Toll样受体2对人角质形成细胞增殖的影响

目的 探讨Toll样受体2(TLR2)对体外培养人角质形成细胞增殖的影响.方法 天然配体肽聚糖(PGN)体外活化人角质形成细胞TLR2,用噻唑蓝法检测PGN对角质形成细胞体外增殖的影响,确定最适作用浓度;用实时荧光定量PCR法和Western印迹法分别检测角质形成细胞Ki67、TLR2、核因子(NF)-KBp65及转化生长因子(TGF)-α mRNA和蛋白的表达水平;采用抗体封闭实验分析封闭TLR2对PGN诱导角质形成细胞Ki67、TLR2、NF-KBp65及TGF-α表达的影响.结果 不同浓度的PGN处理角质形成细胞后24 h,在1.25,2.5,5 μg/mL的浓度下细胞较对照组出现明显增殖(P＜0.05). 1.25、2.5和5μg/mL PGN作用于角质形成细胞后24 h,其中1.25和2.5 μg/mL浓度下Ki67 mRNA的表达明显增加,各组Ki67蛋白合成均有增加;各组TLR2 mRNA和蛋白的表达均增加;1.25μg/mL浓度下NF-KBp65 mRNA的表达明显增加,各组细胞核内NF-KBp65蛋白合成均增加;其中1.25和5 μg/mL浓度下TGF-α mRNA和蛋白表达均明显增加(P＜0.05).以抗人TLR2单克隆阻断性抗体封闭TLR2后,PGN诱导的角质形成细胞Ki67、TI,R2、NF-KBp65及TGF-α mRNA和蛋白表达的上调均受到明显抑制(P＜0.05).结论 角质形成细胞TLR2经PGN诱导活化后,可能通过促进NF-KB活化及TGF-α表达而导致角质形成细胞的异常增殖.     

EGCG对中波紫外线诱导HaCaT细胞p53基因和蛋白表达的实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对中波紫外线(UVB)照射诱导永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p53 mRNA和p53蛋白表达的影响。方法:以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,并以200μg/mL EGCG处理照射后的HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测各处理条件下p53 mRNA和/或p53蛋白的表达水平。结果:30 mJ/cm2的UVB照射后HaCaT细胞的p53 mR-NA和p53蛋白表达逐渐增加,4 h达到峰值,4 h后随照射剂量增加而增加,24 h后有所恢复;加入EGCG可下调UVB诱导的表达作用。结论:UVB照射对HaCaT细胞p53 mRNA和p53蛋白的诱导表达有时效性与量效性,EGCG可下调UVB照射的这种诱导作用。     

白细胞介素22对HaCaT细胞CCL28表达的影响

目的探讨白细胞介素(IL-22)对HaCaT细胞黏膜相关上皮趋化因子(CCL28)表达的影响。方法培养HaCaT细胞,将其分为6组:4个IL-22组(分别用12.5、25、50、100μg/L的IL-22进行干预处理);阻断剂组(50μmol/L PD98059阻断干预,2 h后加入50μg/L IL-22);对照组(用PBS处理)。24 h后,用CCK-8检测细胞的增殖;用实时荧光定量RT-PCR检测CCL28 mRNA的水平变化;用蛋白免疫印迹法、酶联免疫吸附法和免疫荧光检测CCL28蛋白水平的变化。结果CCK-8检测显示,上述浓度的IL-22作用于HaCaT细胞24 h后,对细胞的增殖有明显的促进作用,且这种促进作用能被PD98059抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量RT-PCR检测显示,上述浓度的IL-22作用于HaCaT细胞,细胞中CCL28 mRNA逐渐升高,均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01);通路阻断剂组较50μg/L IL-22组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。用蛋白免疫印迹法和酶联免疫法检测到CCL28蛋白水平变化的趋势与实时荧光定量RT-PCR检测到的CCL28 mRNA的水平变化的趋势一致,且差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光检测显示,HaCaT细胞内CCL28蛋白主要表达在细胞质。结论IL-22可剂量依赖促进HaCaT细胞增殖和CCL28的表达,其可能通过MAPK-ERK1/2通路作用。     

