维甲酸对体外培养兔视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响

目的：研究维甲酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ,ＲＡ）对视网膜色素上ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞生长,增殖的影响。方法：通过细胞生长曲线的测定,观察１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ ＲＡ对ＲＰＥ细胞生长的影响;通过＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入和液闪测定１０＾－５,１０＾－６,１０＾－７,１０＾－８,１０＾－９,１０＾－１９ｍｏｌ／Ｌ ＲＡ作用ＲＰＥ细胞５天,７天时每分钟脉冲值（ＣＰＭ     

放射及化学治疗对RB细胞系HXO－Rb_（44）细胞的影响

作者用人视网膜母细胞瘤细胞系ＨＸＯ－Ｒｂ４４进行顺铂（ＤＤＰ）、阿霉素（ＡＤＭ）和长春新碱（ＶＣＲ）分别联合放射线对该细胞系杀伤效应的研究。结果提示，这三种药物在低剂量时，都可增强放射线对ＲＢ细胞的杀伤作用；高剂量时，则主要表现为两种方法的协同作用。ＤＤＰ、ＡＤＭ两种药物，在放射线照射前后运用无明显差别；ＶＣＲ于照射前运用，效果明显优于照射后运用。ＤＤＰ和ＡＤＭ是通过抑制细胞的潜在致死损伤和亚致死损伤的修复，增加放疗效果，ＶＣＲ只抑制细胞的潜在致死损伤的修复，起放射增敏作用。     

Rb基因诱导视网膜母细胞瘤移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的观察外源性Ｒｂ基因对视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞凋亡的影响。方法建立裸鼠眼玻璃体腔ＲＢ移植瘤模型及构建Ｒｂ基因的逆转录病毒表达载体Ｐｂａｂｅ－Ｒｂ，用脂质体Ｄｏｓｐｅｒ介导法将Ｒｂ基因导入裸鼠ＲＢ移植瘤，采用流式细胞术（ＦＣＭ），光镜、电镜及ＴＵＮＥＬ细胞凋亡原位末端标记法进行ＲＢ细胞凋亡的检测。结果Ｒｂ基因在ＲＢ移植瘤内表达至少持续７天。ＦＣＭ检测发现在Ｒｂ基因转染后第４天，各实验组治疗眼ＲＢ中均可检测到凋亡细胞峰，凋亡细胞百分率高于对照眼；第２０天，各实验组治疗眼细胞凋亡百分率与对照眼比无差异（Ｐ＞０．０５）。透射电镜下可见到典型的早期凋亡细胞及晚期凋亡小体形成。ＴＵＮＥＬ方法可在荧光显微镜下见到发黄绿色荧光的凋亡细胞，光镜下可见到紫红色的被标记的凋亡细胞。结论Ｒｂ基因可诱导ＲＢ移植瘤细胞凋亡，这可能是Ｒｂ基因体内抗癌的又一作用机制。     

d-δ-三烯生育酚对人晶状体上皮SRA细胞增殖和凋亡的影响

目的　研究ｄ－δ－三烯生育酚对人晶状体上皮ＳＲＡ细胞增殖和凋亡的影响,探讨后发性白内障治疗的新方法。方法　将人晶状体上皮ＳＲＡ细胞分为对照组和实验组,对照组不加药物干预,实验组设３个药物浓度,分别为３０μｍｏｌ?Ｌ－１、４０μｍｏｌ?Ｌ－１、５０μｍｏｌ?Ｌ－１的ｄ－δ－三烯生育酚,药物干预人晶状体上皮ＳＲＡ细胞２４ｈ和４８ｈ后,采用ＭＴＴ法、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色和流式细胞仪分析人晶状体上皮ＳＲＡ细胞的增殖和凋亡情况。结果　ｄ－δ－三烯生育酚呈浓度－时间依赖性抑制人晶状体上皮ＳＲＡ细胞的增殖,诱导其凋亡。３０μｍｏｌ?Ｌ－１、４０μｍｏｌ?Ｌ－１、５０μｍｏｌ?Ｌ－１的ｄ－δ－三烯生育酚干预４８ｈ对ＳＲＡ细胞的增殖抑制率分别为（３２．２３±５．２５）％、（５４．１７±１．６３）％和（８６．８０±０．８５）％,与对照组比较差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;干预２４ｈ增殖抑制率分别为（１２．７０±１．２０）％、（１９．５３±０．９５）％和（５１．８３±６．１１）％,与对照组相比差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。干预２４ｈ后,各实验组细胞晚期凋亡率Ｑ２分别为（５．８７±０．１５）％、（１１．３７±０．８５）％、（２２．７７±２．４１）％,与对照组的（１．１０ ±０．１７）％相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;各实验组细胞早期凋亡率Ｑ４分别为（３．５７±０．３２）％、（４．２０±０．４０）％、（８．００±０．５０）％,与对照组的（２．５３±０．１５）％相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ｄ－δ－三烯生育酚抑制人晶状体上皮ＳＲＡ细胞增殖,诱导其凋亡,具有抗晶状体上皮细胞增殖的生物学作用,为治疗后发性白内障提供一种新思路。     

