1型糖尿病大鼠Runx2、O sterix表达变化及唑来膦酸的干预作用

目的：观察1型糖尿病大鼠血清胰岛素和骨钙素水平,骨组织Runx2和Osterix（OSX）基因转录水平及唑来膦酸的干预作用。方法 Wistar雌性大鼠170只,随机分为正常对照组（n＝40）和糖尿病模型组（n＝130）。糖尿病模型组一次性腹腔注射链脲佐菌素（60 mg／kg）制作1型糖尿病模型,随机选取120只分为模型组、预防组和治疗组,每组40只。预防组和治疗组分别在造模成功和造模成功2周后静脉给予唑来膦酸（0．1 mg／kg）。ELISA法检测血清胰岛素和骨钙素水平;RT-PCR法检测右侧股骨Runx2和OSX mRNA表达水平。结果模型组、预防组和治疗组与正常对照组相比,血清胰岛素水平显著下降（P＜0．05）。骨钙素水平模型组显著低于正常对照组（P＜0．05）,预防组高于正常对照组和模型组（P＜0．05）,治疗组在12周高于预防组（P＜0．05）。模型组骨组织Runx2和OSX mRNA表达水平与正常对照组相比显著降低（P＜0．05）,预防组和治疗组表达均明显高于正常对照组和模型组（P＜0．05）,预防组表达上调程度高于治疗组。结论在1型糖尿病大鼠模型中,骨组织Runx2和OSX mRNA表达水平显著下降;预防性应用唑来膦酸可逆转Runx2和OSX mRNA表达的下降,促进骨形成。     

唑来膦酸对成骨细胞增殖及IGF-1表达的影响

目的：观察唑来膦酸对体外大鼠成骨细胞增殖及IGF-1表达的影响,进而分析其对成骨质量的影响。方法：采用体外培养的大鼠颅盖骨成骨细胞,用不同浓度的唑来膦酸（10^-4～10^-9 mol/L）处理后,观察其对成骨细胞增殖率以及其分泌IGF-1的影响。结果：唑来膦酸在较高浓度时（≥10^-5 mol/L）明显抑制细胞增殖;唑来膦酸在≤10^-6 mol/L的浓度时并不影响IGF-1的分泌。结论：唑来膦酸在低浓度时不影响成骨质量,考虑到其在体的作用时间更久,所以使用低浓度的唑来膦酸治疗骨质疏松是更明智的选择。     

静电纺丝薄膜支架对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

目的 观察静电纺丝薄膜支架对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。方法 通过静电纺丝法制备薄膜支架,扫描电镜观察薄膜网状结构,通过薄膜支架作为载体,观察其对成骨细胞的增殖、分化并观察细胞骨架的形态变化。结果 扫描电镜显示:静电纺丝薄膜网状结构有利于细胞的黏附;CCK-8细胞增殖检测与碱性磷酸酶活性检测结果显示,培养1 d、4 d、7 d对照组与实验组相比差异均有统计学意义(P<0.05);细胞骨架染色显示静电纺丝组细胞铺展面积增大且数目增多。结论 静电纺丝薄膜支架对成骨细胞增殖、分化以及细胞黏附具有促进作用。     

磷酸肌酸对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及矿化的影响

目的 探讨磷酸肌酸(phosphocreatine,PCr)对体外培养的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖、成骨分化及矿化的影响.方法 在体外培养的MC3T3-E1细胞中,分别加入含不同浓度(5,10,20 mmol·L-1)的PCr进行培养,并以不给予PCr药物处理的组为空白对照组.采用MTT法检测MC3T3-E1细胞的增殖情况;使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性试剂盒检测MC3T3-E1细胞内ALP的活性;采用Western Blot法检测MC3T3-E1细胞内ALP、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)的蛋白表达情况;利用茜素红染色法检测MC3T3-E1细胞形成矿化的能力.结果 PCr可以促进MC3T3-E1细胞的增殖且具时间依赖性,当处理12 h时,PCr对细胞无明显促增殖作用(P＞0.05);然而当处理48 h时,PCr(5,10,20mmol·L-1)对细胞的促增殖作用可分别达到137％、146％、153％.PCr(10,20 mmol·L-1)使MC3T3-E1细胞内ALP的活性分别增加到空白对照组的1.37和2.14倍(P ＜0.05,P＜0.01),并且显著上调ALP蛋白表达(P＜0.01,P＜0.01).PCr(5,10,20 mmol·L-1)还可明显上调MC3T3-E1细胞内BMP-2的蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),并使MC3T3-E1细胞形成的矿化结节数增加(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 PCr可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化,具有促成骨作用.     

