膝骨性关节炎患者滑膜水通道蛋白-1表达与血管生成的相关性研究

[目的]观察膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)患者滑膜中水通道蛋白1(aquaporins-1,AQP-1)表达和血管生成的情况,并对二者进行相关性分析,从而探讨AQP-1表达与血管生成在KOA滑膜炎中的意义,为进一步研究膝骨性关节炎(osteoarthritis,OA)的发病机制提供试验依据。[方法]根据Kellgren-Lawrence(K/L)分级和美国风湿病协会KOA标准,将50例患者分为早期KOA组、晚期KOA组和正常组。对获取的膝关节样本行术中肉眼观察和显微镜下组织学观察,并用Krenn滑膜炎评分评估滑膜组织学变化。采用免疫组化法检测滑膜组织中AQP-1和CD34的表达情况。显微镜下观察CD34单克隆抗体标记新生血管内皮细胞微血管计数,并进行微血管密度(MVD)的计算。采用Pearson线性相关性分析法分别对MVD与滑膜炎性评分之间,AQP-1阳性细胞表达率与滑膜炎评分之间,AQP-1阳性细胞表达率与MVD之间进行相关性分析。[结果](1)在早期KOA组和晚期KOA组膝关节滑膜中都有滑膜炎性改变,其主要变化为:滑膜衬里层增生、血管增生和炎性细胞浸润。KOA组滑膜炎性评分较正常组明显高,差异具有统计学意义(P0.05),且早期KOA组滑膜较其他两组滑膜炎性等级更高,差异具有统计学意义(P0.05);(2)免疫组化检测结果显示,与正常滑膜组织相比,在KOA组滑膜中AQP-1和MVD有着更高的表达,差异具有统计学意义(P0.05),且早期KOA组高于晚期KOA组,差异具有统计学意义(P0.05);(3)MVD值与滑膜炎性评分呈明显正相关(r=0.825,P0.01);AQP-1阳性细胞表达率与滑膜炎性评分呈明显正相关(r=0.827,P0.01);AQP-1阳性细胞表达率与MVD值明显正相关(r=0.894,P0.01)。[结论](1)AQP-1的表达和新生血管生成在KOA组较正常组明显增多,早期KOA组较晚期KOA组明显增多,且AQP-1表达的上调可能与滑膜血管生成相关;(2)KOA滑膜中AQP-1表达上调和血管生成可能通过协调作用参与了人KOA滑膜炎的形成及KOA的发生、发展。     

骨性关节炎与软骨细胞凋亡的关系

骨性关节炎 (ＯＡ)重要的病理学特征是关节软骨的降解。既往对ＯＡ的研究 ,大多着重于细胞外基质酶性降解和 /或合成新的基质受到抑制而导致软骨的破坏 ,很少注重软骨细胞生存或死亡在ＯＡ关节软骨降解中所起的作用。软骨细胞是成熟软骨中唯一的细胞类型 ,关节软骨与年龄有关的变化包括细胞数减少 ,空陷窝增加 ,异常基质钙化。细胞数量上的变化与软骨纤维化增加的频率一致[1,2 ] ,这提示细胞结构的减少成了基质降解及ＯＡ最终发生的因素。一个重要的现象是ＯＡ患者关节中正常软骨及非负重区软骨中的软骨细胞数少于正常人关节软骨中的软骨细…     

兔椎间盘终板细胞凋亡与水通道蛋白-1的关系

目的 探讨水通道蛋白(AQP)-1与椎间盘终板细胞凋亡的关系及意义.方法 将23个含终板的完整椎间盘分为4组:A组直接把取出的新鲜完整的椎间盘作为对照(椎间盘×5),B组为无干预组[进行培养但不加白细胞介素(IL)-1β,椎间盘×6],C组加入10μg/L IL-1β(椎间盘数×6),D组加入30μg/L IL-1β(椎间盘数×6).B、C、D组培养2周后取组织的相邻切片,免疫组织化学检测AQP-1和Caspase-3的表达.结果 免疫组织化学显示A组中AQP-1和Caspase-3阳性细胞率分别为(88.4±1.1)%和(5.5±0.8)%,B组阳性细胞率分别为(86.7±1.4)%和(6.3±1.6)%,C组中阳性细胞率分别为(42.8±2.2)%和(62.0±1.7)%,D组阳性细胞率分别为(30.5±2.0)%和(71.8±1.23)%,AQP-1与Caspase-3表达呈负相关.结论 AQP-1表达减少与终板细胞的凋亡密切相关.     

