卵巢癌顺铂耐药的分子机制研究进展

顺铂耐药是卵巢癌术后复发和预后不良的重要原因之一.卵巢癌的顺铂耐药机制复杂,除抑癌基因、癌基因、耐药相关基因的改变外,还涉及染色体改变、细胞解毒过程及DNA损伤修复能力的增强以及细胞骨架、热休克蛋白表达异常等,对其分子机制的了解有助于指导卵巢癌临床治疗方案的选择.     

卵巢癌化疗耐药基因检测的研究进展

卵巢癌发生发展是细胞内外多种基因结构和功能异常改变的结果。化疗是目前卵巢癌重要的治疗手段之一，化疗耐药是卵巢癌患者治疗失败和死亡的主要原因，克服化疗耐药是提高远期疗效的关键。近年对卵巢癌化疗的耐药基因如多药耐药基因、DNA修复相关基因、紫杉醇耐药相关基因、p53基因、顺铂耐药性相关基因等进行了广泛研究，阐述有关卵巢肿瘤化疗耐药基因的最新研究动态。     

β-连环素对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨信号分子β连环素(β-catenin)在多个卵巢癌耐药细胞系中的表达及其对顺铂耐药性的影响。方法:首先在2个卵巢癌耐药细胞系(C13K,SKOV-3),2个卵巢癌敏感细胞系(OV2008,A2780),A2780顺铂敏感株、A2780-cis顺铂耐药株,COC10顺铂敏感株、COC1-cis顺铂耐药株中检测β-catenin蛋白的水平。通过小干扰RNA(si RNA)介导的RNA干扰技术靶向沉默细胞中β-catenin的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证β-catenin基因沉默效果。台盼蓝染色方法分析β-catenin基因沉默对细胞化疗药物顺铂敏感性的影响,流式细胞术检测顺铂处理后β-catenin基因沉默细胞的凋亡率。Western blotting筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果:β-catenin在2个卵巢癌耐药细胞系C13K,SKOV-3中蛋白水平较敏感细胞系明显上调。与亲本A2780和COC10细胞相比,在耐药株A2780-cis和COC1-cis中表达水平也明显增高。β-catenin si RNA能显著抑制细胞中β-catenin蛋白的水平。β-catenin基因沉默后,卵巢癌耐药细胞C13K,SKOV-3对顺铂敏感性显著增高;流式细胞术进一步分析发现β-catenin基因沉默可以促进顺铂介导的卵巢癌耐药细胞的细胞凋亡。Western blotting发现β-catenin基因沉默后,顺铂处理可以显著上调促凋亡分子p53和caspase-3蛋白水平。结论:β-catenin在卵巢癌耐药细胞系表达明显增高,β-catenin沉默可以促进卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,并同时促进了顺铂介导的细胞凋亡。     

卵巢癌化疗耐药基因检测的研究进展

卵巢癌发生发展是细胞内外多种基因结构和功能异常改变的结果.化疗是目前卵巢癌重要的治疗手段之一,化疗耐药是卵巢癌患者治疗失败和死亡的主要原因,克服化疗耐药是提高远期疗效的关键.近年对卵巢癌化疗的耐药基因如多药耐药基因、DNA修复相关基因、紫杉醇耐药相关基因、p53基因、顺铂耐药性相关基因等进行了广泛研究,阐述有关卵巢肿瘤化疗耐药基因的最新研究动态.     

化疗对卵巢癌细胞凋亡和P53、Bcl-2蛋白表达的影响

探讨卵巢癌细胞凋亡过程相关基因及其蛋白表达的变化 ,为解决卵巢癌化疗耐药提供理论依据。方法 :应用不同浓度顺铂处理HO - 8910细胞 ,HE染色观察细胞形态改变 ,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解 ,SP免疫组化染色观察细胞凋亡过程中P53、Bcl - 2蛋白表达的变化。结果 :由于使用顺铂 ,HO - 8910细胞呈凋亡改变 ,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。在细胞凋亡的同时 ,P53蛋白表达逐渐升高 ,Bcl- 2蛋白表达逐渐降低 ,二者的变化分别和凋亡细胞数呈正、负相关性。结论 :顺铂通过细胞内P53、Bcl - 2蛋白表达的变化 ,诱导人卵巢癌细胞凋亡是其抗肿瘤的机制之一。卵巢癌细胞对顺铂耐药的产生可能和P53、Bcl- 2蛋白表达有关。     