杜仲叶提取物对MC3T3-E1细胞增殖作用的实验研究

目的研究杜仲叶提取物（Euec）对小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1细胞生长、增殖的影响及其分子机制。方法采用Euec与MC3T3-E1细胞体外共同培养,MTT法检测不同浓度Euec处理MC3T3-E1细胞24、48、72h后的细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果4．0～125．0μg／ml的Euec能促进MC3T3-E1细胞增殖,其中7.8μg／ml的Euec对MC3T3-E1细胞增殖的促进作用最强。流式细胞仪检测显示,6.25μg／ml的Euec作用MC3T3-E1细胞48h后,G0/G1期成骨样细胞显著减少,S期成骨样细胞增多,G2/M期成骨样细胞显著增多。结论Euec可促进MC3T3-E1细胞向G2／M期转换,使G1期的成骨样细胞减少,G2期的成骨样细胞显著增加,从而促进细胞的有丝分裂和细胞的增殖。     

胶体金对MC3T3-E1增殖、分化及RUNX2基因表达的影响

目的研究30nm胶体金对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。方法体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,在仪-MEM培养液中加入不同体积的胶体金处理细胞,利用M1Tr法检测胶体金对成骨细胞增殖活性的影响,碱性磷酸酶活性测定及RT—PCR法分别检测其对成骨细胞分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。结果浓度为10^（-10）、10^（-11）、10^（-12）mg／L的胶体金均促进成骨细胞的增殖,且ALP相对活性及RUNX2基因表达也均高于阳性对照组。结论30nm胶体金能促进小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2的表达,进而促进成骨。     

人参皂苷Rh1对MC3T3-E1细胞增殖和分化的促进作用及其机制

目的:筛选靶向上调雌激素受体β(ERβ)转录和表达的人参皂苷单体,研究其对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响及其机制.方法:采用PGL2-ERβ和内参Renilla荧光素酶质粒Prep7-Rluc共同转染HEK293T细胞,细胞分为对照组,雌二醇组(1×10-6 mmol·L-1),人参皂苷Rb1组、Rb2组、Rd组...     

不同浓度锶与淫羊藿苷联合应用对MC3T3-E1细胞增殖及骨向分化的影响

通过体外培养前成骨细胞MC3 T3-E 1细胞,加入不同浓度锶(Sr)与淫羊藿苷(ICA)处理,在第1、4、7和11天时,通过荧光显微镜观察细胞形态并对细胞计数,通过CCK-8法检测不同浓度Sr与ICA对前成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖活性的影响.通过碱性磷酸酶(ALP)活性检测(第4和7天)及茜素红S染色(第21天),分析不同浓度Sr与ICA对MC3 T3-E 1细胞骨向分化的影响.结果显示,与其他组比较,S1I2组(80 mg/L Sr+7×10-2 mg/L ICA)在荧光显微镜下细胞数量最多,细胞增殖活性最强,并显示出最高的ALP活性和更多地红染的矿化结节.说明适宜浓度的Sr与ICA联合应用可有效促进前成骨细胞MC3 T3-E 1细胞增殖及骨向分化.     