单味中药对膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的作用述略

目的 粗略汇总单味中药对膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的文献,探究单味中药其作用机理。方法 检索1990年至2015年期间CNKI,维普,pubmed数据库上有关单味中药对膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的国内外中英文文献,从中筛选出所发表期刊具有影响力的、所选中药临床常用并具有代表性的、研究量大且具有针对性的文献,将筛选出的文献进行分类,总结提炼出核心结论并进行分析。结果 国内外已经存在大量研究单味中药作用于软骨细胞机制的文献。国内文献多根据中医对本病的认识,辨证虚实,对应中药性味施治,集中研究单味中药的临床疗效研究。国外的中医理论知识薄弱,将中药抽离中医基础,更关注中药内主要有效成分,注重有效成分在软骨细胞中的作用靶点,故对其机理研究较多。其中大部分中药的治疗作用与调节软骨细胞的凋亡密切相关。结论 总体上,国内外承认中药对本病的有效作用,大量研究认为中药能够抑制软骨细胞的凋亡,对软骨细胞的增殖有促进作用,可以通过不同途径改善软骨损伤。     

食用酒精对大鼠肾组织中水通道蛋白1表达的实验研究

目的 观察水通道蛋白1（aquaporin 1,AQP 1）在酒精灌胃大鼠肾组织中的表达,探讨酒精性肾损伤的机制.方法 将45只雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量酒精组和高剂量酒精组,喂养6周,检测血清学指标.用HE染色观察肾脏组织学改变.免疫组化方法检测AQP 1的表达,计算机分析技术计算AQP 1的平均光密度.结果 ①低剂量和高剂量酒精组丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）明显高于对照组（P＜0.05）;②苏木精伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色与对照组相比,低剂量酒精组和高剂量酒精组光镜下观察相似,近曲小管管壁上皮细胞形状不规则,细胞核排列无秩序,近曲小管管腔变大;③免疫组化染色AQP 1在对照组、低剂量酒精组和高剂量酒精组肾组织中均有表达,定位于肾小球毛细血管内皮细胞、近曲小管的上皮细胞,在对照组中染色较深呈棕黄色,在低剂量酒精组染色颜色变浅,在高剂量酒精组染色最浅;④对照组平均光密度为（0.055±0.384）,低剂量酒精和高剂量酒精组平均光密度分别为（0.278±0.047）、（0.279±0.044）,对照组与低剂量和高剂量酒精组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;低剂量酒精和高剂量酒精组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 大量饮酒可导致肾小管中AQP 1表达减少,AQP 1表达减少可能是酒精性肾损伤机制之一.     

水通道蛋白1和3在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的 探讨水通道蛋白1（AQP-1）和AQP-3与结直肠癌发生发展的关系.方法 应用免疫组织化学染色SP法检测25例结直肠腺瘤、50例结直肠癌及相应癌旁组织中AQP-1和AQP-3的表达.结果 结直肠癌组织中AQP-1的阳性表达率为64%（32/50）,明显高于癌旁组织（38%,19/50）和腺瘤组织（32%,8/25）,差异有统计学意义（P＜0.01）;AQP-1表达与肿瘤浸润深度和淋巴结转移有关（P＜0.05）.AQP-3在结直肠癌、腺瘤及癌旁组织中的阳性表达率分别为52%（26/50）、44%（11/25）和56%（28/50）,差异无统计学意义（P＞0.05）;AQP-3表达与患者年龄、肿瘤大小及浸润深度有关（P＜0.05）.结直肠癌中AQP-1与AQP-3表达无显著相关性（P＞0.05）.结论 结直肠癌中高表达AQP-1,但AQP-3表达却未见增高;AQP-1和AQP-3表达无相关性.     