苯妥英钠对慢性高眼压兔视神经的保护作用

目的　观察苯妥英钠对慢性高眼压兔视网膜神经节细胞（ｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｌ,ＲＧＣ）及视神经的保护作用。方法　３０只新西兰白兔随机分为３组:高眼压组、高眼压治疗组与正常眼压组,每组１０只。每天高眼压治疗组给予苯妥英钠灌胃。高眼压造模成功后４周时摘除３组兔眼球标本分别做ＨＥ染色和ＴＵＮＥＬ标记,观察ＲＧＣ的细胞密度和凋亡细胞数量,用透射电子显微镜观察视网膜细胞凋亡情况。结果　节细胞层凋亡细胞:正常眼压组（０．４０±０．１５）×１０－２μｍ－２,高眼压组（３．４０±０．６２）×１０－２μｍ－２,高眼压治疗组（１．７５±０．２８）×１０－２ μｍ－２;内核层:正常眼压组（０．９５±０．２４）×１０－２ μｍ－２,高眼压组（１８．７０±２．４１）×１０－２μｍ－２,高眼压治疗组（８．７５±１．０３）×１０－２μｍ－２。高眼压组和高眼压治疗组与正常眼压组比较,ＲＧＣ密度减小、各层凋亡细胞数量增多（均为Ｐ＜０．０５）;高眼压治疗组与高眼压组比较,ＲＧＣ密度大、凋亡细胞数量少（均为Ｐ＜００５）。电镜下高眼压组与高眼压治疗组均观察到凋亡小体。结论　苯妥英钠对慢性高眼压ＲＧＣ和视神经有保护作用。     

人视网膜母细胞瘤的细胞凋亡

目的 观察凋亡是否为视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞死亡的主要方式。方法 应用光镜（１６例）、电镜（４例）及ＴＵＮＥＬ标记（１２例）对ＲＢ进行观察研究。结果 光镜下凋亡细胞大多位于退化区。电镜下可见不同凋亡阶段的ＲＢ细胞,占瘤细胞死亡的４２％。ＴＵＮＥＬ标记阳性细胞大多位于肿瘤退化区。凋亡指数（ＡＩ）在未分化型和放疗后的ＲＢ中明显增高（Ｐ〈０．０５）,与视神经受累与否及临床分期无关（Ｐ〉０．０５）。结论 凋亡可能是导致ＲＢ细胞死亡的主要形式,诱导调亡可作为促使ＲＢ退化的一种手段。     

人眼视网膜母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的 观察人视网膜母细胞（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ,ＲＢ）标本中细胞凋亡,探讨细胞凋亡在ＲＢ发生发展及消退中的作用。方法 用ＴＵＮＥＬ方法光镜和电镜观察人ＲＢ摘除眼球标本中是否存在细胞凋亡。结果 １５例人ＲＢ分化型和未分化型标本中有９例发现少量凋亡细胞,自发退化型ＲＢ中未发现凋亡细胞。每例中均见成片出现的坏死细胞。结论 视网膜母细胞瘤细胞死亡通过坏死与凋亡２种途径。细胞凋亡是ＲＢ自发退化的机制     