耐药卵巢癌的治疗与细胞自噬的相关研究进展

卵巢癌是目前预后最差的妇科恶性肿瘤之一,主要治疗手段是肿瘤细胞减灭术配伍顺铂等药物的联合化疗。卵巢癌治疗中对传统化疗方案尤其是顺铂的耐药是导致其最终治疗失败的主要原因之一。近年研究发现,细胞自噬效应改变与卵巢癌的耐药性产生有关,使用细胞自噬抑制剂等抑制自噬效应可能会改善耐药卵巢癌的治疗。本文将从细胞自噬、自噬与卵巢癌耐药相关机制及自噬与耐药卵巢癌治疗的相互关系进行简要综述。     

卵巢癌顺铂敏感株C0C1与其耐药亚株C0C1/DDP间的差异蛋白组学分析

随着后基因组时代的到来及蛋白质组学理论及技术的迅速发展及完善，从蛋白质这一全新的角度探讨卵巢癌的顺铂耐药机制已成为可能。本研究采用差异凝胶电泳（difference gel electrophoresis，DIGE）技术比较分析了卵巢癌顺铂敏感株（C0C1）及耐药株（C0C1／DDP）的差异蛋白，期待找到与顺铂耐药相关的关键分子。     

ERK1/2在曲普瑞林逆转卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂耐药中的作用

目的：研究曲普瑞林在抑制卵巢癌OVCAR3细胞增殖的同时可否逆转顺铂耐药，并探讨MAP-ERKl／2在其中的变化及调节机制。方法：筛选建立耐顺铂的亚细胞系OVCAR3-DDP；采用M1Tr、流式细胞术及Westernblot比较不同浓度下顺铂、曲普瑞林及两药联合对耐药卵巢癌OVCAR3-DDP细胞生长的影响，测定ERKl／2蛋白的表达。结果：卵巢癌OVCAR3-DDP细胞耐药指数为3．87；顺铂与曲普瑞林联合化疗增敏倍数为2．23；ERKl／2蛋白活性在顺铂处理组升高，在曲普瑞林处理组、顺铂与曲普瑞林联合处理组降低。结论：曲普瑞林增加了卵巢癌OVCAR3-DDP细胞对顺铂的敏感性，此作用可能与细胞内ERKl／2信号转导通路有关。     

阿司匹林联合顺铂与单纯顺铂抗卵巢癌效应的体外对比研究

化疗是卵巢癌综合治疗的重要手段之一，对于延长中位数生存时间、提高患者生存质量都具有重要意义。多药耐药是化疗失败的重要原因，本实验旨在寻找化疗增敏药物，为提高抗肿瘤药物的临床疗效奠定基础。顺铂是卵巢癌-线化疗药物，顺铂耐药问题严重困扰着临床医生，本实验观察了阿司匹林对顺铂抗卵巢癌效应的影响并对其作用机制进行了初步探讨。     