维胺酯对HaCaT细胞增殖和分化的影响

目的 探讨维胺酯对体外培养角质形成细胞(HaCaT细胞)增殖和分化的影响.方法 将浓度为2,5,10,15,20,25,30 μg/mL的维胺酯作用于培养的HaCaT细胞,采用MTT法检测维胺酯对HaCaT细胞体外增殖的影响,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测分化标记物角蛋白10及内披蛋白mRNA的表达水平.结果 2 μg/mL维胺酯处理的HaCaT细胞,48 h时表现出对细胞增殖的抑制作用,随着时间延长和药物剂量加大,抗增殖作用愈明显;当药物质量浓度达到30 μg/mL时,48 h和72 h时的抑制率分别为57.67%和82.00%.与对照组相比,经维胺酯作用48 h后,细胞G₁期比例显著增加,S期与G₂期比例则显著下降,并可抑制G₁/G₂期转换,但对细胞凋亡无影响.细胞内披蛋白mRNA表达水平随维胺酯处理浓度增高而上升,药物浓度达30μg/mL时,表达水平由对照组的40.80%增高至156.12%;而角蛋白10 mRNA表达水平则下降,由96.46%降至14.60%.结论 维胺酯具有抑制角质形成细胞增殖及诱导其分化的作用.     

Wnt5a对HaCaT细胞的增殖、周期及血管内皮生长因子的影响

目的:以HaCaT细胞为细胞模型,探讨Wnt5a能否激活非经典Wnt5a/Ca~2+信号传导途径,并检测其对HaCaT细胞增殖、周期和对血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨Wnt5a在银屑病发病中的作用机制。方法:采用CCK-8检测不同浓度Wnt5a重组蛋白对HaCaT细胞增殖的影响;利用流式细胞仪技术测定Wnt5a对HaCaT细胞周期和Ca~2+浓度的影响;不同浓度Wnt5a和Frizzled5分别刺激HaCaT细胞后,分别采用RT-PCR和Western blot技术检测HaCaT细胞内VEGF在mRNA和蛋白水平的表达变化。结果:5μg/mL、15μg/mL和25μg/mL的Wnt5a能够不同程度的提高HaCaT细胞的增殖能力,促进细胞周期从G1期向S期分化,其中15μg/mL和25μg/mL组与空白组相比具有明显差异(P0.01)。同时,15μg/mL和25μg/mL的Wnt5a可增加HaCaT细胞内Ca~2+浓度(P0.05)。RTPCR和Western blot结果显示,Wnt5a和Frizzled5能不同程度的促进VEGF的表达,其中Wnt5a的效果更显著(P0.05)。结论:外源性Wnt5a能促进HaCaT细胞增殖和周期,并增加细胞内Ca~2+浓度,进而激活Wnt5a/Ca~2+非经典信号传导途径,从而促进VEGF的表达。     

长波紫外线照射和基因甲基化状态对HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:研究长波紫外线(UVA)照射和基因甲基化状态改变对HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:5 J/cm<'2>UVA照射HaCaT细胞后24 h、48 h和72 h及1μmol/L 5-氮杂胞苷(5-azaC)处理HaCaT细胞24 h、72 h和120 h后,采用反转录(RT)-PCR、Western blot方法和巢式聚合酶链反应(nested polymearse chain reaction,N-PCR)分别检测iNOS mRNA、蛋白和cDNA的表达情况.结果:HaCaT细胞正常对照组无iNOS mRNA、蛋白和cDNA的表达;5 J/cm<'2> UVA照射后,HaCaT细胞的iNOS mRNA、蛋白和cDNA表达在24 h时出现,48 h达高峰,且明显高于24 h(P<0.05),72 h无表达:5-azaC处理HacaT细胞24 h后,仅有iNOS cDNA表达,72 h和120 h有iNOS mRNA、蛋白和cDNA表达,且120 h表达量强于72 h(P<0.05).结论:HaCaT细胞iNOS表达与UVA照射存在一定的时间关系,iNOS基因甲基化状态的改变可以影响其表达.     