γ—干扰素诱导角膜上皮细胞和内皮细胞HLA抗原在体外表达的实验研究

目的了解γ－干扰素对角膜细胞ＨＬＡ抗原表达的影响。动态观察角膜细胞间ＨＬＡ－ＡＢＣ抗原和ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的量变关系。方法采用ＡＣＡＳ－５７０粘附式细胞分析仪和间接免疫荧光技术，对体外原代培养的正常成人角膜上皮和内皮细胞ＨＬＡ－ＡＢＣ位点和ＨＬＡ－ＤＲ位点抗原表达的相对量进行测定。结果在体外，γ－干扰素可诱导角膜上皮细胞和内皮细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原的异常表达，同时使ＨＬＡ－ＡＢＣ位点抗原表达量增加；经γ－干扰素诱导后，上皮细胞的ＨＬＡ－ＡＢＣ抗原及ＨＬＡ－ＤＲ抗原的表达量均较相应的内皮细胞表达量高；且两种细胞的ＨＬＡ－ＡＢＣ抗原表达量增高幅度较小，而ＨＬＡ－ＤＲ抗原增高幅度较大。结论角膜细胞ＨＬＡ抗原的异常表达可能是角膜移植排斥反应发生的主要原因；γ－干扰素在角膜移植排斥反应发生时充当重要角色。     

αB-晶状体蛋白对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞保护作用机制的研究

目的　研究αＢ-晶状体蛋白对钾离子通道ｋｖ１．１、ｋｖ１．３及凋亡抑制因子Ｂｃｌ-ｘｌ和凋亡因子Ｃａｓｐａｓｅ-３的影响,探讨αＢ-晶状体蛋白对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞（ｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｌｓ,ＲＧＣ）保护作用的机制。方法　６０只ＳＤ大鼠随机分为Ａ组（急性高眼压组）、Ｂ组（急性高眼压＋玻璃体内注射生理盐水５μＬ组）、Ｃ组（急性高眼压＋玻璃体内注射１０×１０－６ｇ?Ｌ－１αＢ-晶状体蛋白５μＬ组）,每组２０只,右眼为实验眼。注射后７ｄ和１４ｄ时,应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和实时定量逆转录聚合酶链反应（ＱＲＴ-ＰＣＲ）法检测ｋｖ１．１、ｋｖ１．３、Ｂｃｌ-ｘｌ和Ｃａｓｐａｓｅ-３在视网膜上的表达水平。结果　注射后７ｄ和１４ｄ时,Ｃ组ｋｖ１．１、ｋｖ１．３通道蛋白和凋亡因子Ｃａｓｐａｓｅ-３蛋白表达水平和ｍＲＮＡ相对表达量均较Ａ组、Ｂ组低,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０.０５）;Ｃ组Ｂｃｌ-ｘｌ蛋白表达水平和ｍＲＮＡ相对表达量较Ａ组、Ｂ组高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;相同时间点不同因子Ａ组、Ｂ组间两两比较,差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。结论　αＢ-晶状体蛋白通过抑制急性高眼压后ＲＧＣ上钾离子通道ｋｖ１．１、ｋｖ１．３的表达,从而提高凋亡抑制因子Ｂｃｌ-ｘｌ的表达、降低凋亡因子Ｃａｓｐａｓｅ-３的表达,减少细胞凋亡,保护ＲＧＣ。     

错配PCR—限制性片段长度多态性分析检测HBV前C区终止密码变异株技术的 …

采用错配聚合酶链反应（ｍｐＰＣＲ）对ＨＢＶ前Ｃ区基因进行扩增，对ＰＣＲ产物进行限制片段长度多态性分析（ＲＦＬＰ），鉴定前Ｃ区第８３位核苷酸点突变。并对ＰＣＲ产物进行核苷酸序列３分析以鉴定其特异性。通过对不同含量ＨＢＶ ＤＮＡ的阳性血清检测结果显示本法可检出１０＾５ｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ的ＨＢＶＤＡＮ，预测结果证实ＰＣＲ产物８为ＨＢＶ前Ｃ区特异性序列，与ＲＦＬＰ分析结果相符。采用ｍｐＰＣＲ－ＲＦＬＰ对７     