调节细胞自噬增强卵巢癌顺铂敏感性的体外研究

目的:探讨细胞自噬与上皮性卵巢癌顺铂耐药的关系及调节细胞自噬对卵巢癌顺铂耐药的影响。方法:应用MTT法、MDC荧光染色法及激光共聚焦显微镜技术,观察SKOV3、SKOV3/DDP细胞株自噬现象;通过自噬特异性抑制剂3-MA作用,了解3-MA对卵巢癌细胞胞浆内自噬体的抑制作用及抑制细胞自噬对卵巢癌顺铂敏感性的影响。结果:SKOV3细胞株顺铂IC50值为3.330μg/ml,SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为14.152μg/ml。3-MA联合顺铂作用后SKOV3细胞株的顺铂IC50值为3.312μg/ml,其对顺铂的敏感性无明显影响(P=0.221),SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为6.386μg/ml,提示3-MA可提高上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂的敏感性(P=0.000)。MDC荧光染色及激光共聚焦显微镜观察SKOV3、SKOV3/DDP细胞株胞浆自噬体的形成情况,顺铂能够诱导自噬体的生成,在3-MA作用下,SKOV3/DDP细胞株顺铂诱导的自噬体荧光强度变小,而SKOV3细胞株自噬体的荧光强度变化不大。结论:细胞自噬活性增强与上皮性卵巢癌顺铂耐药有关,抑制细胞自噬活性可以部分逆转上皮性卵巢癌SKOV3/DDP顺铂耐药,但不改变顺铂敏感型细胞SKOV3对顺铂的敏感性。     

卵巢癌对顺铂和紫杉醇耐药的分子机制

卵巢癌致死率居女性生殖道恶性肿瘤之首,严重威胁女性的生命健康。肿瘤细胞减灭术及铂类联合紫杉醇的系统化疗是治疗卵巢癌的金标准。因卵巢癌起病隐匿,多数卵巢癌患者确诊时已属晚期,而晚期肿瘤易对目前的化疗药物产生抗药性,因此化疗耐药已成为提高卵巢癌治愈率的关键制约因素。明确化疗耐药的分子机制对探索有效的靶向治疗、研发逆转耐药的新药物具有极其重要的价值,从而提高化疗敏感性和逆转化疗耐药。卵巢癌化疗耐药的形成是多基因、多因素、多水平共同参与的结果,主要的分子机制有抗凋亡、促生存、细胞内药物排出增多、细胞解毒及DNA修复功能增强等。卵巢癌对顺铂和紫杉醇耐药的分子机制尚无定论,现就其可能的耐药机制进行综述。     

ERK1/2在曲普瑞林逆转卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂耐药中的作用

目的:研究曲普瑞林在抑制卵巢癌OVCAR3细胞增殖的同时可否逆转顺铂耐药,并探讨MAP-ERK1/2在其中的变化及调节机制。方法:筛选建立耐顺铂的亚细胞系OVCAR3-DDP;采用MTT、流式细胞术及Western blot比较不同浓度下顺铂、曲普瑞林及两药联合对耐药卵巢癌OVCAR3-DDP细胞生长的影响,测定ERK1/2蛋白的表达。结果:卵巢癌OVCAR3-DDP细胞耐药指数为3.87;顺铂与曲普瑞林联合化疗增敏倍数为2.23;ERK1/2蛋白活性在顺铂处理组升高,在曲普瑞林处理组、顺铂与曲普瑞林联合处理组降低。结论:曲普瑞林增加了卵巢癌OVCAR3-DDP细胞对顺铂的敏感性,此作用可能与细胞内ERK1/2信号转导通路有关。     

利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的研究

目的:利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的可能机制，为临床化疗提供有效的依据。方法:(1)通过GEO在线GEO2R工具从两组数据库(GSE15372和GSE33482)中，分别比较对顺铂耐药的A2780与对顺铂敏感的A2780中的基因表达差异，并筛选出高表达基因和低表达基因；使用维恩图确定两组数据库中耐药的高表达共同差异基因和低表达的共同差异基因。(2)利用GO分析和KEGG通路富集分析耐药基因的生物学功能。(3)利用蛋白质-蛋白质互作(PPI)网络及Cytoscape软件筛选出A2780对顺铂耐药核心靶基因。(4)利用Kaplan-Meier Plotter工具对Hub基因进行总生存期分析。结果:(1)两组数据集的高表达共同耐药基因共37个，低表达共同耐药基因共2个。(2)GO分析结果显示：生物学过程(BP)分析结果表明，耐药基因主要参与着细胞间信号传导、趋化作用等；细胞组成(CC)分析表明，耐药基因主要位于细胞外区域、细胞间隙、细胞表面；分子功能(MF)分析表明，耐药基因参与着趋化因子相结合等作用。KEGG通路富集分析显示，耐药基因主要在细胞因子与细胞因子...     