重组人色素上皮衍生因子对HaCaT细胞体外增殖和白细胞介素6、8及血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨重组人色素上皮衍生因子（rhPEDF）对HaCaT细胞体外增殖和白细胞介素6（IL-6）、IL-8及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。 方法 HaCaT细胞分4组进行不同处理,分别为100 μg/L rhPEDF组、50 μg/L rhPEDF组、25 μg/L rhPEDF组及对照组（只加RPMI 1640培养液）。采用CCK8法检测不同浓度rhPEDF作用于HaCaT细胞24、48、72 h后对细胞体外增殖的影响。RT-PCR和Western印迹法检测rhPEDF对HaCaT细胞IL-6、IL-8、VEGF mRNA及其蛋白表达的影响。统计分析方法采用两因素方差分析、单因素方差分析、SNK-q检验以及Pearson相关分析。 结果 25、50、100 μg/L的rhPEDF作用24、48、72 h后对HaCaT细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用。随时间延长和rhPEDF浓度的增加,rhPEDF对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用均逐渐增强（F = 1115、329.9,均P < 0.001）。与对照组相比,不同浓度（100、50、25 μg/L）rhPEDF作用于HaCaT细胞48 h后,VEGF、IL-6、IL-8 mRNA及蛋白的表达均下降,差异均有统计学意义（P < 0.05）。随rhPEDF浓度的增加,各浓度rhPEDF组VEGF mRNA、IL-6和IL-8蛋白表达均出现下调,与对照组比较,差异均有统计学意义（P < 0.05）;100 μg/L rhPEDF组的IL-6、IL-8 mRNA表达明显低于25 μg/L rhPEDF组（P < 0.05）;100 μg/L rhPEDF组VEGF蛋白表达分别低于50、25 μg/L rhPEDF组（P < 0.05）,而50与25 μg/L rhPEDF组间差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 rhPEDF可抑制HaCaT细胞体外增殖,并可在mRNA及蛋白水平下调IL-6、IL-8、VEGF的表达。     

白介素22调控角质形成细胞表达角蛋白17的研究

目的:研究白介素(IL)-22对培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)表达角蛋白(K)17的影响.方法:对体外培养的HaCaT细胞分别给予不同浓度的IL-22(0 ～ 100 μg/L)作用24 h,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测K17mRNA 表达水平,以酶联免疫吸附测定技术(ELISA 法)、蛋白质免疫印记法(Western blot)及免疫荧光染色法检测K17 蛋白表达水平的变化.结果:HaCaT细胞经12.5、25.0、50.0、100.0 μg/L 的IL-22 作用后, 均出现不同程度的K17 表达.与空白对照组的HaCaT细胞相比,12.5 μg/L组的mRNA及蛋白表达无明显差异,而25.0、50.0、100.0 μg/L组的mRNA 及蛋白表达则明显上升(P ＜0.05),并且随着IL-22浓度增高,K17mRNA及蛋白表达量增多.免疫荧光染色图片显示,随着IL-22 浓度的增高,HaCaT细胞胞质中K17蛋白荧光染色增强.结论:IL-22可以剂量依赖方式诱导HaCaT细胞表达K17.     