高三尖杉酯碱诱导视网膜母细胞瘤程序性死亡

目的；观察高三尖杉酯碱(homoharringtonine，HHT)对视网膜母细胞(retinoblastoma，RB)细胞系HXO—RB₄₄：细胞的杀伤作用及其诱导的细胞死亡形式。 方法：用MTT法测定肿瘤细胞存活率，提取药物作用后的细胞核DNA进行琼脂糖凝胶电泳。 结果：HHT在10^-9mol/L~10^-4mol/L浓度范围对HXO-RB₄₄具有较强的杀伤作用(P<0.05)。10_-6mol/L的HHT与HXO-RB₄₄作用48小时后，核DNA发生有规律的裂解，琼脂糖凝胶电泳呈典型DNA梯度。 结论：HHT诱导RB发生程序性死亡(programmedcelldeath，PCD)，其诱导活性呈较强的浓度和时间依赖性。 （中华眼底病杂志，1997，13：70-72）     

褪黑素对体外培养的视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞增生活性的影响察

目的 探讨褪黑素（MLT）对视网膜母细胞瘤(RB)HXO-RB44细胞增生活性的影响及相关机制。方法 利用四氮唑化合物（MTT）比色法,观察不同浓度的MLT对RB HXO-RB44细胞增生活性的影响;利用10-10、10-9、10-8、10-7 mmol/L的MLT对RB HXO-RB44分别进行干预,采用Hoechst荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化;利用流式细胞仪测定不同浓度的MLT干预24 h后,RB HXO-RB44细胞内活性氧（ROS）的表达、细胞周期与凋亡情况。结果 浓度为10-7 mmol/L以下的MLT对HXO-RB44细胞并无抑制作用（P值均＞0.05）。10-6 mmol/L以上的MLT能够显著抑制HXO-RB44细胞增生（P＜0.01）。浓度为10-6、10-5、10-4 mmol/L的MLT干预后,随药物浓度的升高,HXO-RB44细胞内ROS的表达逐渐升高。Hoechst染色显示：不同浓度的褪黑素分别作用于培养的HXO-RB44细胞4、8、12、24 h后,细胞核固缩、核碎裂增多,细胞凋亡的程度随着MLT浓度的增大而加重。流式细胞仪检测：药物干预后,G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,随着MLT浓度的升高,HXO-RB44细胞凋亡率明显升高。结论 浓度大于10-6 mmol/L的MLT能够有效地抑制HXO-RB44细胞增生,其抑制效率随药物浓度的升高和作用时间的延长而增强;MLT的抗细胞增殖作用可能与其诱导HXO-RB44细胞内的活性氧产生、阻滞细胞周期于G0/G1期并诱导细胞凋亡有关。     

Effects of salvianolic acid B on in vitro growth inhibition and apoptosis induction of retinoblastoma cells

AIM: To observe the effects of salvianolic acid B (SalB) on in vitro growth inhibition and apoptosis induction of retinoblastoma HXO-RB44 cells. METHODS: The effects of SalB on the HXO-RB44 cells proliferation in vitro were observed by MTT colorimetric method. The morphological changes of apoptosis before and after the treatment of SalB were observed by Hoechst 33258 fluorescent staining method. Apoptosis rate and cell cycle changes of HXO-RB44 cells were detected by flow cytometer at 48 hours after treated by SalB. The expression changes of Caspase-3 protein in HXO-RB44 cells were detected by Western Blot. RESULTS: SalB significantly inhibited the growth of HXO-RB44 cells, while the inhibition was in a concentration-and time-dependent manner. The results of fluorescent staining method indicated that HXO-RB44 cells showed significant phenomenon of apoptosis including karyorrhexis, fragmentation and the formation of apoptotic bodies, etc. after 24, 48 and 72 hours co-culturing of SalB and HXO-RB44 cells. The results of flow cytometer showed that the apoptosis rate and the proportion of cells in S phase were gradually increased at 48 hours and 72 hours after treated by different concentrations of SalB. Western Blot strip showed that the expression of Caspase-3 protein in HXO-RB44 cells was gradually increased with the increase of the concentration of SalB. CONCLUSION: SalB can significantly affect on HXO-RB44 cells growth inhibition and apoptosis induction which may be achieved through the up-regulation of Caspase-3 expression and the induction of cell cycle arrest.     

