中药滋补肝肾方对人黑素细胞株黑素合成的影响

目的通过中药滋补肝肾方对人黑素细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量影响的研究,探讨本方治疗白癜风的作用机制.方法采用4-甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定本方对细胞增殖的影响,用酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,比色法测定中药对黑素含量的影响.结果滋补肝肾方对体外培养的人黑素细胞具有促进细胞增殖、提高黑素含量和酪氨酸酶活性作用.结论本方能促进黑素细胞黑素合成,这可能是其治疗白癜风的作用机理之一.     

甘草提取物对人黑素细胞黑素合成的影响

目的: 评价甘草提取物对人原代黑素细胞酪氨酸酶及黑素合成的影响.方法:选择2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0 mg/L6个浓度的甘草作用于体外培养的人表皮黑素细胞72 h,分别测定细胞增殖活性、酪氨酸酶活性和黑素含量,western blot方法检测甘草作用后黑素细胞中酪氨酸酶蛋白的表达.结果: 甘草显著抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,且呈浓度依赖性.结论: 甘草通过下调酪氨酸酶的表达抑制黑素合成和酪氨酸酶活性.     

芍药苷对黑素细胞生物活性的影响

目的:检测芍药苷对体外培养正常人表皮黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法:建立正常人表皮黑素细胞培养体系,加入不同浓度(5~640μg/mL)芍药苷并作用一定时间后,采用MTT法、体外氧化DOPA反应法、NaOH法等分别测定黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素含量的变化。结果:40~160μg/mL芍药苷呈剂量依赖性抑制黑素细胞增殖,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);5-20μg/mL芍药苷对酪氨酸酶活性呈剂量依赖性促进作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);10-20μg/mL芍药苷对黑素细胞黑素合成起促进作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:芍药苷在较高浓度范围内(40~160μg/mL)对体外培养正常人表皮黑素细胞增殖有剂量依赖性抑制作用;在较低浓度范围内(10-20μg/mL)对其黑素合成有促进作用。     

川芎嗪对正常人黑素细胞黑素合成的抑制作用

目的　了解川芎嗪对黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法　采用黑素细胞体外纯培养技术 ,在药物处理后的细胞中掺入3H TdR测定细胞增殖情况 ,用氧化DOPA反应测定酪氨酸酶活性 ,NaOH法测量黑素生成量。结果　随着药物浓度增加 ,黑素细胞增殖降低 ,但浓度过高 ( >5 0 0 μg/ml)则显示其毒性作用。细胞酪氨酸酶活性及黑素生成量同药物浓度成反比。结论　川芎嗪在较低的相对安全浓度下 ( 5 0～ 40 0 μg/ml)即可有效抑制黑素细胞增殖 ,降低酪氨酸酶活性 ,从而减少黑素合成。     

单味中药提取物对体外培养的黑素细胞酪氨酸酶基因和c-kit基因表达的激活作用

目的 研究补骨脂、白芷、夏枯草、川芎和墨旱莲单味中药提取物对黑素细胞的酪氨酸酶基因和原癌基因c-kit蛋白表达的影响，以及对总蛋白合成的影响。方法 采用蛋白印迹法检测了酪氨酸酶蛋白和干细胞因子受体kit蛋白含量的变化；595nm比色标准曲线测定黑素细胞可溶性总蛋白含量。结果 白芷、补骨脂、夏枯草、川芎和墨旱莲对黑素细胞可溶性总蛋白合成和c-kit基因蛋白表达有促进作用，其中白芷和补骨脂对c-kit基因蛋白表达的促进作用为69．44％和58．43％；夏枯草、墨旱莲和川芎对酪氨酸酶基因的蛋白表达有一定的促进作用。结论 在白癜风治疗中传统中药具有较好的疗效．可能与酪氨酸激酶受体蛋白含量的提高相关，即通过SCF／kit蛋白途径起作用，因此可以通过该途径进一步筛选更多治疗白癜风的单味中药。     

山柰素与熊果苷对体外培养人正常黑素细胞的作用

目的比较山柰素与熊果苷对体外培养人正常黑素细胞增殖、黑素合成及其酪氨酸酶活性的影响,为探索色素沉着性皮肤病的发病机制以及筛选新的治疗药物提供理论依据。方法以不同浓度(1～100μmol/L)山柰素与熊果苷干预体外培养的人正常黑素细胞,比较两者对黑素细胞的黑素含量、细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响。结果对于黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量的抑制作用,山柰素在各个浓度均优于熊果苷,差异有统计学意义(P<0.05),山柰素对细胞增殖抑制率无明显影响,而熊果苷在各浓度对细胞增殖抑制作用显著,且随其浓度增加,抑制率逐渐增强。结论山柰素对黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的抑制作用强于熊果苷,并对黑素细胞的增殖及形态无明显的负面影响,是一种有良好应用前景的酪氨酸酶抑制剂。     