伤科接骨片对MC3T3-E1细胞成骨能力的影响

目的观察伤科接骨片对MC3T3-E1细胞成骨能力的影响。方法取BALB/c小鼠30只,随机分为药物+细胞组:伤科接骨片及饲料喂养+MC3T3-E1+明胶海绵;细胞组:单纯饲料+MC3T3-E1+明胶海绵;阴性对照组:单纯饲料+生理盐水+明胶海绵。每组10只。在小鼠右侧股部臀大肌下方制成肌袋,药物+细胞组和细胞组用无菌明胶海绵吸附MC3T3-E1细胞悬液、阴性对照组用无菌明胶海绵吸附生理盐水后植入肌袋内。术后3天,药物+细胞组将伤科接骨片(0.35g/片)用蒸馏水配制成浓度为20mg/m L的混悬液,按2.0mg/(g·d)剂量灌胃给药,细胞组和对照组均灌胃给予2.0mg/(g·d)的蒸馏水。分别于建模后第4、8周每组各处死小鼠5只,取材后分别作大体、切片HE染色光镜,以及扫描电镜下观察。结果术后4周,药物+细胞组和细胞组肌袋内均可见新骨出现,术后8周两组均形成松质骨样结构的板层骨,药物+细胞组形成的板层骨结构较细胞组更为成熟,成骨细胞数量更多,胶原纤维分泌量也更多,并有更多的钙化结节形成。阴性对照组内未见有明显骨化现象。结论伤科接骨片可以促进MC3T3-E1细胞在动物体内的成骨作用。     

温度对过氧化氢抑制前成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响

目的 探讨温度对过氧化氢(H₂O₂)抑制前成骨细胞增殖和成骨分化的影响。方法 取对数生长期MC3T3-E1细胞,随机分为0、450、500、550、600、650μmol·L^-1H₂O₂干预组,分别给予0、450、500、550、600、650μmol·L^-1H₂O₂溶液干预2 h。另取对数生长期MC3T3-E1细胞,随机分为对照组、模型组、低温组和高温组。对照组细胞置于37℃、含体积分数5%CO₂培养箱中孵育24 h;模型组细胞置于37℃、含体积分数5%CO₂培养箱中孵育24 h,并给予H₂O₂刺激2 h;低温组细胞置于32℃、含体积分数5%CO₂培养箱中孵育24 h,并给予H₂O₂刺激2 h;高温组细胞置于40℃、含体积分数5%CO₂培...     

MC3T3-E1细胞成骨模型的建立及局部黏着斑激酶表达的研究

目的:通过化学诱导手段建立MC3T3-E1细胞成骨模型,探讨局部黏着斑激酶(FAK)基因表达与成骨细胞形成的关系,了解FAK对成骨分化的影响。方法:观察MC3T3-E1细胞成骨诱导前后细胞形态,茜素红化学染色检测矿化情况,实时荧光定量PCR检测成骨标志物Runx2、ALP的表达,同时分析FAK在成骨过程中的表达情况。结果:MC3T3-E1细胞成骨诱导3 d后细胞呈长梭形或多角形;第21、28 d时,茜素红染色可见矿化结节;成骨标志物Runx2、ALP的表达呈持续升高的趋势,FAK的表达总体呈升高趋势,在第7 d时略有下降。结论:FAK的表达与成骨相关基因的表达趋势基本一致,提示FAK可能在MC3T3-E1细胞成骨过程中发挥一定作用。     

含枸杞多糖血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的研究含枸杞多糖血清对MC3T3-E1成骨细胞细胞增殖、分化和矿化的影响。方法含枸杞多糖血清分别加入MC3T3-E1成骨细胞培养液中,使其终浓度为5%、10%、20%3种体积浓度,通过MTT法,碱性磷酸酶活性测定,骨钙素检测和Von kossa矿化染色法观察含枸杞多糖血清的促细胞增殖、分化、矿化作用。结果含枸杞多糖血清在5%、10%浓度促进MC3T3-E1成骨细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05);10%、20%浓度提高MC3T3-E1成骨细胞内碱性磷酸酶的活性,差异有统计学意义(P<0.01)。含枸杞多糖血清在20%浓度培养7及11 d时能明显促进MC3T3-E1成骨细胞骨钙素合成和分泌,20%浓度培养18 d时MC3T3-E1成骨细胞的矿化结节数目增多,差异有统计学意义(P<0.01)。结论含枸杞多糖血清可以促进MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和矿化能力。     