HXO-RB44细胞上清液对ARPE-19细胞内VEGF表达的影响

目的探讨HXO-RB44细胞上清液对人视网膜色素上皮（RPE）细胞系ARPE-19细胞内血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响及其相关机制。方法分别利用含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基及MEM培养基对HXO-RB44细胞及ARPE-19细胞进行培养,在ARPE-19细胞内加入100μL HXO-RB44细胞上清液,分别干预0、4、8、12、24 h,利用RT-PCR、免疫荧光细胞化学、Western blot等方法,检测不同浓度的MLT干预后24 h ARPE-19细胞内VEGF mRNA及蛋白的表达情况。结果HXO-RB44细胞上清液加入后的不同时间点,VEGF mRNA的表达差异有统计学意义（F=195.072,P=0.000）。随着HXO-RB44细胞上清液作用时间的延长,ARPE-19细胞内VEGF mRNA表达逐渐增高（P〈0.01）。HXO-RB44细胞上清液加入后4、8、12、24 h,ARPE-19细胞内VEGF蛋白表达显著增加（F=160.687,P=0.000）,其表达与ARPE-19细胞内VEGF mRNA表达方式相同（P〈0.05）。随着HXO-RB44细胞上清液作用时间的延长,ARPE-19细胞内绿荧光蛋白强度逐渐增加。结论HXO-RB44细胞上清液能促进ARPE-19细胞内VEGF的表达。     

Effects of salvianolic acid B on in vitro growth inhibition and apoptosis induction of retinoblastoma cells

AIM: To observe the effects of salvianolic acid B (SalB) on in vitro growth inhibition and apoptosis induction of retinoblastoma HXO-RB44 cells. METHODS: The effects of SalB on the HXO-RB44 cells proliferation in vitro were observed by MTT colorimetric method. The morphological changes of apoptosis before and after the treatment of SalB were observed by Hoechst 33258 fluorescent staining method. Apoptosis rate and cell cycle changes of HXO-RB44 cells were detected by flow cytometer at 48 hours after treated by SalB. The expression changes of Caspase-3 protein in HXO-RB44 cells were detected by Western Blot. RESULTS: SalB significantly inhibited the growth of HXO-RB44 cells, while the inhibition was in a concentration-and time-dependent manner. The results of fluorescent staining method indicated that HXO-RB44 cells showed significant phenomenon of apoptosis including karyorrhexis, fragmentation and the formation of apoptotic bodies, etc. after 24, 48 and 72 hours co-culturing of SalB and HXO-RB44 cells. The results of flow cytometer showed that the apoptosis rate and the proportion of cells in S phase were gradually increased at 48 hours and 72 hours after treated by different concentrations of SalB. Western Blot strip showed that the expression of Caspase-3 protein in HXO-RB44 cells was gradually increased with the increase of the concentration of SalB. CONCLUSION: SalB can significantly affect on HXO-RB44 cells growth inhibition and apoptosis induction which may be achieved through the up-regulation of Caspase-3 expression and the induction of cell cycle arrest.     

