NF-κB在Caski细胞DEK基因沉默中的作用研究

目的研究NF-κB在宫颈癌DEK基因沉默中作用。方法实验分转染psiRNA-hHDEK组、转染psiRNA-hH1neo组及未转染组,采用免疫细胞化学染色和western blot方法,观察三组细胞NF-κB的表达情况。结果 psiRNA-hHDEK转染组CaSki细胞NF-κB蛋白表达明显增加;经显微图像分析测定转染psiRNA-hHDEK组阳性细胞百分率明显高于未转染组[(74.2±8.1)%vs(11.7±2.6)%]和转染psiRNA-hH1neo组[(74.2±8.1)%vs(21.6±3.9)%]。结论 DEK基因沉默后CaSki细胞内NF-κB表达上调,DEK负性调控宫颈癌细胞中NF-κB表达,从而发挥其衰老抑制基因及凋亡抑制基因的作用。     

STCl过表达对宫颈癌CaSki细胞生物学行为的影响

【目的】研究转染STCl基因对人宫颈癌CaSki细胞生物学行为的影响。【方法】通过MTT、集落形成、划痕实验、Tranwell实验、裸鼠成瘤等方法检测STCl基因转染对宫颈癌CaSki细胞增殖、迁移、侵袭、体内成瘤能力的影响。【结果1MTT和集落形成实验表明,与空载体组相比,CaSki／STCl细胞生长受到抑制,细胞存活率和集落形成率较低（P〈0．05）。划痕实验显示CaSki／STCl较CaSki／NC组细胞迁移率降低（35±3．2％ VS 64±4．5％,P〈0．05）。TranweⅡ实验显示CaSki／NC的85±5,而CaSki／STCl组穿膜细胞数较少为54±4（P〈0．05）。裸鼠成瘤实验显示,CaSki／STCl组和CaSki／NC组的肿瘤平均质量依次为（O．285士0．057）g、（0．523±0．154）g,差异具有统计学意义（P,0．01）。【结论】sTCl过表达抑制宫颈癌细胞增殖、转移及侵袭,STCl基因可用于宫颈癌的基因治疗。     

沉默Caveolin-1基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨沉默 Caveolin-1（Cav-1）基因对人膀胱癌细胞株5637增殖和凋亡的影响。方法通过siRNA转染人膀胱癌细胞株5637（沉默组）,以转染 FAM-siRNA为阴性对照组,未转染细胞为正常对照组。Re-al-time PCR法检测Cav-1基因沉默的效率,CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各种细胞的凋亡情况。结果 siRNA转染可显著降低人膀胱癌细胞株5637中 Cav-1 mRNA 的表达水平。沉默组细胞的增强能力明显减低,而细胞凋亡率明显升高（均P＜ 0.05）。结论沉默Cav-1基因可抑制人膀胱癌细胞株5637的细胞增殖并促进细胞凋亡。     