葫芦素Ⅰ对HaCaT细胞体外增殖及对角蛋白17、STAT3、VEGF表达的影响

目的 探讨葫芦素Ⅰ对HaCaT细胞体外增殖及角蛋白17(K17)、信号转导及转录激活子3(STAT3)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用不同浓度葫芦素Ⅰ(0.0125、0.025、0.05、0.1μmol/L)、含与0.1 μmol/L葫芦素Ⅰ等体积DMSO的DMEM培养液(溶媒组)、DMEM培养液(阴性对照组)、10 nmol/L卡泊三醇(阳性对照组)分别作用于HaCaT细胞.采用CCK8法检测葫芦素Ⅰ作用12、24、36 h后对HaCaT细胞体外增殖的影响,RT-PCR法检测葫芦素Ⅰ作用24 h对HaCaT细胞K17和VEGF mRNA表达的影响,Western印迹法检测葫芦素Ⅰ作用24h对HaCaT细胞K17、STAT3、磷酸化STAT3(P-STAT3)和VEGF蛋白表达的影响.结果 0.0125 μmol/L葫芦素Ⅰ作用12h即开始表现出对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用,当葫芦素Ⅰ浓度增加到0.1 μmol/L时,24h和36h的抑制率分别为43.00％±2.11％和48.98％±2.27％.与阴性对照组相比,各浓度葫芦素Ⅰ组对HaCaT细胞体外增殖均有抑制作用(均P＜ 0.05),且该抑制作用随葫芦素Ⅰ浓度的增加及作用时间的延长逐渐增强.不同浓度葫芦素Ⅰ作用于HaCaT细胞24 h后,K17 mRNA及其蛋白、P-STAT3蛋白、VEGF mRNA及其蛋白表达量均随葫芦素Ⅰ浓度的增加而降低,差异有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 葫芦素Ⅰ可抑制HaCaT细胞的体外增殖,并可在mRNA水平下调K17、VEGF的表达,在蛋白水平下调K17、P-STAT3、VEGF的表达.     

熊果酸对干扰素γ刺激HaCaT细胞产生白细胞介素33的影响

目的：探讨熊果酸对干扰素γ（IFN?γ）刺激HaCaT细胞产生白细胞介素33（IL?33）的影响及其机制。方法不同浓度熊果酸（0、0.1、1、5、10、20、40、80μmol/L）分别刺激HaCaT细胞24、48、72 h,MTT法检测其对细胞增殖的影响。将HaCaT细胞与200μg/L IFN?γ共培养建成炎性细胞模型,再与10和15μmol/L熊果酸共培养,以IFN?γ诱导的HaCaT炎性细胞模型为对照,探讨熊果酸的抗炎作用,RT?PCR法检测IL?6和IL?33 mRNA的表达,Western印迹法检测IL?33、p?ERK1/2和ERK1/2蛋白的表达。结果 MTT法检测显示,5~20μmol/L熊果酸作用24 h对细胞活力影响不大,而40~80μmol/L熊果酸在各个时间点均可明显抑制HaCaT细胞增殖（P<0.05）,故后续实验采用10和15μmol/L浓度。HaCaT细胞经IFN?γ刺激后,IL?33 mRNA（0.812±0.036）、IL?6 mRNA（0.947±0.091）表达量和IL?33蛋白表达（1.317±0.119）均显著高于空白对照组（分别为0.412±0.021、0.595±0.030和0.147±0.036,均P<0.05）;而IFN?γ+10μmol/L熊果酸组（分别为0.447±0.042、0.437±0.099和0.923±0.058）和IFN?γ+15μmol/L熊果酸组（分别为0.438±0.028、0.350±0.075和0.564±0.113）又较IFN?γ组（分别为0.812±0.036、0.947±0.091和1.317±0.119）显著降低（均P<0.05）,且这两个熊果酸组IL?33 mRNA水平与空白对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）,而IFN?γ+15μmol/L熊果酸组IL?33蛋白水平显著低于IFN?γ+10μmol/L熊果酸组（P<0.05）。HaCaT细胞分别经IFN?γ刺激5、60 min后,p?ERK1/2蛋白表达均明显高于空白对照组。IFN?γ+15μmol/L熊果酸5 min组和60 min组p?ERK1/2蛋白的相对表达量（0.458±0.053、0.302±0.054）分别低于IFN?γ5 min组（0.941±0.042）和60 min组（0.509±0.032）,差异均有统计学意义（P<0.05）,而总ERK1/2蛋白表达量不变。结论熊果酸能够降低IFN?γ刺激的HaCaT细胞IL?33的表达量,其机制可能与调节ERK信号通路相关蛋白的表达有关。     