5-Aza-CdR对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞株中RASSF1A基因表达的影响

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR对人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞株中RASSF1A基因启动子区域甲基化状态及其表达的影响。方法不同浓度的5-Aza-CdR对HXO-RB44细胞进行化学干预72h后用无药物完全培养基培养72h,MTT法检测不同浓度5-Aza-CdR对于HXO-RB44细胞的生长抑制率;甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测RASSF1A基因启动子区域甲基化状态的改变;RT-PCR观察RASSF1A基因mRNA水平变化;Western blot检测RASSF1A蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期以及凋亡。结果 0.5μmol.L-1、1.0μmol.L-1、2.0μmol.L-1和5.0μmol.L-1的5-Aza-CdR对HXO-RB44细胞的生长抑制率分别为(9.37±3.53)%、(25.72±2.35)%、(39.88±4.32)%和(76.50±0.94)%,各组之间差异具有统计学意义;经5-Aza-CdR干预后,RASSF1A基因启动子区域由高甲基化状态转变为非甲基化状态,仅0.5μmol.L-15-Aza-Cd就可逆转RASSF1A基因的高甲基化状态;RT-PCR和Western blot结果显示在干预组细胞中分别出现RASSF1A基因的DNA条带(329bp)和蛋白质条带(相对分子质量39×103),而对照组中没有相应条带出现;各组之间RASSF1A mRNA以及蛋白的表达差异均具有显著性统计学意义;流式细胞术显示药物处理后细胞周期出现G0/G1期阻滞,并出现显著的细胞凋亡。结论 DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR能够诱导RASSF1A基因启动子区域去甲基化,并通过该机制诱导RASSF1A基因在人视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44中的表达。     

全反式维甲酸诱导的Cx43基因在RB细胞中的过表达及其对RB生长的抑制作用

背景诱导细胞间隙连接蛋白（＆）基因在瘤细胞中过表达是全反式维甲酸（ATRA）抑制肿瘤细胞生长的重要机制。我们先前的研究已证实,ATRA抑制视网膜母细胞瘤（RB）细胞增生、分化作用的机制与诱导Cx43过表达有关,但药物作用位点及其对在体肿瘤组织生长的影响尚未明确。目的研究ATRA对RB细胞中Cx43基因及其蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法用无水乙醇将ATRA溶解并配制成浓度为1×10^-2mol／L的溶液,使用前再用细胞培养液配制成不同浓度ATRA液。用含体积分数10％热灭活胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养液常规培养人RB细胞株HXO—RB44,将1×10^5-×10“和1×10^-2mol／L的ATRA分别加至培养基中,分别于添加后2、4、6d采集细胞,分别采用Westernblot法和逆转录PCR法检测细胞中Cx43蛋白及mRNA的表达变化。选取15只BALB／c裸鼠,将RB细胞悬液1恤l（含5×10^5个细胞）进行裸鼠右眼前房注射,建立裸鼠眼前房RB模型。将造模成功的11只裸鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和1X10。mol／LATRA组,阴性对照组和1×10^-5mol／LATRA组裸鼠分别行0．5％无水乙醇的生理盐水或1×10^-5mol／LATRA前房注射,每3天1次,共注射3周,裂隙灯显微镜下观察各组裸鼠肿瘤生长情况;实验结束时摘除实验眼,用苏木精-伊红染色法进行组织病理学检查。结果Westernblot法检测结果显示,随ATRA作用时间的延长,各组Cx43蛋白表达量（Acx43／AGPDH）均逐渐增加,总体比较差异有统计学意义（F时间=71．31,P=0．00;F分组7．66,P=0．00）;药物作用后2d1×10^-5mol／LATRA组、作用后4d1×10^-6mol／LATRA组、作用后6d1×10^-7mol／LATRA组Cx43蛋白表达量均明显高于空白对照组,差异均有统计学意义（t=3．34,P〈0．叭;t=2．33,P〈0．05;t=3．12,P〈0．01）。逆转录PCR检测结果显示,随ATRA作用时间的延长,各组Cx43 m     