NAC-1通过自噬介导卵巢癌细胞顺铂耐药的研究

目的:探讨NAC-1在自噬介导的卵巢癌细胞顺铂耐药中的作用。方法:Western blot及流式细胞术检测顺铂诱导的耐药卵巢癌细胞(SKOV3/DDP)自噬及凋亡过程中,NAC-1蛋白的表达情况。采用siRNA下调NAC-1表达,检测其对SKOV3/DDP细胞自噬及凋亡的影响,并检测其对顺铂耐药性的影响。结果:顺铂处理SKOV3/DDP细胞后,细胞自噬及凋亡水平升高,NAC-1蛋白表达升高。siRNA下调NAC-1基因后,顺铂处理SKOV3/DDP细胞的自噬水平降低,凋亡升高,细胞顺铂耐药性降低。结论:NAC-1基因可能通过调节自噬参与卵巢癌细胞顺铂耐药,降低NAC-1基因表达有助于提高顺铂对卵巢癌细胞的杀伤作用。     

卵巢癌耐药基因的研究进展

目前对卵巢癌的治疗原则仍是以手术为主、辅以化疗等综合治疗。随着以顺铂、紫杉醇为基础的联合化疗方案广泛和标准化应用，化疗效果显著提高。但随之而来的肿瘤细胞的原发性和／或获得性耐药现象成为临床治疗的障碍。因此，探索耐药机制是解决耐药问题、改善化疗效果的关键。随着生命科学的飞速发展，分子生物学技术的不断改进，从基因组水平去研究耐药机制逐渐成为热点，本文就耐药基因研究进展综述如下。     

铜离子转运蛋白家族与卵巢癌顺铂耐药关系的研究进展

顺铂是临床上广泛应用的化疗药物之一,但是目前顺铂摄入、泵出细胞,在细胞内发挥作用以及细胞产生继发耐药的机制尚不清楚。近年,文献报道铜离子转运蛋白家族如ATP7B、ATP7A、CTR1等在顺铂进出细胞的过程中起着重要的作用,并且可能与顺铂耐药的产生密切相关。现将铜离子转运蛋白家族与卵巢癌顺铂耐药关系的研究进展作一综述。     

MicroRNA-16逆转上皮性卵巢癌耐药的动物实验研究

目的:研究微小RNA-16(miR-16)对人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤耐药性的逆转作用,并初步探讨其逆转作用机制。方法:24只BALB/c裸鼠,随机分为四组,每组6只:Ⅰ组给予皮下接种卵巢癌SKOV3细胞株,成瘤后应用顺铂治疗;Ⅱ组皮下接种卵巢癌SKOV3/DDP顺铂耐药细胞株,成瘤后给予顺铂治疗;Ⅲ组皮下接种卵巢癌SK-OV3/DDP顺铂耐药细胞株,成瘤后给予顺铂与miR-16阴性对照试剂(miR-16 Negative)协同治疗;Ⅳ组接种卵巢癌SKOV3/DDP顺铂耐药细胞株,成瘤后给予顺铂与miR-16化学修饰模拟物(miR-16 Agomir)协同治疗。观察比较四组皮下肿瘤生长情况,种瘤后第35天处死裸鼠,称取肿瘤组织质量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肿瘤组织中bcl-2 mRNA表达,免疫组化方法检测各组肿瘤组织中bcl-2蛋白表达。结果:顺铂与miR-16 Agomir协同治疗组裸鼠皮下肿瘤生长受到明显抑制,其肿瘤组织中bcl-2 mRNA表达水平较其余各组降低,差异具有显著性(P<0.05),其bcl-2蛋白表达亦明显低于其余各组(P<0.05)。结论:miRNA-16可能通过对其靶基因bcl-2的反向调控作用,逆转裸鼠卵巢癌皮下移植瘤顺铂耐药性。     

