延胡索碱预处理对大鼠缺血-再灌注损伤心肌细胞内Ca~(2+)浓度的调节

目的:观察延胡索碱预处理对大鼠缺血-再灌注损伤心肌细胞内Ca2+浓度的调节干预作用。方法:清洁级成年SD大鼠30只,随机分为6组(延胡索碱高、中、低剂量预处理组,经典缺血预处理组,注射用水组和假手术组),结扎左冠状动脉前降支近段30min后再灌注60min后,断头放血,取出心脏,分离心肌细胞,利用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)结合Fluo-3染色技术检测心肌细胞内钙离子浓度变化。结果:与假手术组比较,模型组心肌细胞内钙离子平均荧光强度增强(P0.01);与模型组比较,经典缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组心肌细胞内钙离子荧光强度均减弱(P0.01),而且高剂量组的这种药物预处理保护作用与经典缺血预处理组相当(P0.05)。结论:延胡索碱预处理可减少心肌细胞内Ca2+浓度,拮抗Ca2+蓄积超载,从而保护心肌缺血-再灌注损伤。     

苦参碱对大鼠心肌细胞钙内流影响的实验研究

目的：观察苦参碱对培养SD大鼠心肌细胞内钙浓度的影响。以进一步明确苦参碱抗心律失常的机理，方法：利用培养的乳鼠心肌细胞，负载Fura-2/AM，在不同的条件下（培养液中分别加维拉帕米，氯化钾，不同剂量的苦参碱等），应用图象分析系统，测定心肌细胞内钙荧光强度的变化，间接测定苦参碱对钙内流的影响。结果：高钾环境下心肌细胞内钙荧光强度增高，而苦参碱对此有拮抗作用。结论：苦参碱的钙离子拮抗作用可能是其抗心律失常作用机理之一。     

西洋参茎叶皂苷对大鼠心肌细胞Ca2+内流的影响

目的:研究西洋参茎叶皂苷(PQS)对大鼠心肌细胞Ca2 内流的影响.方法:应用钙离子荧光指示剂Fura-2/AM检测.结果:PQS(1.5mg/ml)和维拉帕米(0.5μmol/L)对静息状态下心肌细胞内Ca2 浓度均无明显影响,但PQS使心肌细胞内Ca2 浓度有下降趋势;两药可明显抑制高钾(50mmol/L)引起的心肌细胞内Ca2 浓度的升高.结论:PQS对心肌细胞电压依赖性钙通道有阻断作用.     

人参皂苷Rb1配伍乌头碱对新生大鼠心肌细胞ATP酶及相关离子的影响

目的:探讨人参皂苷Rb_1配伍乌头碱对心肌细胞三磷酸腺苷(ATP)酶及相关离子的影响。方法:采用胰蛋白酶消化和差速贴壁法培养大鼠乳鼠心肌细胞,分为正常组、乌头碱组、人参皂苷Rb_1组、乌头碱配伍人参皂苷Rb_1(1∶1,1∶2,2∶1)组,给药作用1 h,检测各组心肌细胞的细胞活力和心肌细胞体内离子浓度和ATP酶活力。结果:0.2%乌头碱能降低心肌细胞活力,降低心肌细胞内Mg2+和K+浓度,升高Ca2+和Na+的浓度,降低Ca2+-ATP酶,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力;人参皂苷Rb_1配伍乌头碱后能提高心肌细胞内Mg2+和K+浓度,降低心肌细胞内Ca2+和Na+浓度,提高Ca2+-ATP酶,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力。结论:人参皂苷Rb_1可减弱乌头碱致心肌细胞毒性,机制可能与调节心肌细胞膜ATP酶活性及细胞内相关离子的浓度有关。     

龙牙葱木皂苷对培养心肌细胞游离钙浓度的影响

目的:观察龙牙葱木皂苷对培养心室肌细胞游离钙离子浓度的影响,旨在从细胞水平进一步证明了As的正性肌力作用的机制。方法:采用特异性的荧光指示剂Fluo-3/AM(5μmmol/l)负载心肌细胞,应用激光共聚焦显微镜观察并连续动态扫描细胞内荧光强度的变化,从而反映其对细胞内游离钙浓度的影响。结果:As(10μg/ml)明显增加培养乳鼠心肌细胞内的游离钙离子浓度。Ca2+平均荧光强度明显升高,与对照组相比,P<0.01,差异显著。荧光强度比正常对照组增30%。结论:增加心肌细胞的钙离子浓度,影响心肌兴奋-收缩藕过程,As增加心肌细胞的收缩力,进而实现正性肌力作用。     