橙皮苷对人黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响

目的:观察橙皮苷对人原代黑素细胞酪氨酸酶及黑素合成的影响,探讨其作用机制.方法:选择50、100、200、300、400、500 和600 mg/L 7 个浓度的橙皮苷作用于体外培养的人表皮黑素细胞72 h,分别测定细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素含量.结果:橙皮苷显著抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,且呈浓度依赖性.结论:橙皮苷可抑制黑素合成和酪氨酸酶活性.     

欧前胡素抑制人表皮黑素细胞黑素生成

目的：评价欧前胡素对培养人表皮黑素细胞黑素生成的作用。方法：体外分离、纯化培养人表皮黑素细胞。随机分为空白组、熊果苷组和欧前胡素组（12．5μM,25μM和50μM）,作用48h,观察黑素细胞形态．检测黑素细胞活力、酪氨酸酶活性和黑素含量,免疫荧光显微镜观察欧前胡素对黑素细胞酪氨酸酶的影响。结果：不同浓度（0、12．5μM、25μM和50μM）欧前胡素作用于黑素细胞48h后,细胞活力分别为100％、107．8％、87．5％和59．7％。低浓度欧前胡素不影响黑素细胞形态,高浓度（50μM）对黑素细胞活力、酪氨酸酶活性、黑素含量有抑制作用,呈剂量依赖性。欧前胡素对酪氨酸酶蛋白在细胞内定位未见明显影响,但酪氨酸酶荧光强度降低。结论：欧前胡素抑制体外培养人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性而降低黑素生成。     

大黄对人表皮黑素细胞的增殖及对酪氨酸酶的双向调节作用

为了研究大黄对人表皮黑素细胞增殖的影响及对酪氨酸酶的双向调节作用,我们采用体外黑素细胞培养的方法,观察了大黄三种不同有效成分对表皮黑素细胞、酪氨酸酶的调节作用,现将结果报道如下.     

芪白合剂对黑素细胞作用的研究

目的：研究芪白合剂对黑素细胞的影响，探讨其治疗白癜风的药理作用。方法：将兔含药血清加入传代培养的正常人黑素细胞，用MTT法、多巴氧化法及NaOH法测定含药血清对黑素细胞的增殖、酪氨酸酶的活性及黑素合成的影响。结果：未灭活组含药血清可以促进黑素细胞增殖，上调酪氨酸酶活性以及增加黑素合成，效果较灭活组显著。结论：芪白合剂直接作用于黑素细胞，促进黑素细胞增殖，上调酪氨酸酶的活性，增加黑素合成，可用于白癜风的治疗。     

人肝细胞生长因子对体外培养的黑素细胞生物学活性的影响

目的 探讨人肝细胞生长因子（rhHGF）对体外培养正常人黑素细胞生物学活性的影响。方法 分别用不同浓度的rhHGF（0.1，1，10，20，60，80，100 μg/L）作用于体外培养的正常人黑素细胞，采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖及酪氨酸酶活性，用倒置显微镜对比观察不同时期rhHGF（60 μg/L）处理组黑素细胞形态的改变，并用流式细胞仪分析黑素细胞周期及凋亡情况。结果 0.1 ~ 100 μg/L rhHGF有促进黑素细胞增殖作用，在20，60，80 μg/L浓度时促增殖比较显著（P ＜ 0.01），rhHGF各浓度组均增加黑素细胞酪氨酸酶活性（P ＜ 0.01或P ＜ 0.05）；浓度为60 μg/L的rhHGF能使黑素细胞数目增多、胞体增大、树突增多，并有促进黑素细胞由G0/G1期进入S期及抑制细胞凋亡的作用。结论 rhHGF可增强体外培养的人黑素细胞的生物学活性。     