质粒介导RNA干扰抑制视网膜母细胞瘤细胞的血管内皮生长因子表达

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）短发夹RNA（shRNA）表达质粒稳定转染对视网膜母细胞瘤（RB）细胞中VEGF表达的作用。方法构建VEGF shRNA表达质粒p4．1CMV—VEGF shRNA,以脂质体介导其转染两种RB细胞系SO—RB50和HXO—RB44,新霉素筛选结合梯度稀释法获得p4．1CMV—VEGF shRNA阳性RB细胞单克隆,继续培养扩增建立p4．1CMV—VEGF shRNA阳性RB细胞,用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测RB细胞中VEGF基因的表达,并用酶联免疫吸附（ELISA）法检测RB细胞上清中VEGF蛋白的表达;以与哺乳动物基因组无同源性的shRNA表达质粒p4．1CMV—Neg shRNA作为阴性对照,同时以未做任何处理组作为空白对照。结果成功构建p4．1CMV—VEGF shRNA并获得其表达阳性的RB细胞克隆。阴性对照组和空白对照组SO-RB50细胞的VEGF基因表达量分别为实验组的5．02倍和6．32倍;阴性对照组和空白对照组HXO—RB44细胞分别为实验组的5．70倍和4．86倍。实验组SO—RB50细胞上清中,VEGF蛋白浓度为（187．69±83．89）μg/L,显著低于阴性对照组（822．98±187．98）μg/L和空白对照组（865．76±170．33）μg／L,差异有统计学意义（均P〈0．01）;实验组HXO—RB44细胞上清中,VEGF蛋白浓度为（162．20±66．33）μg／L,与阴性对照组（764．33±164．79）μg／L和空白对照组（828．22±145．94）μg／L比较,差异也有统计学意义（均P〈0．01）。结论VEGF shRNA表达质粒稳定转染可高效抑制RB细胞中VEGF的表达,靶向VEGF的RNA干扰可作为拮抗VEGF并治疗RB的有效手段。（中华服科杂志,2007,43：493-498）     

Growth Inhibition,Induction of Apoptosis by Green Tea Constituent （—）—

Purpose: To evaluate effect of green tea extract (-)-Epigallocatechin-3-gallate (EGCG) in cultured rabbit lens epithelial cells in order to pave a new way to postcapsular opacity (PCO) prevention.Methods: Cell survival rate was measured by 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) coloimetric assay. Cell apoptosis was detected by electron microscopy, Hochest 33258 stain and flow cytometer. DNA fragment was detected using agarose gel electrophoresis.Result: Proliferation of the cultured rabbit lens epithelia cells was inhibited by EGCG in a dose and time dependent manner. Morphologic study showed that the cells became shrunk, round shaped with their nuclei condensed and broken. Apoptotic bodies were also seen under electron microscope and in Hochest 33258 stain assay 24 hours after EGCG was added to the medium. DNA ladders were shown in agarose gel eletrophoresis. In flow cytometry assay, apoptosis peak was also evident.Conclusion: Green Tea Constituent(-)-Epigallocatechin-3-g     

microRNA-125b对人视网膜母细胞瘤多药耐药性影响的实验研究

目的 探讨microRNA-125b（miR-125b）在人视网膜母细胞瘤细胞中多药耐药的作用及其机制。设计 实验研究。 研究对象 人视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞。方法 用RT-PCR方法检测miR-125b视网膜母细胞瘤细胞株SO-RB50和耐药细胞株SO-Rb50/VCR中的表达变化;化学合成的miR-125b过表达（miR-125mimic 组）和抑制载体（miR-125inhibitor组）转染SO-Rb50细胞株,用MTT法和Annexin V-FITC法检测在药物长春新碱、依托泊苷和卡铂,依次作用上述转染细胞后,细胞增生力和细胞凋亡的变化;用蛋白印迹法检测miR-125b过表达和抑制表达后细胞株SO-RB50中 MAGE-A/P53蛋白的表达变化。主要指标 细胞存活率和细胞凋亡率。结果 SO-Rb50/VCR组与SO-RB50组相比,miR-125b的表达显著增高（P=0.002）;长春新碱、依托泊苷和卡铂依次作用于转染后的SO-RB50细胞株后,miR-125mimic组与miR-125inhibitor组相比,细胞存活率显著增高（P=0.000）,细胞凋亡率显著下降（P=0.000）,P53蛋白表达水平显著下降（P=0.001）,MAGE-A蛋白表达水平显著增高（P=0.004）。结论 在SO-RB50细胞中,下调miR-125b后提高肿瘤细胞对化疗药物敏感性,且miR-125b可能是通过MAGE-A/P53通路调控视网膜母细胞瘤多药耐药性。