应用二维电泳和质谱技术筛选乳腺癌相关差异表达蛋白质的初步研究

目的:通过分离并鉴定乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断的乳腺癌肿瘤标志物.方法:提取人乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择在乳腺癌组织中明显差异表达的蛋白点,行质谱分析.结果:获得了分辨率和重复性均很好的凝胶蛋白图谱.对筛选出的在乳腺癌组织中明显差异表达的20个蛋白点,共有13个蛋白点被成功鉴定,其中在乳腺癌组织巾高表达的为8个,低表达的为5个.结论:乳腺癌组织相对于癌旁、正常乳腺组织蛋白存在明显的差异,过蛋白质组学方法筛选并鉴定出的这些蛋白质可能成为用于早期诊断和评价预后的乳腺癌标志物.     

应用蛋白质组学技术筛选胰腺癌血清肿瘤标志物

目的:比较胰腺癌患者与健康志愿者血清蛋白的差异以寻找候选血清肿瘤标志物,为胰腺癌早期诊断提供依据.方法:通过免疫亲合柱去除丰度最高的14种血清蛋白,用双向电泳分离蛋白并比较差异.选取在胰腺癌患者血清中明显差异表达蛋白点,行质谱鉴定和生物信息学分析.结果:建立了稳定性、重复性良好的凝胶蛋白图谱.对筛选出的在胰腺癌患者血清中明显差异表达的78个蛋白点,共有54个蛋白点被成功鉴定,其中胰腺癌患者血清中高表达者29个,低表达者25个.结论:胰腺癌患者、健康志愿者血清蛋白之间存在明显差异,通过蛋白质组学方法可筛选并鉴定出这些差异蛋白,后者有望为早期诊断胰腺癌提供依据.     

肺腺癌相关蛋白的筛选及鉴定

目的建立肺腺癌组织及配对癌旁组织的2-DE图谱,分析两者蛋白质表达的差异,进而寻找有诊断价值的相关蛋白。方法应用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对肺腺癌组织、配对癌旁组织进行蛋白质组学比较研究。结果获得了分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱。经过Im-ageMaster 2DPlatinum 5.0软件对图像分析后,获得差异大于3倍的蛋白点63个,12个点仅在肺腺癌组织中表达,5个点仅在配对癌旁组织中表达。质谱鉴定去冗余后确定了5种蛋白质,其中4种蛋白与肿瘤相关,分别为S100钙结合蛋白(S100-A11)、Ras相关蛋白Rab-14、微管辅助蛋白(Stathmin)、凝溶胶蛋白(gelsolin)。结论肺腺癌组织与配对癌旁组织的双向电泳结果有明显差异,这些差异蛋白可作为肺腺癌的候选肿瘤标志物。     

胃癌组织差异蛋白表达谱的初步研究

目的:建立胃癌和癌旁胃黏膜组织pH 4~7蛋白质表达谱,分析胃癌和癌旁黏膜组织中蛋白质表达的差异。方法:提取胃癌及癌旁胃黏膜组织总蛋白,采用二维电泳获得胃癌和癌旁胃黏膜组织蛋白质表达谱并进行分析。结果:通过比较分析5对胃癌和癌旁胃黏膜组织pH 4~7蛋白质表达谱,共发现128个差异表达的蛋白质点,其中仅在胃癌组织中表达的蛋白质点56个,胃癌组织中失表达的蛋白质点27个,32个点在胃癌组织中表达上调,13个点在胃癌组织中表达下调。结论:胃癌与癌旁胃黏膜组织之间存在蛋白质表达差异。寻找胃癌与癌旁胃黏膜组织之间表达差异的蛋白质,为阐明胃癌发生的分子机制奠定基础。     

蛋白质组学探索乳腺癌相关差异表达蛋白的研究进展

乳腺癌是全球女性中最常见的癌症,蛋白质组学的应用可以帮助我们更全面地认识乳腺癌的发生发展过程.通过对不同临床样品包括组织、血清、乳房抽吸液、唾液和尿液等进行蛋白质组学检测,可以筛选出不同的差异表达蛋白,并作为乳腺癌早期诊断、预后判断的生物标志物和有效的治疗靶点.作者对近年来蛋白质组学在乳腺癌研究中取得的进展作一综述     