热处理对UVB辐射后体外培养人黑素细胞活性的影响

目的 探讨热处理与窄谱中波紫外线（NB-UVB）联合作用对正常人黑素细胞活性的影响。 方法 分别以20、30、50、70、90、120、180 mJ/cm2 NB-UVB辐射体外培养的正常人黑素细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测细胞增殖活性并选择最佳照射剂量;以42 ℃,1 h为热处理干预剂量,将黑素细胞分为4组：正常对照组、UVB组、加热组、UVB + 加热组,连续干预3 d,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素含量,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 NB-UVB照射呈剂量依赖性减少黑素细胞存活率,选择50 mJ/cm2作为最佳照射剂量;黑素细胞经不同干预后,UVB组、UVB+加热组的酪氨酸酶活性分别为0.244 ± 0.018、0.310 ± 0.015,较对照组（0.235 ± 0.018）分别增长3.8%和31.9%（P < 0.05）,两组黑素含量分别为0.201 ± 0.016、0.286 ± 0.019,较对照组（0.171 ± 0.016）分别增长17.5%和67.3%（P < 0.05）;UVB组和UVB+加热组处于G1期的黑素细胞较对照组分别减少23.94%和33.51%（P < 0.05）,S期细胞分别增加15.35%（P < 0.05）和17.76%（P > 0.05）,G2期分别增加11.93%（P < 0.05）和16.08%（P > 0.05）。 结论 热处理与NB-UVB可以协同增加黑素细胞的酪氨酸酶活性,促进黑素合成及细胞的增殖分化。     

Effects of melanocyte stimulating hormone and theophylline on human melanocytes in vitro

Summary The effects of MSH on the human melanocyte in vitro were studied. The addition of MSH up to the concentration of 40 g/ml into the culture medium did not produce appreciable change on the morphology of the melanocyte. The melanocyte, however, responded to the simultaneous addition of MSH and theophylline with marked increase in the length and complexity of the dendritic process. Melanin synthesis, as indicated by the uptake of tyrosine in the presence of an inhibitor of protein synthesis, was remarkably activated by the simultaneous addition of MSH and theophylline. MSH alone activated the melanin synthesis only slightly, but the increase in the uptake of tyrosine was significant statistically. These results were discussed in terms of the MSH-cyclic AMP cascade in which theophylline worked as an inhibitor of cyclic AMP phosphodiesterase, and increased the intracellular level of cyclic AMP by inhibiting catabolism of cyclic AMP.

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Zusammenfassung Die Wirkungen von MSH auf menschliche Melanocyten wurden in vitro untersucht. Die Zugabe von MSH bis zu einer Konzentration von 40 g/ml in das Kulturmedium führten zu keiner bemerkenswerten Veränderung der Morphologie der Melanocyten. Der Melanocyt jedoch reagierte auf gleichzeitige Gabe von MSH und Theophyllin mit einer Verlängerung und weiteren Formveränderungen der dendritischen Ausläufer. Die Melaninsynthese, welche durch Tyrosinverwertung unter Hemmung der Proteinsynthese bestimmt wurde, war beträchtlich durch gleichzeitige Gabe von MSH und Theophyllin aktiviert. MSH alleine aktiviert die Melaninsynthese nur geringfügig, doch wurde die Aufnahme von Tyrosin erhöht.Die Ergebnisse wurden unter dem Gesichtspunkt einer MSH-cyclischen AMP-Kaskade diskutiert, in der Theophyllin als ein Inhibitor der Phosphodiesterase bekannt ist, unter der der intracelluläre Spiegel vom cyclischen AMP durch Hemmung des Abbaus des cyclischen AMP, erhöht wird.

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Supported by research grants from the Ministery of Education, Japan.

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The author wishes to thank Dr. P. A. Desaulles, and Dr. W. Rittel for their provision

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The author wishes to thank Dr. P. A. Desaulles, and Dr. W. Rittel for their provision     

白细胞介素-22对人表皮黑素细胞生物活性的影响

目的观察白细胞介素(IL)-22对黑素细胞生物活性的影响,包括黑素细胞的增生、黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素细胞凋亡,从而研究色素障碍性皮肤病的发病机制,为色素性疾病的治疗提供新的思路。方法建立模拟正常生理状态的黑素细胞体外培养体系,用不同浓度IL-22作用于黑素细胞,采用CCK-8法检测不同浓度IL-22对黑素细胞增生活性的影响;L-DOPA法检测其对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响;流式细胞仪检测其对黑素细胞凋亡的影响。结果 1 IL-22随着浓度的增加呈明显的时间依赖性抑制黑素细胞的增生,与空白对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。2用浓度为100 ng/ml的IL-22培养黑素细胞,48 h后细胞凋亡率为23.0%,空白对照组为5.1%。结论 IL-22随着浓度的增加明显抑制黑素细胞的增生,呈时间依赖性,当培养时间为72 h时,所有浓度均抑制黑素细胞的增生,黑素细胞酪氨酸酶活性也随着IL-22浓度的增加而降低,黑素细胞凋亡率较空白对照组明显升高,均提示IL-22可引起黑素细胞的损伤。     

