因型之间差异无统计学意义（P〉0．05）。C基因型患者血清的HBVDNA含量（6．08±0．71）显著高于B基因型组（5．73±0．90）（P〈0．05）,而血清ALT水平没有显著性差别（P〉O．05）。结论拉米夫定耐药感染者YMDD变异与基因型无关。但C基因型患者平均年龄、病毒载量显著高于B基因型,可能是导致CHB患者对拉米夫定耐药的重要因素。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效观察及YMDD变异分析

探讨拉米夫定（3TC）对慢性乙型肝炎（CHB）的治疗效果,以及乙型肝炎病毒（HBV）聚合酶酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸（YMDD）基序变异对3TC疗效的影响。【方法】检测分析58例接受3TC治疗的CHB患者治疗前后血清标志物HBVDNA、ALT、HBVM的变化,以及治疗后HBVYMDD变异情况。【结果】3TC治疗HBeAg阴转率为40．38％,eAg／抗-e血清转换率为28．85％,HBVDNA阴转率为74．14％,ALT复常率为77．59％。随着疗程的延长,有65．12％病例出现反跣。检测出23例患者发生YMDD变异,变异发生率为39．66％,且以YVDD型变异为主要形式。YMDD变异与3TC治疗疗程相关;治疗前HBV病毒载量与治疗后YMDD变异的发生可能无相关性（P〉0．05）;HBeAg阳性与HBeAg阴性者YMDD变异发生率可能无明显差异（P〉0．05）。【结论】3TC治疗CHB的短期疗效好,但随着疗程的延长,会出现病毒耐药,3TC耐药与YMDD变异密切相关。YMDD变异耐药株的产生可能与肝炎复发以及肝脏损害加重相关。在3TC治疗过程中,可能还存在HBV基因其他位点的变异而引起耐药。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎发生病毒变异的临床研究

目的观察慢性乙型肝炎患者应用拉米夫定治疗前与治疗24个月期间的乙型肝炎病毒(HBV)变异情况。方法 101例接受拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者,在开始治疗前和治疗第3、6、12个月以及24个月时采集患者外周血,提取HBVDNA,进行HBVDNA测定和实时荧光PCR法分析检测基因序列变异。结果使用拉米夫定治疗前,发生YVDD变异1例,发生YIDD变异1例。应用拉米夫定治疗24个月期间发生变异共39例,变异率39.39%。其中,治疗第3个月,发生YVDD变异1例,YIDD变异1例;治疗第6月,发生YVDD变异3例,YIDD变异2例;治疗12个月时,发生YVDD变异6例,YIDD变异5例;在第24个月时发生YVDD变异11例,YIDD变异10例。随治疗时间的延长,YMDD变异率升高(P<0.05)。用药前HBVDNA定量>107copies/ml的慢性乙型肝炎患者的YMDD变异率明显高于HBVDNA定量<107copies/ml的慢性乙型肝炎患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 YMDD变异的发生随治疗时间的延长而增加。血清病毒载量可作为应用拉米夫定治疗产生YMDD变异的早期预测指标。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞 IFN-γ、IL-6水平变化与拉米夫定疗效的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者拉米夫定治疗前后外周血单个核细胞（PBMC）产生干扰素-1（IFN-γ）、白细胞介素-6（IL-6）水平与血清乙型肝炎病毒（HBV）载量和丙氨酸氨基转移酶（ALT）的关系。方法 采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测拉米夫定治疗前后的CHB患者HBVDNA和PBMC经植物血凝素（PHA）刺激后分泌IFN-1和IL-6的水平。结果 CHB患者治疗前PBMC分泌IFN-1水平显著低于正常对照组（P〈0，01），分泌IL-6水平显著高于正常对照组（P〈0．01）；拉米夫定治疗后HBV高、中载量组分泌IFN-1较治疗前显著升高（分别为P〈0．0l和P〈0，05），分泌IL-6水平较治疗前显著降低（分别为P〈0，01和P〈0，05），治疗后中、低载量组分泌IFN-1水平仍低于正常对照组（P〈0，01），中、低载量组分泌IL-6的水平高于正常对照组（P〈0．01）；患者INF．1水平变化与HBVDNA载量呈负相关（r=0，89，P〈0．001），IL-6水平变化与HBVDNA载量和A胛呈正相关（分别为r=0．92，P〈0，001；r=0．74，P〈0．001）。结论 CHB患者PBMC分泌IFN-1、IL-6水平可作为判断拉米夫定治疗效果的参考指标。     