蛋白质组学技术在乳腺癌研究中的应用

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,2002年全球新发乳腺癌11501298例。尽管各种技术在乳腺癌诊断和治疗中已经取得了长足进步,但是其治疗效果仍难令人满意。1994年澳大利亚学者Marc Wilkins和Keith Williams首先提出了蛋白质组（proteome）的概念并迅速发展成为一门新兴学科——蛋白质组学（proteomics）。蛋白质组学研究方法已经被广泛应用于肿瘤早期诊断、判断预后和预测治疗反应以及寻找生物标志物等研究方面,本文就其在乳腺癌研究中的应用进行综述。     

基于蛋白质组学的乳腺癌标志物筛选及其应用

目的 利用高通量质谱技术筛选不同亚型的乳腺癌发生发展及预后标志物,针对不同亚型患者,有助于建立更有效的乳腺癌诊断手段、预测病因及干预治疗。方法 通过选取4例乳腺癌患者标本,包括4例癌组织和4例对应癌旁组织,采用SDT裂解法提取蛋白质,并BCA法进行蛋白质定量之后,进行肽段的脱盐及定量。随后进行色谱分级、液相色谱-串联质谱（LS-MS/MS）数据采集。用软件MaxQuant进行查库鉴定及定量分析。提取样本RNA经qPCR筛选出乳腺癌差异表达标志物。结果 分析4例乳腺癌样本的蛋白质组定量分析数据最后筛选出LCP1、ARF1、CCT3、VDAC1、NANS、NME1等23个癌组织中特异性表达的蛋白。且将相关蛋白所对应的基因与其癌旁进行比较筛选出在侵袭性乳腺癌癌组织中表达升高的23个基因。qPCR的结果表明最后有14个基因有显著性差异。结论 通过筛选及分析包括以下至少一种:LCP1、CCT3、NANS、NME1、HSP90AA1、RAN、YWHAZ、ERH、PRDX1、STIP1、HSPA8、H2AFY、HSPE1和PDIA3标志物。利用这些标志物在乳腺癌癌组[ 基金项目： 1. 国家自然科学基金青年基金项目（82002929）;2. 深圳市科创委基础研究面上项目（JCYJ20190806154610953） 第一作者：邓克瑜（1982年02月出生）,男,主治医师,从事肿瘤生物超声诊断,现任职于深圳市人民医院健康管理中心。 通讯作者：吴伟晴（1970年4月出生）,女,广东湛江人,毕业于中山医科大学,医学学士,现任职于深圳市人民医院健康管理科科主任、主任医师,主要从事常见慢病和肿瘤的健康管理、健康干预和健康教育等研究。Email: wweiqing007@sina.com。通讯地址：广东省深圳市东门北路1017号深圳市人民医院外科大楼C区三楼健康管理中心。]织及癌旁组织的差异表达,可用于乳腺癌诊断、预后评估或筛药。     

蛋白质组学在乳腺癌中的应用

乳腺癌是最常见的女性恶性肿瘤,蛋白质组学为寻找与乳腺癌诊断和预后密切相关的特异性生物学标志物、探讨乳腺癌的发生机制及早期临床治疗提供了研究平台。一、蛋白质组的概述蛋白质组的概念最早由澳大利亚的Wikins和     

血清中肿瘤相关钙信号转导蛋白2抗体对乳腺癌诊断及预后的临床价值

目的探讨乳腺癌患者血清中肿瘤相关钙信号传导蛋白2(TACSTD2)抗体表达水平及其在乳腺癌诊断及预后中的临床应用价值。方法用表达TACSTD2的噬菌体包被空白的微孔板,ELISA法分别检测100例乳腺癌患者、60例乳腺良性增生患者及60名健康体检者血清中TACSTD2抗体含量。结果与健康对照组相比,乳腺癌患者血清中TACSTD2抗体含量明显升高,具有统计学意义(P<0.001);乳腺癌患者组血清中TACSTD2抗体含量亦明显高于良性对照组(P<0.001);但是已发生淋巴结转移的乳腺癌患者与未发生淋巴结转移的患者血清中TACSTD2抗体含量相比较,无显著性差异(P>0.05)。结论血清TACSTD2抗体的表达与乳腺癌的发生密切相关,可作为乳腺癌诊断的肿瘤标志物。     