顺铂耐药卵巢癌细胞鼠肾包膜下动物模型的建立及其临床意义

目的 :建立顺铂耐药卵巢癌细胞鼠肾包膜下动物模型 ,探讨其临床意义。方法 :采取肾包膜下纤维蛋白细胞凝块移植法 ,用环磷酰胺免疫抑制小鼠建立顺铂耐药卵巢癌模型。结果 :移植后 7d肿瘤体积明显增大 ,顺铂耐受细胞组与非耐受细胞组体积无明显差异 (P >0 .0 5) ;移植后细胞形态学特征无改变 ;在用顺铂治疗后 ,耐药细胞组肿瘤体积较非耐药细胞组体积大 (P <0 .0 5)。结论 :该动物模型可作为短期体内实验模型 ,能保持细胞的耐药性     

白细胞介素6诱导卵巢上皮性癌细胞对化疗药物产生耐药的机制研究

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)诱导卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞对化疗药物产生耐药的机制及相关信号传导通路.方法 应用外源性重组IL-6短期处理或将正义IL-6基因(ssIL-6)稳定转染至A2780细胞(不表达IL-6但表达其受体、对顺铂和紫杉醇敏感),同时将反义IL-6基因(asIL-6)稳定转染至SKOV3细胞(高表达IL-6及其受体、对顺铂和紫杉醇耐药),应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、逆转录PCR(RT-PCR)技术及蛋白印迹法(western blot)观察IL-6是否影响卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,并对可能的信号传导通路进行研究.结果 (1)外源性重组IL-6处理A2780细胞后,对顺铂和紫杉醇的耐药倍数分别为6.25和7.31倍;ssIL-6转染A2780细胞后(内源性过表达IL-6),IL-6低、中、高表达细胞对顺铂的耐药倍数分别为7.13、7.47和8.34倍,对紫杉醇的耐药倍数分别为7.61、8.27和10.70倍;而asIL-6转染SKOV3细胞后(抑制内源性IL-6表达),IL-6中、高抑制表达细胞对顺铂的耐药倍数分别为0.15和0.10倍,对紫杉醇的耐药倍数分别为0.10和0.08倍,可恢复SKOV3细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性.(2)外源性IL-6作用后,上调了A2780细胞中耐药相关基因MDR1和GST-π以及凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xL和XIAP mRNA和蛋白的表达;与此相一致,ssIL-6转染的A2780细胞中MDR1、GST-π及bcl-2、bcl-xL、XIAP mRNA和蛋白的表达水平增加,而asIL-6转染的SKOV3细胞则明显降低.(3)有丝分裂原活化的蛋白激酶-细胞外信号调节激酶(MEK)抑制剂--PD98059和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂--wortmannin能分别阻断IL-6诱导的卵巢癌细胞细胞外信号调节激酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)的活化作用,且两者均能阻断IL-6诱导的卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生的耐药,细胞生长明显减少.结论 IL-6诱导的卵巢癌细胞化疗耐药很可能与其上调卵巢癌细胞耐药相关基因MDR1、GST-π和凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xL、XIAP的表达以及活化MEK/ERK和PI3K/Akt信号传导通路有关.     

卵巢癌顺铂耐药细胞模型中14-3-3蛋白的差异表达

目的探讨卵巢癌顺铂化疗耐药模型中14-3-3蛋白的差异表达,为深入研究卵巢癌顺铂耐药机制提供理论依据。方法分别提取卵巢癌顺铂耐药和敏感细胞的蛋白质,应用差异凝胶电泳(DIGE),通过DecyderTM分析软件获得差异表达蛋白质点,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析、鉴定。结果经过二维电泳技术分离,MALDI-TOF-MS成功鉴定出2个14-3-3蛋白亚型,即14-3-3σ和14-3-3ζ,在耐药细胞中表达分别上调31%和38%,t检验P值分别为0.0049和0.0032。结论差异蛋白14-3-3σ和14-3-3ζ的鉴定为探讨这类蛋白在卵巢癌顺铂耐药中的作用奠定了基础,并提供了候选治疗靶点。