持续静压力环境下MC3T3-E1细胞的基因测序分析

目的：通过对持续静压力环境下MC3T3-E1细胞的基因测序,筛选出Hub基因并分析其与骨质疏松症相关性。方法 ：采用MTT检测细胞增殖和免疫荧光检测细胞骨架蛋白,筛选出最佳实验条件。用TRIzol法提取RNA与基因测序,通过Mfuzz聚类、富集分析、GSVA分析,利用NCBI GEO数据库、Genecards数据库、molecular signatures database数据库,分析对比持续静压力环境下MC3T3-E1细胞差异表达基因,筛选Hub基因,对比分析其与骨质疏松症信号通路关联的分子学机制。结果：在持续静压力环境下,MC3T3-E1细胞增殖显著降低,在1.0 MPa处理8 h和0.5 MPa处理24 h细胞模型组的细胞骨架中,微管蛋白和肌动蛋白的抑制作用显著。通过空白组与模型组基因测序对比后发现29 164个差异基因,其中14 489个上调、14 675个下调。这些差异基因涉及1 658个GO功能,包括1 096 GO＿BP（生物过程）,255 GO＿CC（细胞组分）,307 GO＿MF（分子功能）,MC3T3-E1细胞在持续静压力作用下受到差异基因调控的信号转导通路有305...     

N-乙酰半胱氨酸对尼古丁诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的作用及其机制

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对尼古丁诱导的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制.方法:体外培养MC3T3-E1细胞,采用不同浓度(0、1.0、2.5、5.0和7.5 mmol·L-1)尼古丁诱导MC3T3-E1细胞损伤,采用MTT法检测各组MC3T3-E1细胞增殖活性,并确定尼古丁半...     

柚皮苷对H_2O_2处理小鼠前成骨细胞MC3T3-E1骨形成的影响

目的 :研究柚皮苷对体外培养过氧化氢(H_2O_2)处理的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1骨形成的作用及抗氧化机制。方法:在体外培养的MC3T3-E1s细胞培养基中分别加入不同浓度(0.01 mmol·L-1、0.02 mmol·L-1、0.04 mmol·L-1)的柚皮苷作用48 h,接着加入0.5 mmol·L-1H_2O_2作用4 h,采用CCK-8法检测柚皮苷对成骨细胞活力的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)、细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测MC3T3-E1成骨细胞内ALP、SOD活性和MDA、GSH含量及细胞上清LDH活性;用茜素红S染色法检测矿化结节数目;用Real time RT-PCR的方法检测成骨细胞内I型胶原(COL-I)、骨钙素(OCN)、转录因子Osterix和骨形态发生蛋白2(BMP-2)m RNA表达。结果:柚皮苷可增加H_2O_2损伤后MC3T3-E1细胞ALP活力(P0.05,P0.01)和矿化结节数目(P0.05,P0.01),促进骨形成相关指标COL-I、Osterix、BMP-2和OCN m RNA表达(P0.01);柚皮苷提高H_2O_2损伤后MC3T3-E1细胞活力(P0.05,P0.01),上调细胞内SOD活性和GSH含量并降低细胞中MDA含量和上清中LDH活性(P0.01)。结论:一定浓度(0.01,0.02,0.04 mmol·L-1)的柚皮苷可以促进H_2O_2处理后MC3T3-E1细胞的骨形成,这种促进作用可能是通过降低氧化应激发挥抗氧化作用实现的。     

唑来膦酸联合辛伐他汀对骨质疏松的影响分析

目的:研究分析唑来膦酸联合辛伐他汀对骨质疏松产生的影响.方法:选我院2016年8月-2017年8月接收的骨质疏松96例为对象.采用双盲原理将患者各分为48例的对照组和观察组.对照组患者使用辛伐他汀治疗,观察组患者将唑来膦酸与辛伐他汀联合应用展开治疗.对比2组患者的临床效率.结果:治疗后对照组患者的磷(3. 95 ± 1. 28)mmol/L、血钙(1. 54 ± 0. 56)mmol/L、碱性磷酸酶(77. 84 ± 10. 84)n/% ,而观察组患者的磷、血钙、碱性磷酸酶指标均优于对照组,差异符合统计学意义(P<0. 05);统计分析2组患者的骨密度后股骨颈、腰椎L2-4 、Ward三角区、股骨粗隆骨指标,观察组患者均优于对照组,差异具有统计学意义(P<0. 05).结论:骨质疏松患者将唑来膦酸与辛伐他汀联合应用,效果明显优于单独辛伐他汀,对改善患者磷、血钙、碱性磷酸酶具有显著的效果,并能够增加骨密度,可在临床上推广应用.     