肿瘤标志物联合应用在乳腺癌中的诊断价值

目的　研究联合应用肿瘤标志物 (TM)在乳腺癌诊断中的临床价值。方法　检测血清中CA15 - 3在良性乳腺肿物和恶性乳腺肿物的不同表达。结果　CEA和CA15 - 3的联合应用在乳腺性病变及乳腺癌Ⅰ、Ⅱ期无显著意义 (P >0 0 5 ) ,而在乳腺癌晚期及转移复发中有显著意义 (P <0 0 5 )。结论　联合应用TM对乳腺癌早期诊断没有指导意义 ,但是对乳腺癌进展期和晚期 ,转移和复发有重要的临床指导意义 ,尤其对肿瘤的复发及远处转移更明显     

利用2DE-MS技术筛选和鉴定大肠癌血清标志物

目的 利用2DE-MS技术对大肠癌患者血清和正常人血清蛋白进行比较分析,筛选和鉴定差异蛋白.方法 收集正常人(n=10)和大肠癌患者(n=15)术前血清,进行去除白蛋白和免疫球蛋白及脱盐浓缩预处理,应用2DE-PAGE分离处理后血清蛋白,比较两者的差异蛋白质点,采用MALDI-TOF分析鉴定差异蛋白质.结果 血清经预处理后,可提高样品的上样量,2DE-PAGE图谱的蛋白质点数明显增加,水平条带明显减少.大肠癌患者血清中共筛选2个差异的蛋白点,经质谱鉴定为转甲状腺素蛋白( transthyretin,TTR)和细胞角蛋白1(cytokeratin-1,CK-1).其中TTR在大肠癌患者血清中为低表达,而CK-1为高表达.大肠癌患者血清中TTR含量为(245.87±60.72) mg/L,明显低于大肠腺瘤组和正常血清组[分别为(299.53±67.91)、(311.31±67.01) mg/L,P＜0.01].结论 2DE-MS技术是筛选和鉴定疾病血清标志物的良好工具,TTR可能是大肠癌潜在的血清标志物.     

应用二维电泳和质谱技术筛选食管癌及癌旁组织的差异表达蛋白质

目的 筛选食管癌组织与正常食管组织中的差异表达蛋白质,以发现用于食管癌早期诊断的生物学标志物.方法 收集食管癌组织及其配对的正常食管组织,提取组织蛋白质,进行二维电泳,选取在癌组织中高表达的3个点和在正常食管组织中高表达的3个点进行基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱分析,将获得的肽质量指纹图进行生物信息学分析,鉴定差异蛋白质,利用RT-PCR方法验证蛋白质组筛选结果.结果 建立了分辨率高、重复性较好的食管癌和食管正常组织蛋白质的二维电泳图谱,经鉴定发现了鳞状细胞癌抗原1、细胞角蛋白4和膜联蛋白Ⅰ在食管癌组织中表达下调.磷酸丙糖异构酶1、锰超氧化物歧化酶和热休克蛋白27在食管癌组织中表达上调.RT-PCR的实验结果验证了差异蛋白质的可靠性.结论 食管癌组织和正常食管组织的差异表达蛋白质可做为食管癌早期诊断的候选生物学标志物.     