siRNA沉默细胞周期相关激酶基因对鼠结肠癌生长及其细胞凋亡的影响

目的探讨siRNA沉默细胞周期相关激酶(CCRK)基因对鼠结肠癌生长及其凋亡的影响。 方法将50只BALB/C(nu/nu)裸鼠皮下接种人类结肠癌SW480细胞,将其中建立移植瘤裸鼠模型成功的30只裸小鼠按照单纯随机抽样方法随机分为3组,分别接种siRNACCRK转染的人类结肠癌SW480细胞株(实验组)、正常培养的SW480细胞(空白对照组)和以转染携带无关序列片段sh RNA慢病毒的SW480细胞(阴性对照组)。第42天处死裸鼠后取下肿瘤组织,比较各组肿瘤重量、CCRKmRNA表达量、CCRK蛋白表达和细胞凋亡的变化。 结果转染siRNA组肿瘤重量、CCRK mRNA和CCRK蛋白表达[(0.54±0.15)g,1.14±0.24和0.18±0.05]表达显著低于空白对照组[(1.05 ± 0.14)g,2.41±0.42和0.49±0.07]和空siRNA载体组[(1.07 ±0 .12)g,2.39±0.47,0.47±0.09;F＝21.18,23.47,90.03;P<0.01];空白对照组与空siRNA载体组比较差异无统计学意义(q＝0.98,1.07,1.13;P>0.05)。实验组沉默CCRK基因后组织中细胞凋亡率为(21.23±1.12)%,明显高于空白对照组(6.78±0.37)%和阴性对照组(7.25±0.32)%,差异有统计学意义(F＝56.936,P<0.01);但空白对照组和空siRNA载体组之间差异无统计学意义(q＝1.78,P>0.05)。 结论CCRK靶向siRNA表达载体接种结肠癌裸鼠后能显著降低结肠癌瘤体的增长,抑制CCRK基因和蛋白表达;siRNA沉默CCRK基因能促进其凋亡,CCRK基因有望成为结直肠癌治疗的新靶点。     

siRNA沉默Slug基因抑制体外胰腺癌AsPC l细胞生长的实验研究

有研究发现Slug在恶性肿瘤中过度表达,并与肿瘤的发生、发展,患者预后有关[1].最近发现,S1ug是PUMA的强烈抑制基因,而PUMA是促凋亡基因.本文旨在研究S1ug基因沉默后对胰腺癌AsPC 1细胞的增殖和凋亡的影响,探讨胰腺癌基因治疗的新靶点.     

miR-126对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响

【目的】探讨 miR‐126对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响。【方法】将宫颈癌 HeLa 细胞分为 miR‐126 mimics 组（转染 miR‐126 mimics）、scramble 组（转染 scramble）、Crk‐siRNA 组（转染 Crk‐siRNA）、si‐con‐trol 组（转染 si‐control）,其中 si‐control 组为 Crk‐siRNA 组的阴性对照,scramble 组为 miR‐126 mimics 组的阴性对照。采用 Western blot 法检测外源过表达 miR‐126对宫颈癌 HeLa 细胞 Crk 蛋白表达水平的影响;采用 M TT 和 Transwell 侵袭实验检测外源高表达 miR‐126对宫颈癌 HeLa 细胞增殖与侵袭能力的影响。【结果】Western blot 结果显示,miR‐126 mimics 组和 Crk siRNA 组 Crk 蛋白表达水平较阴性对照组（scram‐ble 组和 si‐control 组）明显降低;M TT 结果显示,转染 miR‐126 mimics 和 Crk‐siRNA 组 HeLa 细胞的增殖速度从48 h 起明显减慢,与各自的阴性对照组比较差异均有统计学意义（ P ＜0．05）;Transwell 结果显示,转染miR‐126 mimics 和 Crk siRNA 组36 h 后 HeLa 细胞穿过基质胶的细胞数量分别为（66±10）和（63±9）,与对照组（157±12）比较,差异具有统计学意义（ P ＜0．01）。【结论】miR‐126可能通过靶向调控 Crk ,从而抑制宫颈癌细胞的增殖与侵袭。     

TPT1基因转染对肝癌细胞系SMMC-7721生物学行为的影响

目的：观察TPT1转染对肝癌细胞系生物学行为的影响.方法：用QIAGEN超纯质粒抽提试剂盒抽提TPT1的真核表达质粒pEGFP-N3TPT1和pEGFP-N3,通过lipofectAMINE,在24 h内连续3次转染肝癌细胞系SMMC-7721,通过荧光显微镜、RT-PCR观察转染、表达效率,通过MTT实验、软琼脂克隆形成实验、细胞周期分析,研究TPT1转染对肝癌细胞系SMMC-7721生物学行为的影响.结果：用此重构体转染后,在荧光显微镜下,可见细胞发出明亮的绿色荧光,转染效率约在30%左右.RT-PCR分析显示,pEGFP-N3 TPT1转染的细胞,TPT1 mRNA水平升高0.78倍（P〈0.05）.与对照组相比,pEGFP-N3TPT1转染可明显增强肝癌细胞系的增殖能力和软琼脂克隆形成能力（P值均〈0.05）,使G2＋S/M期细胞数增多.结论：pEGFP-N3 TPT1可在肝系细胞内高效表达,TPT1可增强肝癌细胞系SMMC-7721的恶性表型.     