水通道蛋白1和3在结直肠癌组织中的表达及其意义

Objective To investigate the significance of aquaporin-1 (AQP-1) and aquaporin-3 (AQP -3) in the development of colorectal carcinoma. Methods The expression of AQP-1 and AQP-3 was investigated using immunohistochemical staining with Streptavidin Perdcidase in tissues from colorectal adenoma (CRA, n=25), colorectal cancer (CRC, n=50), and adjacent mucosa (CRT, n=50).Results The positive rate of AQP-1 was 64%(32/50) in CRC, significantly higher than that in CRT (38%, 19/50) and CRA(32%,8/25)(P＜0.05). The expression of AQP-1 was associated with depth of invasion and lymph node metastasis in CRC patients(P＜0.05). The positive rate of AQP-3 was 56% in CRT, 44% in CRA, and 52% in CRC. There were no significant differences(P＞0.05). The expression of AQP-3 was associated with age, tumor diameter, and depth of invasion(P＜0.05). No significant correlation between the expression of AQP-1 and AQP-3 in CRC was shown by Spearman correlation analysis(P＞0.05). Conclusions AQP-1 expression is increased in CRC while the expression of AQP-3 is not. There is no correlation between the expression of AQP-1 and AQP-3 in CRC.     

膝关节骨关节炎发病过程中HSP70对软骨细胞凋亡的影响

目的:观察热休克蛋白70(HSP70)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3蛋白(caspase-3)在膝关节骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)发病过程中的表达,探讨其相关性。方法:40只3月龄SD大鼠分为两组,实验组30只,对照组10只。实验组采用Hulth法复制膝骨性关节炎模型,作前交叉韧带切断加内侧1/3半月板切除术,对照组不作特殊处理。造模后,不采取任何措施,自由饲养。分别在术后1、2、4周取材股骨端和胫骨端关节,对标本组织进行肉眼、免疫组化及光镜观察,采用Mankin改良的关节软骨病理评分标准进行组织学评分。结果:肉眼及光镜观察,实验组均可见KOA的改变,如滑膜增生、表层软骨糜烂等;同时,免疫组化中,术后1、2、4周HSP70的表达逐渐增加,caspase-3的表达先增加后降低,而对照组并无类似改变。Mankin评分显示1周分别和2、4周比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:膝关节骨关节炎发病过程中,热休克蛋白抑制软骨细胞凋亡,并对软骨细胞具有保护作用,这将为临床上诸保守治疗提供一定程度的客观科学依据。     

膝关节骨性关节炎中WISP-1调控机制的研究

目的使用膝关节骨性关节炎（OA)临床组织标本与人软骨细胞株(NHAC).以分子生物学手法探讨WISP4在骨关节 软骨基质合成和分泌中的调控机理,明确其在骨性关节炎中的作用。方法NHAC细胞以1. 4 x 106/mL密度播种于6孔板 (直径3.5 cm)后培养48 h,于含有0.2%牛血清白蛋白（BSA)的DF中继续培养12 h,使细胞处于静止状态。向含0.02% BSA 的 DF 培养基中加人 10、50 和 100 ng/mL 的 Wnt 刺激细胞 6 h。对照 siRNA 与 P~catenin siRNA,使用 EntranserTM~R (Engreen)转染试剂转染至NHAC。转染24 h后使用PBS清洗细胞两次。向含0.02% BSA的DF培养基中加人50 ngjnL的 Wnt刺激细胞。向NHAC负荷不同剂量WISP4,24 h后观察MMPs和ADAMTS4。利用总RNA提取试剂盒提取组织标本和细 胞RNA,反转录产物cDNA作为PCR扩增模板进行定量PCR;使用蛋白提取试剂盒提取蛋白。结果在膝关节组织标本中发 现,在骨性关节炎关节软骨中WISP~1、Wnt和b相似文献   