人黑素细胞体外培养条件的研究进展

从培养人黑素细胞的基本培养液、添加剂、紫外线以及共培养系统等方面综述安全、有效的黑素细胞体外培养条件的研究进展;同时总结了人毛囊无色素性黑素细胞、永生化黑素细胞的培养条件,对色素疾病的基础研究及临床治疗有重要意义。     

中药单体芍药甙促进黑素合成的机制研究

目的:确定芍药甙(paeoniflorin)对促进黑素合成的作用.方法:MTT法测定芍药甙对黑素细胞增殖影响,多巴氧化法和NaOH法测定黑素细胞内酪氨酸酶活性和黑素合成, 定量定时RT-PCR和蛋白印迹法测定酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达.结果:100 μg/mL芍药甙对细胞的生长有抑制作用;5～10 μg/mL浓度可促进促黑素细胞的增殖;芍药甙增强酪氨酸酶的活性,增加黑素合成;上调TYR,TRP-1 mRNA表达.结论:芍药甙可促进黑素细胞增殖,通过上调酪氨酸酶的活性促进黑素合成.     

白介素-10,白介素-17对人表皮黑素细胞生物活性的影响

目的观察不同浓度白介素-10,白介素-17对黑素细胞生物活性的影响。方法建立模拟正常生理状态的黑素细胞体外培养体系,用不同浓度白介素-10,白介素-17作用于黑素细胞后,采用CCK-8法测定白介素-10,白介素-17对黑素细胞增殖活性的影响、L-DOPA法测定对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响、流式细胞仪检测黑素细胞凋亡率。结果 1 50μg/ml IL-10组对黑素细胞的增殖率随着培养时间的延长而升高,当培养48h和72h后与空白对照组相比有极显著的统计学差异(P0.01)。但随着IL-10浓度的升高,其增殖率随着培养时间的延长反而有下降趋势,200μg/ml IL-10组培养黑素细胞48h和72h后与空白对照组相比有统计学差异(P0.05);2 IL-17随着培养时间的延长呈剂量依赖性抑制黑素细胞的增殖,50μg/ml IL-17组培养黑素细胞48h和72h后与空白对照组相比有统计学差异(P0.05);100μg/ml IL-17组和200μg/ml IL-17组培养黑素细胞48h和72h后与空白对照组相比有极显著的统计学差异(P0.01);3在培养48h后,50μg/ml IL-10组黑素细胞酪氨酸酶活性升高,较空白对照组有统计学差异(P0.05)。50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml IL-17组抑制黑素细胞酪氨酸酶的活性,与空白对照组相比有统计学差异(P0.05);4用浓度为100μg/ml的IL-10,IL-17培养黑素细胞,48小时后细胞凋亡率分别为5.2%、32.1%,空白对照组为5.1%。结论 1适当浓度的IL-10可促进黑素细胞的增殖,提高酪氨酸酶的活性;2 IL-17对黑素细胞有损伤作用,但其作用机制还需进一步的试验和探讨。     

Effects of dibutyryl adenosine 3',5'-cyclic monophosphate on human melanocytes in vitro.

The effects of cyclic AMP and its analogue, dibutyryl cyclic AMP (DBcAMP) on the pigmentary system were studied by using human epidermal melanocytes in culture. The melanocytes responded to 1 mM DBcAMP with an increase in number, length, and complexity of dendritic processes. The effect of DBcAMP on the dendritogenesis was reversible. Melanin synthesis, as indicated by the uptake of tyrosine in the presence of an inhibitor of protein synthesis, was significantly stimulated by DBcAMP. The maximum stimulation was observed at concentrations of 0.5 mM, and 1.0 mM. The melanin synthesis increased after 12-hour treatment with DBcAMP and continued to increase with the prolonged treatment. Cyclic AMP, theophylline, sodium butyrate, or 5'-AMP at a concentration of 1 mM did not have any remarkable effect on the morphology or the melanin synthesis of the melanocyte. The results of this investigation indicate the possible role of the MSH-cyclic AMP system in the melanin pigmentation of human skin and represent a system for further study of the pathobiology of human melanocytes.