人睾丸胚胎性癌蛋白质组的双向电泳分析及质谱鉴定

目的 应用双向电泳和质谱技术研究人睾丸胚胎性癌蛋白质组.方法 利用固相PH梯度双向凝胶电泳技术进行分离,凝胶经银染显色后,用PDQuest 7.30软件分析2-DE图谱.选择在睾丸胚胎性癌图谱中高表达的3个蛋白点酶解,应用基质辅助激光解析电离飞行时间/飞行时间(MALDI-TOF/TOF)仪器进行串联质谱(MS/MS)鉴定.结果 双向电泳成功有效筛选出差异蛋白点,并成功鉴定3种蛋白质.结论 双向电泳和质谱技术可有效研究睾丸胚胎性癌总蛋白质,为从蛋白质组水平研究睾丸胚胎性癌蛋白质的表达改变提供了新的方法和途径.

Abstract：

Objective To separate and identify human testicular embryonal carcinoma proteomics using two-dimensional electrophoresis (2-DE) and mass spectrometry. Methods Immobilized pH gradient two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis was used to separate the total proteins of the samples. After silver staining, PDQuest 7.30 image analysis software was applied to analyze the 2-DE images. Three of the proteins highly expressed in human testicular embryonal carcinoma were identified by matrix-assisted laser adsorption/ionization-time of flight-tandem mass spectrometry (MALDI-TOF-MS/MS). Results 2-DE effectively screened the differentially expressed proteins in the carcinoma tissues.Three proteins highly expressed in the carcinoma were successfully identified. Conclusion The proteins of human testicular embryonal carcinoma can be effectively separated and analyzed using 2-DE and mass spectrometry. Proteomic analysis offers a new means for further study of this carcinoma.     

Differentially expressed phosphoproteins in diazoxide-pretreated ventricular myocytes by two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry in vitro

Objectives To analyze and identify differentially expressed phosphoproteins associated with mitochondrial KATP channel opening. Methods： Adult rat ventricular myocytes were isolated, cultured, and identified, and pretreated without or with 100 μmol/L diazoxide for 10 min. Phosphoproteins prepared and enriched from the control and diazoxide-pretreated cells were separated by two-dimensional gel electrophoresis （2-DE） followed by sliver staining. The obtained interesting phosphoproteins were further identified by mass spectrometry. Results. Associated with diazoxide preconditioning, the proteins of chaperonin containing TCP-1 and hypothetical protein XP-346548 were phosphorylated significantly （P〈0. 01）, while the 94-kDa glucose-regulated protein, calpactin I heavy chain and ferritin were dephosphorylated markedly （P〈0. 01）. Conclusion： These findings suggest that cardiomyocytes undergo significant posttranslational modification via phosphorylation in a multitude of proteins in order to respond diazoxide preconditioning, and these phosphorylated protein may mediate the downstream signaling of cardioprotection by mitochondrial KATp channel opening induced by ischemic preconditioning.     

高/低分化大肠癌组织的二维电泳图谱的建立及质谱分析

目的研究人大肠癌高、低分化组织及癌旁正常黏膜之间蛋白质组表达差异，寻找和鉴定癌组织与正常黏膜之间以及高、低分化癌组织之间差异表达蛋白。方法收集新鲜大肠癌标本；根据病理诊断结果将大肠癌标本分为高分化癌组、低分化癌组，以癌旁正常肠黏膜作为对照。提取组织总蛋白，进行双向凝胶电泳。比较得到高分化与低分化组织之间表达差异点。将这些差异蛋白点进行肽指纹图分析及网上数据库鉴定。应用Western blot验证蛋白质组筛选结果。结果在两组癌标本中均存在钙网硬蛋白前体、O98007蛋白类似物的特异表达以及AAH10915、AAH75839蛋白表达上调；在高分化癌组中存在E980237蛋白的特异表达以及三磷酸异构酶、肝脂肪酸结合蛋白表达上调；在低分化癌组中存在2HHEB（氧化血红蛋白变异体）和锌指蛋白312类似物的特异表达以及Q9TQL5蛋白（Fragment）类似物表达上调。Western blot检测HSP27和LFBP表达的结果与蛋白质组分析结果一致。结论高分化癌组织与低分化癌组织之间存在蛋白质组差异表达，这些蛋白与大肠癌细胞分化有关。     