胞内氯离子通道蛋白1表达与胆囊癌侵袭转移的相关性研究

目的 探讨胆囊癌组织胞内氯离子通道蛋白1(chloride intracellular channel 1,CLIC1)蛋白表达与胆囊癌侵袭转移的关系. 方法 应用免疫组织化学SP染色法及Western blot技术,检测36例胆囊癌和相应癌旁组织中CLIC1蛋白的表达.采用Spearman等级相关分析、x2检验对结果进行分析.结果 免疫组化结果提示,CLIC1蛋白高表达于胆囊癌组织,癌旁组织中CLIC1蛋白表达较少,阳性表达率分别为81％ (29/36)和44％ (16/36),差异有统计学意义(P＜0.05).胆囊癌组织CLIC1表达与患者性别和年龄无关(P＞0.05),而与肿瘤的淋巴转移、浸润深度、TNM分期和分化程度相关(P＜0.05).Western blot结果显示,CLIC1的特异性条带出现在Marker标准相对分子质量27 000左右,CLIC1在胆囊癌的阳性率高于癌旁组织(P＜0.05).结论 CLIC1可能在胆囊癌的发生发展过程中发挥重要的作用,CLIC1蛋白的高表达与胆囊癌的侵袭转移密切相关.     

无菌性松动全髋关节假体周围界膜组织中Caspase-3表达和细胞凋亡的研究

目的观察无菌性松动全髋关节假体周围界膜中凋亡调控蛋白Caspase-3表达和细胞凋亡分布的变化,探讨其与假体周围骨溶解之间的关系。方法2001年4月～2006年8月临床上选取16例高分子聚乙烯-金属配伍全髋关节翻修术的患者,其中男10例,女6例;初装年龄45～67岁,翻修年龄55～78岁,使用时间7～13年。根据术前X线片和术中所见,分为松动/非骨溶解组和松动/骨溶解组,每组各8例,取出假体周围各区的假体-骨间界膜组织。另取6例初装人工全髋关节的骨性关节炎患者作为对照组,其中男2例,女4例;年龄54～68岁,病程9～15年;采用免疫组织化学法检测界膜组织中Caspase-3的表达,末端标记法原位检测细胞凋亡,分析并比较Caspase-3和细胞凋亡的阳性表达和分布,与磨损颗粒的局部聚积和骨溶解程度的关系。结果高分子聚乙烯磨损颗粒局部聚积区的Caspase-3阳性细胞率和细胞凋亡指数明显高于金属磨损颗粒;重度磨损细胞凋亡指数高于轻度磨损,差异有统计学意义(P<0.05);松动/骨溶解组Caspase-3阳性细胞率和细胞凋亡指数明显高于松动/非骨溶解组和对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论假体周围界膜组织Caspase-3的表达和细胞凋亡具有一定规律性,并与磨损微粒的局部聚积和骨溶解程度密切相关,可能是磨损颗粒造成界面骨重建受阻而溶骨大量发生的关键环节之一;细胞凋亡参与了假体无菌性松动的病理过程,且与Caspase-3信号激活有关。     

体外培养软骨细胞凋亡与caspase-3表达的实验研究

目的探讨软骨细胞体外培养过程中凋亡发生以及caspase-3的表达. 方法采用Annexin Ⅴ和TUNEL法检测第1～4代软骨细胞在体外正常培养体系中第3天和第7天的凋亡率;RT-PCR和Western blot分析caspase-3表达水平;ELISA检测caspase-3蛋白酶活性. 结果第1～4代软骨细胞在体外培养过程中均存在不同程度的凋亡现象,各代次软骨细胞第7天的凋亡率15.7%±0.3%,明显高于第3天的8.9%±0.6%,有统计学意义(P＜0.01).caspase-3 mRNA和蛋白质在整个培养过程中都有表达,随着时间延长表达上调,第7天的表达水平高于第3天.体外培养7天后caspase-3被激活,可检测到分子量为20 ku的裂解片段.caspase-3蛋白酶活性随着培养时间延长也逐渐增高,与细胞凋亡程度基本一致. 结论软骨细胞在体外培养过程中存在凋亡,caspase-3参与了凋亡事件并发挥着重要作用.     