枸杞多糖对中波紫外线照射HaCaT细胞低氧诱导因子1α、血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的 探讨枸杞多糖对中波紫外线(UVB)照射HaCaT细胞低氧诱导因子1cα(HIF-1cα)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达.方法 将常规培养的HaCaT细胞,分为对照组和枸杞多糖给药组(12.5、25.0、50.0、100.0 μg/ml浓度),各组在给药4h后同时进行不同强度UVB(0、20、40、60 mJ/cm2)照射,培养24 h.用CCK-8法检测细胞生存率.酶生化法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性;RT-PCR及Western印迹检测HIF-1α、VEGF基因及蛋白的表达.结果 对照组同照射剂量比,枸杞多糖(12.5、25.0、100.0 μg/ml浓度)各组不同程度提高UVB照射损伤细胞的生存率(P＜0.05),以50.0.μg/ml枸杞多糖组升高最明显,差异有统计意义(P＜ 0.01).枸杞多糖各给药组SOD活性以50.0 μg/ml SOD活性升高最明显,差异有统计学意义(P＜0.01).随着UVB照射剂量(20、40、60 mJ/cm2)增加,HIF-1α、VEGF基因、蛋白的表达也逐渐增高,与对照组相比,50.0 μg/ml枸杞多糖给药组能够有效降低细胞内HIF-1cα、VEGF基因及蛋白的表达,差异有统计意义(P＜0.05).结论 枸杞多糖通过对HaCaT细胞内HIF-1α、VEGF基因及蛋白表达的影响,可能参与预防UVB照射损伤的过程.     

白细胞介素22对HaCaT细胞他扎罗汀诱导基因3表达的影响

目的 探讨白细胞介素22（IL-22）对HaCaT细胞他扎罗汀诱导基因3（TIG3）表达的影响。 方法 用12.5 ~ 100 μg/L IL-22、IL-22 + PD98059（MAPK-ERK1/2通路抑制剂）及IL-22 + AG490（JAK2/STAT3通路抑制剂）干预处理HaCaT细胞24 h后,分别提取HaCaT细胞总蛋白及总RNA,用免疫荧光、Western印迹法、ELISA法检测TIG3的蛋白水平,用实时荧光定量RT-PCR检测TIG3 mRNA水平的改变。 结果 免疫荧光检测显示,HaCaT细胞内TIG3蛋白主要表达在细胞质。用Western印迹法检测,用12.5、25、50、100 μg/L的IL-22干预处理后,HaCaT细胞中TIG3蛋白表达分别为0.743 ± 0.035,0.678 ± 0.040,0.582 ± 0.041和0.328 ± 0.032,均低于对照组0.839 ± 0.045（P < 0.05）。酶联免疫法检测的结果示,上述浓度的IL-22干预处理后,TIG3蛋白水平变化的趋势与Western印迹法的结果一致。定量RT-PCR检测示TIG3 mRNA分别为对照组的0.838 ± 0.036,0.686 ± 0.061,0.565 ± 0.047,0.457 ± 0.033（P < 0.05）。加入信号通路抑制剂后,TIG3蛋白和mRNA水平降低程度较无抑制剂组减少,差异有统计学意义。 结论 IL-22可剂量依赖抑制HaCaT细胞TIG3的表达,其机制可能与MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3通路有关。     