重症急性胰腺炎患者血清差异蛋白质的表达

目的：用蛋白质组学技术比较重症急性胰腺炎（SAP）与轻症急性胰腺炎（MAP）患者血清的差异蛋白,探讨SAP特异蛋白的表达。方法：血清标本取自10例急性胰腺炎（AP）患者,其中5例SAP,5例MAP,用双向凝胶电泳检测两类患者的蛋白表达,并将这些差异表达蛋白点进行质谱鉴定,Mascot数据库检索。结果：比较双向电泳图谱发现15个差异表达蛋白点,经质谱分析,成功鉴定出10种蛋白质,在SAP患者其中4种表达上调,6种表达下调。数据库查询结果,4个表达上调蛋白分别为补体4A、结合珠蛋白亚型2、结合珠蛋白和载脂蛋白L1;6个表达下调蛋白分别为四连接素、谷胱甘肽过氧化物酶3、丝氨酸蛋白酶抑制剂亚型F1、丛生蛋白亚型-1、转甲状腺素蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制剂A1亚型2。结论：SAP患者血清有差异蛋白质表达,这可能和SAP发病机制相关。     

利用双向凝胶电泳和质谱技术进行前列腺癌差异蛋白质组学研究

目的 分离前列腺癌雄激素依赖型和非依赖型细胞系差异表达蛋白质,为进一步研究前列腺癌的蛋白组学打下基础. 方法 培养前列腺癌雄激素依赖型(LNCaP)和非依赖型(DU145)细胞系,分别提取两种细胞系的总蛋白,进行等电点聚焦和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对所得胶图利用ImageMaster4.01软件进行分析,选取差异点进行质谱分析,对分析结果进行数据库检索. 结果 得到了分辨率和重复性均好的前列腺癌雄激素依赖型和非依赖型细胞系的双向凝胶电泳图谱,每块凝胶上平均蛋白质点数为816±15,通过分析得到3倍差异点41个,完全差异点10个.对完全差异点进行质谱分析和数据库检索得到与差异点相对应的3个蛋白质,其中第83号和175号为未命名蛋白质,第632号蛋白质是KIAA1283蛋白质,具有载脂蛋白功能. 结论 在前列腺癌激素依赖型和激素非依赖型细胞系中存在差异表达蛋白质,并可以利用双向凝胶电泳技术进行分离,为进一步研究前列腺癌的蛋白质组学和发病机制提供了线索.     

高低分化喉癌组织的二维电泳图谱的建立及质谱分析

目的 研究人高、低分化喉癌组织及癌旁正常黏膜组织之间蛋白质组表达差异,寻找和鉴定高、低分化癌组织之间差异表达蛋白.方法 收集新鲜喉癌标本;根据病理诊断结果将喉癌标本分为高分化癌组、低分化癌组,以癌旁正常黏膜组织作为对照.提取组织总蛋白,进行双向凝胶电泳,比较得到高分化与低分化癌组织之间表达差异点.将这些差异蛋白点进行肽指纹图分析及网上数据库鉴定.结果 共鉴定出11个蛋白,在两组癌标本中均存在Cofilin-1、Cyclophilin A特异表达,发现在高分化癌组中有特异表达或升高的蛋白4个,发现在低分化癌组中有特异表达或升高的蛋白有5个.结论 高分化癌组织与低分化癌组织之间存在蛋白质组差异表达,这些蛋白与喉癌细胞分化有关.     

人肾组织磷酸化蛋白质组二维凝胶电泳的建立与优化

目的:利用二维凝胶电泳法分离人肾组织磷酸化蛋白质组.方法:利用金属磷酸盐亲和层析树脂富集人肾组织磷酸化蛋白.样品浓缩除盐后,进行一维等电聚焦分离和二维SDS电泳分离提取人肾组织磷酸化蛋白.结果:成功提取了人肾组织磷酸化蛋白,并得到了磷酸化蛋白的双向凝胶电泳图谱.结论:磷酸化蛋白富集技术与二维凝胶电泳技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步研究人肾组织磷酸化蛋白奠定基础.