蜂胶黄酮对培养大鼠乳鼠心肌细胞游离钙离子的影响

目的 探讨蜂胶黄酮对培养大鼠乳鼠心肌细胞内游离钙离子的影响及其作用机制.方法 原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,用钙敏荧光探针Fura-2/ AM负载染色后,采用阳离子测定系统,检测给药前后心肌细胞游离钙离子浓度[Ca2+]i及心肌细胞钙瞬变.结果 (1)静息状态下,心肌细胞[Ca2+]i为(83.3±11.7) nmol/L(x±s,n=6),终质量浓度分别为0.2、1、5μg/mL蜂胶黄酮对静息[Ca2+]i无影响.(2) KC1、Iso能明显升高[Ca2+]i(P ＜0.01),预孵蜂胶黄酮能抑制KCl及Iso引起的[Ca2+]i增高(P＜0.01);(3)蜂胶黄酮能降低心肌细胞钙瞬变峰值,抑制钙瞬变频率,对KCl、异丙肾上腺素诱导心肌细胞钙瞬变变化具有抑制作用.结论 蜂胶黄酮可抑制心肌细胞内钙超载,其作用机制可能与影响钙通道及细胞内钙释放有关.     

人参皂苷类成分对戊巴比妥钠损伤心肌细胞ATP酶及相关离子的影响

目的:探讨人参皂苷类成分对戊巴比妥钠损伤心肌细胞的影响。方法:将培养至第5日的乳鼠大鼠心肌细胞暴露于0.8%戊巴妥钠5min制备大鼠乳鼠心肌细胞损伤模型;选用人参皂苷Rg1为代表,MTT法确定作用浓度;然后选取最佳浓度作为人参皂苷Rg1、Rb1、Re及阳性药物西地兰的作用浓度,作用时间为24h,试剂盒测定心肌细胞内Na+、K+、Ca2+、Mg2+浓度和细胞膜上Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结果:在1×10-8M剂量下,人参皂苷Rg1、Rb1、Re均能不同程度升高模型细胞Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性,降低Na+-K+-ATP酶的活性,同时纠正因造模引起的细胞内Na+、K+、Mg2+、Ca2+等离子浓度的异常。结论:人参皂苷Rg1、Rb1、Re对心衰心肌细胞具有一定治疗作用。     

环维黄杨星D对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用和对心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的:研究环维黄杨星D(CVB-D)对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用和对急性分离大鼠心肌细胞内游离Ca²⁺浓度的影响。方法:采用培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,测定心肌细胞搏动频率、细胞存活率、肌酸激酶(CK)的含量;应用特异性荧光指示剂Fluo-3/AM负载急性分离的大鼠心肌细胞,用激光共聚焦显微镜检测胞内游离钙的变化。结果:缺氧/复氧损伤+环维黄杨星D组(H/R+CVB-D)乳鼠心肌细胞搏动频率、细胞存活率与缺氧/复氧损伤组比较明显升高,CK含量与缺氧/复氧损伤组比较明显下降。对急性分离大鼠心肌细胞内[Ca²⁺]i逐步升高,并呈剂量依赖性;在有外钙和无外钙时,CVB-D对胞内钙的升高有显著差异(P<0.05);在无外钙并加入内罗啶孵育后,CVB-D引起的胞内[Ca²⁺]i轻度升高,但与无钙组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:环维黄杨星D对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤有保护作用,对急性分离大鼠有升高心肌细胞内游离钙离子浓度的作用,[Ca²⁺]的升高既源于内钙释放又源于外钙内流。     

柴胡三参胶囊对心肌缺血心律失常模型大鼠心肌细胞Ca~(2+)及SERCA2a mRNA表达的影响

目的:研究柴胡三参胶囊对心肌缺血心律失常模型大鼠的防治作用,通过检查指标探讨其可能的作用机制。方法:以结扎大鼠冠状动脉前降支为模型,将60只大鼠分为模型组、假手术组、柴胡三参胶囊小、中、大剂量组和普罗帕酮组,观察大鼠结扎后心电图、心肌细胞Ca2+浓度及SERCA2amRNA表达。结果:柴胡三参胶囊可减少大鼠心肌缺血心律失常的发生,减少心肌细胞内Ca2+超载,增强SERCA2amRNA的表达。结论:柴胡三参胶囊对大鼠心肌缺血心律失常具有明显的保护作用,可能是通过增加SERCA2amRNA活性,从而减少心肌细胞内Ca2+超载。     