p27基因在宫颈癌中表达的临床病理意义

目的探讨 p2 7基因在宫颈癌中表达的临床病理意义。方法用链霉菌亲生物素 -过氧化酶法检测宫颈癌中 p2 7蛋白表达。结果p2 7蛋白高表达率在宫颈癌中为 19% (9/48) ,而正常宫颈组织中均为高表达。细胞分化程度中 ,Ⅰ级的 p2 7蛋白高表达率明显高于Ⅱ级及Ⅲ级 (P <0 .0 5 ) ;不伴淋巴结转移的 p2 7蛋白高表达率 3 2 %(8/2 5 ) ,明显高于伴有淋巴结转移的p2 7蛋白表达率 4% (1/2 3 ) (P <0 .0 5 )。结论p2 7与宫颈癌的发生、分化程度及淋巴结转移有关 ,对p2 7蛋白进行检测可为诊断宫颈癌及临床综合治疗提供参考     

SGK1基因沉默对人前列腺癌细胞生长的抑制作用

目的探究糖皮质激素诱导蛋白激酶1(serum and glucocorticoid-inducible kinase 1,SGK1)基因沉默对人前列腺癌细胞生长抑制的作用。方法选取人前列腺癌PC-3细胞,将RNAi重组质粒(PSGK1-RNAi)通过脂质体转染至PC-3细胞,再用G418筛选稳定转染的SGK1基因沉默的PC-3细胞作为SGK1基因沉默组,并将正常培育的PC-3细胞和空质粒稳定转染的PC-3细胞分别作为阴性对照组与阳性对照组。检测培育48 h、72 h、96 h的细胞增殖能力,计算培育48 h的不同细胞周期表达水平和细胞凋亡情况。结果培育48 h、72 h及96 h,三组PC-3细胞水平差异有统计学意义(P 0. 05);与SGK1基因沉默组比较,培育48 h、72 h及96 h的阳性对照组、阴性对照组PC-3细胞水平升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。三组G1期和S期细胞所占比例比较差异有统计学意义(P 0. 01);与SGK1基因沉默组比较,阳性对照组、阴性对照组G1期细胞所占比例下降,S期细胞所占比例升高,差异具有统计学意义(P 0. 01)。三组PC-3细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P 0. 01);与SGK1基因沉默组比较,阳性对照组、阴性对照组细胞凋亡率下降,差异有统计学意义(P 0. 001)。结论 SGK1基因沉默能抑制PC-3细胞增殖,诱发PC-3细胞凋亡,可作为基因治疗前列腺癌的有效靶点。     

RNAi干扰HPV16 E6基因对宫颈癌Siha细胞的影响

目的:探讨E6 SiRNA对HPV16阳性Siha细胞E6基因的抑制作用,以及对细胞凋亡的影响.方法:合成两对针对HPV16 E6基因的特异性SiRNA及一对阴性对照SiRNA,脂质体介导转染Siha细胞系.RT-PCR检测各组HPV16 E6基因mRNA表达,Westem bIot检测HPV16 E6及P53蛋白变化,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率.结果:与未转染组相比,两对SiRNA分别降低E6 mRNA表达水平84.7%和82.3%(P<0.001),同时分别降低HPV16 E6蛋白表达水平61.3%及62.4%(P<0.001),另外,P53蛋白表达水平分别增加244%及272%(P<0.001),但两转染组间差异无统计学意义(P>0.05).两转染组细胞凋亡率分别为(34.38±3.14)%和(11.24±1.88)%,两转染组间细胞凋亡率差异亦有统计学意义(P<0.001).结论:RNAi明显抑制了HPV16 E6基因的转录及翻译,能够提高P53表达,促进细胞凋亡.     