HBV基本C区启动子区位点突变及病毒载量与拉米夫定耐药的关系

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）基本C区启动子（BCP）区第1762、1764位点突变及病毒载量与拉米夫定治疗慢性乙型肝炎（CHB）P区第552、528位点变异产生的关系。方法选择CHB且未接受过拉米夫定治疗的患者56例,应用拉米夫定治疗6个月,采用乙型肝炎病毒基因多态性检测芯片对拉米夫定治疗前后乙型肝炎病毒BCP区第1762、1764位点,P区第552、528位点进行检测,同时对患者治疗前后血清病毒载量进行检测。对比分析BCP区第1762、1764位点突变患者（A组）和未突变患者（B组）应用拉米夫定治疗6个月后,P区第552、528位点变异率,以及治疗前后血清病毒载量水平。结果（1）应用拉米夫定治疗6个月后,A组P区第552、528位点总突变率显著高于B组（P〈O．05）;第552、528单位点以及第552和528双位点突变率两组相比较差异均无统计学意义（P〉O．05）。（2）A组患者治疗前血清病毒载量水平显著高于B组患者（P〈O．05）。（3）产生P区第552、528位点变异患者治疗前血清病毒载量水平,显著高于P区未变异患者（P〈O．05）。结论（1）乙型肝炎病毒BCP区第1762、1764位点突变可增加拉米夫定治疗的耐药率。（2）BCP区第1762、1764位点突变可增加乙型肝炎病毒的复制水平。（3）BCP区位点突变所引起的乙型肝炎病毒大量复制可能是导致拉米夫定耐药率增加的主要原因。     

荧光PCR法检测乙型肝炎病毒YMDD基因变异的研究

目的探讨荧光PCR法在检测酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸(YMDD)基因变异上的临床应用价值及其拉米夫定治疗一年慢性乙型肝炎(CHB)患者发生YMDD基因变异的情况.方法61例HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)HBVDNA(+)CHB患者接受拉米夫定治疗一年,采用荧光定量PCR法检测其血清HBVDNA含量,ELISA法检测血清乙肝五项标志物,动力学法检测血清谷丙转氨酶(ALT)含量.HBV YMDD基因变异采用荧光PCR法进行检测.结果61例CHB患者经拉米夫定治疗一年后HBV-DNA阳性率降至34.4%(21/61),YMDD基因变异发生率18.0%(11/61),分析YMDD基因变异类型:4例为混合变异,其中3例为YMDD+YIDD,1例为YMDD+YVDD;7例为完全变异,其中5例为YIDD,2例为YVDD.变异患者组无1例出现HBeAb血清学转换,血清HBVDNA含量1066±0.8(copies/mi),明显高于HBVDNA(+)无变异组(P＜0.05),ALT含量123.8±53.8(U/L),明显高于HBVDNA(-)无变异组(P＜0.01).结论YMDD基因变异CHB患者HBVDNA均反跳,伴有ALT升高,及时了解CHB患者有无YMDD基因变异对避免造成患者不必要的经济负担、指导临床合理用药具有重要意义.荧光PCR法用于检测YMDD基因变异,具有经济实用、自动化程度高、简便快捷的优点.     

Posttransfusion hepatitis B transmitted by blood from a hepatitis B surface antigen-negative hepatitis B virus carrier

A female blood donor at our institution was implicated in three cases of clinical posttransfusion hepatitis B. She had given blood 25 times in 8 years. Twenty-seven recipients were followed up, and about one-half of those who were still living had serologic markers of hepatitis B virus (HBV) infection. The donor was repeatedly negative for hepatitis B surface antigen (HBsAg) and antibody, but she had high titers of antibody to hepatitis B core antigen. We conclude that blood from this HBsAg-negative blood donor was capable of transmitting hepatitis B.     