Bax基因表达在胰腺癌组织细胞凋亡中的作用

目的:探讨胰腺癌组织中细胞凋亡与bax基因表达的相互关系及其在肿瘤发生发展中作用。方法：采用原位末端标记法（ISEL）和免疫组织化学技术检测40例胰腺癌组织及14例慢性胰腺炎组织的细胞凋亡（AI），凋亡相关基因bax蛋白的表达。结果：胰腺癌组织中的AI均值明显高于慢性胰腺炎组织（P＜0．01），随肿瘤进展AI逐渐减少。在癌组织中bax 基因阳性表达率为72．50％（29／40），且bax基因高表达组的AI均值明显高于低表达组（P＜0．01）。结论：细胞凋亡相对减少，在胰腺癌发生发展中起重要作用。bax蛋白是调节胰腺癌组织中细胞凋亡的重要因素。     

细胞凋亡及增殖细胞核抗原双染色在肝细胞肝癌组织中的研究

目的 研究肝细胞肝癌细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）／凋亡细胞比值与肝细胞肝癌分化程度的关系。方法 应用原位末端标记法（TUNEL）及免疫组化双染色技术,对35例肝细胞肝癌石蜡包埋组织进行检测。结果 不同分化程度癌组织中细胞凋亡和PCNA的阳性率不同。分化程度高,细胞凋亡阳性率高、PCNA阳性率偏低;分化程度低,细胞凋亡阳性率偏低、PCNA阳性率高。随分化程度的降低,PCNA／凋亡细胞的比值显著增加,二者有良好的相关性。结论 PCNA／凋亡细胞的比值可作为评估肝细胞肝癌分化程度的指标。     

p21 ras和nm23-H1表达与胃癌淋巴结转移的关系

为探讨ｐ２１ｒａｓ和ｎｍ２３－Ｈ１表达与胃癌淋巴结转移的关系,采用ＬＳＡＢ法观察了８０例胃癌患者的ｐ２１ｒａｓ和ｎｍ２３Ｈ１的表达,并分析其与淋巴结转移的关系,结果：有淋巴结转移（ＬＮＭ）组ｐ２１ｒａｓ表达阳性率（６２．５％）明显高于无ＬＮＭ组（４２．５％）但ｎｍ２３－Ｈ１表达阳性率（２７．５％）则明显低于无ＬＮＭ组（４７．５％）ＬＮＭ数为１－３枚和ｐ２１ｒａｓ表达阳性率（３３．３％）明显低于４－     

COX-2在肝细胞肝癌中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨肝细胞癌(HCC)中环氧化酶-2(COX-2)的表达与细胞凋亡的关系及其可能的机制.方法 选用44例HCC组织制作组织芯片,应用免疫组织化学S-P法检测癌组织COX-2、caspase-3和survivin的表达情况.应用末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡指数(AJ).结果 HCC中COX-2蛋白阳性率为52.3%,其表达与AJ呈显著负相关r=-0.354,P＜0.05),与caspase-3蛋白表达也呈显著负相关(r=-0.447,P＜0.01),但与survivin蛋白的表达呈显著正相关(r=0.394,P＜0.01).AI与caspase-3呈显著正相关(r=0.381,P＜0.05),但与survivin呈显著负相关(r=-0.458,P＜0.01).结论 本研究证实了HCC中COX-2的抗肿瘤细胞凋亡作用;其机制可能是通过上调肿瘤细胞survivin表达,同时下调caspase-3表达途径实现的.     