双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549抑制作用的实验研究

目的观察双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549的作用。方法采用四唑氮蓝（MTT）法测定不同浓度和时间双氢青蒿素对A549细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术检测双氢青蒿素对A549细胞增殖和细胞周期的影响;应用透射电镜分析法检测双氢青蒿素对A549细胞凋亡的影响。结果双氢青蒿素对A549细胞有明显的体外增殖抑制作用,72 h的IC50值为580 nmol/L,且有明显的时间和剂量依赖关系;双氢青蒿素作用后G0/G1期细胞数增加;双氢青蒿素作用A549细胞后可以出现凋亡的形态学改变。结论双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞有生长抑制作用,其机制可能与诱导A549细胞周期阻滞和凋亡有关。     

乳腺颗粒细胞瘤1例临床病理观察并文献复习

目的探讨乳腺颗粒细胞瘤的临床病理特征、诊断与鉴别诊断。方法对1例乳腺颗粒细胞瘤进行组织形态学、影像学和免疫组化研究,并复习文献。结果左乳内上象限触及2 cm×2 cm质硬包块。瘤细胞体积大,圆形、多边形或梭形,胞浆丰富嗜酸性颗粒状,呈实性巢团或条索状排列,浸润性生长。抗淀粉酶PAS阳性,免疫组化染色瘤细胞S-100、NSE、Vimentin(+),CK、EMA、myoglobin、ER和PR均(-)。结论乳腺颗粒细胞瘤少见,临床、影像学、细胞学和冷冻快速切片均易误诊或漏诊,确诊主要依靠病理组织学和免疫组化标记。     

肝部分切除术促人结肠癌Caco-2细胞肝转移及相关机制

目的研究肝部分切除术对人结肠癌Caco-2细胞肝转移的影响及其相关机制。方法应用人结肠癌Caco-2细胞系,构建结肠癌肝转移裸小鼠模型,同时行肝部分切除术(PH),假手术(Sham)设为对照,并对Caco-2细胞行siRNA-Snail干扰。观察肝转移灶面积,肿瘤组织Snail和基质金属蛋白酶2蛋白(MMP-2)表达。结果 PH组转移灶面积、Snail蛋白和MMP-2表达均显著大于Sham组和siRNA-Snail-PH组。结论 PH可促进结肠癌发生肝转移,该作用与促进Snail表达及上调Snail调控的MMP-2表达相关。     

siRNA沉默VDAC1对MCF-7细胞增殖、周期的影响及其作用机制

[目的]观察siRNA沉默VDAC1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响.[方法]针对人VDAC1基因设计并合成siRNA,并将VDAC1-siRNA转染MCF-7细胞后,应用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测MCF-7细胞中VDAC1的表达水平,MTT法检测MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞术检测MCF-7细胞的周期分布,同时Western印迹法检测周期蛋白D1的表达.[结果]MCF-7细胞转染VDAC1-siRNA后能够有效抑制VDAC1的表达,显著抑制其增殖水平,促使MCF-7细胞发生G1期阻滞,同时下调Cyclin D1蛋白表达.[结论]VDAC1沉默能够有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,促使细胞发生G1期阻滞.VDAC1可作为乳腺癌治疗的新靶点.     