甲基原薯蓣皂苷对心肌细胞内钙及ATP酶功能的影响及其机制

目的:研究甲基原薯蓣皂苷(MPD)对大鼠心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i)的活动及细胞膜ATP酶功能的影响,并分析其机制。方法:将乳鼠心肌细胞悬液随机分为对照组、MPD组、地尔硫卓(Dil)组,荧光分光光度计法观察心肌细胞[Ca2+]i的变化。将培养的乳鼠心肌细胞分为对照组和MPD组,分别检测心肌细胞膜ATP酶活性,并观察肌浆网钙ATP酶SERCA2a基因的mRNA表达水平。结果:在静息状态下,各组的心肌细胞[Ca2+]i均无显著性差异。但在KCl刺激下,MPD和Dil组与对照组相比,荧光信号峰值和[Ca2+]i浓度均低于对照组(P0.001)。在心肌细胞膜ATP酶的活性中,MPD组的Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性显著高于对照组(P0.05,P0.01),而Mg2+-ATP酶的活性在2组间的比较无差异性。MPD组与对照组2组SERCA2a的mRNA表达量也无差异性。结论:MPD在一定程度上可以抑制细胞膜上电压依赖型钙通道开放,减少钙离子内流。MPD还可以通过提高心肌细胞膜钠泵和钙泵功能,影响心肌细胞钙离子跨膜转运,维持细胞内低钙离子的环境。     

参芪益心方抑制阿霉素诱导大鼠H9c2细胞凋亡的机制研究

目的?基于心肌细胞内质网应激观察参芪益心方对大鼠H9c2心肌细胞内Ca2+及半胱氨酸天冬氨酸酶（Caspase）-3、Caspase-12、葡萄糖调节蛋白-78（GRP78）、增强型蛋白同源蛋白（CHOP）、肌质网钙离子ATP酶（SERCa2a）蛋白和mRNA表达的影响。方法?SD大鼠制备参芪益心方含药血清。体外培养H9c2心肌细胞，用阿霉素诱导凋亡建立模型，将细胞分为模型组（8%空白血清）、高剂量组（8%含药血清）、中剂量组（4%含药血清+4%空白血清）、低剂量组（2%含药血清+6%空白血清）和卡托普利（1×10-5 mol/L）组，另设空白组（8%空白血清）。Real-time PCR及Western Blot分别检测Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP、SERCa2a mRNA及蛋白的表达，Fluo-3AM流式细胞仪检测H9c2细胞内Ca2+荧光强度。结果?与空白组比较，模型组Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP的蛋白、mRNA表达及Ca2+荧光强度增加，SERCa2a 蛋白及mRNA表达下降（均P<0.01）。与模型组比较，各干预组Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达降低，Ca2+荧光强度降低，SERCa2a蛋白及mRNA表达增加（P<0.01）。与卡托普利组比较，中药高剂量组SERCa2a蛋白及mRNA表达升高，Ca2+荧光强度升高（P<0.01）。结论?参芪益心方可通过降低Ca2+浓度，下调Caspase-3、Caspase-12、GRP78、CHOP的表达，上调SERCa2a的表达，减轻内质网的过度应激，抑制心肌细胞凋亡。     

黄芪甲苷对心肌缺血心律失常大鼠模型Ca~（2＋）浓度影响初步研究

目的：初步探讨黄芪甲苷对心肌缺血心律失常模型大鼠心肌细胞Ca2＋浓度的影响。方法：将心肌缺血再灌注模型大鼠随机分为模型组和假手术组,各组给药7d后开始造模。将Fura-2/AM荧光探针负载于大鼠心肌细胞,采用荧光分光光度计检测Ca2＋浓度。结果：模型组心肌细胞内游离Ca2＋浓度与假手术组比较,差异有显著性（P〈0.01）;与黄芪甲苷的低剂量组比较,无显著性差异（P〉0.05）;与黄芪甲苷的中、高剂量组比较,有显著性差异（P〈0.01）;黄芪甲苷的中、高剂量组与普罗帕酮组比较,无显著性差异（P〉0.05）。结论：黄芪甲苷可降低心肌细胞内游离Ca2＋浓度,从而减少心律失常的发生,起到抗心律失常的作用。     