自体移植皮片中黑皮素1受体表达与黑色素含量的相关性研究

目的检测黑皮素1受体(melanocortin 1 receptor,MC-1R)及黑色素在不同类型自体移植皮片中的表达,并与自身正常皮肤作对照,初步认识MC-1R在自体移植皮片过度色素沉着中的作用。方法取颈部自体皮片移植术后1年的皮片(包括全厚皮片、中厚皮片及刃厚皮片),以及原供区、受区周围皮肤作为正常对照,采用免疫组织化学方法、银染-丽春红法检测自体移植皮片与正常皮肤中MC-1R表达及黑色素含量。结果MC-1R的表达定位于表皮基底部黑色素细胞、角质形成细胞胞浆;在各类自体移植皮片中均呈阳性表达,皮片愈薄MC-1R表达愈明显;MC-1R在各类移植皮片中的表达与两类正常对照皮肤比较差异均有统计学意义(P<0.01),但两类正常对照皮肤内的表达差异无统计学意义(P>0.01)。不同类型移植皮片表皮中黑色素含量较两种正常对照皮肤均明显增加,且差异有统计学意义(P<0.01);且不同类型移植皮片表皮中黑色素含量的差异亦均有统计学意义(P<0.01),皮片愈薄,黑色素含量愈多;皮片中黑色素含量与MC-1R表达量呈正相关。结论自体移植皮片中黑色素含量与MC-1R表达量呈正相关,MC-1R在自体移植皮片中的高表达能使皮片中黑色素含量增加,在自体移植皮片过度色素沉着中起重要调控作用。     

syndecan—1蛋白的表达与肝细胞肝癌恶性表型的研究

目的 探讨syndecan-1蛋白在肝细胞肝癌的表达及与临床病理参数的关系。方法 采用免疫组化ABC法检测syndecan-1在肝细胞肝癌中的表达 。结果 发现在47例肝癌组织中syndecan-1阴性表达28例,其分化不良的肝癌syndecan-1阴性表达率高于分化较好者（分别为78．3％,41．7％,两者相比P＜0．05）;直径＞5cm的肝癌syndecan-1阴性表达率高于直径≤5cm肝癌（分别为81．0％,42．3％,两者相比P＜0．01）;大体或镜下有癌栓者syndecan-1阴性表达率高于无癌栓的肝癌（分别为84．2％,42．9％,两者相比P＜0．01）。syndecan-1的阴性表达与患者血清甲胎蛋白水平及Child分级均无明显的相关性（P＞0．05）。结论 syndecan-1的低表达与肝癌增大、分化程度低、侵袭转移发生等恶性表型相关,可能对这些表型起负调节作用,可视为抑癌基因。     

Caspase-1表达和软骨细胞凋亡在骨关节炎的意义

目的观察骨关节炎（osteoarthritis,OA）关节软骨标本的Caspase-1表达和软骨细胞凋亡的程度,初步探讨两者的相关性和与OA病变程度的关系。方法选取2007年3月至2007年11月进行关节置换的OA患者的关节软骨标本26例作为OA组,男8例,女18例;髋20例,膝6例;年龄52～81岁,平均60岁。选取截肢的正常关节软骨标本10例作为对照组,男7例,女3例;年龄16～45岁,平均40岁;均排除结构性破坏。按改良Mankin病理评分进行分级,将标本分成正常软骨组0～1分（A组）即对照组;OA软骨轻度退变组2～5分（B组）、OA软骨中度退变组6～9分（C组）和OA软骨重度退变组10～14分（D组）,B～D组即OA组。分别采用HE染色和番红O/固绿染色后,采用免疫组化和TUNEL检测法,检测软骨细胞中Caspase-1的表达和凋亡细胞阳性率。结果 （1）对照组Caspase-1表达低于OA组;Caspase-1的表达与Mankin评分呈正相关;（2）对照组的凋亡细胞阳性率低于OA组的凋亡细胞阳性率;软骨凋亡细胞阳性率与Mankin病理评分呈正相关;（3）A～D组Caspase-1的表达和凋亡细胞阳性率不存在相关性。结论 （1）Caspase-1与OA发生发展有关,能反应OA软骨的病变进展程度;（2）软骨细胞凋亡是OA的可能发病机理,其凋亡率可能影响OA病程进展。