宫颈细胞学不典型腺细胞的临床分析与管理

目的：探讨宫颈细胞学诊断中的不典型腺上皮细胞（Atypical glandular cells，AGC）适宜的临床管理方法。方法：采用前瞻性自身对照方法，选择2002—03／2004—10我院阴道镜门诊就诊的65例宫颈细胞学AGC患者，分析其阴道镜检查、宫颈活检、子宫分段诊刮和宫颈LEEP术的组织学结果及随访时间6～31个月，中位随访时间12个月的结果。结果：细胞学检查共51462例，AGC152例，检出率0．295％，其中接受阴道镜检查和组织学确诊者65例。（1）阴道镜检查结果：正常转化区30例（46．15％）；上皮内低度病变者30例（46．15％）；移行带上移阴道镜检查不满意者3例（4．62％）；图像显示宫颈浸润癌2例（3．08％）。（2）组织病理学结果：47例（72．31％）慢性宫颈炎；15例（23．08％）宫颈上皮内瘤变1级（Cervical intraepithelial neoplasia，CIN），合并尖锐湿疣6例，6例（9．23％）为腺上皮轻度不典型增生（CGIN1）；1例CIN2；1例（1．54％）宫颈鳞癌；1例（1．54％）子宫内膜腺癌。（3）随访结果：除外2例癌患者，余63例均行随访，随访率100％。慢性宫颈炎60例（95．24％）、2例CIN1（与活检CIN1为同患者）、1例LEEP病理由原活检CIN1进展为CIN2。结论：AGC是一个重要的细胞学诊断提示，因有宫颈癌前期病变、宫颈癌和子宫内膜癌的存在，需用组织学评价其临床意义，包括用阴道镜指引下的宫颈活检术、分段诊刮术和宫颈LEEP术。随访是临床工作中不容忽视的重要环节。     

短发夹RNA诱导survivin基因缄默对Jurkat细胞凋亡和增殖的影响

目的研究应用载体表达短发夹 RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术抑制人 T 淋巴细胞白血病细胞株 Jurkat 细胞 survivin 基因的表达,探讨 survivin 基因表达缄默对 Jurkat 细胞凋亡和增殖的影响。方法构建针对 survivin 基因的 shRNA 重组质粒并转染至 Jurkat 细胞,分别用多重 PCR和 Western blot 法检测瞬时转染和稳定转染细胞 survivin 基因 mRNA 和蛋白表达水平的变化;流式细胞术检测瞬时转染和稳定转染细胞凋亡指数的变化,绘制细胞生长曲线,探讨 survivin shRNA 转染对细胞生长和增殖的影响。结果多重 PCR 结果示与无功能(对照组)shRNA 处理组和磷酸盐缓冲液处理组比较,survivin shRNA 瞬时转染和稳定转染细胞 surivivin 基因 mRNA 表达均显著下降,抑制率分别为66.675% 和60.69%(P<0.05);Western blot 结果显示 survivin shRNA 瞬时转染和稳定转染细胞survivin 蛋白表达水平亦显著降低,抑制率分别为63.41% 和60.18%(P<0.05)。流式细胞术检测瞬时转染和稳定转染细胞的凋亡率显著增加,分别为(22.41±2.83)% 和(20.73±2.56)%(与对照组比较,P均<0.05),细胞倍增时间显著延长。生长曲线显示稳定转染细胞的生长显著减慢。结论shRNA 重组质粒介导的 RNA 干扰能明显抑制 Jurkat 细胞 survivin 基因 mRNA 和蛋白产物的表达,诱导细胞凋亡和生长抑制。     

非典型鳞状细胞意义不明中的宫颈高度病变

目的探讨非典型鳞状细胞意义不明(atypical squamous cells of undetermined significance,ASC-SU)对诊断宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)2级及其以上病变的临床意义。方法对2009年在北京大学第三医院进行宫颈涂片检查的妇女的资料进行回顾性分析。结果 2 163例宫颈细胞学为ASC-US,546例行阴道镜检查及宫颈活检病理检查,57例病理结果为CIN2级及其以上病变,复核细胞学符合率约50%。57例中55例在阴道镜下可见异常图像。56例行高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,HR-HPV)检测,55例检测结果为阳性。结论联合应用HR-HPV检测、阴道镜检查和宫颈活检术可提高ASC-US妇女的宫颈高度病变检出率。