针刺手厥阴心包经穴对心肌缺血再灌注损伤心肌细胞钙超载的影响

目的:观察针刺手厥阴经“内关”“郄门”穴在缺血再灌注损伤过程中对心肌细胞钙超载的影响。方法:实验分空白组、缺血再灌注模型组、针刺“内关”治疗组、针刺“郄门”治疗组和针刺“支沟”对照组。电针大鼠心包经穴位20 min后,结扎左冠状动脉前降支40 min,心电图监测,再电针穴位20 min,松扎,恢复灌流60 min,摘取心脏,取心室肌制成心肌细胞悬液,细胞浓度为106个/mL,用DMSO溶解荧光染料,Fluo-3负载,激光扫描共聚焦显微镜下观察Ca2+的变化。结果:模型组细胞内Ca2+含量明显增高,荧光分布多,强度高。针刺心包经穴组与模型组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论:针刺手厥阴经穴能有效地抑制心肌细胞的钙超载,减轻损伤的程度,起到保护心肌的作用。     

银杏二萜内酯葡胺注射液对心肌缺血再灌注所致心律失常模型大鼠的影响

目的研究银杏二萜内酯葡胺注射液(DGMI)对心肌缺血再灌注所致心律失常大鼠的保护作用及其机制。方法取120只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,DGMI低(1.5 mg/kg)、中(3 mg/kg)、高(6 mg/kg)剂量组和维拉帕米组[2.5 mg/(kg·d)],每组各20只;术前7 d连续腹腔注射给药,每日1次,最后一次给药2 h后,采用结扎冠状动脉前降支的方法建立心肌缺血再灌注性心律失常大鼠模型,行Ⅱ导联心电图监测并记录,计算心律失常发生率、行心律失常评分;测定心肌组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性,测定心肌组织Ca2+浓度;测定心肌组织抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量。结果与模型组比较,DGMI中、高剂量组和维拉帕米组心电图PR间期、QRS间期显著延长且ST段抬高程度显著降低(P0.05或P0.01);室性心动过速(VT)、室颤(VF)发生率显著降低(P0.05或P0.01),心律失常评分显著降低(P0.05或P0.01),心肌组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性显著升高(P0.05或P0.01),Ca2+浓度显著降低;抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)]活性显著升高且MDA含量显著降低(P0.05或P0.01)。结论 DGMI对心肌缺血再灌注性心律失常大鼠具有一定的保护作用,机制可能与DGMI提高ATPase活性、降低心肌组织Ca2+浓度、降低氧化应激损伤有关。     

不同针刺刺激量对寒凝证类痛经模型大鼠血清及子宫组织内钙离子的影响

目的:观察不同针刺刺激量诱导动物不同"得气"状态对寒凝证类痛经模型大鼠血清Ca2+及子宫Ca2+的影响,探讨针刺"得气"治疗痛经相关机制。方法:将90只SD雌性大鼠,随机分为4组:盐水对照组18只,寒凝证类痛经模型组(模型组)、刺激量A组(期望"得气"组)与刺激量B组(期望"不得气"组)各24只,采用全身冷冻联合雌激素法建立寒凝类痛经大鼠模型,并用粗针深刺行手法与细针浅刺不行手法干预模型20 min,采用不同检测方法观察血清及子宫组织内钙离子变化情况。结果:1.血清内Ca2+含量:与盐水组比较,模型组及刺激量B组血清内Ca2+含量显著增多(P0.01);与模型组比较,刺激量A组血清内Ca2+含量显著降低(P0.01)。2.各组子宫组织内Ca2+含量比较,差异无统计学意义(P0.05)。3.4组大鼠子宫平滑肌内Ca2+荧光强度及百分比比较,各组间P1/P2荧光强度无明显变化,但模型组P2百分比显著增多(P0.01),而刺激量A组能够明显降低P2百分比(P0.01)。结论:刺激量A组能明显降低痛经模型血清Ca2+浓度及Fluo-3-AM负载细胞子宫Ca2+荧光强度百分比,分析认为不同针刺刺激量诱导的不同"得气"状态治疗痛经的机制是通过调节血清及子宫平滑肌内Ca2+水平实现镇痛。     

电针“内关”穴对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织一氧化氮、一氧化氮合酶和细胞内钙的影响