TLR expression in human melanoma cells

There is increasing evidence that melanoma cells express TLR2, -3, and -4. However, the expression of other TLRs by these cells still remains unknown. We investigated the expression patterns of TLR2, -3, -4, -7, -8 and -9 both on melanoma-invaded lymph nodes and on melanoma cell lines. TLR2, -3, -4, -7 and -9 mRNA expression was determined by quantitative RT-PCR. The TLR protein expression level was measured ex vivo by immunohistochemistry and in vitro by flow cytometry. Results: At the mRNA level, melanoma cells in vitro, and possibly ex vivo, expressed TLR2, -3, -4, -7 and -9. TLR2 and -4 protein expressions ex vivo were over 50%, contrasting with an absence of these 2 TLRs in vitro. On the contrary, TLR-3 and -8 proteins had a low expression ex vivo with a high expression in vitro. TLR-7 and -9 proteins were expressed ex vivo and in vitro. Our study demonstrates for the first time that melanoma cells express TLR7 and -8.     

卡泊三醇、维A酸及雷公藤内酯醇对角质形成细胞及COLO16细胞中血管内皮生长因子生成的影响

目的 探讨卡泊三醇、维A酸及雷公藤内酯醇对角质形成细胞及COLO16细胞中血管内皮生长因子(VEGF)生成的影响.方法 采用RT-PCR法检测原代培养的人角质形成细胞及COLO16细胞中VEGFmRNA的水平.结果 卡泊三醇作用于正常人角质形成细胞4h和24h后,以及作用COLO16细胞24h后,均可抑制VEGFmRNA的表达,呈剂量依赖性,IC₅₀值分别为1.19×10^-4μg/mL、1.51×10^-4μg/mL和3.16×10^-5μg/mL.维A酸作用于正常人角质形成细胞4h后可抑制VEGFmRNA的表达,作用于正常角质形成细胞24h后及作用于COLO16细胞4h和24h均无抑制作用.雷公藤内酯醇对正常角质形成细胞和COLO16细胞中VEGFmRNA表达均无抑制作用.结论 在转录水平抑制VEGF生成可能是维A酸与卡泊三醇抗银屑病的作用机制之一.     

喜树碱对低氧诱导HaCaT细胞趋化因子配体20表达的影响

目的观察喜树碱(CPT)对低氧(2%O2)培养下人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)趋化因子配体(CCL20)表达的影响,探讨CPT治疗斑块状银屑病可能的作用机制。方法将HaCaT细胞分为常氧组(21%O2点)和低氧(2%O2点)组,培养12 h,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测CCL20 mRNA 的相对表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)Kit测定细胞培养上清中CCL20表达;将12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 nmol/L的CPT作用低氧诱导12 h的HaCaT细胞,ELISA Kit测定细胞培养上清中CCL20表达。结果常氧组和低氧组培养12 h,HaCaT细胞CCL20 mRNA 表达(ΔCT值)分别为-15.19±0.13和-13.70±0.10,两组间表达差异有统计学意义(t=-14.430,P=0.001);低氧培养12 h后HaCaT细胞(1×105个细胞)较常氧组CCL20蛋白表达增多,分别为(112.18±28.66)pg/ml、(64.36±47.85)pg/ml,但两组间表达差异无统计学意义(t=-1.485,P=0.212);100.0、200.0 nmol/L CPT处理低氧诱导12 h的HaCaT细胞(1×105个细胞)CCL20的表达分别为(64.35±19.70)pg/ml、(74.35±23.85)pg/ml,溶媒对照组为(112.18±28.66)pg/ml,组间多重比较差异有统计学意义(P0.05)。结论低氧可诱导HaCaT细胞CCL20 mRNA 表达增加;100.0、200.0 nmol/LCPT可抑制HaCaT细胞CCL20蛋白的表达。     