Hepatitis B virus DNA and hepatitis B surface antigen levels in chronic hepatitis B

Despite universal vaccination, chronic hepatitis B (CHB) continues to be a major health burden worldwide, with an estimated 350–400 million people infected with the virus. Over the past decade, rapid progress has been made with regards to antiviral therapy for CHB, from conventional interferon to pegylated interferon, and with the earliest oral agent lamivudine to the current, more potent drugs such as entecavir and tenofovir. There have also been new developments in the diagnostic and monitoring tools for CHB. Qualitative hepatitis B surface antigen (HBsAg) testing has been used to diagnose patients infected with CHB. More recently, quantitative HBsAg titers have been used to predict treatment outcome when measured at baseline or early into treatment. The progress on the use of hepatitis B virus (HBV) DNA levels has been more rapid. Serum HBV DNA levels have been shown to be important in the natural history of CHB infection, with higher levels being significantly associated with the development of cirrhosis and hepatocellular carcinoma. For patients receiving antiviral therapy, the baseline and early on-treatment HBV DNA levels are important in determining treatment outcomes. Monitoring of HBV DNA levels during therapy will allow for early detection of drug resistance. The end-of-treatment and post-treatment HBV DNA levels have been demonstrated to be important indicators of treatment success and relapse, respectively. With newer and more powerful antiviral agents, and with the development of quantitative assays that are highly sensitive, further studies are needed to optimize the use of these tools and agents in the modern management of CHB.     

慢性HBV感染者肝组织HBV cccDNA的定量检测

目的建立一种肝活检组织中HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）的定量检测方法。方法待检肝组织标本共21份，来源于江苏省人民医院肝脏手术患者，包括19份慢性HBV感染，其中HBeAg（＋）标本10份，HBeAg（-）标本9份，4份非HBV感染为阴性对照组，取HBVDNA阳性的患者外周血作为rcDNA组。检测方法的主要步骤为肝组织经蛋白酶K和细胞裂解缓冲液消化后，用液相抽提法提取核酸，将提取的核酸溶液分为2等份。1份用特异性降解单链DNA的核酸酶加以消化，纯化后使用跨缺口引物和SYBR GreenⅠ荧光染料进行实时荧光定量PCR分析；另1等份则用以定量检测肝细胞看家基因（β-Globin）作为样本细胞参数。检测结果的特异性主要通过PCR反应产物的序列分析及rcDNA组结果的对照进行证实，HBeAg（＋）组和HBeAg（-）组cccDNA水平的差异通过两样本t检验进行分析。结果PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析显示扩增产物的碱基数为350bp左右，DNA测序分析提示产物与目的片段的序列符合率为99％以上，且以rcDNA为对照的结果均为阴性，排除最有可能造成假阳性的rcDNA对结果的干扰。本方法对10mg HBeAg（＋）肝组织标本的cccDNA的检测阳性率为100％。血清HBeAg（＋）的肝组织样本的平均HBV cccDNA水平高于HBeAb（＋）的肝组织标本（P〈0．05）。结论通过上述三种途径证实了本文所建立方法的特异性。应用SYBR GreenⅠ荧光染料和β-Globin作为样本细胞参数所建立的实时荧光定量PCR方法检测肝细胞内HBV cccDNA，具有较高的特异性、敏感性，且成本较低的特点。     

Chronic hepatitis B and hepatitis B surface antigen carriers in university students

A study was made of latent hepatic diseases in university students. 1.4% to 1.6% of the students were positive for hepatitis B surface antigen (HBsAg), and 10.3% for anti-HBs. Of 28 students with HBs-antigenemia, 2 had chronic persistent hepatitis, and 3 minimal hepatitis, 23 being healthy carriers. Hepatitis B e-antigen (HBeAg) was detected in 44% of the students with HBsAg, and anti-HBe in 13%. Anti-HBe was significantly more frequently found in female students with HBsAg than in male students. Though most of the students with HBsAg had high titer of antibody to hepatitis B core antigen (anti-HBc), there were a small number of cases showing low titer. HBsAg and anti-HBs was detected in the same serum specimens of 2 carrier students. Liver damage was also found in 3 students without HBs-antigenemia.     

Management of hepatitis B

Treatment of chronic hepatitis B needs to consider two aspects. First, a certain proportion of patients will spontaneously undergo a stable remission of the underlying liver disease, i.e. without therapeutic intervention, on occasion of the HBeAg --> anti-HBe seroconversion. Second, all drugs that have been used so far in the treatment of HBV have rarely resulted in the definitive eradication of the viral infection, i.e. a permanent disappearance of HBsAg with development of anti-HBs. Thus, the most reasonable, albeit surrogate endpoint of treatment is the acceleration towards HBeAg --> anti-HBe seroconversion and/or the stable suppression of HBV replication at levels below 500000 copies/ml, which is associated with disappearance of intrahepatic necrosis and inflammation and slowing down of the fibrosis progression. Two drugs are currently available--interferon-alpha and lamivudine--and a third antiviral compound (adefovir dipivoxil) will soon appear in the market. Advantages and disadvantages of different therapeutic options are discussed below.