目的:观察电针"内关"穴对实验性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞内钙超载及内源性保护物质一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的影响,为针刺防治心血管疾病及经脉脏腑相关理论提供实验依据。方法:50只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注模型组、电针内关组、电针列缺组、电针合谷组。采用冠脉结扎法建立心肌缺血再灌注模型,各电针组于冠脉结扎前后各电针20 min(30 Hz/100 Hz,2～4 mA)。硝酸还原酶比色法检测各组心肌组织NO、NOS的含量,在Fluo-3/AM染色后于激光共聚焦显微镜下检测心肌细胞内Ca2+荧光强度。结果:与假手术组比较,模型组心肌组织NOS含量明显降低(P0.05),心肌细胞内Ca2+荧光强度明显升高(P0.01);电针心包经"内关"穴组与模型组比较,心肌组织NO、NOS含量明显升高(P0.05),心肌细胞内Ca2+荧光强度明显降低(P0.01);电针肺经"列缺"穴及电针大肠经"合谷"穴与模型组比较,各指标的差异无统计学意义(P0.05)。结论:电针心包经"内关"穴可上调心肌内源性保护物质的水平,降低Ca2+超载,且这种效应存在经脉(穴)与脏腑间的相对特异性联系。     

薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的:研究薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,以不同剂量的薯蓣皂苷进行干预。实验分为5组:空白对照组、缺氧/复氧组、薯蓣皂苷低、中、高剂量(10,20,40μmol/ml)干预组。MTT法检测心肌细胞存活率;TUNEL法检测心肌细胞凋亡百分率;Fluo-3负载激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内[Ca2+]i的变化;硝酸还原酶法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度。结果:与缺氧/复氧组比较,薯蓣皂苷各剂量干预组心肌细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低,心肌细胞[Ca2+]i荧光强度明显减弱,心肌细胞培养液中NO浓度降低。结论:薯蓣皂苷能有效抑制缺氧/复氧导致的乳鼠心肌细胞的凋亡,其可能与减轻细胞内钙超载,抑制受损心肌细胞NO升高,减轻过量NO的细胞毒性作用有关。     

补脾方药对脾虚大鼠心肌细胞ATP酶活性和Ca~(2+)浓度的影响

目的:通过测定大鼠心肌细胞ATP酶活性和Ca2+浓度来探讨补脾方药对脾虚证的作用机制。方法:SPF大鼠采用复合方法制成脾虚模型后分别以3种不同配伍补脾方药灌胃3周。采用比色分析法测定心肌细胞ATP酶活性和Ca2+浓度。结果:与正常对照组、模型组比较,中药用药组大鼠心肌细胞ATP酶活性显著升高(P<0.05),中药用药组大鼠心肌细胞Ca2+浓度比模型组有所降低(P<0.05),有统计学意义。结论:补脾方药治疗脾虚证的作用机制可能与提高细胞内ATP酶活性和降低Ca2+浓度有关。     

心脉龙注射液对大鼠心肌细胞内游离Ca2+的影响

目的探讨心脉龙注射液对大鼠心肌细胞内游离Ca2+的影响.方法采用荧光分光光度法测定给予不同剂量的心脉龙注射液后大鼠心肌细胞内Ca2+的浓度.结果心脉龙注射液3个剂量组(0.19、0.38、0.76g@L-1)均能增加心肌细胞内Ca2+含量,依次为169.18±11.64、233.26±10.69、164.25±10.34nmol@L-1,与对照组(120.64±3.02nmol@L-1)相比有显著性差异(P<0.01).40μmol@L-1的维拉帕米对0.38g@L-1的心脉龙注射液所致的心肌细胞内Ca2+增加有抑制作用(抑制率为20%),而对0.19、0.76g@L-1心脉龙注射液所致的心肌细胞内Ca2+增加无明显抑制作用.结论心脉龙注射液强心作用与升高心肌细胞内Ca2+有关.     

牛磺酸对阿霉素所致大鼠心肌线粒体损伤的影响

目的:研究牛磺酸(Tau)对阿霉素(Adr)所致大鼠心肌线粒体损伤的影响.方法:将Tau灌胃于Adr所致心肌线粒体损伤的40只大鼠,采用透射电镜对大鼠心肌线粒体的损伤情况进行观察;用激光共聚焦显微镜观测心肌细胞内的Ca23浓度;以Rhodamine 123为荧光探针,用荧光分光光度计测定心肌线粒体悬液的荧光强度反应线粒体膜电位变化.结果:Adr累积用量达到20 mg/kg可致大鼠心肌线粒体损伤,Ca2+浓度增加,线粒体膜电位降低.Tau高、中剂量组(400mg/kg、200 mg/kg)可减轻心肌细胞超微结构的损伤,减轻钙超载和升高线粒体膜电位.结论:Tau能明显改善Adr所致大鼠心肌线粒体损伤,对Adr心脏毒性具有保护作用.