唑来膦酸联合辛伐他汀对骨质疏松的影响分析

目的:研究唑来膦酸联合辛伐他汀对骨质疏松进行治疗的效果.方法:本文选择的所有研究对象均为我院在2017年3月-2018年8月收治的骨质疏松患者,本文选择96例,按照随机方法分为A组和B组,每组患者平均为48例.A组患者单独给药辛伐他汀,B组患者在A组患者给药基础上加用唑来膦酸,比较2组患者治疗的效果.结果:经不同治疗后,比较2组患者各个部位的骨密度情况,本文的B组患者明显优于A组,P<0.05,差异存在统计学意义;比较2组患者并发症的发生率,A组患者为12.50%(6/48),B组患者为14.58%(7/48),P>0.05,不存在统计学意义.结论:选择唑来膦酸联合辛伐他汀进行骨质疏松的治疗,能有效的改善患者的骨密度,提升治疗的质量,而且具有较高的安全性,值得推广.     

酸枣仁皂苷A对小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响

【摘要】 目的 通过体外细胞实验探讨酸枣仁皂苷A对小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖分化的影响,为临床治疗骨折与促进骨折愈合提供实验基础。方法将酸枣仁皂苷A分4个浓度（5、10、20、40 mg/L)分别干预细胞,使用CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Von kossa染色法检测细胞矿化结节生成情况,Elisa法检测细胞中ALP与BGP的含量,RT-qPCR法检测细胞中Runx-2与BGP的基因表达水平,Western Blot法检测细胞中TGF-β1、Col I与BMP 2的蛋白表达水平。结果酸枣仁皂苷A能促进MC3T3-E1细胞增殖,减少细胞凋亡,提高细胞中ALP与BGP的含量,提高细胞中Runx-2与BGP基因的表达水平与TGF-β1、Col I与BMP-2的蛋白表达水平,增加细胞中矿化结节的形成数量（均P<0.05）。结论酸枣仁皂苷A能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖,减少细胞凋亡,提高细胞分化程度与成骨效率,其机制可能是通过调控TGF/BMP通路而发挥的。     

选择性雌激素受体调节剂对MC3T3-E1细胞生长分化的调节

目的探讨选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor modulator,SERM)———雷洛昔芬对小鼠颅顶成骨细胞MC3T3-E1分化的调节及其机制。方法体外培养MC3T3-E1细胞,10-7mol/L的雷洛昔芬和雌激素受体拮抗剂ICI-182780刺激细胞,另设空白对照组,24、48、72 h后检测各指标。MTT法检测细胞增殖;微量酶标法检测细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测细胞内β-catenin,雌激素受体α、β(estrogen receptorα、β,ERα、ERβ)mRNA的表达。结果 MC3T3-E1细胞分别加入10-7mol/L的雷洛昔芬和ICI-182780后,相对于对照组,雷洛昔芬处理组的促细胞增殖作用较强,在24 h增殖率最高,达(55.93±10.88)%;ALP活性增加,在48 h活性增加率最高,为(30.881±5.614)%;β-catenin、ERα和ERβmRNA的表达均增高,有统计学意义(P<0.05)。ICI-182780组的促细胞增殖率、ALP活性降低;β-catenin、ERα和ERβmRNA的表达均降低,有统计学意义(P<0.05)。结论雷洛昔芬可能通过上调β-catenin、ERα和ERβmRNA的表达促进MC3T3-E1细胞的增殖分化,而ICI-182780则下调β-catenin、ERα和ERβmRNA的表达抑制MC3T3-E1细胞的增殖和分化。