本维莫德对HaCaT细胞增殖、炎症因子分泌及皮肤屏障因子产生的影响

【摘要】 目的 研究本维莫德对人角质形成细胞增殖、炎症细胞因子分泌、皮肤屏障蛋白合成以及信号转导与转录激活蛋白1（STAT1）磷酸化的影响。方法 体外培养HaCaT细胞,采用0.1 ~ 1 000 μmol/L本维莫德处理24 h,用CCK8法检测细胞增殖。部分HaCaT细胞分为6组,对照组仅加入DMEM培养基,刺激剂组加入10 μg/L肿瘤坏死因子α（TNF-α）和干扰素γ（IFN-γ）,本维莫德组加入10 μg/L TNF-α和IFN-γ以及终浓度为1 ~ 10或1 ~ 100 μmol/L本维莫德,AhR拮抗剂组加入10 μg/L TNF-α和IFN-γ、10或100 μmol/L本维莫德以及10 nmol/L StemRegenin1（SR1）,处理24 h后,酶联免疫吸附实验检测细胞培养上清液中白细胞介素（IL）-4、IL-10、IL-22和胸腺活化调节趋化因子（TARC）的水平,RT-PCR检测HaCaT细胞芳香烃受体（AhR）、细胞色素P450 1A（CYP1A1）、聚丝蛋白、内披蛋白、胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）和TARC mRNA的表达水平,Western印迹法检测聚丝蛋白、内披蛋白、TSLP和STAT1及磷酸化STAT1（p-STAT1）的蛋白表达水平,免疫荧光检测本维莫德对HaCaT细胞中AhR核转位的影响。计量资料采用非配对Student t检验和单因素方差分析进行比较,Spearman检验分析各指标间的关系。结果 0.1、1、10、100、1 000 μmol/L本维莫德干预HaCaT细胞24 h后,细胞存活率分别为（90.2 ± 2.4）%、（85.4 ± 11.9）%、（52.8 ± 14.0）%、（39.4 ± 7.9）%、（27.5 ± 3.4）%,各组间差异有统计学意义（F = 162.5,P < 0.001）,50%抑制浓度为48.54 μmol/L。与刺激剂组相比,10和100 μmol/L本维莫德组HaCaT细胞分泌的IL-10水平上升（F = 16.110,P < 0.001）,但100 μmol/L组IL-22（F = 6.884,P < 0.001）和10、100 μmol/L组 TARC水平（F = 7.052,P < 0.001）显著下降。与刺激剂组相比,1 和10 μmol/L本维莫德组CYP1A1 mRNA表达（P = 0.004）和10 μmol/L本维莫德组FLG mRNA表达（P = 0.040）水平显著增高,而10 μmol/L组 TARC mRNA和10 μmol/L组TSLP mRNA表达显著降低（均P < 0.01）,而刺激剂组和本维莫德组间AhR mRNA的表达差异无统计学意义（P = 0.193）。与刺激剂组相比,10 μmol/L本维莫德组聚丝蛋白（P = 0.020）和1、10 μmol/L本维莫德组内披蛋白表达水平（P < 0.001）显著上升,而10 μmol/L TSLP蛋白表达水平显著下降（P < 0.001）,1和10 μmol/L本维莫德组p-STAT1蛋白表达水平显著下降（P < 0.001）。与100 μmol/L 本维莫德组相比,AhR拮抗剂组IL-10分泌水平显著下降（t = 4.794,P = 0.003）,TSLP mRNA的表达显著上升（t = 3.769,P = 0.005）;与10 μmol/L 本维莫德组相比,AhR拮抗剂组 IVL蛋白表达显著下降（t = 5.117,P = 0.002）,TSLP蛋白表达显著上升（t = 3.117,P = 0.043）, p-STAT1蛋白表达无明显变化（t = 1.400,P = 0.719）。免疫荧光染色显示对照组和1 μmol/L本维莫德组中AhR绿色荧光主要表达于HaCaT细胞胞质中,细胞核中基本无荧光表达;而在10 μmol/L和20 μmol/L本维莫德组HaCaT细胞的细胞质和细胞核均可见高密度绿色荧光。结论 本维莫德可通过活化AhR信号通路抑制HaCaT细胞增殖,调节炎症因子分泌,上调皮肤屏障相关因子的产生和抑制STAT1磷酸化。